CN102824515B - 热毒清片在制备抑制a-204细胞增殖药物中的应用 - Google Patents

热毒清片在制备抑制a-204细胞增殖药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用,热毒清片处方为重楼、南板蓝根、蒲公英、冰片、甘草,能清热解毒,消肿散结,用于上呼吸道感染引起的咽喉发炎,规格为每片0.3g,口服,一次3-4片,一日3次,现发现其能抑制A-204细胞增殖。

Description

热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用
技术领域
本发明涉及一种中成药的新用途,尤其涉及热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用。
背景技术
横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)是起源于横纹肌细胞或向横纹肌细胞分化的间叶细胞的一种恶性肿瘤为儿童软组织肉瘤中最常见的一种少发生于成人。男性较女性多见。少发生于成人。男性较女性多见。胚胎型横纹肌肉瘤,多发于8岁前儿童(平均年龄为6岁),腺泡型横纹肌肉瘤见于青春期男性(平均年龄为12岁),多型性横纹肌瘤最常见于成人,也可见于儿童没有其他相关内容描述。横纹肌肉瘤发生率次于恶性纤维组织细胞男友瘤和抗生素脂肪肉瘤,居软组织肉瘤的第三位。
热毒清片是云南白药集团股份有限公司的独家产品,目前还没有其抑制横纹肌肉瘤(A-204)细胞增殖的文献报道。
发明内容
发明目的:本发明的目的在于提供热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用。
技术方案:热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用。
热毒清片处方为重楼、南板蓝根、蒲公英、冰片、甘草,能清热解毒,消肿散结,用于上呼吸道感染引起的咽喉发炎,规格为每片0.3g,口服,一次3-4片,一日3次,现发现其能抑制A-204细胞增殖。
有益效果:热毒清片抑制A-204细胞增殖,效果良好。
具体实施方式
热毒清片抑制A-204细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
横纹肌肉瘤(A-204),来自本公司实验室细胞库,DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物:热毒清片,云南白药集团股份有限公司,批号:20110423
药液储液:称取100mg热毒清片,溶于5ml无水乙醇中,0.2μm滤器过滤,500μl doff管分装,-20℃存储,同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419);NaHCO3(上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387);Trypsin(AMRESCO公司批号:2010/04);EDTA(AMRESCO公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司批号:2010242);Streptomycin Sulfate(AMRESCO公司批号:2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182);MTT(Biosharp批号:0793);PBS(实验室自配);
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜(德国Leica型号:DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号:SPECTRAMAX 190);CO2培养箱(FORMA型号:3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号:S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A);冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号:KA-1000);0.2μm滤器(MILLIPORE型号:SLGP033RB);10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司);细胞计数板;离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1)A-204细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养(10cm培养皿),当细胞生长至对数期时,收集细胞,弃去培养液,PBS轻洗3遍,加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA,37℃消化2min后,向其中加入5ml完全培养基中和反应,吹打细胞后将其转入离心管中,1000rpm离心5min,调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中,每孔加入细胞悬液180μl,培养板放入细胞培养箱中(37℃,5%CO2)常规培养。
3)根据细胞生长情况,一般长至50%-70%,加入热毒清片溶液,继续培养24h。
4)24h后加入20μl MTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。
5)4h后扣板法倒去上清,用吸水纸轻轻拍干,每孔加入200μl二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底(不加细胞,只加培养液),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示:
细胞增值抑制率(%)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验,数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示,与对照组比较,当剂量达到5mg/ml时,对A-204细胞增殖抑制有差异(P<0.05),剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P<0.01),当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(P<0.001)。
表1热毒清片对A-204细胞增殖抑制影响研究 
注:与对照组比较,*P<0.01;**P<0.001
5实验结论
热毒清片可以抑制A-204细胞增殖,减少A-204细胞的细胞生长数目,该作用呈剂量依赖性。

Claims (1)

1.热毒清片在制备抑制A-204细胞增殖药物中的应用,其特征在于,热毒清片处方为重楼、南板蓝根、蒲公英、冰片、甘草,能清热解毒,消肿散结,用于上呼吸道感染引起的咽喉发炎,规格为每片0.3g,口服,一次3-4片,一日3次。
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