CN102821773A - 包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物 - Google Patents

包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN102821773A
CN102821773A CN2011800166177A CN201180016617A CN102821773A CN 102821773 A CN102821773 A CN 102821773A CN 2011800166177 A CN2011800166177 A CN 2011800166177A CN 201180016617 A CN201180016617 A CN 201180016617A CN 102821773 A CN102821773 A CN 102821773A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bog bilberry
macula
degeneration
extract
bog
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011800166177A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102821773B (zh
Inventor
丁世荣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of CN102821773A publication Critical patent/CN102821773A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102821773B publication Critical patent/CN102821773B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/45—Ericaceae or Vacciniaceae (Heath or Blueberry family), e.g. blueberry, cranberry or bilberry
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于治疗、预防或缓解黄斑变性的组合物，所述组合物包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分。本发明的活性成分笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分抑制视网膜色素上皮细胞的A2E积累并且抑制A2E的氧化以有效地保护视网膜色素上皮细胞，从而预防黄斑变性的原因。因此，本发明的组合物可以开发为用于优异地治疗或缓解黄斑变性的各种产品，例如药物、膳食补充剂等。

Description

包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物
技术领域
本发明涉及一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物，所述组合物包含笃斯越橘(Vaccinium uliginosum)提取物或其部分(fraction)作为活性成分。
背景技术
黄斑(macula)或黄斑(macula lutea)是位于人眼视网膜中心附近的神经组织，主要负责眼睛的视觉，因为其是视野的中心，并且是大部分视觉细胞集中和图像所在的位置。由各种因素导致的黄斑变性是导致视觉损害的医疗状况。黄斑变性是三种不可逆的失明的主要原因之一，另外两种是青光眼和糖尿病性视网膜病。
由视网膜中心的损伤所导致的黄斑变性自身表现为各种病征或症状的形式(包括中央视觉模糊、中心暗点、视物变形症形式的视觉扭曲、中心视觉的点状丧失等)，因而使得难以或不可能进行诸如阅读和驾驶的日常生命活动。在极端情况下，黄斑变性可能导致失明。
黄斑变性的首要代表性原因中有老化，同时家族史、人种和吸烟据报道也与黄斑变性的发作有关。特别地，在西方社会，年龄相关的黄斑变性(AMD)长期以来是55岁或更老的老年人失明的主要原因。据报道，美国每年有高达8百万的人患有干AMD，这是AMD的一种，并且有3百万人丧失视力。而且，在韩国患有黄斑变性的患者的数目大量增加，并且这被认为是由于西方化的饮食以及由于臭氧枯竭而导致的UV暴露增加。黄斑变性被认为是主要在老年人中发生的病症，但是最近一些年发生黄斑变性的人已经低于60岁，甚至在40或50岁时发生，并且中年人中的发病率迅速升高。
黄斑变性主要以干和湿形式发生。干AMD导致约90%的诊断病例。在干黄斑变性中，来自代谢的细胞外废物诱导视网膜细胞死亡，这导致黄斑的萎缩或变薄。当由于视网膜细胞死亡的黄斑后异常血管生长并且弱血管被破坏时发生湿黄斑变性。干AMD是慢性疾病，其缓慢地发展从而患有干AMD的患者无法察觉该疾病的发作，因为在早期阶段没有症状。干AMD不导致完全失明，但是许多变为导致完全失明的湿AMD。因此，对于人们非常重要的是在远视开始发生的40或50岁时试图预防该疾病。
特别地，对于干黄斑变性还没有确立的医疗或手术治疗。如果变性边界清晰，则湿黄斑变性的治疗用激光光凝固法进行。此外，使用维速达尔(visudyne)的光动力学疗法(PDT)对于治疗湿黄斑变性是有效的。用于抑制血管发生的VEGF抑制剂的眼内注射也被提议为湿黄斑变性的疗法。然而，特别强调黄斑变性的预防，因为目前尚未确立有希望的疗法。
同时，黄斑变性市场主要是药物和功能健康食品。迄今为止，在韩国批准用于治疗年龄相关的黄斑变性的唯一可用药物是用于湿类型的黄斑变性的雷珠单抗(Lucentis)，并且尚未批准用于干黄斑变性的药物。雷珠单抗是人源化单克隆抗体，其强力地结合并抑制血管内皮生长因子A(VEGF-A)。已知这种药物改善湿黄斑变性破坏的视觉或者维持视觉以免恶化。
Genetech所警示的临床试验中的副作用为接受雷珠单抗的患者的中风风险。此外，雷珠单抗价格昂贵并且其眼内注射也不方便。
对于功能健康食品领域，尚未了解除叶黄素以外的其他有效食品成分。据发现，叶黄素在黄斑中浓缩以增加黄斑色素从而有助于防止黄斑变性。然而，一些研究表明使用诸如叶黄素的类胡萝卜素补充剂在长时间内增加肺癌的风险，特别是在吸烟者中。因此，使用叶黄素相关产品对于吸烟者可能是危险的。
充当黄斑色素如叶黄素的玉米黄质和花色素苷在浆果中含量丰富，据报道表现出抗AMD效果，但是还没得到FDA批准。另外，关于该色素对黄斑变性的效果仅进行了一些研究。考虑到黄斑变性不仅从老年人扩散到中年人，而且对于黄斑变性还没有令人满意的疗法的情况，亟需开发有助于对抗黄斑变性的药物和功能健康食品。
发明内容
技术问题
因此，本发明致力于本领域存在的上述问题，并且本发明的目的在于提供一种用于治疗或预防黄斑变性的组合物，所述组合物包含笃斯越橘的提取物作为活性成分，其表现出优异的治疗和预防效果，甚至在长期使用时不导致副作用。
本发明的另一目的在于提供用于改善黄斑变性的化妆品组合物、细胞学组合物或药物组合物，其包含笃斯越橘提取物。
本发明的这些和其他目的及特征可以从以下详述、权利要求书和附图更完整地理解，这构成本申请的一部分。
技术方案
为了实现上述目的，本发明提供一种用于改善或治疗黄斑变性的组合物，所述组合物包含笃斯越橘的提取物作为活性成分。
根据我们对于黄斑变性的原因和发展的了解，A2E(双类视黄醇吡啶(pyridinium bis-retinoid))是主要负责黄斑变性的首要因素。A2E在体内并不降解，并且其在视网膜色素上皮细胞中的积累与年龄相关的黄斑变性的发展有关。A2E是发现的视网膜色素上皮脂褐素的主要自发光(autofluorescent)组分之一，在视网膜色素上皮细胞中积累以诱导这些细胞的死亡，由此发生光受体细胞死亡，从而包含高浓度光受体细胞的黄斑丧失其功能，发生黄斑变性。
此外，UV光增加黄斑变性的风险或者加速黄斑变性的发展，因为其将A2E转化为光氧化形式，这显著地增加视网膜色素上皮细胞的死亡。
在本发明之前，本发明人进行了关于治疗和预防黄斑变性的广泛且详尽的研究，并且获得了确定的结果。该研究获得这样的发现，笃斯越橘的提取物可以抑制视网膜色素上皮细胞中A2E的积累以及A2E通过UV光的氧化，从而保护视网膜色素上皮细胞免于A2E，并且获得科学证据表明所述提取物可以治疗和预防黄斑变性。
首次由本发明用于治疗、预防和改善黄斑变性的笃斯越橘属于杜鹃花科(Ericaceae)。在韩国，该植物原生于Halla山、Keumkang山、Baekdu山等地。该植物从6月至7月开花，并在8月结果。笃斯越橘中发现的主要组分包括糖(8~11.8%)、果酸(2~2.25%)、鞣酸(0.15~0.25%)和纤维蛋白。
笃斯越橘的药用历史悠久。中世纪德国的修道院院长St.Hildegard ofBingen(1098-1179)提议将果实用作女性生理疾病状况的药物。在中国和北韩，笃斯越橘长期以来用作健康酒精饮料的材料。然而，对笃斯越橘的药理活性的科学基础了解很少，对其组分的分析数据也很少。
如上文所述，将通常用作食品材料的笃斯越橘用作治疗、预防或改善黄斑变性的物质。本发明的用于预防或治疗黄斑变性的组合物可以配制为局部剂型，其常规地直接施用于眼，如滴眼剂、眼软膏以及口服剂型。
如下文所解释的，用ARPE-19细胞进行的实验证实，本发明的笃斯越橘的提取物具有抑制A2E积累和抑制A2E氧化的潜力。笃斯越橘提取物或其部分可以完全对抗黄斑变性的病因，如A2E积累和A2E氧化，从而其可以用作治疗、预防和改善黄斑变性，特别是年龄相关的黄斑变性的药物组合物或功能食品组合物的活性成分。
因此，本发明的另一方面在于笃斯越橘提取物或其部分在治疗、预防或改善黄斑变性中的用途。在一优选实施方案中，本发明提供一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物，或者一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的方法。
在一实施方案中，本发明提供一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物，所述组合物包含笃斯越橘提取物或其部分作为活性成分。
笃斯越橘提取物可以是从笃斯越橘的花、果实、叶或树皮制备的提取物。
天然材料的提取可以根据本领域公知的方法用通常的溶剂，即在通常温度、压力和时间条件下进行。此外，可用于通常提取过程的溶剂可以用于制备本发明的笃斯越橘提取物。优选水以及无水或含水的1-4个碳原子的低级醇。此外，提取溶剂可以选自丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇。
对于笃斯越橘部分，其可以获得自笃斯越橘的花、果实、叶或树皮以及笃斯越橘提取物。表现出本发明的显著效果的笃斯越橘的实例包括笃斯越橘的多酚部分、笃斯越橘的色素部分及其组合，并且优选笃斯越橘的多酚部分。
笃斯越橘部分可以利用本领域公知的分级分离方法获得，例如色素分级分离、多酚分级分离等，例如通过下文的实施例部分描述的固相提取(SPE)。笃斯越橘部分可以在适合的过程中利用根据要提取的成分而选择的合适洗脱溶剂来分离。例如，可以获得富含碳水化合物/酸成分的碳水化合物/酸部分、富含多酚化合物(黄酮醇等)的多酚部分以及富含色素(花色素苷)的色素部分。本领域技术人员可以容易地选择合适的洗脱溶剂。例如，如下文的实施例部分所示，可以用乙酸乙酯获得多酚部分，并且可以利用HCl/甲醇水溶液形成色素部分。在这些部分中，仅多酚部分、色素部分或其混合物表现出显著的效果。最优选多酚部分。
在本发明的一实施方案中，所述组合物可以为药物组合物的形式，其包含药学有效量的笃斯越橘提取物。本文所用的术语“药学有效量”指足以实现对黄斑变性的治疗或预防效果的活性成分的量。
除了笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分以外，本发明的药物组合物还可以包含药学可接受的载体。药学可接受的载体可以为本领域常用的那些载体，包括例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油，但并不限于此。此外，本发明的药物组合物还可以包含稀释剂、赋形剂(expedient)或其他药学可接受的添加剂，例如填充剂、增稠剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等。
本发明的药物组合物的有效剂量取决于各种因素，包括配制方法、给药方法、患者体重、年龄、性别、健康状况、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物敏感性等。通常可以单剂量给药，并且优选以每天的多剂量给药，每日剂量的范围为0.001-1000mg/kg。
本发明的药物组合物可以口服或肠胃外给药。所述药物组合物的代表性剂型有滴眼剂、眼软膏、注射剂、片剂、胶囊剂、粒剂和散剂。它们可以利用目前可用的技术来配制。
作为示例，为了制备滴眼剂，可以任选地使用等渗剂，例如氯化钠和浓甘油；缓冲剂，如磷酸钠和乙酸钠；表面活性剂，如聚氧乙烯山梨坦单油酸酯、聚氧乙烯硬脂酸40(stearic acid polyoxyl 40)和聚氧乙烯氢化蓖麻油；稳定剂，如柠檬酸钠和依地酸钠(sodium edentate)；以及防腐剂，如苯扎氯胺和对羟基苯甲酸酯。将滴眼剂的pH调节至眼用物质通常允许的范围内，优选4~8。
眼软膏可以通过用作基质的白凡士林或液体石蜡制备。对于口服制剂如片剂、胶囊剂、粒剂和散剂，它们的制备可以任选地使用增稠剂，如乳酸、晶体纤维素、淀粉和植物油；润滑剂，如硬脂酸镁和滑石；粘合剂，如羟丙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，如羧甲基纤维素钙和低取代的羟丙基甲基纤维素；包衣剂，如羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇和硅树脂；以及膜剂，如明胶膜。
在一实施方案中，本发明的组合物可以食品组合物的形式提供，特别是功能食品组合物。本发明的功能食品组合物可以包含食品制备中常用的成分，例如蛋白质、碳水化合物、脂质、营养物和调味剂。作为示例，用于食品组合物的天然碳水化合物包括单糖(如葡萄糖、果糖等)；二糖(如麦芽糖、蔗糖等)；寡糖；多糖(如糊精、环糊精等)；以及糖醇(如木糖醇、山梨醇、赤藓醇等)。调味剂可以是天然的(如竹芋蛋白、甜叶菊提取物等)和合成的(如糖精、阿斯巴甜等)。
在一实施方案中，本发明提供一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的方法，所述方法包括向患有黄斑变性或者有需要的个体给予所述药物组合物或所述食品组合物，或者向所述个体施用所述组合物，这取决于所述组合物的制剂。在本文中，个体为包括人在内的哺乳动物。
有利效果
通过抑制视网膜色素上皮细胞中的A2E积累和抑制A2E氧化，本发明的活性成分笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分完全地对抗黄斑变性的病因。因此，本发明的组合物可以开发为各种用于治疗或改善黄斑变性的产品，例如药物和功能健康食品。
附图说明
图1为示出以下内容的图：笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E的UV-A-诱导的光氧化的抑制活性。
图2为示出以下内容的图：笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E积累的ARPE-19细胞的UV-A-诱导的凋亡的细胞保护活性。
图3为示出以下内容的图：笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对细胞内A2E/异A2E积累的抑制活性。
实施例
本发明在以下实施例中进一步限定。应当理解，这些实施例，尽管示例本发明的优选实施方案，但仅仅是示例性的。根据上文的讨论和这些实施例，本领域技术人员可以明确本发明的基本特征，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种变化和修饰以使其适应各种用途和条件。因此，除了本文所示和所述的那些以外，根据上述说明书，本发明的各种修饰对于本领域技术人是显而易见的。这样的修饰也意图在所附的权利要求书的范围内。
实施例1：笃斯越橘提取物的制备
选择形状良好的笃斯越橘的果实并洗涤。向100g果实添加2,000mL水，然后在90°C下进行两轮热水提取16小时以获得10%笃斯越橘提取物。将这种笃斯越橘提取物冷冻干燥，加工成粉末并保存在-40°C下，直至用于制备笃斯越橘部分或者用于下文的实验。
实施例2：笃斯越橘部分的制备
将实施例1中制备的粉末形式的笃斯越橘提取物溶于蒸馏水。分别地，将两个C18Sep-Pak柱筒(cartridge)互相连接并用10mL乙酸乙酯和无水甲醇预条件处理，然后使0.01NHCl水溶液流过柱筒。
将提取物溶液装入柱筒，然后用6mL0.01NHCl水溶液洗脱碳水化合物、酸和其他水溶性化合物。洗脱液收集为碳水化合物/酸部分，其在随后的实验中用作比较。
然后，将连接的C18Sep-Pak柱筒用氮气通气10min来干燥上述柱筒。然后，使20mL乙酸乙酯流过干燥的柱筒以洗脱酚化合物和在试管中收集多酚(polyphenyl)部分。
然后，用10mL包含0.1%HCl的无水甲醇洗脱花色素苷以获得色素部分。
将所有的部分在40°C下浓缩以除去残留的溶剂。
这些步骤之后，将碳水化合物/酸部分和色素部分分别溶于蒸馏水，并将笃斯越橘多酚部分溶于50%乙醇水溶液。将部分的溶液保存于-70°C下直至用于随后的实验和分析。
实施例3：细胞培养
用于本发明的实验和分析的人成体ARPE细胞(ARPE-19；编号CRL-2302)获得自Catholic University of Korea,School of Medicine的VisionScience Institute。在37°C和5%CO2气氛的培养箱中，将ARPE细胞保持在DMEM中，所述DMEM补充了10%胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素和100mg/ml链霉素。将细胞以5×104个细胞/孔的密度接种于6孔板中。实施例4：A2E合成
合成用于本发明的实验和分析的A2E。首先，将全反式视黄醇(retinal)和乙醇胺(2:1摩尔比)在乙醇中的混合物与乙酸在避光条件下反应2天。将所得的混合物在40°C下真空浓缩，然后通过硅胶柱色谱纯化以获得纯A2E。将其制备为20mM的DMSO(二甲亚砜)中的储备液，并保存在-20°C下直至用于实验。
实验例1：笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E的UV-A-诱导的光氧化的抑制活性
将A2E用发射355nm~375nm波长的UV-A灯(Sankyo Denki,Tokyo,Japan)光氧化。在用UV-A光照射之前，将细胞用PBS(磷酸缓冲盐水)洗涤，并将PBS去除至细胞未变干燥的程度。从孔板移除盖子，然后用UV-A光以2.35±0.3mW/cm2的强度照射，能量为3J/cm2。
分析笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E氧化的抑制活性。为此，在96孔板的每孔中，将20μL的1mM A2E(将20mM A2E储备液在PBS中稀释)与160μL包含0.01%DMSO(二甲亚砜)的PBS中的20μL笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分混合。然后在ELISA酶标仪中测量430nm的吸光度。UV-A(3J/cm2)照射入孔板中后，如之前进行的相同方式读取吸光度。将测试样品的吸光度值与A2E对照比较。氧化的A2E的浓度表示为UV-A照射之前和之后的吸光度差异。
实验例2：笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E-积累的ARPE-19的UV-A-诱导的死亡的细胞保护活性
将ARPE-19细胞以5x104个细胞/孔的密度接种在6孔板中，并使其中积累20μL的A2E，保持5天。然后，将细胞用各种剂量的笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分(笃斯越橘提取物：100、250、500mg/mL；笃斯越橘部分：12.5、25、50、100mg/mL)处理，然后用UV-A(3J/cm2)照射。温育24小时后，利用MTT测定分析UV-A-诱导的凋亡。在这种情况中，将细胞在包含0.5mg/mL MTT的DMEM中于37°C下避光温育2小时。然后将细胞充分溶于DMSO，随后在ELISA酶标仪中测量550nm的吸光度。细胞成活力表示为正常对照的吸光度的百分比，所述正常对照不积累A2E也不用UV-A照射。
实验例3：笃斯越橘提取物和部分对ARPE-19细胞的A2E/异A2E积累的抑制活性
将ARPE-19细胞以5×104个细胞/孔的密度接种在6孔板中，并用各种剂量的笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分温育2天，然后使细胞以与之前的实验相同的方式在其中积累A2E。然后，将细胞悬浮于包含蛋白酶抑制剂(CompleteTM,Roche,Mannheim,Germany)的25mM HEPES缓冲液中，并进行高效液相色谱以定量分析细胞A2E沉积。对于定量分析，使用浓度已知的A2E溶液。通过Bradford方法的测量校准A2E水平(Bio-Rad Protein Assay,Bio-Rad,Hercules,CA)。在HPLC分析之前，用CHCl3从ARPE-19细胞提取A2E，然后使用样品。
HPLC分析的详细条件和方法如下。
HPLC分析
使用Waters 600E HPLC系统，其配有Waters 996光电二极管阵列检测器A，使用反相C18柱(2504.6mm,Cosmosil 5C18,Nacalai Tesque,Osaka,Japan)。将A2E用0.1%三氟乙酸(TFA)溶液中的乙腈溶解并分离。一旦分离A2E，测量430nm的吸光度并表示为A2E没有积累的组的%。
实验结果1笃斯越橘提取物和部分对A2E的UV-A-诱导的光氧化的抑制活性
为了检查笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分对A2E氧化的抑制活性，将细胞用UV-A光照射，并以实验例1相同的方式测量氧化的A2E浓度(图1)。
从图1(a)可见，与未处理相比，用125、250、500μg/mL浓度的笃斯越橘提取物处理时，氧化的A2E的水平分别降低20、32和41%，这表明笃斯越橘提取物以剂量依赖性的方式抑制光诱导的A2E氧化。
此外，如图1(b)所示，与对照相比(未处理)，25、50和100μg/mL多酚部分分别降低氧化的A2E的水平33、71和85%，这显示最强的对A2E氧化的抑制活性。在相同浓度的色素部分的存在下，与未处理的细胞相比，氧化的A2E水平分别降低32、53和66%。相比之下，未观察到碳水化合物/酸部分具有抗氧化活性。因此，对A2E氧化的抑制活性的次序为多酚部分>色素部分》碳水化合物/酸部分。
实验结果2笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E-积累的ARPE-19细胞的UV-A-诱导的凋亡的细胞保护活性
为了检查本发明的笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分的细胞保护活性，以实验例2相同的方式，在UV-A照射后，利用MTT测定分析细胞凋亡(图2)。
参见图2(a)，与未积累A2E也未用UV-A照射的正常对照相比，其中未积累A2E并用UV-A照射的细胞(无A2E-UV)和A2E后未用UV-A照射的细胞(A2E-无UV)均未表现出细胞成活力的显著差异。正常对照与A2E积累后用UV-A照射的阴性对照之间存在细胞成活力的显著差异。
从图2(a)的数据明显可见，与阴性对照相比，用125、250和500μg/mL笃斯越橘处理的细胞的细胞成活力分别增加63、134和167%，这表明笃斯越橘提取物以剂量依赖性的方式保护ARPE-19细胞。
此外，如图2(b)所示，与阴性细胞相比，12.5、25、50和100μg/mL浓度的多酚部分分别增加细胞成活力63、80、161和207%，这表现出笃斯越橘部分中最高的细胞保护活性。与阴性对照相比，用相同浓度的色素部分处理的细胞的细胞成活力分别增加14、26、44和75%。相比之下，未发现碳水化合物/酸部分具有细胞保护活性。对ARPE-19细胞的UV-A-诱导的氧化的细胞保护活性的次序为多酚部分》色素部分>碳水化合物/酸部分。
实验结果3笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对ARPE-19细胞中A2E和异A2E积累的抑制活性
为了检查本发明的笃斯越橘提取物和笃斯越橘部分对A2E和异A2E积累的抑制活性，重复实验例3中相同的步骤。测定A2E和异A2E的水平，结果示于图3。
