CN102787106A - 发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高产菌株发酵制取谷氨酸脱氢酶的方法，其制备方法如下：经过谷氨酸棒杆菌发酵、制备粗酶液、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析、超滤、浓缩干燥后，获得谷氨酸脱氢酶成品，其比酶活高于260U/mg，酶活回收率高于14％，纯化倍数约75倍。本发明采用上述方法制备谷氨酸脱氢酶，设备简单，方法易行，操作安全，适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别是涉及到一种谷氨酸脱氢酶的发酵制备方法。
背景技术
谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase)是谷氨酸生物合成过程中的关键酶，它广泛分布于细菌、酵母、植物和哺乳动物组织中，是连接碳、氮代谢的重要酶类，催化谷氨酸脱氨生成α-酮戊二酸和氨，氨基被用于许多其他氨基酸的合成中。目前，谷氨酸脱氢酶已应用到医疗诊断中，也是制备尿素氮试剂盒(速率法)的必需酶之一。
从1960年开始，国内外对其他细菌来源的谷氨酸脱氢酶已开始进行分离和研究。但对谷氨酸生产菌中谷氨酸脱氢酶的报道较少，谷氨酸棒杆菌中的谷氨酸脱氢酶的提取纯化相关报道很少，国内尚未实现菌株发酵制备谷氨酸脱氢酶的规模化生产，致使国内研制尿素氮试剂盒所用的谷氨酸脱氢酶大多从国外进口，因此试剂盒的成本较高，为降低其成本必须解决谷氨酸脱氢酶的制备问题，因而对谷氨酸脱氢酶的菌株发酵制备工艺进行深入的研究，将为指导工业生产提供重要的依据。
发明内容
本发明的目的是提出发酵法制取谷氨酸脱氢酶的一种工艺，本工艺可以有效提谷氨酸脱氢酶的产量和产品纯度，提高产率，降低生产成本。
发酵法制取谷氨酸脱氢酶的一种工艺方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)谷氨酸棒杆菌CQ920的发酵
谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h进行活化，活化1～2次；将3-4块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内，32℃，180rpm培养10-12h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内，控制发酵温度及通风，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右。
(2)谷氨酸脱氢酶粗酶液的制备
菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤数次，取定量湿菌体，按比例加入pH 7.5的25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液。
(3)离子交换层析
谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，分布收集，合并活性部分。
(4)疏水层析
离子交换层析液用PEG6000浓缩后，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，分步收集，合并活性部分。
(5)凝胶过滤层析
疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩后上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱SuperdexG-200，用相同的缓冲液洗脱，分步收集，合并活性高的部分。
(6)超滤
将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h。
(7)成品：取离心后上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品。
本发明提供的上述以发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特点在于：
(1)诱变筛选获得高产谷氨酸脱氢酶菌株，菌株发酵性能稳定，发酵液内谷氨酸脱氢酶含量高，酶活性高，为后期发酵工艺的优化及产物的提取奠定了基础；
(2)菌株发酵培养基内加入了稀土元素，有效提高了谷氨酸脱氢酶的活性，优化后菌株发酵酶活达到110U/mL，为国内已报道中最高水平；
(3)采用柱层析进行谷氨酸脱氢酶的纯化，可有效提高终产品的比酶活，同时降低杂质对产物的影响，有效实现终产品的稳定性和高效性；
(4)利用液体发酵制备谷氨酸脱氢酶，与传统提取法相比，具有周期短、产量大、成本低等优点，制备获得的谷氨酸脱氢酶的比酶活高于260U/mg。
附图说明
附图1为发酵法制取谷氨酸脱氢酶工艺流程图，经菌株发酵制备获得的谷氨酸脱氢酶成品比酶活高于260U/mg。
具体实施方式
提出以下实例来具体说明本发明，但本发明的内容并不局限于此。
实例1
谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h活化2次；将3块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内(尿素0.5％(单独灭菌)，葡萄糖2.5％，玉米浆3％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，pH值7.0-7.2)，32℃，180rpm培养10h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内(尿素0.8％(单独灭菌)，葡萄糖5％，玉米浆0.8％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，LaCl3 0.72mmol/L，CeCl3 0.071mmol/L，NdCl3 0.007mmol/L，pH值调节至7.0-7.2)，发酵温度前期控制为34℃，中期为36℃，后期为37℃，通风控制为前期200r/min，中期250r/min，后期230r/min，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右，发酵18h后停止。
菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤2次，取30g湿菌体，加入150ml pH 7.5的25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液，谷氨酸脱氢酶的酶活为110U/mL。
谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；离子交换层析液用PEG6000浓缩至5mL左右，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩至2mL左右，上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱Superdex G-200，用相同的缓冲液洗脱，流速0.5mL/min，分步收集，合并活性高的部分；将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h，取上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品，比酶活为260.8U/mg。
实例2
谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h活化1次；将4块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内(尿素0.8％(单独灭菌)，葡萄糖3％，玉米浆2.5％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，pH值7.0-7.2)，32℃，180rpm培养12h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内(尿素0.8％(单独灭菌)，葡萄糖5％，玉米浆0.8％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，LaCl3 0.72mmol/L，CeCl3 0.071mmol/L，NdCl3 0.007mmol/L，pH值调节至7.0-7.2)，发酵温度前期控制为33℃，中期为35℃，后期为37℃，通风控制为前期200r/min，中期250r/min，后期230r/min，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右，发酵18h后停止。
菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤3次，取30g湿菌体，加入200ml pH 7.5的25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液，谷氨酸脱氢酶的酶活为112U/mL。
谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；离子交换层析液用PEG6000浓缩至5mL左右，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩至2mL左右，上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱Superdex G-200，用相同的缓冲液洗脱，流速0.5mL/min，分步收集，合并活性高的部分；将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h，取上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品，比酶活为262.2U/mg。
实例3
谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h活化2次；将4块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内(尿素0.5％-0.8％(单独灭菌)，葡萄糖2.8％，玉米浆3％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，pH值7.0-7.2)，32℃，180rpm培养12h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内(尿素0.8％(单独灭菌)，葡萄糖5％，玉米浆0.8％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，LaCl3 0.72mmol/L，CeCl3 0.071mmol/L，NdCl3 0.007mmol/L，pH值调节至7.0-7.2)，发酵温度前期控制为32℃，中期为34℃，后期为37℃，通风控制为前期200r/min，中期250r/min，后期230r/min，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右，发酵18h后停止。
菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤3次，取30g湿菌体，加入150ml pH 7.5的25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液，谷氨酸脱氢酶的酶活为112.6U/mL。
谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；离子交换层析液用PEG6000浓缩至5mL左右，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩至2mL左右，上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱Superdex G-200，用相同的缓冲液洗脱，流速0.5mL/min，分步收集，合并活性高的部分；将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h，取上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品，比酶活为261.5U/mg。
实施例四
谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h活化2次；将4块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内(尿素0.5％(单独灭菌)，葡萄糖3％，玉米浆3％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，pH值7.0-7.2)，32℃，180rpm培养12h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内(尿素0.8％(单独灭菌)，葡萄糖5％，玉米浆0.8％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，LaCl3 0.72mmol/L，CeCl3 0.071mmol/L，NdCl3 0.007mmol/L，pH值调节至7.0-7.2)，发酵温度前期控制为32℃，中期为36℃，后期为37℃，通风控制为前期200r/min，中期250r/min，后期230r/min，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右。
菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤3次，取30g湿菌体，加入240ml pH 7.5的25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液，谷氨酸脱氢酶的酶活为112.5U/mL，发酵18h后停止。
谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；离子交换层析液用PEG6000浓缩至5mL左右，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，流速2.5mL/min，分步收集，合并活性部分；疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩至2mL左右，上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱Superdex G-200，用相同的缓冲液洗脱，流速0.5mL/min，分步收集，合并活性高的部分；将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h，取上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品，比酶活为260.9U/mg。
Claims (6)
1.一种发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，包括如下步骤：
(1)发酵：谷氨酸棒杆菌CQ920接种于普通肉汤培养基上，32℃培养36h进行活化，活化1～2次；将3-4块0.5-1.0cm2活化后的菌株接入灭菌冷却后的种子培养基内，32℃，180rpm培养10-12h；培养获得的种子培养液以8％的接种量转入灭菌冷却后的发酵培养基内，控制发酵温度及通风，发酵过程中流加10％的尿素控制pH值为7.5左右，当残糖浓度降至一定值时开始加入50％的葡萄糖溶液，流加糖总时间为10h左右；
(2)粗酶液的制备：菌株发酵液离心，用0.2％的KCl洗涤数次，取定量湿菌体，按比例加入pH 7.5 25mm的Tris-HCl缓冲液，菌体悬液在4℃用超声波细胞破碎仪处理2次，每次20min，离心去沉淀，获得谷氨酸脱氢酶粗提液；
(3)离子交换层析：离子交换层析工艺为：谷氨酸脱氢酶粗提液上样于25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的DEAE-纤维素柱，用含0.2-0.6mm NaCl的25mmTris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，分步收集，合并活性部分；
(4)疏水层析：离子交换层析液用PEG 6000浓缩后，上样于用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的疏水柱HiPrep，用含1m硫酸铵的25mm Tris-HCl(pH 7.5)和含50％乙二醇的25mm Tris-HCl(pH 7.5)梯度洗脱，分步收集，合并活性部分；
(5)凝胶过滤层析：疏水层析收集液用截留分子量为12000U的透析袋透析4h，用PEG6000浓缩后上样于用含0.2m NaCl的25mm Tris-HCl(pH 7.5)平衡的凝胶过滤柱Superdex G-200，用相同的缓冲液洗脱，分步收集，合并活性高的部分；
(6)超滤：将凝胶过滤层析收集液用截留分子量10000U的超滤器于5000r/min，4℃离心5-6h；
(7)成品：取离心后上部超滤液，冷冻干燥，获得谷氨酸脱氢酶成品。
2.根据权利要求1所述的发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，步骤(1)所述的种子培养基：尿素0.5％-0.8％(单独灭菌)，葡萄糖2％-3％，玉米浆2.5％-3％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，pH值7.0-7.2；发酵培养基：尿素0.5％-0.8％(单独灭菌)，葡萄糖2％-3％，玉米浆0.5-％0.8％，硫酸镁0.4％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸铁2×10-6，硫酸锰2×10-6，LaCl3 0.72mmol/L，CeCl3 0.071mmol/L，NdCl3 0.007mmol/L，pH值调节至7.0-7.2。
3.根据权利要求1所述的发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，步骤(1)所述的发酵温度前期控制为30-35℃，中期为32-37℃，后期为35-38℃；通风控制为前期150-200r/min，中期200-250r/min，后期180-230r/min。
4.根据权利要求1所述的发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，步骤(2)所述的谷氨酸脱氢酶制备过程中菌体洗涤次数为2-3次，湿菌体及缓冲液的比例为1∶5-1∶8(m/v)。
5.根据权利要求1所述的发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，步骤(3)、(4)、(5)、(6)所述的纯化各步操作均加入0.02％叠氯化钠以防止杂菌污染。
6.根据权利要求1所述的发酵法制取谷氨酸脱氢酶的工艺，其特征在于，制备获得的谷氨酸脱氢酶的比酶活高于260U/mg。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104178465A (zh) * | 2014-08-19 | 2014-12-03 | 西藏天虹科技股份有限责任公司 | 一种从牛肝脏中提取谷氨酸脱氢酶的方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319668A (zh) * | 2000-03-23 | 2001-10-31 | 德古萨股份公司 | 编码dapC基因的核苷酸序列及生产L－赖氨酸的方法 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1319668A (zh) * | 2000-03-23 | 2001-10-31 | 德古萨股份公司 | 编码dapC基因的核苷酸序列及生产L－赖氨酸的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王燕 等: "谷氨酸生产菌S9114中谷氨酸脱氢酶的研究", 《生物工程学报》 * |
| 顾薇 等: "谷氨酸脱氢酶发酵工艺的正交试验设计", 《化工时刊》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104178465A (zh) * | 2014-08-19 | 2014-12-03 | 西藏天虹科技股份有限责任公司 | 一种从牛肝脏中提取谷氨酸脱氢酶的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Zhang Chunying Inventor after: Zhang Liyun Inventor before: Gao Juxia |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: GAO JUXIA TO: ZHANG CHUNYING ZHANG LIYUN |
|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20121121 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |