CN102762984A - 用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法 - Google Patents

用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102762984A
CN102762984A CN2010800602468A CN201080060246A CN102762984A CN 102762984 A CN102762984 A CN 102762984A CN 2010800602468 A CN2010800602468 A CN 2010800602468A CN 201080060246 A CN201080060246 A CN 201080060246A CN 102762984 A CN102762984 A CN 102762984A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cancer
peptide
ligand complex
developer
plectin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2010800602468A
Other languages
English (en)
Inventor
金柏莉·A·凯利
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
University of Virginia Patent Foundation
Original Assignee
University of Virginia Patent Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by University of Virginia Patent Foundation filed Critical University of Virginia Patent Foundation
Publication of CN102762984A publication Critical patent/CN102762984A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A61K51/0482—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group chelates from cyclic ligands, e.g. DOTA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/06—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules
    • A61K51/065—Macromolecular compounds, carriers being organic macromolecular compounds, i.e. organic oligomeric, polymeric, dendrimeric molecules conjugates with carriers being macromolecules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4724—Lectins

Abstract

本发明提供了用于检测并定位生物标志网蛋白-1的诊断和成像技术的组合物和方法。本发明提供了可偶联显像剂和/或治疗剂的用于靶向网蛋白-1的多聚体肽配体复合物，例如具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2的多聚体肽配体复合物。

Description

用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)享有2009年11月5日递交的美国临时专利申请第61/258242号的优先权。
关于联邦资助研究或开发的声明
本发明以美国国立卫生研究院授予的基金号NIH-P50-CA86355和PO1-CA117969-01在美国政府支持下进行。美国政府在本发明中具有特定权利。
背景
在美国和其他工业化国家中，胰腺癌(PDAC)是癌症相关死亡的第四大主要原因[1]。尽管已作出了大量努力，其仍是毁灭性的疾病，其5年存活率小于5％且平均中值存活期小于1年[1]。这种严酷的预后主要是由于其初步诊断经常延迟在不可治愈的晚期，通常在转移后。
认为PDAC通过称作胰上皮内瘤变(PanIN)的前期病变进展成侵入性癌症，与在其他恶性肿瘤中观察到的腺瘤-癌序列相似。病变从腺瘤(PanINI)进展成伴有发育异常的腺瘤(PanIN II)、原位癌(PanIN III)并最终进展成侵入性癌症[2，3，4]。尽管通过前期病变充分表征了该致癌作用，仍未获得PDAC的有效早期检测和筛查。这主要是由于缺乏用于早期癌症的诊断工具和生物标志。理想地，因此PDAC生物标志不仅应检测到侵入性癌症，而且应检测到其前期病变、PanIN II和更重要的侵入前恶性PanIN III病变。目前，CA 19.9是唯一临床使用的PDAC血清生物标志。然而，其缺乏特异性和灵敏性，尤其是对于检测小的癌症和恶性和良性胰疾病的分化的特异性和灵敏性[5]。因此，CA 19.9不适合PDAC的筛查或早期检测。侵入性内窥镜程序(EUS和ERCP)可检测某些早期病变，但受限于损伤胰、高假阴性率的可能性，并且高度依赖操作者[6，7]。其还经常不能区分恶性与良性或恶化前病变[8，9]。横截面腹部成像也已证实不能可靠地检测早期PDAC，尤其是在高危患者中[10，11]。在多达30％PDAC患者中，其不能在手术前检测转移[12，13]且不能安全地区分慢性胰腺炎(CP)和PDAC[14，15]。PDAC和慢性胰腺炎的可靠辨别是重要的，但通常难以做到。这两种疾病共有许多临床征兆和症状，但各自采用极为不同的治疗策略。虽然唯一可用的PDAC祛病治疗是根治性手术切除，治疗慢性胰腺炎集中于症状改善，最经常地可不通过手术实现这种改善[14，15]。
克服目前采用的诊断工具的缺点的新型生物标志和非侵入性成像策略将允许PDAC和慢性胰腺炎的可靠辨别。其还将允许在转移开始之前更早地诊断PDAC并因而治疗PDAC。因此非常需要它们且最终可有助于提高存活率[16]。最近，基于体外和基因工程小鼠模型中的发现，表明网蛋白-1(Plec1)是用于PDAC的潜在新型成像生物标志[17]。鉴定到用于检测Plec1的肽配体[17]。然而，仍有待评估Plec1作为用于人PDAC和其前期病变的生物标志的合适性。作为非小细胞肺癌(Harris，2009，J.Clin.Oncology，27，No.15S(5月20日增刊)：e22118)和人结肠直肠腺瘤和腺癌(Lee，2004，J.Med.，35：(1-6)：141-149)的生物标志，Plec1已被确定为用于恶性胰“导管内乳头状黏液性肿瘤”(IPMN)的生物标志并已被假设为用于早期检测产生于IPMN的癌的标志(Bausch等人，2009，J.Gastrointest.Surg.，13：1948)。Plec1的一个肽配体是肽KTLLPTP(SEQ ID NO：1)[Kelly等人(2008)Targeted nanoparticles for imaging incipient pancreatic ductaladenocarcinoma.PLoS Med 5：4：e85；国际专利公布号为WO 2009/129220，Kelly等人，2009年10月22日公布]。
本领域中存在对更好的癌症生物标志、对识别生物标志的新型且更好的试剂的长久渴望的需要，以帮助对癌症进行诊断、监控和定位。本发明满足了这些需要。
发明概述
本发明基于靶向网蛋白-1的本文所述的新型支链多聚体肽成像复合物，且还基于用该复合物获得的令人惊奇的结果。
在早期侵入前、原发性和转移性人PDAC中网蛋白-1(GenBank登记号AAR95677)被特异性上调。在临床前模型中，网蛋白-1是可用于非侵入性成像的首要PDAC生物标志之一。综合起来，这些数据表明Plec1是灵敏且特异的PDAC生物标志，且可用来改进其检测和分期。
本发明提供了结合网蛋白-1或其同源物(homolog)或片段的多聚体肽配体复合物，所述复合物包括独立结合网蛋白-1或其同源物或片段的至少两个肽。一方面，与网蛋白-1或其同源物或片段结合的每种肽独立并任选地包括至少一个非标准氨基酸置换或保守氨基酸置换或添加。一方面，独立地，任选地通过添加至少一个额外的氨基酸修饰多聚体的每个肽。一方面，多聚体的每个肽独立且任选地与聚乙二醇偶联。一方面，多聚体的每个肽或任选地与聚乙二醇偶联的肽进一步与螯合剂偶联。任选地，螯合剂通过至少一个接头与所述肽或任选地与聚乙二醇偶联的肽偶联。任选地，至少一种显像剂与所述螯合剂偶联，且任选地至少一种治疗剂与所述螯合剂偶联。
一方面，多聚体选自由二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体和八聚体组成的组。
一方面，多聚体肽配体复合物为同聚物或异聚物。一方面，同聚物是四聚体。
在一个实施方式中，多聚体肽配体复合物包含选自由DTPA、DO3A、DOTA、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、HYNIC和MECAM组成的组的螯合剂。
一方面，聚乙二醇是聚乙二醇5000。
在一个实施方式中，多聚体肽配体复合物包含选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组的显像剂。一方面，显像剂是放射性核素。一方面，放射性核素选自由110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32P、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb、83Sr和其他γ-、β-或正电子-发射体组成的组。一方面，放射性核素是111In。
一方面，多聚体肽配体复合物包含独立地具有选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列的肽。一方面，所述序列选自由SEQ ID NO：1-4组成的组。SEQ ID NO：1(KTLLPTP)是基础肽配体，且其他序列是其修饰体(见实施例和图9)：
SEQ ID NO：2-βAKTLLPTP
SEQ ID NO：3-βAKTLLPTPGGS
SEQ ID NO：4-KTLLPTPGGS
SEQ ID NO：9-ATLLPTP
SEQ ID NO：10-KALLPTP
SEQ ID NO：11-KTALPTP
SEQ ID NO：12-KTLAPTP
SEQ ID NO：13-KTLLATP
SEQ ID NO：14-KTLLPAP
SEQ ID NO：15-KTLLPTA
SEQ ID NO：16-βAATLLPTPGGS
SEQ ID NO：17-βAKALLPTPGGS
SEQ ID NO：18-βAKTALPTPGGS
SEQ ID NO：19-βAKTLAPTPGGS
SEQ ID NO：20-βAKTLLATPGGS
SEQ ID NO：21-βAKTLLPAPGGS
SEQ ID NO：22-βAKTLLPTAGGS(SEQ ID NO：22)
注意到在随此提供的序列表中，β丙氨酸残基以Xaa提供。这些序列可被修饰，包括不明显影响这些肽结合网蛋白-1或其同源物或片段的氨基酸置换和添加。尽管以上说明了丙氨酸置换，本发明包括使用其他氨基酸的置换。另外，本文公开的数据表明苏氨酸以及脯氨酸在序列中的重要性。
本发明的肽作为多聚体是有用的。另外，可通过添加氨基酸例如β丙氨酸(βA)和聚乙二醇来修饰多聚体以增加稳定性、在血流和组织中的半衰期，减少降解等。本领域普通技术人员将理解在某些情况下可改变序列在复合物中的取向且多聚体可以是异聚物或同聚物。
在一个实施方式中，多聚体复合物为四聚体且具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，图8中示出了其化学结构。图8还示出了与DOTA偶联的显像剂。一方面，四聚体复合物具有约8.3x 10-7M的Ki。在一个实施方式中，显像剂是111In。一方面，用与计算机连接的SPECT/CT扫描仪检测显像剂，并使用程序分析成像数据。
本发明还提供了用于检测受治疗者体内的网蛋白-1或其同源物或片段的方法。该方法包括对受治疗者施用包含显像剂的多聚体肽配体复合物，和检测包含网蛋白-1的细胞的位置。
一方面，该方法包括使用多聚体肽配体成像复合物中的肽配体，其中每个肽配体具有独立地选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列。
一方面，该方法提供了选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组的显像剂的用途。本领域普通技术人员将理解所使用的检测方法将取决于所使用的具体显像剂。
在该方法的一方面，网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
本发明还提供了用于检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗的方法，其中癌症细胞表达或呈递网蛋白-1或其同源物或片段。该方法包括向受试受治疗者施用包含多聚体肽配体复合物的药物组合物，其中该复合物包含显像剂，且然后检测显像剂和确定显像剂在受试受治疗者体内的水平和位置。将受试受治疗者体内的水平和位置与来自未受影响的受治疗者的其他方面相同的位置或与受试受治疗者的未受影响的区域的显像剂的水平和位置进行对比。与来自未受影响的受治疗者或来自受试受治疗者的未受影响的区域的所述样品中显像剂的水平或位置相比，该显像剂在受试受治疗者体内的更高水平或不同位置表明该受试受治疗者患有表达或呈递网蛋白-1或其同源物或片段的癌症。检测到的显像剂的水平或位置是对生物标志网蛋白-1的位置和量的指示。
在一个实施方式中，癌症选自由头颈癌、肝癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、宫颈癌、前列腺癌、肾上腺癌、淋巴瘤、唾液腺癌、骨癌、脑癌、小脑癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、口鼻咽癌(oronasopharyngeal cancer)、NPC、肾癌、膀胱癌、皮肤癌、黑色素瘤、基底细胞癌、硬腭癌、舌鳞状细胞癌、脑膜瘤、多形性腺瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、皮质腺瘤、肝细胞癌、胰腺癌、鳞状细胞癌和腺癌组成的组。
一方面，所述癌症是胰腺癌。一方面，胰腺癌选自由胰导管腺癌、胰上皮内瘤变、腺瘤、伴有发育异常的腺瘤和原位癌组成的组。
在一个实施方式中，所述癌症是转移性癌症。
本发明还用于比较待成像的网蛋白-1的水平以基于所检测到的显像剂的水平(网蛋白-1的量的量度)帮助确定癌症是良性还是恶性的。
本发明还用于确定癌症的癌变阶段并监控其从早期到晚期癌症的进展。该方法还用于确定待使用的治疗的类型和量。
在本发明的方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物的肽各自具有独立地具有选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列。
在本发明的方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2且所述显像剂为111In。
在该方法的一个实施方式中，显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
在本发明的一个实施方式中，网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
本发明还提供了用于诊断受治疗者体内的癌症的组合物和方法，其中癌症细胞表达网蛋白-1或其同源物或片段。该方法包括获得来自受治疗者的生物样品，使样品接触包含权利要求1的多聚体肽配体复合物的组合物，其中复合物包含显像剂。该方法还提供了将来自受试受治疗者的样品中的网蛋白-1的水平或位置与来自从未受影响的受治疗者获得的其他方面相同的样品的网蛋白-1的水平或位置或与包含已知量的网蛋白-1的标准样品进行比较，其中来自所述受试受治疗者的所述样品中的更高水平的网蛋白-1表明所述受试受治疗者患有癌症。
在该方法的一个实施方式中，多聚体肽配体复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。一方面，显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
在一个实施方式中，本发明提供了包含药学可接受的载体和结合网蛋白-1的多聚体肽配体复合物的药物组合物。
本发明还包括试剂盒，其包含含有药学可接受的载体和权利要求1的多聚体肽配体复合物的药物组合物、涂抹器和关于其使用的说明材料，和任选地显像剂和治疗剂。
为评价网蛋白-1靶向的肽(PTP)对于体内成像的效用，本发明在一个实施例中公开了在GMP级设备中将肽合成为用DOTA作为显像剂的螯合剂的四聚体结构。一方面，显像剂是111In。一方面，用于本申请中的网蛋白-1的肽配体是肽KTLLPTP(SEQ ID NO：1)(Kelly等人，2008，PLoSMedicine，5：4：0657-0668；国际专利公布号为WO 2009/129220，Kelly等人，2009年10月22日公布)。一方面，可在制备多聚体肽配体成像复合物之前如本文所述修饰肽配体。一方面，修饰的肽配体是。一方面，本发明的新型四聚体肽成像复合物具有下式：
(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2(本文也表示为[(Ala-Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser-PEG5K)2-Lys]2-Lys-Lys(DOTA)-Ala-NH2)，也就是说，其是包含四个肽的复合物，这四个肽是网蛋白-1的配体。一方面，该复合物还包含显像剂以帮助显示网蛋白-1表达细胞的位置。一方面，显像剂是111IN。
任选地，治疗剂可被连接或可被包括在包含成像复合物的药物组合物中。
本领域普通技术人员将理解，基础肽配体，即SEQ ID NO：1，可以在复合物中以反方向取向。
一方面，网蛋白-1的其他肽配体包括但不限于SEQ ID NO：1-4和9-22和其有功能的同源物、衍生物和片段。
一方面，本发明的四聚体复合物具有约8.3x 10-7M的Ki(抑制离解常数)。一方面，当向受治疗者施用时，其具有约4.29分钟的血液半衰期。
本发明还提供了其他活性四聚体复合物。例如，本发明包括包含用三个额外的氨基酸(Gly、Gly和Ser)修饰的SEQ ID NO：1，也就是KTLLPTPGGS(SEQ ID NO：4)的复合物。四聚体复合物具有式[Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser]4-Lys4-Ala-DOTA，也表示为[KTLLPTPGGS]4-K4-βA-DOTA，具有图7的结构。
赖氨酸(K)具有结构：
Figure BDA00001840425500081
如本文使用的临床相关SPECT示踪剂能够实现小PDAC和转移的检测。
一方面，显像剂或可检测的部分包括但不限于放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂。
令人惊奇地，本发明的四聚体肽成像复合物比之前已知的药物更灵敏。另外，令人惊奇地，本发明的四聚体肽成像复合物比已知的药物更迅速地发挥作用。
本申请还公开了网蛋白-1在许多类型的癌症中的表达(图2)。因此，本发明包括使用本发明的多聚体肽成像复合物来检测、诊断和定位除了胰腺癌以外的癌症。本发明还提供了量化网蛋白-1水平，并因此包括区分正常、良性和恶性组织的能力。一方面，多聚体肽成像复合物包括四聚体肽。
本发明还提供了试剂盒，其包含至少一种本发明的多聚体肽配体复合物、说明材料，且任选地包括至少一种显像剂和任选地至少一种治疗剂。
以下更详细地描述了本发明的各个方面和实施方式。
附图简述
图1：网蛋白-1的免疫组织化学和蛋白质印迹。A)所评价的正常胰、慢性胰腺炎、PanIN、PDAC、异种移植的PDAC和PDAC转移部位(肝脏、淋巴结和腹膜)的代表性图像。概览视图(上图)和黑色框的详细视图(下图)。慢性胰腺炎呈网蛋白-1弱染色，而正常的胰不表达网蛋白-1。PanIN显示出弱至中度的膜染色模式。PDAC和PDAC异种移植组织呈中度至强的网蛋白-1胞质和膜染色。常见的PDAC转移部位未表现出明显的网蛋白-1表达，而肿瘤细胞呈Plec1强染色。B)样本中染色强度的分布。所有PDAC个例呈现出中度或强的染色模式，而正常胰和大部分的慢性胰腺炎不表达网蛋白-1。相比之下，多于一半的PanIN II病变弱或中度表达Plec1，而大部分的PanIN III病变为Plec1阳性。C)癌变期间Plec1的细胞定位也会变化。虽然在所有PanIN I和大部分PanIN II病变中仅在膜中鉴定到Plec1，但在某些PanIN III病变中其还存在于胞质中，且在PDAC中总是在胞质中鉴定到Plec1。D)来自50mg的胰组织(快速冷冻的手术样本)的Plec1定量蛋白质印迹。在正常的胰和CP中未检测到Plec1，而其存在于每个PDAC中。
图2：网蛋白-1在正常和恶性人组织中的表达：用于评价网蛋白-1表达的组织微阵列的免疫组织化学。除了膀胱和男性生殖道，正常组织仅表现出弱至中度的网蛋白-1表达。只在胰、食道、胃和肺中观察到区别正常与恶性疾病的网蛋白-1表达的明显差异。常见的PDAC转移部位(淋巴结、肝脏)不表达Plec1。
图3：原位PDAC内Plec1的体内成像(A)。tPTP的体外验证。将L3.6细胞平铺在96孔板上并与111In-tPTP一起孵育和递增对数浓度的tPTP或混杂四聚体一起孵育。(B)用111In-tPTP注射携带来自原位植入的L3.6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠并在注射后4小时通过SPECT/CT成像。注意到tPTP在PDAC中的累积，允许对胰中和腹膜转移的肿瘤的体内成像。T-肿瘤，L-肝脏，rK-右肾，lK-左肾，M-腹膜转移。(C)SPECT/CT成像(图3)后，处死动物(n＝5)，收集器官并评价γ计数。(D)组织学。处死具有原位移植的肿瘤的动物并取出胰和具有可见腹膜转移的区域，包埋在OCT中，切片并用H&E染色。A.胰中肿瘤的10x图像。插图，胰的2x视图，示出了两个肿瘤。B腹膜转移的10x图像。插图，转移和周围腹膜的2x图像。
图4：tPTP靶向PDAC并能够实现非侵入性体内成像。用111In-tPTP注射携带来自原位植入的L3.6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠并在注射后4小时通过SPECT/CT成像。SPECT/CT成像表明tPTP累积在PDAC中，允许对胰中和腹膜转移的肿瘤的体内成像。T-肿瘤；L-肝脏；rK-右肾；lK-左肾；M-腹膜转移。上图-径向平面视图；下图-冠状平面视图。左侧两幅图像-CT；左起第二幅-SPECT；左起第三幅-SPECT/CT；右侧两幅图像-MIP。(还参见图3)。
图5：网蛋白-1靶向肽的图解说明。高度图示化形式的多聚体肽配体复合物，包括四拷贝的SEQ ID NO：1以增加多价性，且描绘了四条5000Da的PEG链，可加入这些链以增加药物的循环时间、降低免疫原性并保护肽免于在到达期望的靶之前被体内裂解。未示出其他可能的修饰。
图6：tPTP-6A的体内表征。对携带来自原位植入的L3.6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠注射的111IN-tPTP的血液半衰期。在注射后0、15、30、45、60和120分钟取血液。tPTP的血液半衰期为4.29分钟。6B.SPECT/CT成像(见图4)后，处死动物(n＝5)，收集器官并评价γ计数。胰表现出3％的注射剂量/克，而在腹腔中发现的转移表现出1.5％的注射剂量/克。111IN-tPTP排泄的主要途径是通过尿。
图7：
[Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser]4-Lys4-βAla-DOTA。具有也表示为[KTLLPTPGGS]4-K4-βA-DOTA的式
[Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser]4-Lys4-βAla-DOTA的四聚体复合物的化学结构。
图8：tPTP-4(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))KKKKDOTAβA-NH2的化学结构。提供了包括111In分子的多聚体肽复合物的化学结构。
图9：KTLLPTP(SEQ ID NO：1)的氨基酸置换：丙氨酸突变。本研究中使用的肽由也称为Panc 27肽的噬菌体来源的序列KTLLPTP(SEQ IDNO：1；对照)和突变序列组成。七个位置中的每一个各自被突变成丙氨酸。分另进行了丙氨酸突变ATLLPTP、KALLPTP、KTALPTP、KTLAPTP、KTLLATP、KTLLPAP和KTLLPTA，即SEQ ID NO：9-15并测试亲和力。详述
缩写和简称
βA-β丙氨酸
CP-慢性胰腺炎
DOTA-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸
ncPTP-阴性对照PTP
NIR-近红外
NIRF-近红外荧光团
Panc 27肽-KTLLPTP(SEQ ID NO：1)
PanIN-胰上皮内瘤变
PanIN I-腺瘤
PanIN II-伴有发育异常的腺瘤
PanIN III-原位癌
PDAC-胰导管腺癌
Plec1-网蛋白-1
PTP-网蛋白-1靶向肽
SPECT-单光子发射计算机断层显像
tPTP-四聚体网蛋白-1靶向肽，也称为四聚体合成肽(其靶向网蛋白-1)
定义
在描述和要求保护本发明中，将根据以下提供的定义使用以下术语。
本文使用冠词“a(一个)”和“an(一个)”指一个或多于一个(即，指至少一个)的该冠词的语法对象。举例来说，“一个元件”指一个元件或多于一个的元件。
如本文所用的，术语“约”指近似，在大约或附近的区域。当结合数值范围使用术语“约”时，其通过扩大界限高于或低于所提供数值来修改那个范围。一般来讲，本文使用术语“约”来使数值与所提供值上下变化10％。一方面，术语“约”指加上或减去与其一起使用的数的数值的20％。因此，约50％指在45％-55％的范围内。本文通过端点提及的数值范围包括包含在那个范围内的所有整数和分数(例如，1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.90、4和5)。还应当理解其所有整数和分数被认为被术语“约”修改。
如本文所用的，与表示由形成腺(包围空腔的细胞的集合)的细胞组成的良性(非癌性)肿瘤的“腺瘤”相反，“腺癌”指癌性肿瘤。
如本发明上下文中使用的，术语“其他治疗活性化合物”或“其他治疗剂”指使用或施用化合物用于待治疗的具体损伤、疾病或紊乱的其他治疗用途。例如，该化合物可包括被用来治疗无关疾病或紊乱，或可能不对被治疗的损伤、疾病或紊乱的初次治疗反应的疾病或紊乱的化合物。
如本文所用的，术语“佐剂”指当与特定抗原组合使用时引发增强的免疫反应的物质。
如本文所用的，术语化合物“的施用”和/或“施用”化合物应理解为是指对需要治疗的受治疗者提供本发明的化合物或本发明的化合物的前药。
如本文所用的，术语“气溶胶”指空气悬浮体。特别地，气溶胶指本发明的制剂和其空气悬浮体的颗粒化或原子化。
如本文所用的，“激动剂”是物质组合物，当对哺乳动物例如人施用时，其增强或延长由靶化合物或目标分子在哺乳动物体内的水平或存在引起的生物活性。
如本文所用的术语“肽结构的变化”指包括但不限于序列变化和翻译后修饰的变化。
“拮抗物”是物质组合物，当对哺乳动物例如人施用时，其抑制由目标化合物或分子在哺乳动物体内的水平或存在引起的生物活性。
如本文所用的，“减轻疾病或紊乱的症状”指减小症状的严重程度或与患者经历这种症状的频率，或两者。
如本文所用的，氨基酸由其全称，由其相应的三字母代码，或由其相应的一字母代码表示，如下表所示：
Figure BDA00001840425500131
Figure BDA00001840425500141
术语“氨基酸”可与“氨基酸残基”互换地使用，且可指游离氨基酸和肽的氨基酸残基。从术语使用的上下文将清楚，其是指游离氨基酸还是肽的残基。
如本文所用的表述“氨基酸”意在包括天然的和合成的氨基酸，及D型和L型氨基酸。“标准氨基酸”指通常发现于天然形成的肽中的二十个标准L-氨基酸的任何一个。“非标准氨基酸残基”指除了标准氨基酸以外的任何氨基酸，无论其是否经合成制备或源自天然来源。如本文所用的，“合成氨基酸”还包括化学修饰的氨基酸，包括但不限于盐、氨基酸衍生物(例如酰胺)和取代物。可通过甲基化、酰胺化、乙酰化或用可改变肽的循环半衰期而不有害地影响其活性的其他化学基团取代来修饰包含在本发明的肽中的氨基酸，且特别是位于羧基端或氨基端的氨基酸。另外，本发明的肽中可存在或不存在二硫键。
氨基酸具有以下一般结构：
Figure BDA00001840425500142
基于侧链R，氨基酸可分成七组：(1)脂族侧链，(2)包含羟基(OH)的侧链，(3)包含硫原子的侧链，(4)包含酸性基团或酰胺基的侧链，(5)包含碱性基团的侧链，(6)包含芳环的侧链，和(7)脯氨酸，侧链稠合到氨基上的亚氨基酸”。
用来描述本发明的肽化合物的命名法遵循常规做法，其中氨基呈现在每个氨基酸残基左侧且羧基在右侧。除非另外指明，在代表本发明所选的具体实施方式的式中，尽管未具体示出，氨基端和羧基端将被理解为是其在生理pH值下将呈现的形式。
如本文所用的术语“碱性的”或“带正电的”氨基酸是指其中R基团在pH7.0具有净正电荷的氨基酸，且包括但不限于标准氨基酸赖氨酸、精氨酸和组氨酸。
如本文使用的，举例来说，化合物的“类似物”是结构上与另一种化合物相似但不一定是异构体的化合物(例如，5-氟脲嘧啶是胸腺嘧啶的类似物)。
如本文所用的术语“抗体”指能够特异性结合抗原上的特定表位的免疫球蛋白分子。抗体可以是来源于天然来源或重组来源的完整免疫球蛋白且可以是完整免疫球蛋白的免疫反应性部分。抗体通常是免疫球蛋白分子的四聚体。本发明中的抗体可以以多种形式存在，包括，例如多克隆抗体、单克隆抗体、Fv、Fab和F(ab)2以及单链抗体和人源化抗体。
如本文所用的“抗体重链”指存在于所有抗体分子中的两种类型的多肽链中的较大链。
如本文所用的“抗体轻链”指存在于所有抗体分子中的两种类型的多肽链中的较小链。
如本文所用的术语“合成抗体”指使用重组DNA技术产生的抗体，诸如，例如由本文所述的噬菌体表达的抗体。该术语还应解释为是指已通过合成编码该抗体的DNA分子产生的抗体且该DNA分子表达抗体蛋白，或指定该抗体的氨基酸序列，其中已使用本领域可获得且熟知的合成DNA或氨基酸序列的技术获得该DNA或氨基酸序列。
如本文所用的术语“抗原”被定义为引发免疫反应的分子。该免疫反应可包括抗体产生或特异性免疫活性细胞的活化，或两者都包括。抗原可来源于生物体、蛋白质/抗原的亚基、杀死的或失活的全细胞或裂解产物。
如本文所用的术语“抗原决定簇”指与特定抗体接触的抗原部分(即，表位)。当使用蛋白质或蛋白质的片段或化学部分免疫宿主动物时，抗原的许多区域可引发特异性结合蛋白上给定区域或三维结构的抗体的产生；这些区域或结构称作抗原决定簇。抗原决定簇可与完整抗原(即，用来引发免疫反应的“免疫原”)竞争结合抗体。
如本文所用的术语“抗微生物剂”指如在本发明的方法中实施的对人或动物使用安全的且在杀死或明显抑制微生物生长方面有效的任何天然形成的、合成的或半合成的化合物或其组合物或混合物。如本文所用的“抗微生物剂”包括抗细菌剂、抗真菌剂和抗病毒剂。
如本文所用的，术语“反义寡核苷酸”或反义核酸指其至少一部分与存在于正常细胞或受损细胞的核酸互补的核酸聚合物。“反义”具体指编码蛋白质的双链DAN分子的非编码链的核酸序列，或指基本与非编码链同源的序列。如本文定义的，反义序列与编码蛋白质的双链DNA分子的序列互补。反义链仅与DNA分子的编码链的编码部分互补是不必要的。反义序列可能与编码蛋白质的DNA分子的编码链上指定的调控序列互补，所述调控序列控制编码序列的表达。本发明的反义寡核苷酸包括但不限于硫代磷酸酯寡核苷酸和寡核苷酸的其他修饰物。
“适配子”是被体外选择优先结合另一化合物(例如，本文鉴定的蛋白质)的化合物。通常，因为可容易地从核苷酸或氨基酸(天然形成的或合成制备的)大量产生随机序列，适配子是核酸或肽，但当然其不必要局限于这些物质。
如本文所用的，本文中可与“结合(bind)”或“结合(binding)”或“结合(binds)”或“结合(bound)”互换使用的术语“连接(attach)”、“连接(attachment)”或“连接(attached)”或“连接(attachment)”或“连接(attaching)”是指导致形成稳定的复合物的分子之间的任何物理关系，例如配体例如肽或小分子与“结合配体”或“受体分子”之间的物理关系。可通过物理化学相互作用，包括但不限于选择性非共价结合、离子引力、氢键、共价键、范德华力或疏水引力介导这种关系。
如本文所用的，术语“亲合力”指配体与受体分子的总结合强度，因此相互作用强度包括配体之间的多个独立的结合相互作用，其可来源于多种低亲和力的相互作用或少数几种高亲和力的相互作用。
术语“结合”指分子彼此粘附，例如但不限于酶与底物、配体与受体、抗体与抗原、蛋白质的DNA结合结构域与DNA、和DNA或RNA链与互补链的粘附。
如本文所用的“结合配体”是指能够结合另一个分子的分子。
如本文所用的，术语“生物相容性的”指不在宿主体内引发显著有害反应的材料。
如本文所用的，术语多肽的“生物学活性片段”或“生物活性片段”包括能够与其天然配体特异性结合或能够执行蛋白质功能的全长蛋白质的天然或合成的部分。
如本文所用的术语“生物样品”指从受治疗者获得的样品，包括但不限于皮肤、头发、组织、血液、血浆、细胞、汗液和尿液。
如本文所用的术语“活检组织”指为了确定样品是否包含癌组织的目的而从受治疗者取出的组织样品。在某些实施方式中，因为怀疑受治疗者患有癌症而获取活检组织。然后检验活检组织存在或不存在癌症。
如本文所用的术语“癌症”被定义为其独特特征-失去正常控制-导致不受调控的生长、缺少分化、局部组织浸润和转移的细胞增殖。实例包括但不限于黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、皮肤癌、胰腺癌、结肠直肠癌、肾癌和肺癌。
如本文所用的，术语“载体分子”是指与目的分子化学偶联的任何分子。
如本文所用的术语“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用。所有这些术语包括其后代，这些后代可以是任何和所有子代。应当理解，由于故意的或偶然突变，所有后代可能不同。
如本文所用的，术语“表征受治疗者的癌症”是指鉴定受治疗者的癌症样品的一个或多个性质，包括但不限于良性组织、癌变前组织或癌组织的存在、癌症的阶段和受治疗者的预后。可通过鉴定一个或多个癌症标志基因，包括但不限于本文公开的癌症标志的表达来表征癌症。
如本文所用的，术语“化学偶联的(chemically congulated)”或“化学偶联(congulating chemically)”是指将抗原连接到载体分子。可使用重组技术在基因水平上形成这种连接，其中可产生包含抗原和载体分子两者的氨基酸序列、或其部分的杂交蛋白质。可由编码抗原和载体分子或其部分的核苷酸序列产生该杂交蛋白。这种连接还包括使用其他化学反应(例如但不限于戊二醛反应)在抗原和载体蛋白之间产生的共价键。还可使用桥接抗原与载体分子的第三分子形成共价键。这些交联剂能够与抗原和载体分子上的基团例如但不限于伯胺、巯基、羰基、烃或羧酸反应。化学偶联还包括抗原和载体分子之间的非共价连接。
基因的“编码区”由分别与通过基因转录产生的mRMA分子的编码区同源或互补的该基因的编码链的核苷酸残基和该基因的非编码链的核苷酸组成。
术语“竞争性序列”是指与另一肽竞争其同源结合位点的肽或其修饰物、片段、衍生物或同源物。
如本文所用的“互补的”是指两个核酸例如两个DNA分子之间的亚基序列互补性的广义概念。当这两个分子的核苷酸位置被正常情况下能够彼此碱基配对的核苷酸占据时，则认为核苷酸在该位置彼此互补。因此，当每个分子中大量的(至少50％)对应位置被正常情况下能够彼此碱基配对(例如A:T和G:C核苷酸对)的核苷酸占据时，认为这两个核酸是彼此互补的。因此，已知第一核酸区域的腺嘌呤残基能够与反向平行于第一区域的第二核酸区域的残基(如果该残基是胸腺嘧啶或尿嘧啶的话)形成特异性氢键(“碱基配对”)。相似地，已知第一核酸链的胞嘧啶残基能够与反向平行于第一链的第二核酸链的残基(如果该残基是鸟嘌呤的话)碱基配对。当这两个区域以反向平行方式布置，第一区域的至少一个核苷酸残基能够与第二区域的残基碱基配对时，核酸的第一区域与相同或不同的核酸的第二区域互补。优选地，第一区域包括第一部分且第二区域包括第二部分，由此，当第一和第二部分以反向平行的方式布置时，第一区域的核苷酸残基的至少约50％，且优选至少约75％、至少约90％，或至少约95％能够与第二部分的核苷酸残基碱基配对。更优选地，第一部分的所有核苷酸残基能够与第二部分的核苷酸残基碱基配对。
如本文所用的“化合物”是指通常被认为是药物或用作药物的候选物的任何类型的物质或药物，以及上述的组合和混合物。
如本文所用的，本文将术语“保守氨基酸置换”定义为以下五组中的一组中的氨基酸交换：
I.小的脂族、非极性或轻微极性的残基：
Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；
II.极性、带负电荷的残基和其酰胺：
Asp、Asn、Glu、Gln；
III.极性、带正电荷的残基：
His、Arg、Lys；
IV.大的、脂族、非极性残基：
Met、Leu、Ile、Val、Cys
V.大的芳族残基
Phe、Tyr、Trp
“对照”细胞是具有与受试细胞相同的细胞类型的细胞。例如，可在与测定受试细胞完全相同或几乎相同的时刻测定对照细胞。例如，还可在与测定受试细胞的时刻相差较远的时刻测定对照细胞，且可记录对照细胞的测定结果以使所记录的结果可与通过测定受试细胞获得的结果对比。
“受试”细胞是被测定的细胞。
如本文所用的“细胞因子”是指细胞内信号分子，其以参与调控哺乳动物体细胞著称。已表征了其作用为生长促进和生长抑制的多个家族的细胞因子，包括，例如白介素、干扰素和转化生长因子。多种其他细胞因子是本领域技术人员已知的。已描述了这些细胞因子的来源、特征、靶和效应物活性。
如本文所用的，化合物的“衍生物”是指以一个或多个步骤，如用烷基、酰基或氨基取代H，可由具有相似结构的另一种化合物生成的化合物。
使用词语“检测”和其语法变体是指非量化地测量物质，而使用词语“测定”或“测量”及其语法变体意指量化地测量物质。术语“检测”和“鉴定”在本文中可互换地使用。
如本文使用的，“可检测标志”或“报告分子”是允许在无标志的相似化合物存在下特异性检测包含所述标志的化合物的原子或分子。可检测标志或报告分子包括，例如，放射性同位素、抗原决定簇、酶、可用于杂交的核酸、生色团、荧光团、化学发光分子、电化学上可检测的分子和提供改变的荧光偏振或改变的光散射的分子。
“疾病”是动物健康状态，其中所述动物不能维持内环境稳定，且其中如果所述疾病未改善，则动物健康状态继续恶化。
相比之下，动物的“紊乱”是指一种健康状态，其中所述动物能够维持内环境稳定，但是其中动物的健康状态不如不存在所述紊乱时其将处于的健康状态好。如果不治疗，紊乱不一定导致动物健康状态的进一步下降。
如本文所用的，术语“结构域”指共有普遍的理化特征，例如但不限于疏水性、极性、球形和螺旋结构域或性质例如配体结合、信号转导、细胞穿透等的分子部分或结构。结合结构域的具体实例包括但不限于，DNA结合结构域和ATP结合结构域。
如本文所用的，关于胰的“导管细胞”是指形成进出胰的导管的导管内衬或具有形成进出胰的导管的导管内衬的能力的任何细胞或来源于进出胰的导管的导管内衬的任何细胞。
如本文使用的，“有效量”或“治疗有效量”是指足以产生所选择的效应，例如减轻疾病或紊乱的症状的量。在以组合形式施用化合物例如多种化合物的背景下，当与另一种化合物组合施用时，每种化合物的量可不同于当单独施用那种化合物时的量。因此，尽管每种化合物的实际量可能不同，化合物组合的有效量统指整体组合。术语“更有效的”是指相对于与其对比的第二种治疗，一种治疗更大程度地减轻了所选择的效应。
如本文所用的，术语“效应结构域”是指能够直接与细胞质中能够调控生化通路的效应分子、化学物质或结构相互作用的结构域。
如本文所用的术语“酏剂”一般是指澄清的、甜的、含醇的，通常是含有调味物质且有时是活性药剂的水醇液体。
“编码”是指多核苷酸中特定核苷酸序列例如基因、cDNA或mRNA在生物学过程中用作合成具有确定核苷酸序列(即，rRNA、tRNA和mRNA)或确定氨基酸序列的其他聚合物和大分子的模板的固有性质和从其所得的生物学性质。因此，如果对应于那个基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质的话，则基因编码该蛋白质。其核苷酸序列与mRNA序列相同且通常在序列表中提供的编码链和用作基因或cDNA转录模板的非编码链都可被称为编码蛋白质或那个基因或cDNA的其他产物。
“增强子”是指不管增强子相对于转录起始位点的距离或取向，可增加转录效率的DNA调控元件。
如本文所用的术语“表位”被定义为抗原分子上可引发并与抗体反应的小的化学基团。抗原可具有一个或多个表位。大多数抗原具有许多表位；即其是多价的。通常，表位的大小大约是5个氨基酸或糖。本领域技术人员理解通常整体三维结构而非分子的具体线性序列是抗原特异性的主要标准。
如本文所用的，特定蛋白质或肽的“基本纯”制剂是这种制剂，其中所述制剂中以重量计至少约95％、且优选至少约99％的蛋白质或肽是该特定蛋白质或肽。
“片段”或“区段”是包含至少一个氨基酸的氨基酸序列的部分，或包含至少一个核苷酸的核酸序列的部分。术语“片段”和“区段”在本文中可互换地使用。
如本文所用的，如用于蛋白质或肽的术语“片段”一般可以是长度为至少约3-15个氨基酸、至少约15-25个氨基酸、长度为至少约25-50个氨基酸、长度为至少约50-75个氨基酸、长度为至少约75-100个氨基酸和长度为大于100个氨基酸。
如本文所用的，如用于核酸的术语“片段”一般可以是长度为至少约20个核苷酸，通常至少约50个核苷酸，更通常地从约50至约100个核苷酸，优选地，至少约100至约200个核苷酸，甚至更优选地，至少约200个核苷酸至约300个核苷酸，还甚至更优选地，至少约300至约350，甚至更优选地，至少约350核苷酸至约500个核苷酸，还甚至更优选地，至少约500至约600，甚至更优选地，至少约600个核苷酸至约620个核苷酸，还甚至更优选地，至少约620至约650，且最优选地，核酸片段长度将大于约650个核苷酸。
如本文使用的，“功能性”生物分子是这种形式的生物分子，其中该分子显示出其被表征的特征。例如，功能性酶是显示出该酶被表征的特征性催化活性的一种酶。
如本文所用的“同源”是指两个聚合物分子，例如两个核酸分子，例如两个DNA分子或两个RNA分子之间，或两个多肽分子之间的亚基序列相似性。当两个分子中的亚基位置都被同一单体亚基占据时，例如，如果两个DNA分子中的每一个的某个位置都被腺嘌呤占据，则它们在那个位置是同源的。两个序列间的同源性是匹配或同源位置的数目的直接函数，例如，如果两个化合物序列中一半位置(例如，长度为10个亚基的聚合物中5个位置)是同源的，则该两个序列是50％同源的，如果90％的位置，例如10个中有9个，是匹配或同源的，则该两个序列共享90％的同源性。举例来说，DNA序列3’ATTGCC5’和3’TATGGC共享50％的同源性。
如本文所用的，“同源性”与“同一性”同义使用。
可使用数学算法完成两个核苷酸或两个氨基酸序列之间的同一性百分比的确定。例如，对比较两个序列有用的数学算法是Karlin和Altschul的算法(1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264-2268)，其被改进为Karlin和Altschul(1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877)。该算法并入到Altschul等人的NBLAST和XBLAST程序中(1990，J.Mol.Biol.215：403-410)，且可在例如具有统一资源定位符的美国国家生物技术信息中心(NCBI)万维网站使用NCBI网站的BLAST工具获得。可通过NBLAST程序(在NCBI网站命名为“blastn”)，使用以下参数：缺口罚分＝5；缺口延伸罚分＝2；错配罚分＝3；匹配奖励＝1；期望值10.0；和字长＝11，进行BLAST核苷酸搜索以获得与本文所述的核酸同源的核苷酸序列。可通过XBLAST程序(在NCBI网站命名为“blastn”)或NCBI“blastp”程序，使用以下参数：期望值10.0，BLOSUM62计分矩阵，进行BLAST蛋白质搜索以获得与本文所述的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为获得对比目的的缺口比对，可利用Altschul等人描述的缺口BLAST(1997，Nucleic Acids Res.25：3389-3402)。可选择地，PSI-Blast或PHI-Blast可用来进行迭代搜索，检测分子之间的远缘关系(Id.)和共有共同模式的分子之间的关系。当使用BLAST、缺口BLAST、PSI-Blast和PHI-Blast程序时，可使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。
可使用与上述那些技术相似的技术在允许缺口或不允许缺口时测定两个序列间的同一性百分比。在计算同一性百分比时，通常计数精确的匹配。
如本文所用的，使用术语“杂交”来表述互补核酸的配对。杂交和杂交强度(即，核酸之间结合的强度)受诸如以下因素的影响：核酸间的互补度、所包括的条件的严格性、所形成的杂交体的长度和核酸内的G:C比。
如本文所用的，术语“吸入器”是指用于例如以溶液、粉末和类似物向鼻部或肺部施用药物的装置。例如，术语“吸入器”期望包括例如用来施用用于急性哮喘发作的抗组胺剂的推进剂驱动的吸入器和例如用来施用去充血剂的塑料喷雾瓶。
如本文所用的术语“抑制”是指基于术语“抑制”所使用的上下文，化合物、药物或方法降低或阻碍所述功能、水平、活性、速度等的能力。优选地，抑制至少10％。术语“抑制”可与“降低”和“限制”互换地使用。
如本文所用的术语“抑制复合物”是指抑制复合物的形成或两种或更多种蛋白质的相互作用，以及抑制所述复合物的功能或活性。该术语还包括破坏所形成的复合物。然而，该术语不意味着必须同时抑制这些功能中的每一种。
如本文所用的术语“抑制蛋白质”是指抑制蛋白质合成、水平、活性或功能的任何方法或技术，以及抑制目的蛋白的合成、水平、活性或功能的引发与刺激的方法。该术语还指可调控目的蛋白的合成、水平、活性或功能的任何代谢或调控途径。该术语包括与其他分子结合和复合物形成。因此，术语“蛋白质抑制剂”是指其施用造成蛋白功能或蛋白通路功能抑制的任何药物或化合物。然而，该术语不意味着必须同时抑制这些功能中的每一种。
如本文所用的，“注射或应用”包括通过任何数目的途径和手段施用本发明的化合物，包括但不限于，局部、口服、颊、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、经皮肤、皮下、腹腔内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道、眼部、肺部或直肠手段。
如本文所用的，“说明材料”包括可用来表达在所述试剂盒中本发明的肽对于实现减轻本文提到的各种疾病或紊乱的有用性的出版物、记录、图表或任何其他表达媒介。任选地或可选择地，说明材料可描述减轻哺乳动物的细胞或组织内的疾病或紊乱的一种或多种方法。例如，本发明的试剂盒的说明材料可粘贴在包含所确认的本发明的化合物的容器上或与包含所确认的化合物的容器一起运送。可选择地，说明材料可与容器分开运送，意图是接受者可协调使用说明材料和化合物。
如本文所用的术语“侵入性的”，或如本文所用的“转移”是指细胞尤其是侵入性癌细胞或肿瘤细胞的任何迁移。该术语适用于正常侵入的细胞例如伤口愈合成纤维细胞且也适用于异常迁移的细胞。尽管该术语受任何机械原理限制，这些细胞被认为通过战胜用于保持其足够“就位”以正常运转的身体工具而迁移。如果其在组织或肿瘤内异常迁移，或逸出所述组织，或侵入其他组织，则这些细胞是“侵入性的”。
“分离的核酸”是指已与以天然存在的状态位于其两侧的序列分离的核酸区段或片段，例如一种DNA片段，其已去除正常与所述片段相邻的序列，例如在其天然存在的基因组中与所述片段相邻的序列。该术语还适用于这种核酸，其已从天然伴随所述核酸的其他组分，例如在细胞内天然伴随它的RNA或DNA或蛋白质中彻底纯化出来。因此该术语包括，例如整合到载体、整合到自主复制的质粒或病毒，或整合到原核生物或真核生物的基因组DNA中的重组DNA，或以单独分子存在的重组DNA(例如，作为通过PCR或限制性内切酶消化产生的cDNA或基因组或cDNA片段)。其还包括一种重组DNA，其是编码其他多肽序列的杂交基因的一部分。
“配体”是特异性结合靶受体或靶分子的化合物。
“受体”或靶分子是特异性结合配体的化合物。
当配体或受体在结合反应中发挥功能时，受体或配体“特异性结合”化合物，这确定了异质化合物的样品中所述化合物的存在。因此，在指定的测定(例如，免疫测定)条件下，配体或受体优先与特定化合物结合而不大量结合样品中存在的其他化合物。例如，多核苷酸在杂交条件下特异性结合包含互补序列的化合物多核苷酸；抗体在免疫测定条件下特异性结合具有针对其产生所述抗体的表位的抗原。
如本文所用的，术语“键”是指两个基团之间的结合。该结合可以是共价的或非共价的，包括但不限于离子键、氢键和疏水/亲水相互作用。
如本文所用的，术语“接头”是指共价或非共价地连接两个其他分子的分子，例如通过离子键或氢键或范德华相互作用，例如与5′端的一个互补序列杂交并与3′端的另一个互补序列杂交，从而连接两个非互补序列的核酸分子。
基因的“异常表达”是指基因在受疾病或紊乱折磨的患者的细胞内的表达，其中相对于细胞周期该基因的表达水平(包括不表达)、表达的基因部分或基因表达的时机不同于同一基因在未受疾病或紊乱折磨的患者的细胞内的表达。应当理解，异常表达可引起或造成所述疾病或紊乱，可以是所述疾病或紊乱的症状或两者的症状。
如本文所用的，术语“恶性的”是指具有退行性变化、穿透性(例如进入附近区域或脉管系统)和转移的性质。
如本文所用的“质量标签”是指分子的化学修饰，或更通常地是分子例如肽的两个这种修饰，可基于分子质量，而不是化学性质将该修饰与另一种修饰区分开。
如本文所用的术语“鉴定样品中肽的方法”是指鉴定小的和大的肽，包括蛋白质。
如本文所用的术语“测量表达水平”或“测定表达水平”是指可用来将测定结果与目的基因或蛋白质的表达水平相关联的任何测量或测定。这些测定包括测量mRNA水平、蛋白质水平等，且可通过测定例如RNA印迹和蛋白质印迹分析、结合测定、免疫印迹等进行。表达水平可包括表达速度且可根据存在的mRNA或蛋白质的实际量测量。
术语“核酸”通常是指大的多核苷酸。“核酸”是指任何核酸，不论是由脱氧核糖核苷酸还是由核糖核苷酸组成，且不论是由磷酸二酯键还是由诸如以下修饰的键组成：磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、羧甲基酯、乙酰胺酯、氨基甲酸酯、硫醚、桥接氨基磷酸酯、桥接磷酸亚甲酯、桥接氨基磷酸酯、桥接氨基磷酸酯、桥接磷酸亚甲酯、硫代磷酸酯、磷酸甲酯、二硫代磷酸酯、桥接硫代磷酸酯或砜键，和这些键的组合。术语核酸还特别地包括由除了5种生物学上存在的碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶)以外的碱基组成的核酸。
如本文使用的，术语“核酸”包括RNA以及单链和双链DNA和cDNA。另外，术语“核酸”、“DNA”、“RNA”和相似术语还包括核酸类似物，即具有除了磷酸二酯骨架以外的类似物。例如，本领域已知的且在骨架中具有肽键而不是磷酸二酯键的所谓“肽核酸”被认为落在本发明的范围内。“核酸”是指任何核酸，不论是由脱氧核糖核苷酸还是由核糖核苷酸组成，且不论是由磷酸二酯键还是由诸如以下修饰的键组成：磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、羧甲基酯、乙酰胺酯、氨基甲酸酯、硫醚、桥接氨基磷酸酯、桥接磷酸亚甲酯、桥接氨基磷酸酯、桥接氨基磷酸酯、桥接磷酸亚甲酯、硫代磷酸酯、磷酸甲酯、二硫代磷酸酯、桥接硫代磷酸酯或砜键，和这些键的组合。术语核酸还特别地包括由除了5种生物学上存在的碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和尿嘧啶)以外的碱基组成的核酸。本文使用常规的符号来描述多核苷酸序列：单链多核苷酸序列的左手端是5’端；双链多核苷酸序列的左手方向是指5’方向。向初生态RNA转录产物添加核苷酸的5’至3’方向是指转录方向。与mRNA具有相同序列的DNA链是指“编码链”；位于DNA链上参考点5’端的DNA链上的序列是指“上游序列”；位于DNA上参考点3’端的DNA链上的序列是指“下游序列”。
如本文所用的术语“核酸构建体”包括无论通过基因组还是合成方法获得的编码期望的特定基因或基因片段的DNA和RNA序列。
除非另外指明，“编码氨基酸序列的核苷酸序列”包括是彼此的简并形式并编码相同氨基酸序列的所有核苷酸序列。编码蛋白质和RNA的核苷酸序列可包括内含子。
术语“寡核苷酸”通常是指短的多核苷酸，通常不大于约50个核苷酸。将应理解，由DNA序列(即，A、T、G、C)表示核苷酸序列时，这还包括RNA序列(即，A、U、G、C)，其中“U”取代“T”。
如本文所用的术语“其他方面相同的的样品”是指与第一样品相似的样品，也就是说，其以相同的方式从同一受治疗者的同一组织或流体获得，或其是指从不同受治疗者获得的相似样品。术语“来自未受影响的受治疗者的其他方面相同的样品”是指从不知道患有待检验的疾病或紊乱的受治疗者获得的样品。当然样品可以是标准样品。通过对比，关于受治疗者或未受影响的受治疗者体内的区域或组织也可使用术语“其他方面相同的”。
把两个多核苷酸描述成“可操作连接的”是指单链或双链核酸部分包括以如下方式排列在核酸部分中的两个多核苷酸：这两个多核苷酸种的至少一个能够发挥其特征性地作用于另一个多核苷酸的生理作用。举例来说，与基因编码区可操作连接的启动子能够启动编码区的转录。
如本文所用的，关于器官“胰”是指通过结缔组织连在一起的多种细胞类型的集合，使得所述多种细胞包括但不限于腺泡细胞、导管细胞和胰岛细胞。“腺泡”产生许多酶，例如消化十二指肠中的食物所需要的脂肪酶。由腺泡产生的酶通过称作导管的小的通道被运载到十二指肠。通常，由与血管细胞和神经细胞紧密相邻的结缔组织将管细胞保持在适当位置。朗格汉斯小岛通常嵌在胰的外分泌腺泡单元之间。胰岛内分泌细胞的实例是分泌抵制胰岛素作用的胰高血糖素的α细胞，而β细胞分泌帮助控制碳水化合物代谢的胰岛素。
如本文所用的，“胰腺癌”是指起源于包括胰的组织的癌症，例如胰导管腺癌细胞。
如本文所用的，“胰导管腺癌细胞”是指具有形成胰的导管内衬的能力的癌细胞或来源于胰的导管内衬的癌细胞。胰导管腺癌细胞可发现于形成腺的胰内，或作为转移的细胞发现于任何器官内或发现于淋巴系统的血流中。
如本文所用的，药物组合物的“肠胃外施用”包括任何途径的施用，这种施用途径的特征是通过物理方法使受治疗者的组织产生缺口并通过组织中的缺口施用药物组合物。因此肠胃外施用药物组合物包括但不限于通过注射组合物，通过手术切口应用组合物，通过组织渗透性非手术伤口应用组合物及类似方法施用药物组合物。特别地，设想肠胃外施用包括但不限于皮下、腹腔内、肌肉内、胸骨内注射和肾透析输注技术。
术语“肽”通常是指短的多肽。
如本文所用的，术语“肽配体”(或关于肽的词语“配体”)是指与分子，例如蛋白质、碳水化合物及类似物特异性结合的肽或蛋白质片段。肽配体的受体或结合配体本质上可以是任何类型的分子，例如多肽、核酸、碳水化合物、脂质或任何器官来源的化合物。配体的具体实例是本发明的肽配体。
术语“多聚体肽配体复合物”是指用于结合和检测网蛋白-1或其片段或其同源物的复合物，其包含结合网蛋白-1的至少两个肽配体。任选地通过保守氨基酸置换修饰肽配体或添加额外的标准或非标准氨基酸以增加降解前的分布或时间，任选地添加额外的氨基酸作为接头，任选地向该肽添加部分例如聚乙烯，且然后任选地通过接头例如柔韧的氨基酸链将这些部分中的每一个结合到螯合剂上，形成多聚体肽配体复合物。螯合剂对于结合显像剂是有用的。术语“多聚体肽配体复合物”可以指具有或没有显像剂的复合物，如可以指术语“多聚体肽配体成像复合物”，并意在根据上下文使用并理解这些术语。可通过添加带有显像剂的短语或没有显像剂的短语或相似短语来对这些术语定性。
如本文所用的术语“肽质量标记”是指用化学性质相同但因质量区别而不同的两种质量标签试剂标记肽的策略。
如本文所用的术语“每次应用”是指对受治疗者施用药物或化合物。
术语“药物组合物”应是指包含至少一种活性成分的组合物，其中对于在哺乳动物(例如但不限于人)中研究指定的、有效的结果，该组合物是可接受的。基于技术人员的需要，本领域普通技术人员将理解和了解适合确定活性成分是否具有期望的有效效果的技术。
如本文所用的，术语“药学可接受的载体”指一种化学组合物，该组合物可与合适的化合物或衍生物组合且组合后其可用于对受治疗者施用合适的化合物。
如本文所用的，术语“生理可接受的”酯或盐是指可与药物组合物的任何其他成分相容的活性成分的酯或盐形式，这种形式对待施用该组合物的受治疗者是无害的。
“药学可接受的”是指对于人或兽医应用是生理可耐受的。
如本文所用的，“药物组合物”包括用于人和兽医用途的制剂。
“多个”是指至少两个。
“多核苷酸”是指核酸的单链或平行和反向平行链。因此，多核苷酸可以是单链或双链核酸。
“多肽”是指由通过肽键、其相关的天然形成的结构变体和其合成的非天然形成的类似物连接的氨基酸残基、其相关的天然形成的结构变体和合成的非天然形成的类似物组成的聚合物。
“合成肽或多肽”是指非天然形成的肽或多肽。例如，可以使用自动多肽合成仪合成合成肽或多肽。各种固相肽合成法是本领域技术人员已知的。
如本文所用的，术语“手术后肿瘤组织”指已从受治疗者体内去除(例如，在手术期间)的癌组织(例如，活检组织)。
“预致敏”是指在用药物攻击前预施用至少一种先天免疫系统刺激剂。有时这是指耐受的引发。
如本文所用的术语“预防”是指避免某事发生或针对可能或很可能发生的某事提前采取措施。在医药上下文中，“预防”通常是指为减少患疾病或病症的几率而采取的措施。
“预防性(preventive)”或“预防性(prophylactic)”治疗是指对不显现疾病或紊乱的征兆或仅显现早期征兆的受治疗者施用的治疗。为了减少出现与罹患疾病或紊乱有关的病理的风险的目的而施用预防性或预防性治疗。
“引物”是指能够与指定的多核苷酸模板特异性杂交并提供用于合成互补多核苷酸的起始点的多核苷酸。当将多核苷酸引物置于引发合成的条件时，即在核苷酸、互补多核苷酸模板和用于聚合的试剂例如DNA聚合酶的存在下，发生这种合成。引物通常是单链的，但可以是双链的。引物通常是脱氧核糖核酸，但各种各样的合成的和天然形成的引物对于许多应用是有用的。引物与引物被设计以与其杂交的模板互补，以用作合成起始位点，但不需要反映模板的确切序列。在这种情况下，引物与模板的特异性杂交取决于杂交条件的严格性。可用例如生色、放射性或荧光部分标记引物并将其用作可检测部分。如本文所用的，术语“启动子/调控序列”是指表达与启动子/调控序列可操作连接的基因产物所需要的核酸序列。在某些情况下，该序列可以是核心启动子序列且在其他情况下，该序列还可包括增强子序列和基因产物表达所需要的其他调控元件。启动子/调控序列可以是例如以组织特异性方式表达基因产物的一种序列。
“组成型”启动子是这种启动子，其在细胞中以恒定的方式驱动与其可操作连接的基因的表达。举例来说，认为驱动细胞管家基因表达的启动子是组成型启动子。
“诱导型”启动子是一种核苷酸序列，当与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作连接时其仅当启动子对应的诱导物存在于细胞内时才导致基因产物在活细胞内大量产生。
“组织特异性”启动子是一种核苷酸序列，当与编码或指定基因产物的多核苷酸可操作连接时其仅在该细胞是对应于启动子的组织类型的细胞时才导致基因产物在活细胞内大量产生。
“预防性”治疗是为了减少出现与疾病有关的病理的目的对不显现疾病征兆或仅显现疾病的早期征兆的受治疗者施用的治疗。
如本文所用的，关于末端氨基的“保护基”指肽的末端氨基，该末端氨基与肽合成中常规采用的各种氨基端保护基中的任何一种偶联。这些保护基包括例如，酰基保护剂例如甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、三氟乙酰基、琥珀酰基和甲氧基琥珀酰基；芳族尿烷保护基例如苄氧基羰基；和脂族尿烷保护基例如叔丁氧基羰基或金刚烷氧基羰基。关于合适的保护基，参见Gross和Mienhofer编辑，The Peptides，第3卷，3-88页(Academic Press，NewYork，1981)。
如本文所用的，关于末端羧基的“保护基”指肽的末端羧基，该末端羧基与各种羧基端保护基中的任何一种偶联。这些保护基包括例如通过酯键或醚键与末端羧基连接的叔丁基、苄基或其他可接受的基团。
术语“蛋白质”通常是指大的多肽。本文使用常规的符号描绘多肽序列：多肽序列的左手端是氨基端；多肽序列的右手端是羧基端。
如本文所用的术语“蛋白质调控通路”是指调控蛋白质的上游调控通路以及该蛋白质所调控的下游事件。这种调控包括但不限于转录、翻译、水平、活性、翻译后修饰和目的蛋白的功能以及该蛋白质调控的下游事件。
本文可互换地使用术语“蛋白质通路”和“蛋白质调控通路”。
如本文所用的，术语“提供预后”是指提供关于癌症的存在(如通过本发明的诊断方法确定的)对受治疗者的未来健康(例如，预期的发病率和死亡率，患癌症的可能性和转移的风险)的影响的信息。
如本文所用的，术语“纯化的”和类似术语涉及相对于其他组分某分子或化合物的富集，在原始环境中这些其他组分通常与所述分子或化合物结合。术语“纯化的”不一定表示在该过程期间已达到特定分子的完全纯化。如本文所用的“高度纯化的”化合物是指纯度大于90％的化合物。特别地，纯化的精子细胞DNA是指当PCR扩增该纯化的精子细胞DNA和随后分析所扩增的DNA时不产生显著的可检测水平的非精子细胞DNA的DNA。“显著的可检测水平”是在所提供的数据中将是明显的且在分析法医证据期间将需要解决/解释的污染物的量。
“重组多核苷酸”是指具有天然状态下未连接在一起的序列的多核苷酸。扩增的或组装的重组核苷酸可包括在合适的载体中，且该载体可用来转化合适的宿主细胞。
重组多核苷酸也可发挥非编码功能(例如，启动子、复制起点、核糖体结合位点等)。
包含重组多核苷酸的宿主细胞称为“重组宿主细胞”。在重组宿主细胞中表达的基因产生“重组多肽”，其中该基因包含重组多核苷酸。
“重组多肽”是经重组多核苷酸表达而产生的一种多肽。
“重组细胞”是包含转基因的细胞。该细胞可以是真核或原核细胞。另外，转基因细胞包括但不限于包含该转基因的胚胎干细胞、从来源于转基因胚胎干细胞的嵌合哺乳动物获得的细胞(其中该细胞包含转基因)、从转基因动物或其胚胎或胎盘组织获得的细胞和包含该转基因的原核细胞。
术语“调控”是指刺激或抑制目的功能或活性。
如本文所用的，术语“报告基因”是指可使用已知方法检测其表达的基因。举例来说，大肠杆菌(Escherichia coli)lacZ基因可在培养基中用作报告基因，因为可通过将生色底物o-；硝基苯基-β-半乳糖苷添加到培养基中使用已知方法检测lacZ基因的表达(Gerhardt等人编辑，1994，Methodsfor General和Molecular Bacteriology，American Society for Microbiology，Washington，DC，第574页)。
如本文所用的“样品”优选地表示来自受治疗者的生物样品，包括但不限于正常组织样品、患病组织样品、活检样品、血液、唾液、粪便、精液、眼泪和尿液。样品也可以是从包含目的细胞、组织或流体的受治疗者获得的任何其他来源的材料。也可从细胞或组织培养物获得样品。
如本文所用的，术语“二抗”是指结合另一抗体(一抗)的恒定区的抗体。
术语“信号序列”是指编码指导多肽在细胞内发生的途径的肽的多核苷酸序列，即，其在细胞内指导多肽的细胞加工，包括但不限于最后从细胞分泌出多肽。信号序列是通常但不完全发现于多肽的氨基端的氨基酸序列，其将多肽合成靶向到内质网。在某些情况下，信号肽被水解而被从多肽上去除且因此不存在于成熟的蛋白质中。
见下文，“小干扰RNA(siRNA)”是指包含有义链和反义链的分离的dsRNA分子。一方面，其长度大于10个核苷酸。siRNA还指具有来自靶基因的有义序列和互补的反义序列的单独的转录产物例如，发夹结构。siRNA还包括任何形式的dsRNA(较大的dsRNA的蛋白水解产物、部分纯化的RNA、基本纯的RNA、合成的RNA、重组产生的RNA)以及通过添加、缺失、置换和/或改变一个或多个核苷酸而不同于天然形成的RNA的改变的RNA。
如本文所用的，术语“固体载体”涉及能够与各种化合物形成键(优选共价键)的溶剂不溶性基底。载体在本质上可以是生物的(例如但不限于细胞或噬菌体颗粒)或合成的(例如但不限于丙烯酰胺衍生物、琼脂糖、纤维素、尼龙、二氧化硅或磁化的颗粒)。
如本文使用的术语“与...特异性结合”是指当化合物或配体在结合反应中或在测定条件下发挥作用时，该术语确定所述化合物在具有异质化合物的样品中的存在，或其是指一个分子例如结合部分例如寡核苷酸或抗体在样品中其他分子的存在下优先结合另一分子例如靶分子，例如核酸或蛋白质。
当关于肽(配体)和受体(分子)的相互作用使用术语“特异性结合”或“特异地结合”时还指取决于特定结构(即，配体或蛋白质中的配体结合结构域的氨基酸序列)的存在的相互作用；换句话说，所述肽包含允许识别并与结合配体内的特定蛋白结构结合而不是与整个分子结合的结构。例如，如果配体在包含结合口袋A的蛋白质的存在下在包含标记的肽配体“A”(例如分离的噬菌体展示的肽或分离的合成肽)和未标记的“A”的反应中是结合口袋“A”特异性的，则未标记的肽配体将会减少与结合配体结合的标记的肽配体的量，换句话说，竞争性结合测试。
如本文所用的术语“标准”是指为对比使用的某物。例如，其可以是被施用并当施用受试化合物时用于结果对比的已知的标准药物或化合物，或其可以是当测量药物或化合物对参数或函数的作用时，被测量以获得对照值的标准参数或函数。标准还可以指“内部标准”，例如药物或化合物，其以已知量加入到样品中且当在测量目的标志前处理样品或对样品进行纯化或提取步骤时其在确定这些事项例如纯化或回收率方面是有用的。内部标准通常是已用例如放射性同位素标记的纯化的目的标志，允许其与内源标志区分开。
分析、诊断或治疗的“受治疗者”是动物。这些动物包括哺乳动物，优选人。
如本文所用的，术语“诊断患癌症的受治疗者”是指已被检验并发现具有癌细胞的受治疗者。可使用任何合适的方法诊断癌症，包括但不限于，组织活检、X-射线、血液检验和本发明的诊断方法。如本文所用的，关于胰细胞的术语“非癌性的”是指相对于其发育阶段和活性表现出可调控的细胞生长和功能生理学的细胞。
如本文所用的，“需要其的受治疗者”是将受益于本发明的方法的患者、动物、哺乳动物或人。
如本文所用的，术语“疑似患癌症的受治疗者”是指表现出一种或多种指示癌症的症状(例如，明显的肿块或团状物)或正被筛查癌症(例如，在常规体检中)的受治疗者。疑似患癌症的受治疗者还可具有一种或多种危险因素。疑似患癌症的受治疗者通常还未进行癌症测试。然而，“疑似患癌症的受治疗者”包括已接受初步诊断但不知晓其癌症阶段的个体。该术语还包括曾经患过癌症的人群(例如，处于缓解期的个人)。
如本文所用的，术语“处于癌症风险下的受治疗者”是指具有患特定癌症的一种或多种危险因素的受治疗者。危险因素包括但不限于，性别、年龄、遗传易感性、环境暴露和癌症的曾经发生、先前存在的非癌症疾病和生活方式。
如本文所用的，“基本上同源的氨基酸序列”包括与参考抗体链的氨基酸序列具有至少约95％的同源性，优选至少约96％的同源性，更优选至少约97％的同源性，甚至更优选至少约98％的同源性，且最优选至少约99％或更大的同源性的那些氨基酸序列。可通过使用采用了BLAST(基本局部比对检索工具)2.0.14算法的BLASTP和TBLASTN程序计算氨基酸序列相似性或同一性。这些程序所用的默认设置适合为本发明的目的鉴定基本上相似的氨基酸序列。
“基本上同源的核酸序列”是指对应于参考核酸序列的核酸序列，其中该对应序列编码具有与参考核酸序列编码的肽基本上相同的结构和功能的肽；例如，其中仅发生不会明显影响肽功能的氨基酸变化。优选地，基本上相同的核酸序列编码参考核酸序列所编码的肽。基本相似的核酸序列和参考核酸序列之间的同一性百分比为至少约50％、65％、75％、85％、95％、99％或更大。可通过对比两个序列的序列同一性，例如通过物理/化学方法(即，杂交)或通过经由计算机算法的序列比对确定核酸序列的基本同一性。确定核苷酸序列与参考核苷酸序列是否基本相似的合适的核酸杂交条件是：50℃下、7％十二烷基硫酸钠SDS、0.5M NaPO4、1mM EDTA，在50℃下在2X标准柠檬酸盐(SSC)、0.1％SDS中洗涤；优选50℃下、7％(SDS)、0.5M NaPO4、1mM EDTA，在50℃下在1X SSC、0.1％SDS中洗涤；优选50℃下、7％SDS、0.5M NaPO4、1mM EDTA，在50℃下在0.5XSSC、0.1％SDS中洗涤；且更优选50℃下、7％SDS、0.5M NaPO4、1mMEDTA进行，在65℃下在0.1X SSC、0.1％SDS中洗涤。确定两个核酸序列之间的基本相似性的合适的计算机算法包括GCS程序包(Devereux等人，1984Nucl.Acids Res.12：387)和BLASTN或FASTA程序(Altschul等人，1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA.199087：14：5509-13；Altschul  等人，J.Mol.Biol.1990215：3：403-10；Altschul等人，1997 Nucleic AcidsRes.25：3389-3402)。为这些程序提供的默认设置适合为本发明的目的确定核酸序列的基本相似性。
术语“基本纯”描述了已与天然伴随它的组分分离的化合物，例如蛋白质或多肽。通常，当样品中的总材料(以体积计，以湿重计或以干重计，或以摩尔百分比或摩尔分数计)的至少10％，更优选至少20％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少75％，更优选至少90％，且最优选至少99％是目的化合物时，该化合物是基本纯的。可通过任何合适的方法，例如，以多肽为例通过柱层析、凝胶电泳或HPLC分析来测量纯度。当其基本不含天然伴随的组分或当其与其是天然状态时伴随它的天然污染物分开时，化合物例如蛋白质也是基本上纯化的。
如本文所用的术语“症状”是指患者所经历的并指示疾病的任何发病现象或在结构、功能或感官上偏离正常。相比之下，“征兆”是疾病的客观迹象。例如，流鼻血是一种征兆。其对于患者、医生、护士或其他观察者是明显的。
“治疗性”治疗是为了减少或消除那些征兆的目的对显现出病理学征兆的受治疗者施用的治疗。
化合物的“治疗有效量”是足以对待施用所述化合物的受治疗者提供有益效果的化合物的量。
如本文所用的，术语“转基因”是指包含与编码氨基酸序列的核酸可操作连接的编码启动子/调控序列的核酸的外源核酸序列，该外源核酸由转基因哺乳动物编码。
如本文所用的，术语“转基因哺乳动物”是指其生殖细胞包含外源核酸的哺乳动物。
如本文所用的，“转基因细胞”是包含已经以允许由所引入的核酸序列编码的基因的表达的方式引入到细胞中的核酸序列的任何细胞。
如本文所用的术语“治疗”是指降低患者或受治疗者经历症状的频率或施用药物或化合物以减少经历症状的频率。
“预防性”治疗是为了减少出现与疾病有关的病理的风险目的对不显现疾病征兆或仅显现疾病的早期征兆的受治疗者施用的治疗。
如本文所用的，术语“肿瘤”是指由不受控制的和渐进性的过度细胞分裂所致的异常组织块。其还称作赘生物。肿瘤可以是良性的(非癌性的)或恶性的。
如本文所用的，本文所用的术语“肿瘤细胞”是指显示出不受控制的生长方式或改变的生理学的任何细胞群。肿瘤细胞可来源于器官内的任何组织(例如，胰导管肿瘤细胞)。如本文所用的，术语“癌症”是用于其特征是不受控制的细胞异常生长的多于100种疾病的概括性术语。癌细胞可局部蔓延或可侵入血管壁并通过血流和淋巴系统蔓延到身体的其他部分并形成转移。蔓延的癌细胞称作“恶性的”。如本文所用的，关于哺乳动物中的生理病症的术语“癌症”和“癌性的”的特征通常是不受调控的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。这些癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠道癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌。
如本文所用的术语“疫苗”是指当对受治疗者接种时具有刺激受治疗者体内的免疫反应的作用的组合物，该组合物用于全部或部分地保护受治疗者免患某种病症、疾病或其症状。一方面，所述病症是怀孕。术语疫苗包括预防性以及治疗性疫苗。组合疫苗是组合了两种或更多种疫苗或两种或更多种化合物或药物的一种疫苗。
“载体”是物质组合物，其包含分离的核酸且其可用来向细胞内部递送分离的核酸。许多载体是本领域已知的，包括但不限于线性多核苷酸、与离子型或两性化合物结合的多核苷酸、质粒和病毒。因此，术语“载体”包括自主复制的质粒或病毒。该术语还应解释为包括有助于向细胞转运或递送核酸的非质粒和非病毒化合物，诸如，例如，聚赖氨酸化合物、脂质体及类似物。病毒载体的实例包括但不限于腺病毒载体、腺相关病毒载体、反转录病毒载体、重组病毒载体及类似载体。非病毒载体的实例包括但不限于脂质体、DNA的多胺衍生物及类似物。
“表达载体”是指包含含有与待表达的核苷酸序列可操作连接的表达控制序列的重组多核苷酸的载体。表达载体包括对于表达足够的顺式作用元件；可由宿主细胞或在体外表达系统中提供的其他表达元件。表达载体包括所有本领域已知的那些载体，例如黏粒、质粒(例如，裸露的或包含在脂质体中)和整合了重组多核苷酸的病毒。
本发明的序列
SEQ ID NO：1-KTLLPTP(SEQ ID NO：1)(也表示为Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro)
SEQ ID NO：2-βAKTLLPTP(SEQ ID NO：2)
SEQ ID NO：3-βAKTLLPTPGGS(SEQ ID NO：3)
SEQ ID NO：4-KTLLPTPGGS(SEQ ID NO：4)
SEQ ID NO：5-KHVMSKQ(SEQ ID NO：5)
SEQ ID NO：6-βKHVMSKQGGS(SEQ ID NO：6)
SEQ ID NO：7-βAKHVMSKQ(SEQ ID NO：7)
SEQ ID NO：8-AKHVMSKQGGS(SEQ ID NO：8)
SEQ ID NO：9-ATLLPTP(SEQ ID NO：9)
SEQ ID NO：10-KALLPTP(SEQ ID NO：10)
SEQ ID NO：11-KTALPTP(SEQ ID NO：11)
SEQ ID NO：12-KTLAPTP(SEQ ID NO：12)
SEQ ID NO：13-KTLLATP(SEQ ID NO：13)
SEQ ID NO：14-KTLLPAP(SEQ ID NO：14)
SEQ ID NO：15-KTLLPTA(SEQ ID NO：15)
SEQ ID NO：16-βAATLLPTPGGS(SEQ ID NO：16)
SEQ ID NO：17-βAKALLPTPGGS(SEQ ID NO：17)
SEQ ID NO：18-βAKTALPTPGGS(SEQ ID NO：18)
SEQ ID NO：19-βAKTLAPTPGGS(SEQ ID NO：19)
SEQ ID NO：20-βAKTLLPTPGGS(SEQ ID NO：20)
SEQ ID NO：21-βAKTLLPAPGGS(SEQ ID NO：21)
SEQ ID NO：22-βAKTLLPTAGGS(SEQ ID NO：22)
SEQ ID NO：23-KKKK(SEQ ID NO：23)
βA是β丙氨酸，且在序列表中被识别为Xaa。
实施方式
本发明提供了对表达网蛋白-1的癌症或任何细胞的诊断、检测、监控和成像有用的多聚体肽配体复合物。这些肽用在对成像、诊断、肿瘤定位等有用的复合物中。本文描述了用于制备多聚体肽和用于对比其相对于相应的单体肽的活性的方法，包括聚乙二醇化，或者可在本领域中找到这些方法(Li，2007，J.Nuc.Med.，48：7：1162-1171，“64Cu-labeled tetrameric andoctameric RGD peptides for small-animal PET of tumor αvβ3integrinexpression”；Choe和Lee在2007，Current Pharmaceutical Design，13：17-31中综述的；Chen等人，2004，Mol.Imaging Biol.6：350-9，“MicroPET imagingof breast cancer alphav-integrin expression with 64Cu-labeled dimeric RGDpeptides”；Janssen，2002，Cancer Biother.Radiopharm.，17：641-6，“Comparisonof monomeric and dimeric radiolabeled RGD-peptidefor tumor targeting；Poethko，2004，J.Nucl.Med.45：892-902；Chen，2004，Bioconjugate Chem.，15：41-9；Chen，2004，Nucl.Med.Biol.，31：11-19，“Pharmacokinetics and tumorretention of 125I-labeled RGD peptide are improved by PEGylation”；Li等人，2009，Mol.Cancer Ther.，8：5：1239-1249；美国专利第7,666,979号(由美国专利申请第10/661,032号公布的)；美国专利申请第12/012,011号(美国专利申请第10/792,582号的继续申请)；Nahrendorf，2010，JACC：CardiovascularImaging，2：10：1213-1222；Krajewski等人，2005，“Effect of Dimerization andTetramerization on the Potency of HIV-Integrase Inhibitory Peptides，”Understanding Biology Using Peptides，American Peptide Society，S.Blondelle，编辑，411-412)。
本文或在Kelly等人(2008，Targeted nanoparticles for imaging incipientpancreatic ductal adenocarcinoma.PLoS Med 5：4：e85)和国际专利公布号WO2009/129220(Kelly等人，2009年10月22日公布)中描述了本发明的有用的基础肽且包括：SEQ ID NO：1-KTLLPTP(SEQ ID NO：1)。本文描述了其他有用的肽，包括用于结合网蛋白-1的SEQ ID NO：2-4和9-15。
本发明还包括包含编码本发明的肽的序列的分离的核酸。
在一个实施方式中，本发明的有用的肽用来制备多聚体肽配体复合物并通过在合成过程中添加额外的氨基酸或置换氨基酸而被修饰。例如，本文使用已知结合网蛋白-1的配体KTLLPTP(SEQ ID NO：1)形成多聚体复合物并修饰碱基序列以获得序列βAKTLLPTPGGS(SEQ ID NO：3)，向该序列添加聚乙二醇部分，例如PEG5000，然后使用连接/间隔赖氨酸将多个肽连接到螯合剂例如DOTA上。螯合剂用作可向其添加显像剂例如111In的部分。基于这些序列所得的本发明的多聚体肽配体复合物在这种情况下是四聚体，且具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。
如通过ChemDraw推断的，具有包含网蛋白-1的四个肽配体(SEQ IDNO：1)的式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2(本文也表示成[(βAla-Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser-PEG5K)2-Lys]2-Lys-Lys(DOTA)-βAla-NH2)的结构的化学名称是：2，2′，2″-(10-(1-(1-(2-(1-(15-氨基-11-(4-氨基丁基)-8-(1-羟乙基)-2，5-二异丁基-4，7，10，13-四氧代-3，6，9，12-四氮杂十五烷)吡咯烷-2-酰胺基)-3-羟基丁酰基)吡咯烷-2-基)-32-(1-(1-(2-(1-(15-氨基-11-(4-氨基丁基)-8-(1-羟乙基)-2，5-二异丁基-4，7，10，13-四氧代-3，6，9，12-四氮杂十五烷)吡咯烷-2-酰胺基)-3-羟基丁酰基)吡咯烷-2-基)-25-(1-(1-(2-(1-(15-氨基-11-(4-氨基丁基)-8-(1-羟乙基)-2，5-二异丁基-4，7，10，13-四氧代-3，6，9，12-四氮杂十五烷)吡咯烷-2-酰胺基)-3-羟基丁酰基)吡咯烷-2-基)-9-(羟甲基)-1，4，7，10-四氧代-14，17-二氧杂-2，5，8，11-四氮杂十九烷酰氨基)-9-(羟甲基)-1，4，7，10，19-五氧代-14，17-二氧杂-2，5，8，11，20-五氮杂二十六烷酰氨基)-25-(1-(1-(2-(1-(15-氨基-11-(4-氨基丁基)-8-(1-羟乙基)-2，5-二异丁基-4，7，10，13-四氧代-3，6，9，12-四氮杂十五烷)吡咯烷-2-酰胺基)-3-羟基丁酰基)吡咯烷-2-基)-9-(羟甲基)-1，4，7，10-四氧基-14，17-二氧杂-2，5，8，11-四氮杂十九烷酰氨基)-35-(3-氨基-3-氧代丙基氨基甲酰基)-9-(羟甲基)-1，4，7，10，19，26，33，41-八氧代-14，17-二氧杂-2，5，8，11，20，27，34，40-八氮杂四十二烷-42-基)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三基)三乙酸，铟盐。
以上命名的四聚体式的化学结构是(再参见图8)：
Figure BDA00001840425500411
本发明还公开了其他多聚体肽配体复合物的制备，通过，例如，修饰SEQ ID NO：1或βAKTLLPTPGGS(SEQ ID NO：3)。例如，这些序列可被SEQID NO：9-22中任何一个取代。因此，通过用允许相似性质的其他序列取代或修饰SEQ NO：3的全部或部分来修饰上述本发明的四聚体，(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。如本文所述，已对SEQID NO：1的每一个残基进行丙氨酸突变/置换，因此本发明的其他四聚体包括那些置换中的每一个。那七种变化包括分别基于用SEQ ID NO：16-22取代SEQ ID NO：3的本发明的另外七个四聚体，即：
(βAATLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，
(βAKALLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，
(βAKTALPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，
(βAKTLAPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，
(βAKTLLATPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，
(βAKTLLPAPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，和
(βAKTLLPTAGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。
这些并不是本发明所包括的仅有的氨基酸置换。本发明还包括使用其他氨基酸的相似置换。另外，本文公开的数据表明苏氨酸的存在可能是特别重要的，且脯氨酸可能也是重要的。这是由如下事实证明的：用丙氨酸对其置换的确导致亲和力至少轻微下降。因此，本发明还提供了例如序列的添加与置换以包括更多的苏氨酸残基或不同位置的苏氨酸残基。
因此本发明包括包含肽配体的多聚体和至少一种显像剂例如金属、放射性核素等的复合物的制备，复合物通常与螯合剂偶联以络合显像剂。
在某些实施方式中，显像剂通过螯合剂与复合物结合。一方面，所述螯合剂是DOTA。
多种三价金属放射性核素具有适合放射性同位素成像(例如，铟-111(111In)、镓-67/68(67/68Ga)和钇-86(86Y))或适合放射性核素靶向治疗(例如90Y和镥-177(177Lu))的物理性质。这些金属放射性核素可与靶向生物分子(例如肽或抗体)组合以诊断、监控或治疗疾病。为获得具有所需要的稳定性的放射性标记的生物分子，必须先将肽或蛋白质与合适的螯合剂偶联以络合金属。螯合剂对用于标记肽的三价金属(例如In、Y、Ga和Lu)的要求通常与对用于标记蛋白质的那些要求相同。复合物在生物系统中应是稳定的且其螯合能力应不受与肽的反应的阻碍。最经常地，使用二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)和/或1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA；CAS 60239-18-1)(参见Choe和Lee，2007，CurrentPharmaceutical Design，13：17-31；Li等人，2007，J.Nuclear Medicine，“64Cu-Labeled Tetrameric and Octameric RGD Peptides for Small-Animal PETof Tumor avb3 Integrin Expression”，48：1162-1171；Nahrendorf等人，2009，JACC Cardiovasc.Imaging，2：10：1213-1222；Li等人，2009，Mol.Cancer Ther.，8：5：1239-1249；Yim等人，2010，J.Med.Chem.，53：3944-3953；Dijkgraaf等人，2010，Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging，2010年9月21日在线公布；美国专利申请第10/792,582号；Dransfield等人，美国专利公布号为US2010/0261875；美国专利第7,666,979号)。在所提及的金属中，DOTA络合物在热动力学和流变学方面比DTPA络合物更稳定(见Sosabowski等人，Nature Protocols 1，-972-976(2006)和Leon-Rodriguez等人，Bioconjugatechemistry，01/03/2008；19(2)：391-402)。
螯合剂
在某些实施方式中，螯合剂可与肽直接或间接地结合，并用来螯合治疗剂或诊断剂，例如放射性核素。示例性的螯合剂包括但不限于DTPA(例如Mx-DTPA)、DOTA、TETA、NETA或NOTA。偶联方法和螯合剂将金属或其他配体结合到蛋白质上的用途是本领域熟知的(参见，例如美国专利申请序列号为12/112,289，本文通过引用将其全部并入)。
本发明包含的有用的螯合剂包括但不限于DTPA、DO3A、DOTA、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、HYNIC和MECAM。HYNIC对于螯合Tc99，本发明的另一种显像剂是特别有用的。
修饰
本发明还提供了作为复合物的一部分的分子例如聚乙二醇(“PEG”)分子的用途。一方面，PEG约20,000m.w.或约小于约20,000m.w。另一方面，PEG小于约18,000m.w.。又另一方面，PEG小于约16,000m.w.。再一方面，PEG小于约14,000m.w.。再一方面，PEG小于约12,000m.w.。再一方面，PEG小于约10,000m.w.。再一方面，PEG小于约8,000m.w.。再一方面，PEG小于约7,000m.w.。再一方面，PEG小于约6,000m.w.。再一方面，PEG小于约5,000m.w.。再一方面，PEG小于约4,000m.w.。再一方面，PEG小于约3,000m.w.。再一方面，PEG小于约2,000m.w.。再一方面，PEG小于约1,000m.w.。再一方面，PEG小于约500m.w.。
一方面，所述PEG是PEG5000。
肽的修饰和制备
在实施例中描述了肽的制备。当然将应理解，本发明的蛋白质或肽可包括被修饰而不影响活性的氨基酸残基。例如，末端可被衍生化以包括封端基，即适合保护和/或稳定N端和C端免于“不期望的降解”的化学取代基，“不期望的降解”是一个意在包括在其末端对化合物进行的、可能影响化合物功能的任何类型的酶促、化学或生化分解的术语，这种分解即，化合物在其末端的顺序性降解。
封端基包括通常用于肽化学领域的不会不利影响所述肽的体内活性的保护基。例如，可通过N端的烷基化或酰化引入合适的N端保护基。合适的N端封端基的实例包括C1-C5支化的或未支化的烷基、酰基例如甲酰基和乙酰基以及其取代形式，例如乙酰胺基甲基(Acm)。氨基酸的脱氨基类似物也是有用的N端封端基，且可与肽的N端偶联或用来取代N端残基。合适的C端封端基包括酯、酮或酰胺，其中C端的羧基被结合或未被结合。形成酯或酮的烷基特别是低级烷基例如甲基、乙基和丙基，和形成酰胺基的氨基例如伯胺(-NH2)和单和二-烷基氨基例如甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲基乙基氨基及类似基团是C端封端基的实例。去羧基化的氨基酸类似物例如胍基丁胺也是有用的C端封端基并可与肽的C端残基偶联或用来取代它。另外，将应理解，可从肽中一同去除位于末端的游离氨基和羧基以产生其去氨基和去羧基化形式而不影响肽活性。
还考虑了本发明的酸加成盐作为功能等效物。因此，为提供肽的水溶性盐，用无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及类似酸，或有机酸例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸及类似酸处理的根据本发明的肽适合用于本发明。
修饰(通常不改变一级序列)包括多肽的体内或体外化学衍生化，例如乙酰化或羧化。还包括糖基化修饰，例如在其合成和加工期间或在进一步加工步骤中通过改变多肽的糖基化方式制备的那些多肽；例如通过将多肽暴露于影响糖基化的酶，例如哺乳动物糖基化或去糖基化酶。还包括具有磷酸化的氨基酸残基例如磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸的序列。
还包括使用普通分子生物学技术修饰以提高其对蛋白酶降解的抗性或优化稳定性特征或使其更适合作为治疗剂的多肽。这些多肽的类似物包括包含除了天然形成的L-氨基酸以外的残基例如D-氨基酸或非天然形成的或合成的非标准氨基酸的那些多肽。本发明的肽不局限于本文列出的任何具体示例性方法的产物。
本发明还包括β-丙氨酸的用途(也称作β-丙氨酸、β-Ala、bA和βA)，其具有结构：
本文提供了序列，这些序列使用符号“βA”，但在随此递交的序列表中，以“Xaa”提供“βA”且在序列表文本中的引用表示Xaa是β丙氨酸。
本发明中有用的肽例如用于分析的标准品或修饰物可易于通过标准的、完备的技术来制备，例如Stewart等人在Solid Phase Peptide Synthesis，第二版，1984，Pierce Chemical Company，Rockford，Illinois中描述和如Bodanszky和Bodanszky在The Practice of Peptide Synthesis，1984，Springer-Verlag，New York中描述的固相肽合成(SPPS)。首先，被适当保护的氨基酸残基通过其羧基结合到衍生化的不溶性聚合物载体例如交联的聚苯乙烯或聚酰胺树脂上。“被适当保护的”是指保护基在氨基酸的α-氨基和在任何侧链官能团上的存在。侧链保护基通常对贯穿合成使用的溶剂、试剂和反应条件是稳定的，且可在将不影响最终肽产物的条件下去除。通过从原始氨基酸上去除N-保护基进行寡肽的分步合成，并将其偶联到期望的肽序列中的下一个氨基酸的羧基端上。该氨基酸也是被适当保护的。引入的氨基酸的羧基可被活化以通过形成反应基例如形成碳化二亚胺、对称酸酐或“活性酯”基例如羟基苯并三唑或五氟苯酯以与载体结合的氨基酸的N端反应。
固相肽合成法的实例包括使用叔丁氧基羰基作为α-氨基保护基的BOC法和使用9-芴基甲氧基羰基保护氨基酸残基的α-氨基的FMOC法，这两种方法都是本领域技术人员熟知的。
还可使用固相肽合成法常用的方案实现N-和/或C-保护基的引入。对于C-端保护基的引入，例如，通常使用已被化学修饰的支撑树脂作为固相进行目的肽的合成以使得与树脂的裂解产生具有期望的C端保护基的肽。例如，为提供其中C端具有伯胺封端基的肽，使用对甲基二苯甲胺(MBHA)树脂进行合成以使得当肽合成结束时，用氢氟酸处理释放期望的C端酰胺化的肽。相似地，使用经HF处理释放具有N-甲基酰胺化的C末端的肽的N-甲基氨基乙基-衍生的DVB树脂实现在C端引入N-甲胺封端基。还可使用常规方法通过酯化作用实现对C端封端。这需要使用允许侧链肽从树脂上释放的树脂/封端基组合以允许随后与期望的醇反应以形成酯官能度。与用甲氧基烷氧基苄醇或等效接头衍生化的DVB树脂组合的FMOC保护基可用于该目的，通过二氯甲烷中的TFA实现与载体断裂。然后可通过加入期望的醇与例如DCC的适度活化的羧基官能团进行酯化作用，然后去保护并分离酯化的肽产物。
例如通过用合适的酸酐和腈处理，可实现N-端封端基的引入而合成的肽仍结合在树脂上。例如，为在N端引入乙酰基封端基，可用20％的溶于乙腈中的乙酸酐处理树脂偶联的肽。然后可从树脂上裂解N-封端的肽产物，去保护并随后分离。
为保证经化学或生物合成技术获得的肽是所期望的肽，应进行肽组成的分析。可使用高分辨质谱法进行该氨基酸组成分析以确定肽的分子量。可选择地，或另外，可通过在酸水溶液中水解肽并使用HPLC或氨基酸分析仪分离、鉴定并量化混合物的组分来证实肽的氨基酸含量。也可使用顺序降解肽并按顺序鉴定氨基酸的蛋白质测序仪来准确地测定肽序列。
在其使用前，可纯化肽以去除污染物。关于这点，将理解将纯化肽以满足适当的监管机构制定的标准。可使用多种常规纯化方法中的任何一种获得所需要的纯度水平，包括，例如使用烷化的二氧化硅柱例如C4-、C8-或C18-二氧化硅进行反相高效液相色谱(HPLC)。通常使用具有渐增的有机含量的梯度流动相例如溶于通常包含少量的三氟乙酸的水缓冲液中的乙腈来实现纯化。还可使用离子交换层析基于其电荷来分离肽。
可通过按照已知的蛋白质纯化方法纯化如本文所述获得的基本纯的蛋白质，其中在该方法中使用免疫学、酶学或其他测定来监控每个阶段的纯化。蛋白质纯化方法是本领域熟知的，且描述在例如Deutscher等人(编辑1990，Guide to Protein Purification，Harcourt Brace Jovanovich，SanDiego)。
如所讨论的，本发明的肽配体的修饰或优化落在本申请的范围内。修饰或优化的肽包含在肽结合配体的定义内。具体地，可修饰所鉴定的肽序列以优化其效力，药物动力学行为、稳定性和/或其他生物学、物理学和化学性质。
氨基酸置换
在某些实施方式中，所公开的方法和组合物可包括制备带有一个或多个取代的氨基酸残基的肽。
在各种实施方式中，可通过取代一个或多个氨基酸残基优化肽序列的结构、物理和/或治疗性特征。
还可包括其他修饰而不有害地影响活性且这些修饰包括但不限于用D-异构体形式的氨基酸取代一个或多个天然L-异构体形式的氨基酸。因此，所述肽可包括一个或多个D-氨基酸残基或可包含都是D-型的氨基酸。还考虑了根据本发明的逆反(Retro-inverso)形式的肽，例如，其中所有氨基酸被D-氨基酸形式取代的反转肽。
技术人员应了解，一般来讲，肽中的氨基酸置换通常包括用具有相对相似性质的另一个氨基酸取代氨基酸(即，保守氨基酸置换)。各种氨基酸的性质和氨基酸置换对蛋白质结构和功能的影响已成为本领域集中研究和了解的主题。例如，技术人员可在母体多肽序列中进行以下等构和/或保守氨基酸变化，期望所得的多肽将具有上述性质的相似或改进的特征。
烷基取代的疏水氨基酸的置换：包括被从C1-10碳的脂族侧链取代的丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、正亮氨酸、S-2-烷基丁酸、S-环己基丙氨酸或其他简单的α-氨基酸，包括支链、环状和直链烷基、烯基或炔置换。
芳族取代的疏水氨基酸的置换：包括苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、联苯基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-苯并噻嗯基丙氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、组氨酸、之前列出的芳族氨基酸的氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氮杂、卤代(氟、氯、溴或碘)或烷氧基取代形式，其示范性的实例是：2-，3-或4-氨基苯丙氨酸、2-，3-或4-氯苯丙氨酸、2-，3-或4-甲基苯丙氨酸、2-，3-或4-甲氧基苯丙氨酸、5-氨基-、5-氯-、5-甲基-或5-甲氧基色氨酸，2′，3′-或4′-氨基-，2′，3′-或4′-氯-、2，3或4-联苯基丙氨酸，2′，-3′-或4′-甲基-2，3或4-联苯基丙氨酸和2-或3-吡啶基丙氨酸。
包含碱性官能团的氨基酸的置换：包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、2，3-二氨基丙酸、高精氨酸、上述氨基酸的烷基、烯基或芳基-取代的(从C1-C10分支的、直链的或环状的)衍生物，无论取代基在杂原子上(例如α氮或远端氮或多个氮)还是在α碳上，例如前R位置上。用作示范性实例的化合物包括：N-ε-异丙基-赖氨酸、3-(4-四氢吡啶基)-甘氨酸、3-(4-四氢吡啶基)-丙氨酸、N，N-γ，γ′-二乙基-高精氨酸。还包括化合物例如α甲基精氨酸、α甲基2，3-二氨基丙酸、α甲基组氨酸、α甲基鸟氨酸，其中烷基占据α碳的前R位置。还包括由烷基、芳族、杂环(其中杂环基团具有单独或组合的一个或多个氮、氧或硫原子)羧酸或许多众所周知的活性衍生物中的任何一种例如酰基氯、活性酯、活性保泰松和相关衍生物)和赖氨酸、鸟氨酸或2，3-二氨基丙酸形成的酰胺。
酸性氨基酸的置换：包括天冬氨酸、谷氨酸、高谷氨酸、酪氨酸、2，4-二氨基丙酸的烷基、芳基、芳烷基和杂芳基磺酰胺、鸟氨酸或赖氨酸和四唑-取代的烷基氨基酸。
侧链酰胺残基的置换：包括天冬酰胺、谷氨酰胺和天冬酰胺或谷氨酰胺的烷基或芳族取代的衍生物。
含羟基的氨基酸的置换：包括丝氨酸、苏氨酸、高丝氨酸、2，3-二氨基丙酸和丝氨酸或苏氨酸的烷基或芳族取代的衍生物。还应理解以上列出的每个种类的氨基酸可被置换成同组的另一个氨基酸。
例如，可考虑氨基酸的亲水指数(Kyte&Doolittle，1982，J.Mol.，Biol.，157：105-132)。氨基酸的相对亲水特征促成了所得蛋白质的二级结构，这反过来限定了蛋白质与其他分子的相互作用。基于其亲水性和电荷特征已为每个氨基酸指定了亲水指数(Kyte&Doolittle，1982)，这些是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。在进行保守置换时，优选使用其亲水指数在+/-2之内的氨基酸，更优选+/-1之内的氨基酸，且甚至更优选+/-0.5之内的氨基酸。
氨基酸置换还可考虑氨基酸残基的亲水性(例如，美国专利第4,554,101号)。已为氨基酸残基指定了亲水值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0)；谷氨酸(+3.0)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5+-0.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。优选用具有相似亲水性的其他氨基酸取代氨基酸。
其他考虑因素包括氨基酸侧链的大小。例如，用具有体积大的侧链的氨基酸例如色氨酸或酪氨酸取代具有紧凑侧链的氨基酸例如甘氨酸或丝氨酸将通常不是优选的。各种氨基酸残基对蛋白质二级结构的影响也是一个考虑因素。在经验性研究中，已确定了不同氨基酸残基对蛋白质结构域采取α-螺旋、β-折叠或反向转角二级结构的趋势的影响且这种影响是本领域已知的(参见，例如Chou&Fasman，1974，Biochemistry，13：222-245；1978，Ann.Rev.Biochem.，47：251-276；1979，Biophys.J.，26：367-384)。
基于这些考虑因素和大量的经验性研究，已绘制了保守氨基酸置换表且是本领域已知的。例如精氨酸和赖氨酸；谷氨酸和天冬氨酸；丝氨酸和苏氨酸；谷氨酰胺和天冬酰胺；和缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸。可选择地：Ala(A)leu、ile、val；Arg(R)gln、asn、lys；Asn(N)his、asp、lys、arg、gln；Asp(D)asn、glu；Cys(C)ala、ser；Gln(Q)glu、asn；Glu(E)gln、asp；Gly(G)ala；His(H)asn、gln、lys、arg；Ile(I)val、met、ala、phe、leu；Leu(L)val、met、ala、phe、ile；Lys(K)gln、asn、arg；Met(M)phe、ile、leu；Phe(F)leu、val、ile、ala、tyr；Pro(P)ala；Ser(S)、thr；Thr(T)ser；Trp(W)phe、tyr；Tyr(Y)trp、phe、thr、ser；Val(V)ile、leu、met、phe、ala。
氨基酸置换的其他考虑因素包括该残基是位于蛋白质的内部还是暴露于溶剂。对于内部残基，保守置换将包括：Asp和Asn；Ser和Thr；Ser和Ala；Thr和Ala；Ala和Gly；Ile和Val；Val和Leu；Leu和Ile；Leu和Met；Phe和Tyr；Tyr和Trp(参见，例如PROWL Rockefeller Universitywebsite)。对于暴露于溶剂的残基，保守置换将包括：Asp和Asn；Asp和Glu；Glu和Gln；Glu和Ala；Gly和Asn；Ala和Pro；Ala和Gly；Ala和Ser；Ala和Lys；Ser和Thr；Lys和Arg；Val和Leu；Leu和Ile；Ile和Val；Phe和Tyr(Id.)。已构建了各种矩阵以帮助选择氨基酸置换，例如PAM250计分矩阵、Dayhof矩阵、Grantha矩阵、McLachlan矩阵、Doolittl矩阵、Henikoff矩阵、Miyata矩阵、Fitch矩阵、Jones矩阵、Ra矩阵、Levin矩阵和Risler矩阵(Idem.)。
在确定氨基酸置换方面，技术人员还可考虑分子间或分子内键的存在，例如带正电荷的残基(例如His、Arg、Lys)和带负电荷的残基(例如Asp、Glu)之间的离子键(盐桥)或附近半胱氨酸残基之间的二硫键的形成。
在所编码的肽序列中将任何一个氨基酸置换成任何其他氨基酸的方法是众所周知的且是技术人员的常规实验的问题，例如通过定点诱变技术或通过合成和组装编码氨基酸置换的寡肽并剪接到表达载体构建体中。
接头
另外，本发明所包括的修饰包括在结合部分或结合多肽的靶序列和可检测标记或治疗剂之间引入接头或间隔区。例如，这些接头/间隔区的使用可改进结合肽的相关性质(例如增加血清稳定性等)。这些接头可包括但不限于本领域常见的取代或未取代的烷基链、聚乙二醇衍生物、氨基酸间隔区、糖或脂族或芳族间隔区。
例如，合适的接头包括同双官能和异双官能交联分子。同双官能分子具有至少两个相同的反应性官能团。同双官能分子上的反应性官能团包括例如醛基和活性酯基。具有醛基的同双官能分子包括例如，戊二醛和subaraldehyde。
具有至少两个活性酯单元的同双官能接头分子包括二羧酸和N-羟基琥珀酰亚胺的酯。这类N-琥珀酰亚胺酯的一些实例包括辛二酸二琥珀酰亚胺和二硫代-双-(丙酸琥珀酰亚胺)和其可溶性双磺酸和双磺酸盐例如其钠盐和钾盐。
异双官能接头分子具有至少两个不同的反应基。包含反应性二硫键的异双官能试剂的某些实例包括3-(2-吡啶基-二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺(Carlsson等人，1978.Biochem.J.，173：723-737)、S-4-琥珀酰亚氨基氧羰基-α-甲基苄基硫代硫酸钠和4-琥珀酰亚氨基氧羰基-α-甲基-(2-吡啶二硫代)甲苯。优选3(2-吡啶二硫代)丙酸N-琥珀酰亚胺。包含具有与硫醇基团反应的双键的反应基的异双官能试剂的某些实例包括4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺和间马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺。其他异双官能分子包括3-(马来酰亚氨基)丙酸琥珀酰亚胺、4-(对马来酰亚氨基-苯基)丁酸琥珀酰亚胺、4-(N-马来酰亚氨基甲基-环己烷)-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺、马来酰亚氨基苯甲酰-5N-羟基-琥珀酰亚胺酯。
另外，还可采用作为上述分子和/或部分的组合的接头以赋予肽的性质特别的优点。可结合带有接头的脂质分子以允许形成超声泡沫、脂质体或其他基于聚集的构建体。这些构建体可用作靶向和递送诊断报告物、治疗剂(例如，用于治疗的化学“弹头”)或这些物质的组合物的药物。
还考虑了采用二聚体、多聚体或一种或多种本发明的肽配体的聚合物的构建体。的确，存在大量的文献证明可通过形成二聚体和多聚体极大地增加低效力的肽或小分子的结合。因此，二聚体和多聚体构建体(同聚的和异聚的)落在本发明的范围内。二聚体构建体中的多肽序列可结合在其N或C端或合适布置的赖氨酸部分的N-ε氮上(或具有选择性衍生基团例如侧链氧基氨基或其他亲核基团的另一个官能团)或可采用合适的连接化学通过一个或多个接头(例如，本文讨论的那些接头)连在一起。该偶联化学物质可包括酰胺、尿素、硫脲、肟或氨基乙酰胺(来自氯代或溴代乙酰胺衍生物，但不局限于此)。例如，制备本发明的结合Plec1的多肽的二聚体或多聚体构建体的方法包括至少下述那些方法。
还可使用接头用于结合螯合剂。
治疗剂
在其他实施方式中，当使用本文所述的多聚体肽配体复合物时，可使用治疗剂包括但不限于细胞毒性剂、抗血管生成剂、促凋亡剂、抗生素、激素、激素拮抗物、趋化因子、药物、前药、毒素、酶或其他物质作为辅助治疗。例如，本发明中有用的药物可具有选自由抗有丝分裂剂、抗激酶剂、烷化剂、抗代谢物、抗生素、生物碱、抗血管生成剂、促凋亡剂和其组合组成的组的药物性质。
诊断、监控和治疗癌症
另一方面，本发明提供了用于诊断受治疗者体内的癌症的组合物和方法。这些方法包括提供来自患者的样品，例如组织活检样品和包括多聚体肽配体复合物的诊断组合物，其中一方面，所述肽配体序列选自任选地与可检测部分偶联的SEQ ID NO：1-4和9-22中的一个，将肽加入到样品中和例如通过检测样品中的可检测部分检测诊断组合物。在某些实施方式中，成像包括但不限于激光扫描显微术、免疫组织化学、荧光显微术、射线照相成像及类似技术。
又一方面，本发明提供了用于体内诊断癌症的方法和组合物。该方法包括确定处于患胰细胞癌的风险之下或疑似患胰细胞癌的受治疗者；对受治疗者施用包含与显像分子偶联的本发明的多聚体肽配体复合物的诊断组合物，和使用体内成像对受治疗者体内的显像分子成像。在某些实施方式中，胰细胞癌是胰导管腺癌。在某些实施方式中，显像分子是磁性荧光颗粒。在某些实施方式中，磁性荧光颗粒包含近红外(NIR)荧光团(NIRF)。在某些实施方式中，通过选自由皮内、皮下、腹腔内、静脉内、动脉内、口服和肠途径组成的组的途径施用组合物。在某些实施方式中，体内成像包括但不限于磁共振成像(MRI)、体内激光扫描显微镜、内窥镜、SPECT/CT和射线照相成像。
本发明还提供了监控癌症进展，包括在癌变期间。本申请公开了胰腺癌形成期间的网蛋白-1表达和细胞定位变化。本发明提供了用于监控这些变化的组合物和方法。
在一个实施方式中，本发明还提供了用于监测癌症的进展或治疗的组合物和方法。
在另一个实施方式中，本发明提供了用于手术去除胰腺癌细胞的方法。这些方法包括a)提供：i)包含用于区分胰腺癌细胞和非胰腺癌细胞的本发明的多聚体肽配体复合物的组合物；ii)已知患胰腺癌的受治疗者；iii)体内成像装置；和b)对受治疗者施用该组合物；c)用成像装置对胰腺癌细胞体内成像；和d)检测其位置后从受治疗者体内去除胰腺癌细胞。
本发明提供了治疗患癌症的患者的方法，包括a)提供：i)需要治疗的受治疗者；ii)包含本发明的多聚体肽配体复合物的药物组合物，其中配体结合本发明的生物标志；和b)对受治疗者施用治疗组合物。在某些实施方式中，药物组合物还包含治疗剂。在某些实施方式中，治疗剂选自由至少一种融合蛋白、毒素和药物或其组合组成的组。
本发明不受表达网蛋白-1或其片段或其同源物或显示出细胞表面网蛋白-1的癌症类型的限制。的确，设想了使用本发明的检测方法的各种类型的癌症包括但不限于肺癌、膀胱癌、头和/或颈癌、乳腺癌、食道癌、口癌、舌癌、肠癌、皮肤癌(例如，黑色素瘤、基底细胞癌、卡波西肉瘤等)、肌肉癌、心癌、肝癌、支气管癌、软骨癌、骨癌、胃癌、前列腺癌、睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫癌、胰腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、淋巴癌、脾癌、胸腺癌、甲状腺癌、脑癌、神经癌、间皮瘤、胆囊癌、眼癌(例如，角膜癌、葡萄膜癌、脉络膜癌、斑癌、玻璃体液癌等)、关节癌(例如滑膜癌)、成胶质细胞瘤、白细胞癌(例如，淋巴瘤、白血病等)、遗传性非息肉性癌(HNPC)、结肠相关癌症等。还通过肉瘤(例如骨肉瘤和卡波西肉瘤)例示癌症。
本发明提供了治疗患胰腺癌的患者的方法，包括a)提供，i)需要治疗的癌症患者，ii)包含配体的药物组合物，其中所述配体结合网蛋白-1或其片段，和b)对患者施用治疗组合物。在某些实施方式中，药物组合物还包含治疗剂。在某些实施方式中，治疗剂选自由融合蛋白、毒素和药物组成的组。另一方面，本发明提供了治疗患胰腺癌的受治疗者的方法。这些方法包括例如基于其患胰腺癌确定需要治疗的受治疗者，和施用治疗有效量的包括包含但不限于具有与细胞毒性剂例如毒素或药物连接的序列SEQID NO：1-4和9-22的肽的多聚体肽配体复合物的药物组合物。
另一方面，本发明提供了用于鉴定对肽配体具有选择性亲和力的癌细胞结合配体(受体)的方法。该方法包括将不同群体的结合分子选择性固定到固相载体，使固定在固相载体上的不同群体与一种或多种肽配体接触(例如，同时接触)和确定选择性结合一种或多种肽配体，包括由噬菌体表达的那些肽配体的至少一种结合分子。还提供了用于鉴定对肿瘤抗原(结合分子)具有选择性亲和力的肽配体的方法。这些方法包括将肿瘤抗原选择性地固定到固相载体上，使固相载体上的固定的肿瘤抗原与一种或多种肽配体接触(例如，同时接触)和鉴定选择性结合一种或多种肿瘤抗原的至少一种肽配体。还提供了对肿瘤生物标志选择性的分离的结合肽(“肽配体”)，特别是网蛋白-1的肽配体。本文还描述了快速且有效地鉴定对一种或多种目的肽配体显示选择性亲和力的结合分子的方法。这些方法是有优势的因为其允许同时筛选针对多个目的肽配体的多个结合分子。另外，需要非常少的关于用于本发明的结合分子或配体的身份或功能的信息。例如，可同时筛选针对不同群体的肽配体的不同群体的结合分子以快速鉴定显示出期望的结合特异性的众多分子。因此本文所述的方法可有优势地用于发现特定试剂，例如肽配体和生物标志以诊断和治疗人类疾病。
本发明中有用的核酸包括，举例来说且不限于，寡核苷酸和多核苷酸例如反义DNA和/或RNA；核酶；用于基因治疗的DNA；包含病毒DNA和/或RNA的病毒片段；DNA和/或RNA嵌合体；mRNA；质粒；黏性质粒；基因组DNA；cDNA；基因片段；各种结构形式的DNA包括单链DNA、双链DNA、超螺旋DNA和/或三螺旋DNA；Z-DNA及类似物。可通过通常用来大量制备核酸的任何常规手段制备核酸。例如，可使用化学上可获得的试剂和合成仪通过本领域熟知的方法(参见，例如，Gait，1985，OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS：A PRACTICAL APPROACH(IRL Press，Oxford，England))化学合成DNA和RNA。可使用质粒例如SP65(PromegaCorporation，Madison，WI)通过体外转录以高产率制备RNA。
显像剂和诊断剂
诊断剂选自例如由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。这些诊断剂是众所周知的且可使用任何这种已知的诊断剂。诊断剂的非限制性实例可包括放射性核素例如110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32p、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb、83Sr和其他γ-、β-或正电子-发射体。有用的顺磁离子可包括铬(III)、锰(II)、铁(III)、铁(II)、钴(II)、镍(II)、铜(II)、钕(III)、钐(III)、镱(III)、钆(III)、钒(II)、铽(III)、镝(III)、钬(III)或铒(III)。金属造影剂可包括镧(III)、金(III)、铅(II)或铋(III)。超声造影剂可包含脂质体，例如充气脂质体。不透射线的诊断剂可选自化合物、钡化合物、镓化合物和铊化合物。多种多样的荧光标记是本领域已知的，包括但不限于异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二醛和荧光胺。有用的化学发光标记可包括鲁米诺、异鲁米诺、芳族吖啶酯、咪唑、吖啶盐或草酸酯。
现有技术中提供或本文描述了用于检测和测量这些试剂的技术。
抗体和其制备
可使用本领域熟知的方法产生针对本发明的蛋白质、多肽或其肽片段的抗体。例如，本文通过引用将其全部并入的美国专利申请第07/481,491号公开了产生针对肽的抗体的方法。为了制备抗体，可通过注射多肽或其肽片段来免疫各种宿主动物，包括但不限于兔子、小鼠和大鼠。为增强免疫反应，可根据宿主物种使用各种佐剂，包括但不限于弗氏佐剂(完全佐剂和不完全佐剂)、矿物凝胶例如氢氧化铝、表面活性物质例如溶血磷脂酰胆碱、复合多元醇、聚阴离子、肽、油乳液、钥孔血蓝蛋白、二硝基苯酚和可能有用的人佐剂例如BCG(卡介苗)和短棒杆菌(corynebacteriumparvum)。
为了制备单克隆抗体，可利用通过连续培养细胞系提供抗体分子产生的任何技术。例如，可采用最先由Kohler和Milstein(1975，Nature256：495-497)开发的杂交瘤技术、三源杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人，1983，Immunology Today 4：72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人，1985，在Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，第77-96页中)来产生人单克隆抗体。在另一个实施方式中，单克隆抗体产生于无菌动物体内。
根据本发明，可使用人抗体并通过使用人杂交瘤(Cote等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：2026-2030)或通过用EBV病毒体外转化人B细胞(Cole等人，1985，在Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，AlanR.Liss，Inc.，第77-96页中)获得该抗体。另外，可采用通过将来自特异性针对SLLP多肽表位的小鼠抗体分子的基因与来自具有合适的生物活性的人抗体分子的基因剪接在一起来制备“嵌合抗体”而开发的技术(Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6851-6855；Neuberger等人，1984，Nature 312：604-608；Takeda等人，1985，Nature 314：452-454)；这些抗体落在本发明的范围内。一旦已研发出特异的单克隆抗体，通过常规技术制备其突变体及变体也是可行的。
在一个实施方式中，所述的制备单链抗体的技术(美国专利第4,946,778号，本文通过引用将其全部并入)适用于制备蛋白质特异性单链抗体。在另一个实施方式中，使用所述的用于构建Fab表达文库的技术(Huse等人，1989，Science 246：1275-1281)以允许快速且简易地鉴定对本发明的特定抗原、蛋白质、衍生物或类似物具有期望的特异性的单克隆Fab片段。
可通过已知技术产生包含抗体分子个体基因型的抗体片段。例如，这些片段包括但不限于：可通过胃蛋白酶消化抗体分子产生的F(ab′)2片段、可通过还原F(ab′)2片段的二硫键产生的Fab′片段、可通过用木瓜蛋白酶和还原剂处理抗体分子产生的Fab片段；和Fv片段。
可通过用抗原接种期望的动物并由此分离特异性结合该抗原的抗体实现多克隆抗体的产生。
可通过使用任何熟知的单克隆抗体制备方法，例如Harlow等人(1988，In：Antibodies，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY)和在Tuszynski等人(1988，Blood，72：109-115)所述的那些方法来制备针对蛋白质或肽的全长或肽片段的多克隆抗体。还可使用化学合成技术合成期望肽的量。可选择地，可克隆编码期望肽的DNA并在适合大量产生肽的细胞中由合适的启动子序列表达。针对肽的单克隆抗体产生于使用如本文引用的标准方法接种的小鼠。
可使用本领域可获得的技术克隆使用本文所述的方法获得的编码单克隆抗体的核酸并对其测序，例如Wright等人描述了该方法并在此引用该参考文献(1992，Critical Rev.in Immunol.12(3，4)：125-168)。进一步地，可使用Wright等人(如前)和其中引用的参考文献和Gu等人所述的技术(1997，Thrombosis and Hematocyst 77(4)：755-759)“人源化”本发明的抗体。
为制备噬菌体抗体文库，先由从细胞，例如表达待表达在噬菌体表面上的期望蛋白，例如，所期望的抗体的细胞例如杂交瘤分离到的mRNA获得cDNA文库。使用反转录酶产生mRNA的cDNA拷贝。通过PCR获得指定免疫球蛋白片段的cDNA并将所得的DNA克隆到合适的噬菌体载体中以产生包含指定免疫球蛋白基因的DNA的噬菌体DNA文库。制备包含异源DNA的噬菌体文库的方法是本领域熟知的，并在例如Sambrook等人(1989，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY)中描述。
可工程化编码期望抗体的噬菌体以使蛋白质以如下方式展示在其表面：使其可用于结合其相应的结合蛋白质，例如抗体针对的抗原。因此，当在表达相应抗原的细胞的存在下孵育表达特异性抗体的噬菌体时，该噬菌体将结合细胞。不表达所述抗体的噬菌体不会结合细胞。这些淘选技术是本领域熟知的。
已开发使用M13噬菌体展示制备人抗体的方法(Burton等人，1994，Adv.Immunol.57：191-280)例如上述的那些方法。本质上，cDNA文库由从产生抗体的细胞群获得的mRNA产生。该mRNA编码重排的免疫球蛋白基因且因此，cDNA编码相同的基因。将所扩增的cDNA克隆到M13表达载体中，制备在其表面表达人Fab片段的噬菌体文库。通过抗原结合筛选展示目的抗体的噬菌体并使其在细菌中增殖以产生可溶性的人Fab免疫球蛋白。因此，与常规的单克隆抗体合成相比，该方法将永生化编码人免疫球蛋白的DNA而不是表达人免疫球蛋白的细胞。
刚刚提供的方法描述了产生编码抗体分子的Fab部分的噬菌体。然而，本发明不应解释为仅局限于产生编码Fab抗体的噬菌体。而是，编码单链抗体的噬菌体(scFv/噬菌体抗体文库)也包含在本发明内。Fab分子包含完整的Ig轻链，也就是说，其包含轻链的可变区和恒定区，但只包括重链的可变区和第一恒定区结构域(CH1)。单链抗体分子包括包含Ig Fv片段的蛋白质单链。Ig Fv片段只包括抗体重链和轻链的可变区，其中不包含恒定区。可按照在Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222：581-597中所述的方法制备包含scFv DNA的噬菌体文库。以与为包含Fab DNA的噬菌体文库所述的方式相似的方式进行为这样产生的噬菌体的淘选以分离期望抗体。
本发明还应解释为包括合成的噬菌体展示文库，其中可合成重链和轻链可变区以使其包含几乎所有可能的特异性(Barbas，1995，NatureMedicine 1：837-839；de Kruif等人，1995，J.Mol.Biol.248：97-105)。
在抗体制备中，可通过本领域已知的技术，例如ELISA(酶联免疫吸附试验)完成期望抗体的筛选。根据本发明产生的抗体可包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合(即，“人源化”)抗体和单链(重组)抗体、Fab片段和通过Fab表达文库产生的片段。
适配子
本发明还涉及有用的适配子。在一个实施方式中，“适配子(aptamer)”是体外选择的优先结合另一化合物(在此种情况中是所鉴定到的蛋白质)的化合物。一方面，适配子是核酸或肽，因为可容易地从核苷酸或氨基酸(天然形成的或合成制备的)大量产生随机序列，但是当然适配子不一定局限于这些。另一方面，核酸适配子是结合蛋白质靶的短链DNA。一方面，适配子是寡核苷酸适配子。寡核苷酸适配子是可结合特定的目的蛋白质序列的寡核苷酸。识别适配子的一般方法是从部分降解寡核苷酸开始，且然后同时根据结合期望蛋白质的能力筛选数以千计的寡核苷酸。可从蛋白质洗脱已结合的寡核苷酸并测序以确定特异性识别序列。大量的化学上稳定的适配子向细胞内的转移可导致与目的多肽的特异性结合，从而阻碍其功能。[例如，参见以下描述适配子的体外选择的出版物：Klug等人，Mol.Biol.Reports 20：97-107(1994)；Wallis等人，Chem.Biol.2：543-552(1995)；Ellington，Curr.Biol.4：427-429(1994)；Lato等人，Chem.Biol.2：291-303(1995)；Conrad  等人，Mol.Div.1：69-78(1995)；和Uphoff等人，Curr.Opin.Struct.Biol.6：281-287(1996)]。
适配子提供了优于由于其以高亲和力和特异性结合这些基因的蛋白质产物的能力而人工干扰靶基因功能的其他基于寡核苷酸的方法的优点。然而，RNA适配子可受限于其靶向细胞内蛋白质的能力，因为即使是抗核酸酶的适配子也不能有效地进入细胞内区室。另外，可能改变其功能构象的其他旁侧序列在所表达的RNA适配子中的存在阻碍了关于通过基于载体的方法在哺乳动物细胞内表达RNA适配子的尝试。
使用单链核酸(DNA和RNA适配子)靶向蛋白质分子的想法基于短序列(20mer至80mer)折叠成独特的3D构象的能力，这种独特的构象能够实现其以高亲和力和特异性结合靶蛋白。已在真核细胞，例如酵母和多细胞生物体内成功地表达RNA适配子且已表明其在细胞环境中对其靶蛋白具有抑制作用。
在结合试验中，该相互作用是结合，且可分离或检测反应混合物中所形成的复合物。在特定实施方式中，将本文所述的复合物的一个肽或受试化合物或药物候选物通过共价或非共价连接固定在固相上，例如，微量滴定板上。通常通过用所述肽的溶液涂覆固体表面并干燥完成非共价连接。可选择地，可使用对待固定的肽特异的固定的抗体例如单克隆抗体以将其锚定在固体表面上。可通过向已固定的组分例如包含经锚定的组分的涂覆过的表面中加入可用可检测标记标记的未固定的组分进行测定。当反应完成时，例如，通过洗涤去除未反应的组分，并检测锚定在固体表面上的复合物。当最初未固定的组分携带可检测标记时，检测到固定在表面上的标记表明发生络合。当最初未固定的组分不携带标记时，例如可通过使用特异性结合固定的复合物的标记过的抗体检测络合。
本发明还包括包含本发明的多聚体肽配体复合物的药物组合物和治疗组合物。更特别地，可使用本领域技术人员已知的标准的药学可接受的载体、填充剂、增溶剂和稳定剂将这些化合物制备成药物组合物。
本发明还提供了包含本发明的一种或多种多聚体肽配体或复合物的药物制剂。所述多肽在所述药物组合物中的浓度可极大地变化，即，从小于以重量计的约0.1％，通常是以重量计至少约1％至多达以重量计的20％或更多。
除了活性成分，该组合物可包含药学可接受的载体。药物载体可以是适合向患者递送肽的任何相容性的、非毒性物质。对于多肽，无菌水、醇、脂肪、蜡和惰性固体可用作载体。还可将药学可接受的佐剂、缓冲剂、分散剂及类似物并入到药物组合物中。
美国专利第5,789,543和6,207,718号中描述了制备包含多肽的药物组合物的方法。优选形式取决于期望的施用方式和治疗应用。
在一个实施方式中，通过注射施用包含多聚体肽的该组合物。施用多肽的肠胃外途径符合已知方法，例如，通过静脉内、腹腔内、肌肉内、动脉内、皮下或病灶内途径注射或输注。可通过输注或通过大丸剂注射持续施用所述蛋白或多肽。用于静脉输注的典型组合物可制备成包含10至50ml的无菌0.9％NaCl或5％葡萄糖，任选补充有20％铝溶液和10ug和50mg，优选50ug和10mg之间的多肽。用于肌肉内注射的典型药物组合物将被制备成包含例如1-10ml的无菌缓冲水和10ug和50mg之间，优选50ug和10mg之间的本发明的多肽。用于制备可肠胃外施用的组合物的方法是本领域已知的并被更详细地描述于各种来源，包括，例如Remington′sPharmaceutical Science(第15版，Mack Publishing，Easton，Pa.，1980)(为所有目的通过引用将其全部并入)。
药物组合物和施用
本发明还涉及对受治疗者施用本发明的化合物的方法。在一个实施方式中，本发明提供了诊断癌症，检测Plec-1，定位Plec-1表达细胞或通过施用使用本发明说明书的方法鉴定的化合物治疗受治疗者的方法。通过任何数量的途径，包括但不限于局部、口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘膜内、心室内、经皮肤、皮下、腹腔内、鼻内、肠内、局部、舌下或者直肠方法向需要其的受治疗者施用包含该化合物的药物组合物。
根据一个实施方式，提供了治疗需要该治疗的受治疗者的方法。该方法包括向需要其的受治疗者施用包含至少一种本发明的化合物的药物组合物。还可将通过本发明的方法鉴定的化合物与已知化合物或其他材料一起施用。
可施用对实施本发明有用的药物组合物以递送1ng/kg/天和100mg/kg/天之间的剂量。
本发明包括包含作为活性成分对治疗本文公开的疾病有用的化合物的药物组合物的制备和用途。该药物组合物可由仅适合对受治疗者施用的形式的活性成分组成，或该药物组合物可包含活性成分和一种或多种药学可接受的载体、一种或多种附加成分或这些成分的某些组合。活性成分可以以例如与本领域熟知的生理上可接受的阳离子或阴离子组合的生理上可接受的酯或盐形式存在于药物组合物中。
如本文所用的，术语“生理可接受的”酯或盐是指可与药物组合物的任何其他成分相容的活性成分的酯或盐形式，这种形式对待施用该组合物的受治疗者是无害的。
本文所述的药物组合物的制剂可通过药学领域任何已知的或下文开发的方法制备。一般来讲，这些制备方法包括使活性成分与载体或一种或多种其他附属成分结合的步骤，然后，如果必要或期望的话，将产物定型或包装成期望的单剂量或多剂量单位。
技术人员将应理解该药物组合物通常适合用于对所有种类的动物施用。设想本发明的药物组合物所施用的受治疗者包括但不限于人和其他灵长类、哺乳动物(包括商购的合适的哺乳动物例如牛、猪、马、绵羊、猫和狗)、鸟类(包括商购的合适的鸟类例如鸡、鸭、鹅和火鸡)。还设想本发明用于公害动物例如啮齿类的避孕。
可以以单独的单位剂量或以多个单独的单位剂量大批制备、包装或销售本发明的药物组合物。如本文所用的，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于将对受治疗者施用的活性成分的剂量或是该剂量的方便分数，诸如，例如，该剂量的一半或三分之一。
活性成分、药学可接受的载体和任何附加成分在本发明的药物组合物中的相对量将根据所治疗的受治疗者的性质、体积和状态并进一步根据组合物将被施用的途径而变化。举例来说，组合物可包含0.1％和100％(w/w)之间的活性成分。
除了活性成分，本发明的药物组合物还可包含一种或多种其他药学活性成分。特别考虑的其他药物包括抗催吐剂和清除剂例如氰化物和氰酸酯清除剂。
可使用常规技术制备本发明的药物组合物的控释或缓释制剂。
如本文所用的，“附加成分”包括但不限于以下一种或多种：赋形剂、表面活性剂、分散剂、惰性稀释剂、造粒剂和崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂、防腐剂、生理上可降解组合物例如明胶、含水介质和溶剂、油性介质和溶剂、悬浮剂、分散剂或润湿剂、乳化剂、缓和剂、缓冲液、盐、增稠剂、填充剂、乳化剂、抗氧化剂、抗生素、抗真菌剂、稳定剂和药学可接受的聚合物材料或疏水性材料。可包含在本发明的药物组合物中的其他“附加成分”是本领域已知的且例如在本文通过引入并入的Genaro，编辑，1985，Remington′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.，Easton，PA中有描述。
通常，可对动物，优选人施用的本发明的化合物的剂量范围在从1μg至约100g每千克动物体重的量。而施用的准确剂量将根据许多因素变化，包括但不限于动物的类型和正在治疗的疾病状态的类型、动物的年龄和施用途径。优选地，化合物的剂量将从约1mg至约10g每千克动物体重变化。更优选地，所述剂量将从约10mg至约1g每千克动物体重变化。
可频繁地对动物施用化合物如一天几次或可不太频繁地施用化合物，例如一天一次、一周一次、每两周一次、每月一次或甚至更不频繁地，例如每几个月一次或甚至一年一次或更少。剂量的频率对于技术人员将是易于明显的且将取决于许多因素，例如但不限于待诊断的癌症的类型、待治疗的病症或疾病的类型和严重性、动物的类型和年龄等。
合适的制剂包括如液体溶液或悬浮液形式的可注射剂，然而，也可制备适合在注射前溶解在、悬浮在液体中的固体形式。还可乳化该制剂，或将多肽封装在脂质体中。经常将活性成分与药学可接受的且与该活性成分相容的赋形剂混合。合适的赋形剂是例如盐水、右旋糖、甘油、乙醇或类似物和其组合。另外，如果期望的话，疫苗制剂还可包括小量的辅助物质例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂和/或佐剂。
本发明还包括试剂盒，该试剂盒包含本发明的组合物和描述了对受治疗者的细胞或组织经外膜施用该组合物的说明性材料。在另一个实施方式中，该试剂盒包含在适合对受治疗者施用该化合物之前溶解或悬浮本发明的组合物的溶剂(优选是无菌的)。
如本文所用的，“说明材料”包括可用来表达试剂盒中的本发明的肽用于实现减轻本文提到的多种疾病或紊乱的有用性的出版物、记录、图表或任何表达媒介。任选地或可选择地，说明材料可描述为诊断或鉴定目的使用组合物或减轻哺乳动物的细胞或组织内的疾病或紊乱的一种或多种方法。例如，本发明的试剂盒的说明材料可粘贴在包含本发明的多聚体肽的容器上或与包含所述肽的容器一起运送。可选择地，说明材料可与容器分开运送，意图是接受者可协调地使用说明材料和化合物。
在实施本发明时可使用本领域已知的其他技术。
现在参考以下实施例和实施方式描述本发明。无需进一步描述，认为本领域普通技术人员可使用前述说明书和以下示例性实施例制备并使用本发明并实施所要求保护的方法。因此，以下工作实施例仅为说明目的而提供并特别指出了本发明的优选的实施方式，且不应解释为以任何方式限制本公开内容的其余部分。因此，这些实施例应解释为包括由于本文提供的教导变得明显的任何和所有改变。
实施例
设计了下述实验以确定网蛋白-1(PLEC-1)是否是用于癌症、特别是侵入前、侵入性和转移性PDAC的生物标志并开发更好的用于检测网蛋白-1的配体复合物。另外，寻求确定其是否区分良性胰疾病，最重要的是慢性胰腺炎，与恶性胰疾病，和是否可采用其过表达用于PDAC的非侵入性成像。另外，本文评价了Plec1是否还是其他非胰腺人类癌症的生物标志。
方法：
组织样品
经许可并根据机构审查委员会的要求收集所有组织和生物样品。
从医院存档获得石蜡包埋的组织样品。所有样本在评价的时刻具有确定的诊断。获得了总共4例正常的胰、15例慢性胰腺炎、14例PanIN I、26例PanIN II、15例PanIN III和31例PDAC、8例肝脏转移和1例淋巴结转移和1例腹膜转移。对于Plec1在人胰外癌症中的表达的评价，使用了商购肿瘤组织微阵列(MTU951，US Biomax，Rockville，MD)。
小鼠
所有动物程序被批准。从内部饲养厂获得雌性无胸腺小鼠(nu/nu)。将小鼠维持在无菌环境中并使其随意地获得可用的食物和水。
蛋白质印迹分析
将以速冻手术样本获得的50mg胰组织在与蛋白酶抑制剂混合物(0.001mg/ml抑蛋白酶肽、苯丁抑制素、胃蛋白酶抑制剂、亮抑酶肽和0.005mg/ml 20mM PMSF，Sigma-Aldrich，St.Louis，USA)组合的RIPA-缓冲液(50mM Trizma Base，pH 7,4，1％Triton X-100，0.25％脱氧胆酸钠，100mMEDTA 150mM NaCl)中匀浆。通过离心净化裂解液并使用非常准确的测定(2-D Quant试剂盒，Amersham Biosciences，NJ)测定蛋白质浓度。通过SDS-PAGE分离20μg蛋白质/泳道并将其转移到硝酸纤维素膜上。使用针对人Plec1的兔单克隆抗体(Abcam，Cambridge，MA)进行抗原检测。二抗是HRP-偶联的山羊抗兔多克隆抗体(Sigma-Aldrich，St.Louis，USA)。通过ECL观察条带。(对照：大鼠脑裂解液，Santa Cruz Biotechnology，LaJolla，CA)。
免疫染色
将石蜡包埋的切片脱蜡，用TBS水合并用H2O2封闭。通过在Retrievit(BioGenex，San Ramon，CA)中煮沸组织实现抗原修复。用TBS中的抗生物素蛋白/生物素(Vector Laboratories，Burlingame，CA)和5％山羊血清封闭后，在4℃下将切片与1∶250的Plec1抗体(Abcam)孵育过夜。在TBST中洗涤切片三次，然后用生物素化的抗兔山羊二抗(Vector Laboratories，Burlingame，CA)孵育，然后使用DAB(Invitrogen，Carlsbad，CA)显色并用苏木精复染。使用Y-FL显微镜(Nikon，Japan)评价切片。用DP-25摄像机和采集软件(Olympus，Japan)获取图像。
组织学评价
注意到神经具有中度Plec1染色强度且存在于所有切片上。因此使用Plec1在每个切片内的神经中的表达作为染色对照和染色强度参考。由两个独立的观察者记录染色强度，并在结果矛盾的情况下，由第三个观察者评价。将异常上皮细胞的染色相对于在神经中看到的中度染色分成阴性、弱、中或强。
体外竞争测定
基于网蛋白-1靶向肽KTLLPTP(SEQ ID NO：1)(Kelly等人，2008，PLoSMedicine，5：4：e85：0657-0668)，在GMP级设备(CS Bio Company，Menlo Park，CA)中合成四聚体网蛋白-1靶向肽(tPTP)复合物(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2，(本文也表示为[(βAla-Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser-PEG5K)2-Lys]2-Lys-Lys(DOTA)-βAla-NH2)。
制备tPTP支链PEG肽复合物的概述
肽序列(实施例)
[(βAla-Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-Gly-Gly-Ser-PEG5K)2-Lys]2-Lys-Lys(DOTA)-βAla-NH2
MW：25648
PEG5K：来自Fmoc-PEG5000-NHS酯(JenKem Tech)
材料-
1)树脂：
Fmoc-Rink-酰胺树脂(Sub：0.34mmol/g)；
2)使用以下专门的侧链保护的AA：
Lys-15：Lys(Mmt)，Lys-14、13：Fmoc-Lys(Fmoc)；
3)偶联试剂：Rx/AA/DIC/HOBt(1/3/3/3)；
4)裂解试剂：TFA/TIS/H2O；
5)纯化：ACN/H2O/TFA
合成-
1)将β-Ala连接到Rink酰胺树脂上，并对Rx上的β-Ala脱去Fmoc后，连接Fmoc-Lys(Mmt)。
2)在Fmoc基团存在下，脱去Mmt并将Tri-tBu-DOTA偶联到Lys-15侧链上。偶联：Rx/DOTA/DIC/HOBt(1/2/2/2)，单偶联。
3)脱去Fmoc后，在将Fmoc-Lys(Fmoc)连接到Rx上的延伸的肽上。对Lys-14进行脱Fmoc，这将产生两个游离的NH2-基团，一个在主链上，而另一个在侧链上。
4)使用二倍量的偶联试剂将Fmoc-Lys(Fmoc)连接到Rx上的两个NH2-基团上。脱去Fmoc后，Rx上的四个NH2-基团可用于下一步偶联。
5)然后使用DIPEA作促进剂(Rx/PEG 1/8)将Fmoc-PEG5000-NHS连接到四个NH2-基团上。Kaiser测试阴性后，对PEG脱Fmoc并继续一个接一个地将AA偶联到4个分支的N-端直到β-Ala-1。
6)最后一次脱Fmoc后，准备裂解Rx。
裂解-
试剂：95％TFA、2.5％H2O、2.5％TIS。室温下搅拌240min。
使用真空从反应中去除溶剂并在加入水/ACN后冻干混合物。
纯化-
用水稀释后，将粗品肽(作为浆体)上样到HPLC柱(4.1x25cmxcm)上并在20-60％梯度缓冲液B中纯化60分钟。流速，在TFA缓冲液体系中25mL/min。0.1mmol合成提供200mg终产物(未优化)。
DOTA(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸)具有结构：
作为对照，还合成了非结合的四聚体(ncPTP-4(βAKHVMSKQGGS(PEG5000))KKKDOTAβA-NH2)。对照肽序列包括KHVMSKQ(SEQ IDNO：5)和添加了两个甘氨酸和一个丝氨酸的SEQ ID NO：5，产生KHVMSKQGGS(SEQ ID NO：6)。向SEQ ID NO：5或向SEQ ID NO：6添加β丙氨酸(βA)分别产生βAKHVMSKQ(SEQ ID NO：7)和βAKHVMSKQGGS(SEQ ID NO：8)。
在GMP设备中将tPTP化学合成为四聚体以增加多价性，并添加四个5000Da PEG链(向四个肽中的每个肽添加一个)以延长药物的循环时间，降低免疫原性，并防止肽在到达期望靶之前被体内降解。
添加显像剂
对于铟标记，将肽(100μg，nmol)溶解在20μL的PBS中，然后稀释在100μL乙酸铵缓冲液(0.1M，pH 4.5)中。将氯化铟(5mCi于水中)(Cardinal Health，VA)与肽混合并通过在40℃下混合15min促进平衡。使用DPBS预平衡的PD10脱盐柱通过尺寸排阻纯化反应混合物。对于体外肽验证试验，在室温下将细胞一式三份地与从10-3至10-9范围内的浓度的tPTP或ncPTP和5μCitPTP-In111孵育1hr。1hr后洗涤细胞并用100μL1M NaOH裂解5min。然后将混合物转移到管中并在γ计数器上分析计数。
成像
用1mCi的111In标记的tPTP注射携带原位注射的L3.6pl胰腺癌肿瘤细胞的小鼠(n＝4)，然后在注射4小时后用对Uva设计并制造的微SPECT/CT扫描仪成像。贯穿成像期间递送麻醉剂(1％-2％异氟烷于氧中)。CT采集使用200次均匀间隔的投射，在约5分钟内跨越200度。将小鼠重新轴向放置以获得针孔SPECT扫描，同时使用两台γ摄像机在180度内获得60个均匀间隔的投影视图。采集时间约30分钟。这两台摄像机配置有直径1mm的钨针孔。重建的Ct体元尺寸在512×512×640图像矩阵上是0.082×0.082×0.082mm。重建的SPECT体元尺寸在60×60×60图像矩阵上是0.65×0.65×0.65mm。校正所有SPECT图像的放射性衰变而未校正γ射线衰减。
生物分布和血液半衰期
通过SPECT/CT对小鼠成像后，处死动物并收集其器官并放到预称重的Eppendorf管中。然后再将每个管称重以测定器官的重量并测量辐射。为确定探针的血浆半衰期，在注射后第0、15、30、45、60和120min对用tPTP-Peg-111In注射的小鼠取血，并通过井式计数器测量放射性。
组织学
用4％PFA固定来自胰和腹膜转移的PDAC样本并在OCT中冷冻。然后将组织样品制备切片并通过H&E染色。
Panc 27肽(KTLLPTP(SEQ ID NO：1))的丙氨酸突变
测定了SEQ ID NO：1的每个氨基酸残基的丙氨酸置换的影响。用于该研究的肽由噬菌体来源的序列KTLLPTP(SEQ ID NO：1)和丙氨酸突变ATLLPTP、KALLPTP、KTALPTP、KTLAPTP、KTLLATP、KTLLPAP和KTLLPTA(分别是SEQ ID NO：9-15)组成，其中顺序地将每个残基突变成丙氨酸。将2mg每种肽溶解在200μL PBS中，与1mg FITC混合，并允许反应过夜。使用乙腈/水混合物通过在C18反相树脂上的快速层析纯化肽并通过光谱法定量。
将L3.6细胞平铺在24孔板上并当约90-95％汇合时使用。将肽稀释至30μM，然后通过3倍稀释制备浓度系列，其中最小浓度约14nM(8个浓度)。将这些浓度施加到L3.6细胞上(200μL/孔，一式三份)并允许在冰上孵育2hr。用PBS+1％吐温-20将其洗涤3次，并在200μL的裂解缓冲液(50mL PBS，0.5mL Triton X-100，15mg ANSA(氨基萘磺酸)和20uL用HR标记的抗-FITC抗体中裂解。为量化剩余肽的量，在37℃下在标记有FITC-BSA的免疫测定板上一起孵育裂解液与肽稀释液1hr以获得标准曲线。用PBS中的0.1％BSA和0.1％吐温-20溶液洗涤板4-5次，并用四甲基联苯胺显色。
使用Graphpad prism作为S形剂量-效应(可变斜率)曲线分析来自这些研究的吸光度对浓度曲线以计算肽的表观亲和力。重复整个程序至少一次以验证每个突变的亲和力，并不符合期望的S形剂量响应曲线的实验被重新运行。
结果
PDAC中表达Plec1，而慢性胰腺炎和正常胰中不表达
Plec1表达清楚地将恶性与良性胰疾病区分开(图1)。百分之百的PDAC(31/31)呈Plec1染色；77％(24/31)强染色，23％中度染色(7/31)。与PDAC相比，在正常胰(4/4)或在大多数的慢性胰腺炎(10/15)中都没有鉴定到Plec1。其余的慢性胰腺炎(5/15)的导管上皮中呈Plec1弱染色(图1B)。胰组织裂解液的蛋白质印记确认了IHC结果。未在正常胰(2/2)和慢性胰腺炎(3/3)中检测到Plec1而其存在于每例PDAC(3/3；图1D)中。
胰癌变期间的Plec1表达和细胞定位变化
在胰癌变期间，Plec1表达强度增加(图1)。随着病变从PanIN I进展到III，其对Plec1的染色强度增加且呈Plec1阳性的病变的百分比增加。早期PDA C前体病变，PanIN I，大多是Plec1阴性的(11/14)。相比之下，多于一半的PanIN II病变弱(13/26)或中度(1/26)表达Plec1，而87％的PanINIII病变是Plec1阳性的(13/15；图1A、B)。值得注意地，在癌变期间，Plec1的细胞定位也变化。如果在早期PanIN病变中鉴定到Plec1，其位置局限于细胞膜而Plec1在恶性病变中的表达具有细胞质和膜定位。在27％(4/15)的侵入前恶性PanIN III和100％(31/31)的侵入性PDAC病变(图1C)中，Plec1定位到膜和细胞质。
在PDAC转移中保持Plec1表达
PDAC具有向腹膜、淋巴结和肝脏早期转移的倾向，其中Plec1正常不表达。所测定的所有转移灶保持了其Plec1表达(8/8肝脏，1/1淋巴结和1/1腹膜转移)，在这些组织中清楚地鉴定到并标明了转移沉积(图1A)。
Plec1在人非胰腺癌症中过表达
人肿瘤组织微阵列的IHC表明Plec1的实用性可能不局限于胰腺癌。在食道、胃和肺样本中，Plec1还具有不同的表达模式，其可被潜在地用于区分良性和恶性组织(图2)。
Plec1靶向探针可用于PDAC的非侵入性成像
为确定Plec1是否能起到促进人PDAC体内检测的成像生物标志作用，我们使用来源于噬菌体展示筛选的Plec1-靶向肽合成作为单光子发射计算机断层成像(SPECT)的临床相关显像剂起作用的四聚体合成肽(tPTP)复合物(见图8)。通过与标记的tPTP和未标记的tPTP或阴性对照PTP(ncPTP)的竞争测定进行了tPTP特异性的体外验证。对于tPTP，Ki(抑制离解常数)为8.3x 10-7M，而对于ncPTP为2.86x10-6M(图3A)。对经原位注射胰腺癌细胞的动物施用tPTP并在4小时后通过SPECT/CT成像。成像结果不仅示出了胰中的肿瘤而且示出了存在于动物腹膜中的转移(图3B和图4)。成像后进行的生物分布研究表明胰肿瘤具有3％的注射剂量/克(id/g)组织，而脾脏、肝脏和心脏具有小于1％id/g(图3)。探针还在肾中累积；的确排出该肽的主要途径是通过肾(图3C)和尿液。经切片的胰和腹膜的H&E染色证实了肿瘤在胰中的存在且还在腹膜转移中存在(图3D)。这些数据表明tPTP作为对网蛋白-1的高度特异的成像工具发挥功能。
tPTP靶向PDAC并能够实现非侵入性体内成像
用111In-tPTP注射携带来自原位植入的L3.6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠并在注射4小时后通过SPECT/CT成像。SPECT/CT成像表明tPTP累积在PDAC中，允许胰内和腹膜转移中的肿瘤的体内成像。见图4。
图5是四聚体网蛋白-1靶向肽的图解说明。图7是另一种四聚网蛋白-1四聚体肽。
tPTP的体内表征
图6示出了对携带来自原位植入的L3.6细胞的肿瘤的无胸腺裸小鼠注射111IN-tPTP的血液半衰期研究的结果(见图6A)。在注射后第0、15、30、45、60和120分钟取血液。tPTP的血液半衰期为4.29分钟。SPECT/CT成像(还参见图4)后，处死动物(n＝5)，收集器官并评价γ计数。胰表现出3％的注射剂量/克，而在腹膜腔中发现的转移表现出1.5％的注射剂量/克，而肾中最高(见图6B)。111IN-tPTP排泄的主要途径是通过尿。
四聚肽相对于单体肽的结合和寿命
发现四聚体网蛋白-1靶向肽4(βAKTLLPTP-GGS(PEG5000))-KKKKDOTAβA-NH2(见图8中的化学结构)具有比前述单体肽增加的灵敏性(即，tPTP的亲和力600pmol对单体肽的亲和力160nmol)。另外，因为β-丙氨酸和PEG的添加，该四聚体具有比单体肽更佳的寿命和生物分布，因为PET降低了毒性且β-丙氨酸减少了降解。另外，可迅速(即，1-4小时)观察到标记的四聚肽复合物而在观察到已知的单体肽之前的时间长得多(即，48小时)。
KTLLPTP(SEQ ID NO：1)的氨基酸置换：丙氨酸突变
本研究中使用的肽由也称为Panc 27肽的噬菌体来源的序列KTLLPTP(SEQ ID NO：1)组成。七个位置中的每一个被各自突变成丙氨酸。进行了丙氨酸突变ATLLPTP、KALLPTP、KTALPTP、KTLAPTP、KTLLATP、KTLLPAP和KTLLPTA(分别是SEQ ID NO：9-15)并测试亲和力。图9中提供了结果。数据表明苏氨酸的重要性，因为用丙氨酸置换苏氨酸的确降低了亲和力，而未排除以下可能性：在本发明的序列的任何其他位置添加一个或多个苏氨酸将是对置换有用的。这对于脯氨酸也是适用的，但如由该数据表明的，程度较小。然而，分析置换的主要标准是所得的置换是否对亲和力具有显著影响。
讨论
目前，没有对帮助检测早期或甚至侵入前PDAC可用的生物标志。可用的生物标志都不能可靠地区分PDAC与良性胰疾病，最明显的是慢性胰腺炎。此处，我们鉴定到Plec1是在早期侵入前、原发性和转移性人PDAC中特异性表达的第一个新颖的生物标志，而正常的导管上皮或慢性胰腺炎的导管上皮细胞不表达该蛋白质。另外，我们证明可采用Plec1表达来检测食道、胃和肺部的癌症，包括转移。除了这些发现，我们能够在体内临床前模型中证明Plec1靶向显像剂可用于PDAC的非侵入性成像。这允许将Plec1靶向成像并入到PDAC的常规临床诊断和筛查措施的可能性。
Plec1本身是血小板溶素家族的典型细胞接头蛋白。血小板溶素将中间丝连接到桥粒和半桥粒上，机械地稳定细胞，调控细胞骨架动力学，并用作信号分子的支架台。另外，血小板溶素对于皮肤和骨骼肌完整性是必不可少的[18]。因此，Plec1基因突变首先发现于皮肤病，例如大疱性表皮松解症[19，20]。近来，发现Plec1与乳腺癌易感基因2(BRCA2)相互作用[21]。BRCA2突变与增加的胰腺癌风险有关[22，23]。BRCA2本身在DNA损伤修复中起重要作用且主要发现于细胞核，但还在中心体中被鉴定到。Plec1/BRCA2相互作用在调控中心体定位中起重要作用。因此Plec1异常表达导致中心体易位并可造成基因组不稳定性和癌症发生[21]。
认为PDAC通过PanIN I和II病变进展成PanIN III(原位癌)而产生并最终进展成侵入性癌[2，3，4]。基于该研究中获得的数据，在从PanIN I向PanIN II转变期间获得Plec1过表达。只有一小部分的PanIN I(21％)表达Plec1，而一半的PanIN II(54％)和大多数PanIN III(87％)是Plec1阳性的。因此看起来Plec1过表达开始于PanIN I阶段，甚至在向PanIN II组织进展之前并当病变进展成PDAC时进一步增加。有趣的是，随着病变进展时，Plec1未滞留在细胞膜上而是无所不在地表达在癌细胞中。Plec1在早期PanIN I和II病变中仅定位在细胞膜上，而27％的PanIN III和全部31例PDAC表现出膜和细胞质的Plec1表达。因此Plec1表达可能识别注定进展成癌症的早期PanIN病变。这是特别重要的，因为PDAC在其早期临床过程中转移。因此，Plec1是存在于早期癌变中且其表达维持在侵入性癌症中的第一个PDAC生物标志。这可能第一次允许在病变转移前使用生物标志早期检测侵入前PDAC病变。基于Plec1的筛选与PDAC诊断具有克服目前可用的诊断工具的许多缺点的潜能。不像缺乏灵敏性和特异性的CA 19-9[5]，它是用于PDAC的灵敏且特异的生物标志。基于Plec1的横截面腹部成像原则上可能能够可靠地检测早期PDAC，尤其是在高危患者中。另外，Plec1过表达可潜在地被利用以指出小的、目前不可鉴定的转移灶，从而改进术前分期。另外，基于Plec1的横断面腹部成像应安全地区分慢性胰腺炎和PDAC。
综合起来，这些数据表明Plec1是对原发性和转移性人PDAC以及早期侵入前癌症的灵敏且特异的生物标志。可容易地将Plec1靶向成像并入到诊断程序中并具备极大地促进提高检测PDAC的诊断准确性的希望，特别是在其转移开始前的早期。
在此通过引用本文所提及的每一个专利、专利申请和出版物的公开内容将其全部并入本文。
为了引用并帮助查找某些部分，将标题包括在本文中。这些标题并不意在限制其下文所述概念的范围，且这些概念可在遍布整个说明书的其他部分具有适用性。
虽然已参考具体实施方式公开了本发明，而明显地本领域技术人员可修改本发明的其他实施方式和变化而不偏离本发明的真实精神和范围。
参考文献
1.Jemal A，Siegel R，Ward E，Murray T，Xu J，等人.(2007)Cancerstatistics，2007.CA Cancer J Clin 57：43-66.
2.Hruban RH，Goggins M，Parsons J，Kern SE(2000)Progression modelfor pancreatic cancer.Clin Cancer Res 6：2969-2972.
3.Maitra A，Fukushima N，Takaori K，Hruban RH(2005)Precursors toinvasive pancreatic cancer.Adv Anat Pathol 12：81-91.
4.Hruban RH，Takaori K，Klimstra DS，Adsay NV，Albores-Saavedra J，等人(2004)An illustrated consensus on the classification of pancreaticintraepithelial neoplasia and intraductal papillary mucinous neoplasms.Am JSurg Pathol 28：977-987.
5.Goggins M(2007)Identifying molecular markers for the early detectionof pancreatic neoplasia.Semin Oncol 34：303-310.
6.Ahmad NA，Kochman ML，Brensinger C，Brugge WR，Faigel DO，等人(2003)Interobserver agreement among endosonographers for the diagnosisof neoplastic versus non-neoplastic pancreatic cystic lesions.GastrointestEndosc 58：59-64.
7.Meining A，Rosch T，Wolf A，Lorenz R，Allescher HD，等人(2003)High interobserver variability in endosonographic staging of uppergastrointestinal cancers.Z Gastroenterol 41：391-394.
8.Krishna NB，Mehra M，Reddy AV，Agarwal B(2009)EUS/EUS-FNAfor suspected pancreatic cancer：influence of chronic pancreatitis and clinicalpresentation with or without obstructive jaundice on performancecharacteristics.Gastrointest Endosc 70：70-79.
9.Varadarajulu S，Tamhane A，Eloubeidi MA(2005)Yield of EUS-guidedFNA of pancreatic masses in the presence or the absence of chronic pancreatitis.Gastrointest Endosc 62：728-736；quiz 751，753.
10.Chari ST(2007)Detecting early pancreatic cancer：problems andprospects.Semin Oncol 34：284-294.
11.Pelaez-Luna M，Takahashi N，Fletcher JG，Chari ST(2007)Resectability of presymptomatic pancreatic cancer and its relationship to onsetof diabetes：a retrospective review of CT scans and fasting glucose values priorto diagnosis.Am J Gastroenterol 102：2157-2163.
12.Fernandez-del Castillo C，Rattner DW，Warshaw AL(1995)Furtherexperience with laparoscopy and peritoneal cytology in the staging ofpancreatic cancer.Br J Surg 82：1127-1129.
13.John TG，Greig JD，Carter DC，Garden OJ(1995)Carcinoma of thepancreatic head and periampullary region.Tumor staging with laparoscopy andlaparoscopic ultrasonography.Ann Surg 221：156-164.
14.Boll DT，Merkle EM(2003)Differentiating a chronic hyPerplasticmass from pancreatic cancer：a challenge remaining in multidetector CT of thepancreas.Eur Radiol 13Suppl 5：M42-49.
15.Oto A，Eltorky MA，Dave A，Ernst RD，Chen K，等人(2006)Mimicksof pancreatic malignancy in patients with chronic pancreatitis：correlation ofcomputed tomography imaging features with histopathologic findings.CurrProbl Diagn Radiol 35：199-205.
16.Furukawa H，Okada S，Saisho H，Ariyama J，Karasawa E，等人(1996)Clinicopathologic features of small pancreatic adenocarcinoma.A collectivestudy.Cancer78：986-990.
17.Kelly KA，Bardeesy N，Anbazhagan R，Gurumurthy S，Berger J，等人(2008)Targeted  nanoparticles fpr imaging incipient pancreatic ductaladenocarcinoma.PLoS Med 5：e85.
18.Sonnenberg A，Liem RK(2007)Plakins in development and disease.Exp Cell Res 313：2189-2203.
19.Pfendner E，Uitto J(2005)Plectin gene mutations can causeepidermolysis bullosa with pyloric atresia.J Invest Dermatol 124：111-115.
20.Pulkkinen L，Smith FJ，Shimizu H，Murata S，Yaoita H，等人(1996)Homozygous deletion mutations in the plectin gene(PLEC 1)in patients withepidermolysis bullosa simplex associated with late-onset muscular dystrophy.Hum Mol Genet 5：1539-1546.
21.Niwa T，Saito H，Imajoh-Ohmi S，Kaminishi M，Seto Y，等人(2009)BRCA2 interacts with the cytoskeletal linker protein plectin to form a complexcontrolling centrosome localization.Cancer Sci.
22.Bausch等人，2009，J.Gastrointest.Surg.，13：1948.
23.Harris，2009，J.Clin.Oncology，27，No.15S(5月20日增刊)：e22118.
24.Lee，2004，J.Med.，35：(1-6)：141-149.
25.国际专利申请公布号WO 2009/129220，Kelly，等人，2009年10月22日公布.
26.Karlin和Altschul(1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：2264-2268.
27.Karlin和Altschul(1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877.
28.Altschul，等人(1990，J.Mol.Biol.215：403-410.
29.Altschul等人(1997，Nucleic Acids Res.25：3389-3402.
30.Gross和Mienhofer，编辑，The Peptides，第3卷，第3-88页(AcademicPress，New York，1981.
31.Gerhardt等人，编辑，1994，Methods for General and Molecular Bacteriology，American Society for Microbiologgy，Washington，DC，第574页.
32.Devereux等人，1984Nucl.Acids Res.12：387.
33.Altschul等人，1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA.199087：14：5509-13.
34.Altschul等人，J.Mol.Biol.1990215：3：403-10；Altschul等人，1997Nucleic Acids Res.25：3389-3402.
35.Li，2007，J.Nuc.Med.，48：7：1162-1171，“64Cu-labeled tetrameric andoctameric RGD peptides for small-animal PET of tumor αvβ3integrinexpression”.
36.Choe和Lee综述于2007，Current Pharmaceutical Design，13：17-31.
37.Chen等人，2004，Mol.Imaging Biol.6：350-9，“MicroPET imaging ofbreast cancer alphav-integrin expression with 64Cu-labeled dimeric RGDpeptides”.
38.Janssen，2002，Cancer Biother.Radiophamr.，17：641-6，“Comparison ofmonomeric and dimeric radiolabeled RGD-peptide for tumor targeting.
39.Poethko，2004，J.Nucl.Med.45：892-902.
40.Chen，2004，Bioconjugate Chem.，15：41-9.
41.Chen，2004，Nucl.Med.Biol.，31：11-19，“Pharmacokinetics and tumorretention of 125I-labeled RGD peptide are improved by PEGylation”.
42.Li等人，2009，Mol.Cancer Ther.，8：5：1239-1249.
43.美国专利第7,666,979号(由美国专利申请第10/661,032号公布)，Fan，等人，“Methods for Preparing Multivalent Constructs for Therapeutic andDiagnostic Applications and Methods of Preparing the Same，2010年2月23日.
44.美国专利申请第12/012,011号(美国专利申请第10/792,582号的继续申请).
45.Nahrendorf，2010，JACC：Cardiovascular Imaging，2：10：1213-1222.
46.Krajewski等人，2005，“Effect of Dimerization and Tetramerization onthe Potency of HIV-Integrase Inhibitory Peptides，”in Understanding BiologyUsing Peptides，American Peptide Society，S.Blondelle，Editor，411-412).
47.Yim等人，2010，J.Med.Chem.，53：3944-3953.
48.Dijkgraaf等人，2010，Eur.J.Nucl.Med.Mol.Imaging，2010年9月21日在线公布.
49.美国专利申请第10/792,582号；Dransfield等人，美国专利公布第2010/0261875号；美国专利第7,666,979号)。
50.参见Sosabowski等人，Nature Protocols 1，-972-976(2006)andLeon-Rodriguez等人，Bioconjugate chemistry，01/03/2008；19(2)：391-402).
51.美国专利申请序列号12/112,289
52.Kyte&Doolittle，1982，J.Mol.Biol.，157：105-132.
53.Chou&Fasman，1974，Biochemistry，13：222-245；
54.1978，Ann.Rev.Biochem.，47：251-276；1979，Biophys.J.，26：367-384)。
55.PROWL Rockefeller University网站
56.Stewart等人在Solid Phase Peptide Synthesis，第2版，1984，PierceChemical Company，Rockford，Illinois中.
57.Bodanszky和Bodanszky在The Practice of Peptide Synthesis，1984，Springer-Verlag，New York中.
58.Deutscher等人(编辑，1990，Guide to Protein Purification，HarcourtBrace Jovanovich，San Diego)。
60.Gait，1985，OLIGONUCLEOTIDE SYNTHESIS：A PRACTICALAPPROACH(IRL Press，Oxford，England.
61.Kohler和Milstein(1975，Nature256：495-497.
62.Kozbor等人，1983，Immunology Today 4：72).
63.Cole等人，1985，在Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，AlanR.Liss，Inc.，第77-96页中.
64.Cote等人，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：2026-2030.
65.Morrison等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6851-6855；
66.Neuberger等人，1984，Nature 312：604-608；
67.Takeda等人，1985，Nature 314：452-454.
68.美国专利第4,946,778号
69.Huse等人，1989，Science 246：1275-1281.
70.Harlow等人(1988，在：Antibodies，A Laboratory Manual，ColdSpring Harbor，NY.
71.Tuszynski等人(1988，Blood，72：109-115).
72.Wright等人(1992，Critical Rev.in Immunol.12(3，4)：125-168.
73.Gu等人(1997，Thrombosis和Hematocyst 77(4)：755-759.
74.Sambrook等人(1989，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY)。
75.Burton等人，1994，Adv.Immunol.57：191-280.
76.Marks等人，1991，J.Mol.Biol.222：581-597.
77.Barbas，1995，Nature Medicine 1：837-839；de Kruif等人1995，J.Mol.Biol.248：97-105.
78.Klug等人，Mol.Biol.Reports 20：97-107(1994).
79.Wallis等人，Chem.Biol.2：543-552(1995).
80.Ellington，Curr.Biol.4：427-429(1994)；Lato等人，Chem.Biol.2：291-303(1995).
81.Conrad等人，Mol.Div.1：69-78(1995).
82.Uphoff等人，Curr.Opin.Struct.Biol.6：281-287(1996).
83.Fields和Song，Nature(London)，340：245-246(1989).
84.Chien等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：9578-9582(1991).
85.Chevray和Nathans，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：5789-5793(1991).
86.Watt，2006，Nature Biotechnology，24：177；
87.Watt，美国专利第6,994,982号；
88.Watt，美国专利公布第2005/0287580号；
89.Watt，美国专利第6,510,495号
90.美国专利第5,789,543号
91.美国专利第6,207,718号
92.Remington′s Pharmaceutical Science(第15版，Mack Publishing，Easton，Pa.，1980).
93Genaro编辑1985Remin gton′s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.，Easton，PA.
94.Burrows，等人，“Peptide-MHC Class I Tetrameric Complexes DisplayExquisite Ligand Specificity”，J of Immunology，2000；6229-6234.
95.Chakraborty，等人，“Evaluation of 111In-Labeled Cyclic RGDPeptides：Tetrameric not Tetravalent”，Biconjugate Chem.，2010，21，969-978.
96.Ponticelli，等人，“Modulation of Angiogenesis by a TetramericTripeptide That Antagonizes Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1”，Jof Biological Chemistry，2008，第283卷，第49期，34250-34259.
97.Choe，等人，“Targeted In Vivo of Angiogenesis：Present Status andPerspectives”，Current Pharmaceutical Design，2007，13，17-31.
98.Chang，等人，“Tetrameric Cytokines with Improved BiologicalActivity”，2010年7月29日.
Figure IDA00001840426000011
Figure IDA00001840426000021
Figure IDA00001840426000031
Figure IDA00001840426000041
Figure IDA00001840426000051
Figure IDA00001840426000061

Claims (34)

1.一种用于结合网蛋白-1或其同源物或片段的多聚体肽配体复合物，所述复合物包括：
独立地结合网蛋白-1或其同源物或片段的至少两个肽；
其中，结合网蛋白-1或其同源物或片段的所述肽各自独立地任选地包含至少一个非标准氨基酸置换或保守氨基酸置换；
其中，所述肽各自独立地任选地通过添加至少一个额外的氨基酸而被修饰；
其中，所述肽各自任选地与聚乙二醇偶联；
其中，所述肽或任选地与聚乙二醇偶联的肽各自独立地还与螯合剂偶联，且任选地所述螯合剂通过至少一个接头与所述肽或任选地与聚乙二醇偶联的肽偶联；
其中，任选地，至少一种显像剂与所述螯合剂偶联；且
其中，任选地，至少一种治疗剂与所述螯合剂偶联。
2.根据权利要求1所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体是同聚物或异聚物。
3.根据权利要求2所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体是四聚体。
4.根据权利要求3所述的多聚体肽配体复合物，其中所述多聚体肽配体复合物的肽独立地具有选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列。
5.根据权利要求4所述的多聚体肽配体复合物，其中所述序列选自由SEQ ID NO：1-4组成的组。
6.根据权利要求5所述的多聚体肽配体复合物，其中所述四聚体复合物具有约8.3x 10-7M的Ki。
7.根据权利要求6所述的四聚体肽配体复合物，其中所述复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。
8.根据权利要求1所述的多聚体肽配体复合物，其中所述螯合剂选自由DTPA、DO3A、DOTA、EDTA、TETA、EHPG、HBED、NOTA、DOTMA、TETMA、PDTA、TTHA、LICAM、HYNIC和MECAM组成的组。
9.根据权利要求1所述的多聚体肽配体复合物，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
10.根据权利要求9所述的多聚体肽配体复合物，其中所述显像剂是放射性核素。
11.根据权利要求10所述的多聚体肽配体复合物，其中所述放射性核素选自由110In、111In、177Lu、18F、52Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、86Y、90Y、89Zr、94mTc、94Tc、99mTc、120I、123I、124I、125I、131I、154-158Gd、32p、11C、13N、15O、186Re、188Re、51Mn、52mMn、55Co、72As、75Br、76Br、82mRb、83Sr和其他γ-、β-或正电子-发射体组成的组。
12.根据权利要求11所述的多聚体肽配体复合物，其中所述放射性核素是111In。
13.根据权利要求1所述的多聚体肽配体复合物，其中所述聚乙二醇是聚乙二醇5000。
14.一种检测受治疗者体内的网蛋白-1或其同源物或片段的方法，所述方法包括向受治疗者施用包含显像剂的权利要求1的多聚体肽配体复合物，和检测包含网蛋白-1的细胞的位置。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2且所述显像剂为111In。
16.根据权利要求14所述的方法，其中用与计算机连接的SPECT/CT扫描仪检测所述显像剂，并使用程序分析成像数据。
17.根据权利要求14所述的方法，其中组成所述多聚体肽配体的肽各自具有独立地选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
20.一种用于检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗的方法，其中所述癌症的细胞表达网蛋白-1或其同源物或片段，所述方法包括向受试受治疗者施用包含权利要求1的多聚体肽配体复合物的药物组合物，其中所述复合物包含显像剂，检测所述显像剂和确定所述显像剂在所述受试受治疗者体内的水平和位置和将所述水平和位置与来自未受影响的受治疗者的其他方面相同的位置或所述受试受治疗者的未受影响的区域的所述显像剂的水平和位置进行对比，其中与所述显像剂在来自未受影响的受治疗者或来自所述受试受治疗者的未受影响的区域的所述样品中的水平和位置相比，所述显像剂在所述受试受治疗者体内的更高水平或不同位置表明所述受试受治疗者患有表达网蛋白-1或其同源物或片段的癌症，从而检测癌症、诊断癌症、监控癌症进展或监控癌症治疗，其中所述癌细胞表达网蛋白-1或其同源物或片段。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症选自由头颈癌、肝癌、胰腺癌、食道癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌、子宫内膜癌、宫颈癌、前列腺癌、肾上腺癌、淋巴瘤、唾液腺癌、骨癌、脑癌、小脑癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、口鼻咽癌、NPC、肾癌、膀胱癌、皮肤癌、黑色素瘤、基底细胞癌、硬腭癌、舌鳞状细胞癌、脑膜瘤、多形性腺瘤、星形细胞瘤、软骨肉瘤、皮质腺瘤、肝细胞癌、胰腺癌、鳞状细胞癌和腺癌组成的组。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述胰腺癌选自由胰导管腺癌、胰上皮内瘤变、腺瘤、伴有发育异常的腺瘤和原位癌组成的组。
24.根据权利要求20所述的方法，其中所述癌症是转移性癌。
25.根据权利要求20所述的方法，其中组成所述多聚体肽配体复合物的肽各自具有独立地选自由SEQ ID NO：1-4和9-22组成的组的序列。
26.根据权利要求20所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2且所述显像剂为111In。
27.根据权利要求20所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
28.根据权利要求20所述的方法，其中所述网蛋白-1或其同源物或片段是细胞表面网蛋白-1或其同源物或片段。
29.一种用于诊断受治疗者体内的癌症的方法，其中所述癌症的细胞表达网蛋白-1或其同源物或片段，所述方法包括：获得来自所述受治疗者的生物样品，使所述样品与包含权利要求1的多聚体肽配体复合物的组合物接触，其中所述复合物包含显像剂，将所述网蛋白-1在来自所述受试受治疗者的所述样品中的水平或位置与从未受影响的受治疗者获得的其他方面相同的样品的网蛋白-1的水平或位置或与包含已知量的网蛋白-1的标准样品进行对比，其中网蛋白-1在来自所述受试受治疗者的所述样品中的更高水平表明所述受试受治疗者患有癌症。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述多聚体肽配体复合物具有式(βAKTLLPTPGGS(PEG5000))4KKKKDOTAβA-NH2。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述显像剂选自由放射性核素、放射性造影剂、顺磁离子、金属、生物标签、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂和光敏剂组成的组。
32.一种药物组合物，包含药学可接受的载体和权利要求1的多聚体肽配体复合物。
33.一种试剂盒，包括包含药学可接受的载体和权利要求1的多聚体肽配体复合物的药物组合物、涂抹器和关于其使用的说明材料，和任选地显像剂和治疗剂。
34.根据权利要求1所述的多聚体肽配体复合物，包含显像剂，其中所述复合物具有结构：
Figure FDA00001840425400051
CN2010800602468A 2009-11-05 2010-11-05 用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法 Pending CN102762984A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US25824209P 2009-11-05 2009-11-05
US61/258,242 2009-11-05
PCT/US2010/055632 WO2011057078A2 (en) 2009-11-05 2010-11-05 Compositions and methods for detecting plectin-1 as a biomarker for cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102762984A true CN102762984A (zh) 2012-10-31

Family

ID=43970781

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2010800602468A Pending CN102762984A (zh) 2009-11-05 2010-11-05 用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法

Country Status (7)

Country Link
US (2) US9075059B2 (zh)
EP (1) EP2496948B1 (zh)
JP (1) JP2013510094A (zh)
KR (1) KR20120101054A (zh)
CN (1) CN102762984A (zh)
CA (1) CA2779730C (zh)
WO (1) WO2011057078A2 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104208727A (zh) * 2013-08-10 2014-12-17 深圳市奥尼克斯基因技术有限公司 一种新型肿瘤显像剂(99m)TC-HYNIC/EDDA-TMTP1的制备与应用
US9075059B2 (en) 2009-11-05 2015-07-07 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting plectin-1 as a biomarker for cancer
CN109414489A (zh) * 2016-04-08 2019-03-01 埃缇健康公司D/B/A泽尔拜尔 网蛋白-1结合抗体及其用途

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106526186A (zh) 2011-09-12 2017-03-22 克里蒂科斯有限责任公司 检测靶分子的非侵入性方法
JP6646571B2 (ja) * 2013-03-13 2020-02-14 クリエイティクス エルエルシー 膵臓がんを検出するための方法および組成物
US9606123B2 (en) 2013-03-29 2017-03-28 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for diagnosing and monitoring ovarian cancer progression and treatment
US9572832B2 (en) * 2013-08-29 2017-02-21 Holy Stone Healthcare Co., Ltd. Compound of glycosaminoglycan and its fabrication method as well as application
KR20160045547A (ko) * 2014-10-17 2016-04-27 에스케이텔레콤 주식회사 췌장암 진단용 조성물 및 이를 이용한 췌장암 진단방법
US10611796B2 (en) 2016-03-16 2020-04-07 Council Of Scientific & Industrial Research Method for regressing pancreatic tumor by a liposomal formulation along with DNA vaccines
CN105938114B (zh) * 2016-04-15 2018-06-08 中国科学院武汉物理与数学研究所 一种用于蛋白质顺磁标记的探针及其合成方法
GB201700557D0 (en) * 2017-01-12 2017-03-01 Peptinnovate Ltd Novel peptides
WO2019168921A1 (en) 2018-02-27 2019-09-06 University Of Virginia Patent Foundation Plectin-targeted liposomes/parp inhibitor in the treatment of cancer
CN108623661B (zh) * 2018-05-14 2021-04-27 中国医学科学院肿瘤医院 一种靶向胰腺癌肿瘤细胞的双特异性多肽分子探针及应用
WO2019232418A1 (en) * 2018-06-01 2019-12-05 Northwestern University Spatial mapping of kidney functions
CN110935006B (zh) * 2019-11-12 2021-05-18 中食都庆（山东）生物技术有限公司 地龙蛋白肽在制备预防和/或治疗血栓性疾病的药物中的应用
CA3203072A1 (en) * 2020-12-22 2022-06-30 Andrea CASAZZA Compounds comprising a tetrapeptidic moiety

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1297902A (zh) * 1999-11-24 2001-06-06 上海博容基因开发有限公司 一种新的多肽——人网蛋白80和编码这种多肽的多核苷酸
CN1905894A (zh) * 2003-11-25 2007-01-31 诺瓦提斯公司 降钙素和甲状旁腺素治疗功效的生物标志
US20080108795A1 (en) * 2004-12-21 2008-05-08 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in EGFR-signaling pathways
WO2009097579A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-06 Proteogenix, Inc. Gestational age dependent proteomic changes of human maternal serum for monitoring maternal and fetal health
WO2009129220A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 The Gereral Hospital Corporation Plectin-1 targeted agents for detection and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7261876B2 (en) 2002-03-01 2007-08-28 Bracco International Bv Multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications
US7666979B2 (en) 2002-03-01 2010-02-23 Bracco International B.V. Methods for preparing multivalent constructs for therapeutic and diagnostic applications and methods of preparing the same
US7563433B2 (en) 2007-01-11 2009-07-21 Immunomedics, Inc. Methods and compositions for F-18 labeling of proteins, peptides and other molecules
WO2004078778A2 (en) 2003-03-03 2004-09-16 Dyax Corp. PEPTIDES THAT SPECIFICALLY BIND HGF RECEPTOR (cMet) AND USES THEREOF
US8034352B2 (en) 2005-04-06 2011-10-11 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Tetrameric cytokines with improved biological activity
US20080267882A1 (en) * 2007-04-27 2008-10-30 Stanford University Imaging compounds, methods of making imaging compounds, methods of imaging, therapeutic compounds, methods of making therapeutic compounds, and methods of therapy
ES2613844T3 (es) * 2008-04-21 2017-05-26 Lawrence Livermore National Security, Llc Ligandos polidentados de alta afinidad selectivos y métodos para producirlos
EP2496948B1 (en) 2009-11-05 2018-01-10 University of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting plectin-1 as a biomarker for cancer

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1297902A (zh) * 1999-11-24 2001-06-06 上海博容基因开发有限公司 一种新的多肽——人网蛋白80和编码这种多肽的多核苷酸
CN1905894A (zh) * 2003-11-25 2007-01-31 诺瓦提斯公司 降钙素和甲状旁腺素治疗功效的生物标志
US20080108795A1 (en) * 2004-12-21 2008-05-08 Cell Signaling Technology, Inc. Reagents for the detection of protein phosphorylation in EGFR-signaling pathways
WO2009097579A1 (en) * 2008-01-30 2009-08-06 Proteogenix, Inc. Gestational age dependent proteomic changes of human maternal serum for monitoring maternal and fetal health
WO2009129220A2 (en) * 2008-04-14 2009-10-22 The Gereral Hospital Corporation Plectin-1 targeted agents for detection and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIRK BAUSCH ET AL: "Plectin-1 is a Biomarker of Malignant Pancreatic Intraductal Papillary Mucinous Neoplasms", 《J GASTROINTEST SURG》 *
KAM LEUNG: "Lys-Thr-Leu-Leu-Pro-Thr-Pro-cross-linked iron oxide-Cy5.5", 《MOLECULAR IMAGE AND CONTRAST AGENT DATABASE》 *
KIMBERLY A.KELLY ET AL: "Targeted Nanoparticles for Imaging Incipient Pancreatic Ductal Adenocarcinoma", 《PLOS MEDICINE》 *
蔡金华等: "大鼠骨髓间充质干细胞磁标记及MR成像研究", 《中华放射学杂志》 *
陈俊星等: "钙网蛋白在膀胱移行上皮细胞癌中的表达和意义", 《中华实验外科杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9075059B2 (en) 2009-11-05 2015-07-07 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for detecting plectin-1 as a biomarker for cancer
CN104208727A (zh) * 2013-08-10 2014-12-17 深圳市奥尼克斯基因技术有限公司 一种新型肿瘤显像剂(99m)TC-HYNIC/EDDA-TMTP1的制备与应用
CN104208727B (zh) * 2013-08-10 2018-02-02 深圳市奥尼克斯基因技术有限公司 一种新型肿瘤显像剂(99m)TC‑HYNIC/EDDA‑TMTP1的制备与应用
CN109414489A (zh) * 2016-04-08 2019-03-01 埃缇健康公司D/B/A泽尔拜尔 网蛋白-1结合抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
KR20120101054A (ko) 2012-09-12
US9075059B2 (en) 2015-07-07
WO2011057078A2 (en) 2011-05-12
CA2779730A1 (en) 2011-05-12
WO2011057078A3 (en) 2011-09-22
CA2779730C (en) 2019-04-30
EP2496948A2 (en) 2012-09-12
AU2010315021B2 (en) 2016-03-17
US20150374862A1 (en) 2015-12-31
JP2013510094A (ja) 2013-03-21
EP2496948A4 (en) 2014-05-07
US9623128B2 (en) 2017-04-18
AU2010315021A1 (en) 2012-05-24
EP2496948B1 (en) 2018-01-10
US20120219499A1 (en) 2012-08-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102762984A (zh) 用于检测作为癌症生物标志的网蛋白-1的组合物和方法
JP7079685B2 (ja) 癌治療および判断ターゲットとしてのｌｙ７５
CN109476721B (zh) Cd8-特异性捕获剂、组合物及使用和制备方法
CN105143266B (zh) 包含dll3结合试剂的癌症的治疗和诊断靶标
JP6046070B2 (ja) 膵管腺癌の検出および治療のためのプレクチン−１標的化剤
CN110074997A (zh) 细胞穿透肽、包含该肽的缀合物、及包含该缀合物的组合物
US9606123B2 (en) Compositions and methods for diagnosing and monitoring ovarian cancer progression and treatment
KR101947529B1 (ko) Rhamm 결합 펩타이드
JP2019108354A (ja) 治療的及び診断的標的としての不活性Ｎ−アセチル化−α−結合型酸性ジペプチダーゼ−様タンパク質２（ＮＡＡＬＡＤＬ２）
CA2906775A1 (en) Bh4 stabilized peptides and uses thereof
US20220402980A1 (en) Chromogranin a-derived peptides and uses thereof
CN115916234A (zh) 靶向ras蛋白的分子
AU2010315021B9 (en) Compositions and methods for detecting Plectin-1 as a biomarker for cancer
KR102069104B1 (ko) 폴리펩티드 및 이미징 방법
US20170326166A1 (en) Compositions and methods for treating pituitary tumors
CN113717249B (zh) 一种cd47靶向多肽、分子探针及其应用
US20160067314A1 (en) Compositions and methods for inhibiting chemoresistance in cancer and improving response to therapy
Josan Heteromultivalent ligands directed targeting of cell-surface receptors—Implications in cancer diagnostics & therapeutics
CN117881413A (zh) 颗粒酶可活化的膜相互作用肽和使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20121031