从图3(a)可见，与未处理的细胞相比，观察到用50、100、250和500μg/mL浓度的笃斯越橘提取物处理的ARPE-19细胞的A2E/异A2E水平分别降低18、26、37和34%/8、11、18和13%，这表明笃斯越橘提取物以剂量依赖性的方式抑制A2E/异A2E的积累。
参照图2(b)，与未处理的细胞相比，在用25、50和100μg/mL的色素部分处理的ARPE-19细胞中积累的A2E/异A2E水平分别降低36、45和51/13、14和40%，这显示色素部分具有最强的对A2E/异A2E积累的抑制活性。在相同浓度下，多酚部分分别降低A2E/异A2E的细胞内积累19、20和40/0.1、3.3和15%。相比之下，未发现碳水化合物/酸部分具有对A2E/异A2E积累的抑制活性。因此，对ARPE-19细胞中A2E和异A2E积累的抑制活性的次序为色素部分>多酚部分》碳水化合物/酸部分。
总而言之，从实验获得的数据证实，本发明的笃斯越橘提取物以及源自其的部分抑制ARPE-19细胞中的A2E积累，并且抑制A2E的UV-诱导的光氧化，从而保护ARPE-19细胞。
因此，本发明的组合物可以完全地对抗黄斑变性的病因，并且预期对于改善和缓和黄斑变性非常有用。
尽管参考前述优选和替代性实施方案具体地示出和描述了本发明，但是本领域技术人员应当理解在实施本发明中可以使用本文所述的发明的实施方案的各种替代选择而不偏离所附的权利要求书限定的本发明的精神和范围。所附的权利要求书限定本发明的范围并且覆盖这些权利要求及其等同物的范围中的组合物和方法。

Claims (14)

1.一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的药物组合物，所述药物组合物包含笃斯越橘(Vaccinium uliginosum)提取物或笃斯越橘部分作为活性成分。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述笃斯越橘提取物通过用水、1-4个碳原子的低级醇或其组合提取来获得。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述笃斯越橘部分利用固相提取(SPE)方法来分级分离。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述黄斑变性为年龄相关的黄斑变性。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述笃斯越橘部分为笃斯越橘的多酚部分、笃斯越橘的色素部分或其组合。
6.如权利要求5所述的药物组合物，其中通过用HCl从所述笃斯越橘提取物除去碳水化合物/酸部分，然后用乙酸乙酯洗脱来获得所述笃斯越橘的多酚部分。
7.如权利要求5所述的药物组合物，其中用HCl从所述笃斯越橘提取物除去碳水化合物/酸部分并用乙酸乙酯洗脱多酚部分之后，用甲醇/HCl洗脱所述笃斯越橘的色素部分。
8.如权利要求1所述的药物组合物，其配制为滴眼剂或眼软膏。
9.一种用于预防或改善黄斑变性的食品组合物，所述食品组合物包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分。
10.如权利要求9所述的食品组合物，其中所述黄斑变性为年龄相关的黄斑变性。
11.如权利要求9所述的食品组合物，其中所述笃斯越橘部分为笃斯越橘的多酚部分、笃斯越橘的色素部分或其组合。
12.如权利要求11所述的食品组合物，其中通过用HCl从所述笃斯越橘提取物除去碳水化合物/酸部分，然后用乙酸乙酯洗脱来获得所述笃斯越橘的多酚部分。
13.如权利要求11所述的食品组合物，其中用HCl从所述笃斯越橘提取物除去碳水化合物/酸部分并用乙酸乙酯洗脱多酚部分之后，用甲醇/HCl洗脱所述笃斯越橘的色素部分。
14.一种用于治疗、预防或改善黄斑变性的方法，所述方法包括向有需要的个体给予或施用权利要求1-8中任一项所述的药物组合物或者权利要求9-13中任一项所述的食品组合物。
CN201180016617.7A 2010-03-10 2011-03-09 包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物 Active CN102821773B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20100021449 2010-03-10
KR10-2010-0021449 2010-03-10
PCT/KR2011/001631 WO2011112002A2 (ko) 2010-03-10 2011-03-09 들쭉 추출물 또는 들쭉 분획물을 유효 성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102821773A true CN102821773A (zh) 2012-12-12
CN102821773B CN102821773B (zh) 2014-09-03

Family

ID=44564001

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201180016617.7A Active CN102821773B (zh) 2010-03-10 2011-03-09 包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物

Country Status (4)

Country Link
JP (1) JP5860418B2 (zh)
KR (1) KR101330850B1 (zh)
CN (1) CN102821773B (zh)
WO (1) WO2011112002A2 (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101484386B1 (ko) * 2013-01-23 2015-01-19 정수영 들쭉 추출물로부터 분리된 페놀류 화합물을 유효성분으로 함유하는 황반 변성증의 치료, 예방 또는 개선용 조성물
KR20170036352A (ko) * 2015-09-24 2017-04-03 동아에스티 주식회사 들쭉 추출물을 유효성분으로 함유하는 황반변성증 치료용 조성물
KR102481709B1 (ko) 2015-12-21 2022-12-27 동아제약 주식회사 들쭉 추출물을 유효성분으로 포함하는 안구건조증 치료용 조성물
KR20210142445A (ko) 2020-05-18 2021-11-25 (주)비지엔케어 울금 추출물을 포함하는 망막질환 예방 및 치료용 조성물

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1032176A (zh) * 1988-07-02 1989-04-05 黑龙江中医学院 笃斯色素的提取工艺
US20050175720A1 (en) * 2002-04-03 2005-08-11 Mckenzie Maureen A. Vaccinium species compositions with novel beneficial properties
CN101102746A (zh) * 2005-01-11 2008-01-09 丁世荣 包含笃斯越桔提取物的用于改善皮肤状况的组合物及其制备方法
CN101265252A (zh) * 2008-04-28 2008-09-17 吉林大学 笃斯越桔花青素及其分离纯化方法
CN102258165A (zh) * 2010-09-08 2011-11-30 李德海 笃斯越橘花色苷片剂及其制备方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5474774A (en) * 1994-03-25 1995-12-12 Jlb, Inc. Adhesion inhibiting composition
US7306815B2 (en) * 2000-08-31 2007-12-11 Phenolics, Llc Compositions enriched in phenolic compounds and methods for producing the same
KR100616068B1 (ko) * 2004-12-14 2006-08-28 학교법인 한림대학교 들쭉나무 추출물을 포함하는 당뇨병 합병증 저해제
JP4873904B2 (ja) * 2005-08-22 2012-02-08 国立大学法人弘前大学 眼血管血流障害改善剤
WO2007094193A1 (ja) * 2006-02-15 2007-08-23 Wakasa Seikatsu Co., Ltd 血管新生阻害剤及び血管新生を伴う疾病に対する予防又は治療剤並びに食品

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1032176A (zh) * 1988-07-02 1989-04-05 黑龙江中医学院 笃斯色素的提取工艺
US20050175720A1 (en) * 2002-04-03 2005-08-11 Mckenzie Maureen A. Vaccinium species compositions with novel beneficial properties
CN101102746A (zh) * 2005-01-11 2008-01-09 丁世荣 包含笃斯越桔提取物的用于改善皮肤状况的组合物及其制备方法
CN101265252A (zh) * 2008-04-28 2008-09-17 吉林大学 笃斯越桔花青素及其分离纯化方法
CN102258165A (zh) * 2010-09-08 2011-11-30 李德海 笃斯越橘花色苷片剂及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN102821773B (zh) 2014-09-03
WO2011112002A2 (ko) 2011-09-15
KR20110102246A (ko) 2011-09-16
WO2011112002A3 (ko) 2012-01-12
KR101330850B1 (ko) 2013-11-18
JP2013522188A (ja) 2013-06-13
JP5860418B2 (ja) 2016-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101762750B1 (ko) 무궁화의 꽃으로부터 추출된 정유를 포함하는 피부 재생용 외용제 및 화장료 조성물
Arawwawala et al. Alpinia calcarata Roscoe: A potent antiinflammatory agent
US20140080776A1 (en) Composition and methods for extracting and using phytochemicals for the treatment of influenza
Nikavar et al. Influence of three Morus species extracts on α-amylase activity
CN102821773B (zh) 包含笃斯越橘提取物或笃斯越橘部分作为活性成分的用于治疗、预防或改善黄斑变性的组合物
KR100877371B1 (ko) 시력 보호용 조성물
KR102120483B1 (ko) 하고초 추출물을 유효성분으로 함유하는 황반변성의 예방 또는 치료용 약학 조성물
Cui et al. Experimental and clinical applications of Chamaecyparis obtusa extracts in dry eye disease
EP3341002B1 (en) Herbal composition for the treatment of age related macular diseases
WO2015190875A1 (ko) 스피루리나 추출물을 유효성분으로 함유하는 망막질환 예방 및 치료용 약학적 조성물
WO2014009936A1 (en) Compositions for the treatment of neuropathic pain
JP2006248946A (ja) 視機能障害改善剤及び視神経細胞保護剤
KR20200091925A (ko) 칠엽수 추출물을 포함하는 조성물
KR20120095251A (ko) 벌개미취 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 망막질환 예방 및 치료용 조성물
JP4644834B2 (ja) ハマナス類由来のα−アミラーゼ阻害剤、α−グルコシダーゼ阻害剤、グルコース吸収阻害剤およびその利用
Sivaranjani et al. In Vitro Anti Inflammatory and Antioxidant Activities on Fruits of Terminalia catappa L.
US20220339232A1 (en) Phytocomplex and selected extract of a meristematic cell line of a plant belonging to the genus melissa
JPWO2006030907A1 (ja) 網膜保護剤
WO2008001360A2 (en) Compositions and methods for treating and preventing gastro esophageal reflux disease
Rao et al. Alloxan induced diabetes and impairment of oxidative defense system in rat pancreas: protective effect of actinopteris dichotoma
Sharmila et al. Anti-diabetic potential of Indian medicinal plants with Garcinia kola and Syzygium cumini
KR102311887B1 (ko) 괭생이모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 간질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물
Mumper et al. Berry preparation and extracts
KR20180077484A (ko) 장미 수용성 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 녹내장 또는 황반변성 예방 또는 치료용 조성물
Kahyaoğlu et al. Hypericum’s 90th anniversary in the laboratory

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant