CN102753553B - 6-氨基-2-{[(1s)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)-7,9-二氢-8h-嘌呤-8-酮马来酸盐 - Google Patents

6-氨基-2-{[(1s)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)-7,9-二氢-8h-嘌呤-8-酮马来酸盐 Download PDF

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Abstract

化合物，其为马来酸盐形式的式(I)的6-氨基-2-{[(1<i>S</i>)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8<i>H</i>-嘌呤-8-酮,式(I)：

Description

6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮马来酸盐
背景技术
本发明涉及化合物；其制备方法；含有其的组合物；其在治疗各种病症，特别是变应性疾病及其它炎症性病症例如变应性鼻炎和哮喘、感染性疾病、癌症中的用途以及其作为疫苗佐剂的用途。
脊椎动物经常受到微生物的侵袭的威胁并且已经进化出免疫防御机制以消除感染性病原体。在哺乳动物中，该免疫系统包括两个分支：先天免疫和获得性免疫。宿主防御的第一线是先天免疫系统，其是由巨噬细胞和树突细胞所介导的。获得性免疫涉及在感染的晚期消除病原体并且也能够使得免疫记忆产生。由于具有已经经历基因重排的抗原-特异性受体的淋巴细胞的数量巨大，因此获得性免疫是高度特异性的。
先天免疫反应最初被认为是非特异性的，但是现在已经知道其能够区分自身和各种病原体。先天免疫系统通过有限数目的具有很多重要的特征的种系编码的模式识别受体(PRR)来识别微生物。
Toll样受体(TLR)是描述于人中的十种模式识别受体的家族。TLR主要由先天免疫细胞表达，其在此处的功能是针对感染的迹象监测环境并且在活化之后动员目标为消除入侵的病原体的防御机制。由TLR引发的早期的先天免疫应答限制感染的扩散，而它们诱导的促炎细胞因子和趋化因子导致抗原递呈细胞、B细胞和T细胞的募集和活化。TLR可以通过树突细胞活化和细胞因子释放而调节适应性免疫应答的性能以提供适当的保护(AkiraS.,等人,Nat.Immunol.,2001:2,675-680)。从不同的TLR激动剂所见的应答谱取决于所活化的细胞类型。
TLR7是局限于细胞的内体隔室中的TLR(TLR3、7、8和9)亚组的成员，其已经变成专司检测非自身的核酸。TLR7通过识别ssRNA而在抗病毒防御中发挥重要作用(DieboldS.S.,等人,Science,2004:303,1529-1531；和LundJ.M.,等人,PNAS,2004:101,5598-5603)。TLR7在人中具有限制的表达谱，主要由B细胞和浆细胞样树突细胞(pDC)表达，而单核细胞的表达程度稍低。浆细胞样DC是起源于淋巴的树突细胞的独特的群体(外周血单核细胞(PBMC)的0.2-0.8%)，所述细胞是主要的产生I型干扰素的细胞，其响应于病毒感染分泌高水平的干扰素-α(IFNα)和干扰素-β(IFNβ)(LiuY-J,Annu.Rev.Immunol.,2005:23,275-306)。
变应性疾病与针对变应原的倾向于Th2的免疫应答有关。Th2应答与升高的IgE水平有关，其通过对肥大细胞的作用，促进对变应原的超敏反应，导致例如在变应性鼻炎中所见的症状。在健康个体中，对变应原的免疫应答应用混合的Th1/Th2和调节T细胞应答更加平衡。TLR7配体已经显示出在体外降低Th2细胞因子和增加Th1细胞因子释放以及在变应性肺模型中在体内改善Th2型炎性应答(FiliL.,等人,J.All.Clin.Immunol.,2006:118,511-517;MoisanJ.,等人,Am.J.Physiol.LungCellMol.Physiol.,2006:290,L987-995;Tao等人,Chin.Med.J.,2006:119,640-648)。因此，TLR7配体具有使变应性个体中见到的免疫应答再平衡和导致疾病缓解的潜能。
哺乳动物中的有效的先天免疫反应的产生的核心是引起干扰素和对细胞发挥作用以诱导多种效应的其它细胞因子的诱导的机制。这些效应可以包括抗感染基因表达的活化、细胞中抗原呈递的活化(以驱动强的抗原特异性免疫)和吞噬细胞中吞噬作用的促进。
干扰素最初被描述为可以保护细胞免受病毒感染的物质(Isaacs&Lindemann,J.VirusInterference.Proc.R.Soc.Lon.Ser.B.Biol.Sci.1957:147,258-267)。在人中，I型干扰素是由在染色体9上且编码至少13个干扰素α(IFNα)的同工型和1个干扰素β(IFNβ)的同工型的基因编码的相关蛋白家族。重组体IFNα是第一个被批准的生物学治疗剂并且已经成为病毒感染和癌症中的重要疗法。除了对细胞的直接的抗病毒活性以外，还已知干扰素是免疫反应的有效调节剂，作用于免疫系统的细胞。
作为丙型肝炎病毒(HCV)疾病的一线疗法，干扰素联合在降低病毒负荷和在一些受试者中消除病毒的复制上可以是高度有效的。然而，许多患者没能显示出持续的病毒应答，并且在这些患者中病毒负荷不受控制。另外，采用注射干扰素的治疗可能与多种不需要的显示出影响依从性的副作用有关(DudleyT.,等人,Gut.,2006:55(9),1362-3)。
给予可以刺激先天免疫反应、包括I型干扰素和其它细胞因子的活化的小分子化合物可以成为治疗或预防人类疾病(包括病毒感染)的重要策略。这种类型的免疫调节策略具有鉴定化合物的潜力，所述化合物不仅可以用于感染性疾病，还可以用于癌症(Krieg.,Curr.Oncol.Rep.,2004:6(2),88-95)、变应性疾病(MoisanJ.,等人,Am.J.Physiol.LungCellMol.Physiol.,2006:290,L987-995)、其它炎性病症诸如应激性肠病(Rakoff-NahoumS.,Cell.,2004,23,118(2):229-41)，以及用作疫苗佐剂(Persing等人,TrendsMicrobiol.,2002:10(10Suppl),S32-7)。
在动物模型中，咪喹莫特(imiquimod)局部地(AdamsS.,等人,J.Immunol.,2008,181:776-84;JohnstonD.,等人,Vaccine,2006,24:1958-65)或系统地(FransenF.等人,Infect.Immun.,2007,75:5939-46)显示出佐剂活性。也已经显示瑞喹莫德(Resiquimod)和其它相关的TLR7/8激动剂显示出佐剂活性(MaR.等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.,2007,361:537-42;Wille-ReeceU.,等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2005,102:15190-4;Wille-ReeceU.,等人,US2006045885A1)。
导致I型干扰素的诱导的机制仅得到部分的了解。一种可以在多种细胞类型中导致干扰素诱导的机制是由RNA解旋酶RIG-I和MDA5识别双链病毒RNA。该机制被认为是仙台病毒感染细胞诱导干扰素的主要的机制。
用于诱导干扰素的另外的机制是借助TLR-依赖性信号事件。在人中，浆细胞样树突细胞(pDC)是专业的产生干扰素的细胞，其能够例如响应于病毒感染产生大量干扰素。这些pDC显示出优先地表达TLR7和TLR9，并且分别用病毒RNA或DNA刺激这些受体可以诱导干扰素α的表达。
已经描述了TLR7和TLR9的寡核苷酸激动剂以及基于小分子嘌呤的TLR7激动剂，其可以在动物和人中从这些细胞类型中诱导干扰素α(TakedaK.等人,Annu.Rev.Immunol.,2003:21,335-76)。TLR7激动剂包括咪唑并喹啉化合物咪喹莫特和瑞喹莫德、氧代腺嘌呤类似物以及核苷类似物诸如洛索立宾和7-硫杂-8-氧代鸟苷(已经在很长一段时间知晓其诱导干扰素α)。国际专利申请公开号WO2008/114008(AstraZenecaAB/DainipponSumitomoPharmaCo.Ltd)公开了作为TLR7调节剂的9-取代的-8-氧代腺嘌呤化合物。
仍不清楚小分子嘌呤样化合物如何能够诱导I型干扰素和其它细胞因子，因为这些已知的诱导剂的分子靶点尚未被鉴定出来。然而，已经发展出基于用化合物刺激主要的人供体细胞的测定策略以表征人干扰素IFNα的小分子诱导剂(不管其机制)，并且公开于本文中。
发明简述
已经证实公开于国际申请号PCT/EP2009/060265(以WO2010/018133公开)中的化合物6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮是人干扰素的诱导剂并且可以具有与已知的人干扰素诱导剂相关的改善的性能，例如增强的效力，并且可以显示出相对于TNFa而言的对IFNα的增强的选择性。期望马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮将更容易配制和/或加工和/或处理。例如，6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的纯度可以通过马来酸盐的形成和/或重结晶来改善，和/或其稳定性可以相比于游离碱而言得到改善。诱导人干扰素的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可用于治疗各种病症，例如治疗变应性疾病和其它炎性病症(例如变应性鼻炎和哮喘)、治疗感染性疾病和癌症，并且也可以用作疫苗佐剂。期望马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮将具有类似的药理学性质。
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮是有效的免疫调节剂并且相应地，应当在其处理过程中加以注意。
发明概述
在第一方面，提供了化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮：
。
进一步地，提供了马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，其中马来酸根阴离子与6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的比为1:1。
因此，作为本发明的另一方面，提供了化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，其用于治疗。
也因此提供了化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，其用于治疗变应性疾病和其它炎性病症、感染性疾病和癌症。
也因此提供了化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，其用于治疗变应性鼻炎。
也因此提供了化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，其用于治疗哮喘。
也因此提供了疫苗佐剂，其包括为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了免疫原性组合物，其包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了疫苗组合物，其包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了治疗或预防疾病的方法，所述方法包括向遭受或易感疾病的人类受试者给予免疫原性组合物，所述组合物包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了治疗或预防疾病的方法，所述方法包括向遭受或易感疾病的人类受试者给予疫苗组合物，所述组合物包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备免疫原性组合物中的用途，所述组合物包括抗原或抗原组合物，用于治疗或预防疾病。
还提供了为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备疫苗组合物中的用途，所述组合物包括抗原或抗原组合物，用于治疗或预防疾病。
还提供了为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗变应性疾病和其它炎性病症、感染性疾病和癌症的药物中的用途。
还提供了为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗变应性鼻炎的药物中的用途。
还提供了为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
还提供了治疗变应性疾病和其它炎性病症、感染性疾病和癌症的方法，所述方法包括向需要所述治疗的人类受试者给予治疗有效量的为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了治疗变应性鼻炎的方法，所述方法包括向需要所述治疗的人类受试者给予治疗有效量的为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
还提供了治疗哮喘的方法，所述方法包括向需要所述治疗的人类受试者给予治疗有效量的为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
本发明在另一方面提供了联合物，其包括为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物和至少一种其它治疗活性剂。
还提供了药物组合物，其包括为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物，以及一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。
还提供了用于制备药物组合物的方法，所述方法包括混合为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物与一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和其盐可以通过描述于美国临时申请号61/087777和国际申请号PCT/EP2009/060265(以WO2010/018133公开)中的方法制备，将其结合于本文中作为参考。
发明详述
将理解多种有机化合物可以与溶剂形成复合物，二者在其中反应或从其中沉淀或结晶。这些复合物被称为“溶剂化物”。例如，与水的复合物被称为“水合物”。具有高沸点的溶剂和/或具有高度形成氢键的倾向的溶剂诸如水、乙醇、异丙醇和N-甲基吡咯烷酮可用于形成溶剂化物。用于鉴定溶剂化物的方法包括但不限于NMR和微量分析。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的溶剂化物属于本发明的范围之内。
将理解6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮将主要以S-异构体的形式存在，但可以包括少量，例如小于5%、或小于3%、并且优选小于1%、或优选小于0.5%的R-异构体。将理解这些混合物的马来酸盐被认为是属于本发明的范围之内。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以以互变异构形式存在。将理解本发明涵盖了马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的所有互变异构体，不论是作为单独的互变异构体或其混合物。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以为晶体或无定形的形式。此外，马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的一些晶体形式可以作为多晶型物存在，其包括在本发明的范围之内。热力学上最稳定的一种或多种多晶型形式是特别感兴趣的。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的多晶型形式可以用多种传统的分析技术，包括但不限于X射线粉末衍射(XRPD)、红外光谱分析(IR)、拉曼光谱学、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和固态核磁共振(ssNMR)来表征和区分。
从上述内容将理解包括在本发明范围之内的是溶剂化物、水合物、异构体和多晶型形式的马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮。
其中马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可具有潜在有益效果的疾病状态的实例包括变应性疾病和其它炎性病症例如变应性鼻炎和哮喘、感染性疾病和癌症。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也具有作为疫苗佐剂的潜在用途。
作为免疫反应的调节剂，单独或联合作为佐剂的马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗和/或预防免疫介导的病症，包括但不限于炎性或变应性疾病诸如哮喘、变应性鼻炎和鼻结膜炎、食物过敏、过敏性肺病、嗜酸细胞性肺炎、迟发型过敏性病症、动脉粥样硬化、胰腺炎、胃炎、结肠炎、骨关节炎、牛皮癣、结节病、肺纤维化、呼吸窘迫综合征、细支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、鼻窦炎、囊性纤维化、光化性角化病、皮肤发育异常、慢性荨麻疹、湿疹和所有类型的皮炎。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗和/或预防抗呼吸道感染的反应，包括但不限于呼吸道病毒加重和扁桃体炎。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗和/或预防自身免疫疾病，包括但不限于类风湿性关节炎、牛皮癣关节炎、系统性红斑狼疮、斯耶格伦氏病、强直性脊柱炎、硬皮病、皮肌炎、糖尿病、移植排斥(包括移植物抗宿主病)、炎性肠病(包括但不限于克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗感染性疾病，包括但不限于由肝炎病毒(例如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒)、人类免疫缺陷病毒、乳头瘤病毒、疱疹病毒、呼吸道病毒(例如流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、偏肺病毒、副流感病毒、SARS)和西尼罗河病毒引起的那些。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗由例如细菌、真菌或原生动物引起微生物的感染。这些包括但不限于肺结核、细菌性肺炎、曲霉病、组织胞浆菌病、念珠菌病、肺囊虫病、麻疯病、衣原体病、隐球菌病、隐孢子虫病、弓形体病、利什曼原虫病、疟疾和锥虫病。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以用于治疗各种癌症，特别是治疗已知对免疫疗法有反应的癌症并且包括但不限于肾细胞癌、肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌、膀胱癌、黑素瘤、白血病、淋巴瘤和卵巢癌。
本领域技术人员将理解，取决于所述病症，在本文中提及的治疗或疗法可以延伸至预防和治疗确定的病症。
如在本文中所提及的，马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可用作治疗剂。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以配制成以任何方便的途径给药。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以例如配制成用于口服、局部、吸入、鼻内、含服、胃肠外(例如静脉内、皮下、皮内或肌内)或直肠给药。在一个方面，马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮被配制成用于口服给药。在另一方面，马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮被配制成用于局部给药，例如鼻内或吸入给药。
用于口服给药的片剂和胶囊剂可以包含常规赋形剂，诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、西黄蓍胶、淀粉粘胶、纤维素或聚乙烯基吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、微晶纤维素、糖、玉米淀粉、磷酸钙或山梨醇；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉、交联羧甲纤维素钠或淀粉羟乙酸钠；或润湿剂，诸如月桂基硫酸钠。片剂可以按照本领域公知的方法来包衣。
口服液体制剂可以为例如含水或含油混悬液、溶液、乳剂、糖浆或酏剂的形式，或者可以呈现为在使用之前用水或其它适当的媒介物构建的干燥制品。这样的液体制剂可以包含常规的添加剂，诸如助悬剂，例如山梨醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖浆、明胶、羟甲基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化可食用脂肪；乳化剂，例如，卵磷脂、失水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水媒介物(其可以包括可食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯、丙二醇或乙醇；或防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸。视情况而定，所述制剂也可以包含缓冲盐、矫味剂、着色剂和/或甜味剂(例如甘露醇)。
用于鼻内给药的组合物包括通过滴剂或通过增压泵向鼻部给药的含水组合物。适当的组合物包含水，其作为用于该目的的稀释剂或载体。用于向肺或鼻部给药的组合物可以包含一种或多种赋形剂，例如一种或多种助悬剂、一种或多种防腐剂、一种或多种表面活性剂、一种或多种张度调节剂、一种或多种共溶剂，并且可以包括控制组合物的pH的组分，例如缓冲系统。此外，组合物可以包含其它赋形剂，诸如抗氧化剂(例如偏亚硫酸氢钠)和掩味剂。组合物也可以通过喷雾法向鼻部或呼吸道的其它区域给药。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以提供足够的溶解度和稳定性用于呈现为含水鼻内溶液制剂。
鼻内组合物可以容许将马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮递送至鼻腔(靶组织)的所有区域，并且还容许活性化合物与靶组织保持长时间的接触。用于鼻内组合物的适当的给药方案将使患者在清理完鼻腔之后通过鼻部缓慢地吸入。吸入期间，组合物将备递送至一个鼻孔，而另一个被手动地压缩。然后将对另一个鼻孔重复该过程。典型地，将采用上述过程每日一、二或三次，理想地每日一次对每个鼻孔给予一或二次喷雾。特别感兴趣的是适于每日一次给药的鼻内组合物。
一种或多种助悬剂如果包括在内的话，将典型地以基于组合物的总重量的0.1至5%(w/w)、诸如1.5%至2.4%(w/w)的量存在。药学上可接受的助悬剂的实例包括，但不限于Avicel?(微晶纤维素和羧甲基纤维素钠)、羧甲基纤维素钠、硅酸镁铝(veegum)、西黄蓍胶、膨润土、甲基纤维素、黄原胶、聚羧乙烯(carbopol)和聚乙二醇。
用于向肺或鼻部给药的组合物可以包含一种或多种赋形剂，其可以通过包含一种或多种防腐剂来保护免于微生物或真菌污染和生长。药学上可接受的抗微生物剂或防腐剂的实例包括，但不限于季铵化合物(例如苯扎氯铵、苄索氯铵、溴化十六烷基三甲铵、西吡氯铵、劳拉氯铵和氯甲十四烷基吡啶)、汞剂(例如硝酸苯汞、醋酸苯汞和硫柳汞)、醇试剂(例如三氯叔丁醇、苯乙醇和苯甲醇)、抗菌酯类(例如对羟基苯甲酸酯类)、螯合剂(诸如依地酸二钠(EDTA))和其它抗微生物剂，诸如氯己定、氯甲酚、山梨酸和其盐(诸如山梨酸钾)和多粘菌素。药学上可接受的抗真菌剂或防腐剂的实例包括，但不限于苯甲酸钠、山梨酸、丙酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯。一种或多种防腐剂如果包括在内的话，可以以基于组合物的总重量的0.001至1%(w/w)、诸如0.015%至0.5%(w/w)的量存在。
组合物(例如其中至少一种化合物处于混悬液中)可以包括一种或多种表面活性剂，其发挥促进药物粒子在组合物的水相中溶解的作用。例如，所使用的表面活性剂的量为不会导致在混合期间形成泡沫的量。药学上可接受的表面活性剂的实例包括脂肪醇、酯和醚，诸如聚氧乙烯(20)失水山梨糖醇单油酸酯(聚山梨酯80)、聚乙二醇醚和泊洛沙姆。表面活性剂可以以基于组合物的总重量的约0.01至10%(w/w)，诸如0.01至0.75%(w/w)，例如约0.5%(w/w)的量存在。
可以包括一种或多种张度调节剂以实现体液、例如鼻腔液体所产生的张度，导致减小的刺激水平。药学上可接受的张度调节剂的实例包括，但不限于氯化钠、右旋糖、木糖醇、氯化钙、葡萄糖、甘油和山梨醇。张度调节剂如果存在的话，可以以基于组合物的总重量的0.1至10%(w/w)、诸如4.5至5.5%(w/w)、例如约5.0%(w/w)的量包括在内。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以通过加入适当的缓冲剂，诸如柠檬酸钠、柠檬酸、氨基丁三醇、磷酸盐(诸如磷酸氢二钠(例如十二水合物、七水合物、二水合物和无水形式)或磷酸钠及其混合物)来缓冲。
缓冲剂如果存在的话，可以以基于组合物的总重量的0.1至5%(w/w)、例如1至3%(w/w)的量包括在内。
掩味剂的实例包括三氯蔗糖、蔗糖、糖精或其盐、果糖、右旋糖、甘油、玉米糖浆、阿司帕坦、乙酰舒泛-K、木糖醇、山梨醇、赤藓醇、甘草酸铵、索马汀(thaumatin)、纽甜(neotame)、甘露醇、薄荷醇、桉叶油、樟脑、天然矫味剂、合成矫味剂及其组合。
可以包括一种或多种共溶剂以有助于一种或多种药物化合物和/或其它赋形剂的溶解度。药学上可接受的共溶剂的实例包括，但不限于丙二醇、双丙二醇、乙二醇、甘油、乙醇、聚乙二醇(例如PEG300或PEG400)和甲醇。在一个实施方案中，共溶剂是丙二醇。
一种或多种共溶剂如果存在的话，可以以基于组合物的总重量0.05至30%(w/w)、诸如1至25%(w/w)、例如1至10%(w/w)的量包括在内。
用于吸入给药的组合物包括通过增压泵或吸入器例如贮库式干粉吸入器、单位剂量干粉吸入器、预计量的多剂量干粉吸入器、鼻吸入器或增压气雾剂吸入器、喷雾器或吸入器向呼吸道给药的含水、有机或含水/有机混合物、干粉或晶体组合物。适合的组合物包含水，其作为用于该目的的稀释剂或载体，并且可以提供有常规的赋形剂，诸如缓冲剂、张度调节剂等。含水组合物也可以通过喷雾法向鼻部和呼吸道的其它区域给药。这样的组合物可以为通过借助于合适的液化推进剂而从增压包装(诸如定量吸入器)递送的水溶液或混悬液或气雾剂。
用于向鼻部(例如，用于治疗鼻炎)或肺局部给药的组合物包括通过增压泵向鼻腔递送的增压气雾剂组合物和含水组合物。非增压的和适于向鼻腔局部给药的组合物是特别感兴趣的。适合的组合物包含水，其作为用于该目的的稀释剂或载体。用于向肺或鼻部给药的含水组合物可以提供有常规赋形剂，诸如缓冲剂、张度调节剂等。含水组合物也可以通过喷雾法向鼻部给药。
液体分配器通常可以用于向鼻腔递送液体组合物。液体组合物可以是含水或非水的，但通常是含水的。这样的液体分配器可以具有分配喷嘴或分配孔口，在使用者向所述液体分配器的泵机构施加作用力后通过所述分配喷嘴或分配孔口来分配经过计量的剂量的液体组合物。这样的液体分配器通常配有液体组合物的多倍计量剂量的贮库，所述剂量可在连续泵启动时进行分配。分配喷嘴或孔口可以设置成用于插入使用者的鼻孔的形式以将所述液体组合物喷雾分配至鼻腔中。上述类型的液体分配器描述和例示于国际专利申请公开号WO2005/044354(GlaxoGroupLimited)中。所述分配器具有外壳(housing)，所述外壳容纳具有设置在用于包含液体组合物的容器上的压缩泵的液体排放器。所述外壳至少具有一指可操作的侧杆，其可相对于所述外壳向内移动，从而使所述容器凭借凸轮而在外壳中向上移动，导致泵被压缩并从泵主体通过所述外壳的鼻喷嘴泵出经过计量的剂量的组合物。在一个实施方案中，所述液体分配器是例示于WO2005/044354的附图30-40中的通常类型。
含有马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的含水组合物也可以通过公开于国际专利申请公开号WO2007/138084(GlaxoGroupLimited)(例如参见其附图22-46公开的)中的泵，或者公开于英国专利申请号GB0723418.0(GlaxoGroupLimited)(例如参见其附图7-32公开的)中的泵来递送。所述泵可以用公开于GB0723418.0的附图1-6的致动器来启动。
用于通过吸入向肺局部递送的干粉组合物可以例如以胶囊和药筒(例如明胶的)、或者泡罩(例如薄片状铝箔)呈现在吸入器或吹入器中使用。粉末掺合组合物通常包含用于吸入6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐的粉末混合物，和适合的粉末基质(载体/稀释剂/赋形剂物质)，诸如单糖、二糖或多糖(例如乳糖或淀粉)。除药物和载体之外，干粉组合物也可以包括额外的赋形剂(例如三元试剂，诸如糖酯(例如纤维二糖八乙酸酯)、硬脂酸钙或硬脂酸镁。
在一个实施方案中，适合于吸入给药的组合物可以包括在设置于适合的吸入装置内部的一个或多个药物包装上提供的多个密封的剂量容器中。所述容器可以是可破裂的、可剥离的或能另外打开的(一个/次)并且所述干粉组合物的剂量通过在吸入装置的管口上吸入给予，如本领域已知的。药物包装可以采用多种不同的形式，例如磁盘状或伸长的带状。代表性的吸入装置为GlaxoSmithKline出售的DISKHALERDISKUSTM装置。
可吸入干粉组合物也可以以吸入装置中的整体(bulk)贮库的形式提供，然后所述装置配有计量机构，其用于计量从贮库至吸入通道的组合物的剂量，在此处所计量的剂量能够被在所述装置的管口处吸入的患者所吸入。该类型的示例性的上市的装置是TURBUHALER(AstraZeneca)、TWISTHALER(Schering)和CLICKHALER(Innovata.)。
用于可吸入干粉组合物的另一种递送方法是将组合物的经过计量的剂量提供于胶囊(单剂量/胶囊)中，然后通常在需要时由患者将所述胶囊装载于吸入装置中。所述装置具有裂开、刺穿或另外打开所述胶囊的设备，以便所述剂量能够在患者在所述装置的管口处吸入时被输送至患者的肺中。作为这样的装置的出售的实例，可以提及的是ROTAHALER(GlaxoSmithKline)和HANDIHALER(BoehringerIngelheim.)。
适于吸入的增压气雾剂组合物可以为混悬液或溶液并且可以包含6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐，和适合的推进剂诸如碳氟化合物或含氢的氯氟烃或其混合物，特别是氢氟烷烃，尤其是1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷或其混合物。气雾剂组合物可以任选包含本领域公知的额外的组合物赋形剂，诸如表面活性剂，例如油酸、卵磷脂或寡乳酸或其衍生物(例如描述于WO94/21229和WO98/34596(MinnesotaMiningandManufacturingCompany)中的)和共溶剂例如乙醇。增压组合物通常将保持在用阀(例如配量阀)封闭并且适合于配有管口的致动器的罐(例如铝罐)中。
软膏剂、乳膏剂和凝胶剂可以例如用含水或含油基质外加适合的增稠剂和/或胶凝剂和/溶剂来配制。例如，这样的基质可以由此包括水和/或油，诸如液体石蜡或植物油(诸如花生油或蓖麻油)，或溶剂诸如聚乙二醇。可以根据基质的性质而使用的增稠剂和胶凝剂包括软石蜡、硬脂酸铝、十八醇十六醇混合物、聚乙二醇、羊毛脂、蜂蜡、羧聚乙烯和纤维素衍生物、和/或单硬脂酸甘油酯和/或非离子乳化剂。
洗液可以用含水或含油基质配制并且将通常也包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。
供外用的散剂可以借助于任何适合的粉末基质例如滑石、乳糖或淀粉来配制。滴剂可以用含水或非水基质来配制，其还包括一种或多种分散剂、增溶剂、助悬剂或防腐剂。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以例如通过组合至贴剂或其它将活性组分递送至皮肤中的装置(例如增压气体装置)中来配制成用于透皮给药。
对于含服给药，所述组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以配制成栓剂，例如包含常规的栓剂基质诸如可可豆脂或其它甘油酯的栓剂。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以配制成用于通过推注或连续输注肠胃外给药并且可以以单位剂量的形式呈现，例如作为安瓿、小瓶、小体积输注或载药注射器，或呈现于添加了防腐剂的多剂量容器中。组合物可以采用诸如于水或非水媒介物中的溶液、混悬液或乳剂这样的形式，并且可以包含配方剂，诸如抗氧化剂、缓冲剂、抗微生物剂和/或张度调节剂。可替换地，活性成分可以为用于在使用之前用适合的媒介物、例如无菌无热原水配制的粉末形式。干固体形式可以通过将无菌粉末以无菌的方式装入单独的无菌容器中或通过将无菌溶液以无菌的方式装入各个容器中并冷冻干燥来制备。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以与疫苗配制，作为调节其活性的佐剂。这样的组合物可以包含一种或多种抗体或抗体片段或抗原成分，其包括但不限于蛋白、DNA、存活或死亡的细菌和/或病毒或病毒样颗粒，以及一种或多种具有佐剂活性的组分，其包括但不限于铝盐、油和水乳剂、热休克蛋白、脂质A制剂和衍生物、糖脂、其它TLR激动剂(诸如CpGDNA或类似的试剂)、细胞因子(诸如GM-CSF或IL-12或类似的试剂)。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以单独使用或与其它治疗剂结合使用。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和一种或多种其它药学活性剂可以共同或分别给药，并且当分别给药时，给药可以同时或以任何顺序相继发生。将对马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和一种或多种其它药学活性剂的量以及相对给药时限进行选择，以实现所期望的联合治疗效果。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮与其它治疗剂的组合的给药可以通过在包括两种化合物的单一药物组合物中一起给药，或在各自包括其中一种所述化合物的单独的药物组合物中给药来实现。可替换地，所述组合可以以连续的方式分开给药，其中一种治疗剂先给药并且另一种后给药，反之亦然。这样的连续给药可以在时间上接近或相距较长时间。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以与一种或多种可用于预防或治疗病毒感染的药剂联合使用。这样的药剂的实例包括但不限于聚合酶抑制剂，诸如公开于WO2004/037818-A1中的那些，以及公开于WO2004/037818和WO2006/045613中的那些；JTK-003、JTK-019、NM-283、HCV-796、R-803、R1728、R1626，以及公开于WO2006/018725、WO2004/074270、WO2003/095441、US2005/0176701、WO2006/020082、WO2005/080388、WO2004/064925、WO2004/065367、WO2003/007945、WO02/04425、WO2005/014543、WO2003/000254、EP1065213、WO01/47883、WO2002/057287、WO2002/057245中的那些和类似的药剂;复制抑制剂，诸如阿昔洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、拉米夫定以及相似的药剂；蛋白酶抑制剂，诸如HIV蛋白酶抑制剂沙奎那韦、利托那韦、印地那韦、那非那韦、安泼那韦、福沙那韦、brecanavir、阿扎那韦、替拉那韦、帕利那韦、拉西那韦，和HCV蛋白酶抑制剂BILN2061、VX-950、SCH503034；以及相似的药剂；核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂，诸如齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、阿巴卡韦、司他夫定、阿德福韦、阿德福韦二吡呋酯、福齐夫定、todoxil、恩曲他滨、阿洛夫定、氨多索韦、艾夫他滨、和类似的药剂；非核苷逆转录酶抑制剂(包括具有抗氧化活性的药剂，诸如怡妙康(immunocal)、奥替普拉等等)，诸如奈韦拉平、地拉韦啶、依法韦仑、洛韦胺、怡妙康、奥替普拉、卡普韦林、TMC-278、TMC-125、依曲韦林和类似的药剂；进入抑制剂诸如恩夫韦地(T-20)、T-1249、PRO-542、PRO-140、TNX-355、BMS-806、5-螺旋和类似的药剂；整合酶抑制剂，诸如L-870,180和类似的药剂；出芽抑制剂(buddinginhibitors)，诸如PA-344和PA-457和类似的药剂；趋化因子受体抑制剂，诸如vicriviroc(Sch-C)、Sch-D、TAK779、马拉维若(UK-427,857)、TAK449、以及公开于WO02/74769、WO2004/054974、WO2004/055012、WO2004/055010、WO2004/055016、WO2004/055011和WO2004/054581中的那些和类似的药剂；神经氨酸酶抑制剂，诸如CS-8958、扎那米韦、奥塞米韦、帕拉米韦和类似的药剂；离子通道阻断剂，诸如金刚烷胺或金刚乙胺和类似的药剂；以及干扰RNA和反义寡核苷酸以及诸如ISIS-14803和类似的药剂；作用机理未确定的抗病毒剂，例如公开于WO2005/105761、WO2003/085375、WO2006/122011中的那些、利巴韦林和类似的药剂。马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以与一种或多种可用于预防或治疗病毒感染的其它药物联合使用，所述药物例如免疫治疗剂(例如干扰素或其它细胞因子/趋化因子、细胞因子/趋化因子受体调节剂、细胞因子激动剂或拮抗剂和类似的药剂)；以及治疗疫苗、抗纤维化药物、抗炎药诸如皮质激素或NSAID(非甾体抗炎药)和类似的药剂。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以与一种或多种可用于预防或治疗变应性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病的其它药物联合使用，所述药物例如抗原免疫治疗剂、抗组胺剂、甾类、NSAID、支气管扩张药(例如β2激动剂、肾上腺素能激动剂、抗胆碱能药、茶碱)、氨甲喋呤、白三烯调节剂和和类似的药剂；单克隆抗体治疗剂，诸如抗IgE、抗TNF、抗IL-5、抗IL-6、抗IL-12、抗IL-1和类似的药剂；受体治疗剂，例如依那西普和类似的药剂；抗原非特异性免疫治疗剂(例如干扰素或其它细胞因子/趋化因子、细胞因子/趋化因子受体调节剂、细胞因子激动剂或拮抗剂、TLR激动剂和类似的药剂)。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以与一种或多种可用于预防或治疗癌症的其它药物联合使用，所述药物例如化学治疗剂，诸如烷化剂、拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、抗有丝分裂剂、激酶抑制剂和类似的药剂；单克隆抗体治疗剂，诸如曲妥单抗、吉姆单抗和其它类似的药剂；和激素治疗剂，诸如他莫昔芬、戈舍瑞林和类似的药剂。
根据本发明的药物组合物也可以单独使用或与其它治疗领域(例如胃肠疾病)中的至少一种其它治疗剂联合使用。根据本发明的组合物也可以与基因替代治疗联合使用。
本发明在另一方面包括组合，其包括马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和至少一种其它治疗活性剂。
上面所提及的组合可以方便地呈现为以药物组合物的形式使用，由此包括如上面所定义的组合与至少一种其药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物代表了本发明的另一方面。
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐的治疗有效量将取决于多种因素。例如，接受者的物种、年龄和体重、需要治疗的确切的病症和其严重度、组合物的性质以及给药途径全部是要考虑的因素。治疗有效量最终应当由护理医师来决定。尽管如此，用于对病人进行治疗的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐的治疗有效量通常应当在每天0.0001至100mg/kg接受者体重的范围。更通常地，有效量应当为每天0.001至10mg/kg体重的范围。因此，对于70kg成年人而言，每天的实际量的一个实例将通常为7至700mg。对于鼻内和吸入给药途径，70kg成年人的典型的剂量应当为每天1微克至1mg的范围。所述量可以以每天单一剂量给予或以每天多个(诸如二、三、四、五或更多)亚剂量给予，以使得总的日剂量是相同的。类似的剂量应当适合于治疗在本文中提及的其它病症。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以以任何合适的频率例如每周1-7次给药。确切的给药方案当然将取决于以下因素，诸如治疗适应症、患者的年龄和病症、以及所选择的特定给药途径。
药物组合物可以以包含预定量的活性成分/单位剂量的单位剂量形式呈现。作为非限定性实例，这样的单位可以包含0.5mg至1g的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐，其取决于被治疗的病症、给药途径和患者的年龄、体重和状况。优选的单位剂量组合物是包含如在本文中上面所述的活性成分的日剂量或亚剂量、或其合适的部分的那些。这样的药物组合物可以通过任何药物领域公知的方法来制备。
还提供了药物组合物，其包括马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮、以及一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。任选地，所述药物组合物可以进一步包含至少一种其它治疗活性剂。
还提供了用于制备这样的药物组合物的方法，所述方法包括混合马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮与一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。
还提供了用于制备6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐的方法，所述方法包括使6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮与马来酸根阴离子源(例如，马来酸，例如于适合的溶剂中)反应以生成马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮。在另一方面，所述方法生成1:1比例的马来酸根阴离子:6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮。
马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以通过下文中描述的方法来制备。
缩写
下述清单提供了某些在本文中使用的缩写的定义。将理解所述清单并非穷举，但并未在下文中定义的那些缩写的含义对于本领域技术人员而言将是非常显而易见的。
DMFN,N’-二甲基甲酰胺
DMSO二甲亚砜
HPLC高效液相色谱法
MDAPHPLC在C18柱上的反相HPLC，使用两种溶剂梯度并通过电喷雾质谱法分析馏分
SPE固相萃取
min分钟
Stripped减压除去溶剂
TFA三氟乙酸
rt室温
vol体积
BSAN,O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺
CPME环戊基甲基醚
TBME叔丁基甲基醚
MeTHF2-甲基四氢呋喃
NMPN-甲基吡咯烷酮
DCM二氯甲烷。
制备6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮和其马来酸盐的合成方法概述于方案1中。
方案1
其中RAZ=，n=2，m=5且X=Cl。
方案1的每个合成步骤的典型反应条件提供如下：
A：二氢吡喃/对甲苯磺酸，例如50℃保持3-6小时。
A1:二氢吡喃/对甲苯磺酸，例如在50℃保持1小时，然后是氨水/异丙醇，例如在60℃保持4小时，然后加水并冷却至环境温度，历时12-18小时。
A2：BSA于乙腈中的溶液，回流，冷却至0℃，然后是乙酸四氢吡喃于乙腈中的溶液，升温至10℃，然后是碳酸氢钠水溶液。
B：氨水/异丙醇，例如50℃保持5小时，然后在环境温度保持12-18小时，然后在50℃保持9小时。
C：对Z=O，RA=C1-6烷基而言：RAONa/丁醇/二甲氧基乙烷，例如在93-110℃保持12-18小时。
C1:N-溴琥珀酰亚胺于二氯甲烷中的溶液，例如在0-5℃保持30分钟，然后在环境温度保持0.5-1小时，然后是例如甲醇钠/甲醇在氮气下/在60-70℃/12-18小时，然后是TFA/甲醇，例如在环境温度保持18-65小时。
D：N-溴琥珀酰亚胺于二氯甲烷中的溶液，例如在0-5℃保持30分钟，然后在环境温度保持36-48小时，或者N-溴琥珀酰亚胺于氯仿中的溶液，在<5℃保持4-6小时。
E：甲醇钠/甲醇，例如回流4–6小时。
F：TFA/甲醇，例如在环境温度保持18-65小时，或者TFA/甲醇，例如在环境温度保持70-74小时。
G：碳酸钾/DMF，然后在50℃保持1-1.5小时，然后加入(VI)，搅拌40分钟，然后加入(IV)/三乙胺，然后在环境温度保持18小时。
G1：碳酸钾/DMF，然后在50℃在氮气下保持30分钟，然后在环境温度，加入(VI)，搅拌20小时。
G2：于含N,N’-二异丙基乙胺的DMF中的溶液，然后在50℃保持48小时，然后加入更多的(IV)，然后进一步在50℃保持48小时。
H：氯化氢/甲醇，然后在环境温度保持18小时。
式(IV)、(VI)、(XIA)、(XII)、(XIII)、(XIV)和(XV)的化合物是文献中已知的或可商购的，例如来自Sigma-Aldrich,UK，或可以通过与已知的方法、例如公开于合成方法学的标准参考文本诸如J.March,AdvancedOrganicChemistry,6thEdition(2007),WileyBlackwell或ComprehensiveOrganicSynthesis(TrostB.M.andFlemingI.,(Eds.),PergamonPress,1991)(由于其与这样的方法有关，故将其各自结合到本文中作为参考)中的那些类似的方法来制备。
更通常地，马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮也可以通过使6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮与马来酸根阴离子源在适合的溶剂例如异丙醇中反应来制备。适合的马来酸根阴离子源是马来酸或马来酸盐。
可以在本文中所述的合成途径中使用的其它保护基的实例及用于除去其的方法可以在T.W.Greene‘ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis’,4thEdition,J.WileyandSons,2006(由于其与这样的方法有关，故将其结合到本文中作为参考)中找到。
对于任何在上文描述的反应或方法，可以分别采用加热和冷却的常规方法，例如调节温度的油浴或调节温度的热块，以及冰/盐浴或干冰/丙酮浴。可以使用常规分离方法，例如从含水或非水溶剂萃取或萃取至含水或非水溶剂中。可以采用干燥有机溶剂、溶液或萃取物的常规方法，诸如用无水硫酸镁或无水硫酸钠振摇，或通过疏水玻璃料。可以根据需要使用常规纯化方法，例如结晶和色谱法，例如硅胶色谱法或反相色谱法。可以使用常规溶剂诸如乙酸乙酯、甲醇、乙醇或丁醇，或其含水混合物进行结晶。将理解特定的反应时间温度通常可以用反应监测技术、例如薄层色谱法和LC-MS来确定。
在适当的情况下，单独的异构体形式6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮可以使用常规方法诸如对非对映异构衍生物的分步结晶或手性高效液相色谱法(手性HPLC)制备成个别的异构体。
化合物的绝对立体化学可以使用常规方法诸如X射线晶体学来确定。
一般实验细节
使用来自AdvancedChemistryDevelopmentsInc.,Toronto,Ontario,M5H2L3,Canada的ACD/NamePRO6.02化学命名软件对化合物进行命名。
本文中所提及的LCMS系统B-D的实验细节如下：
系统B
柱：30mm×4.6mmID，3.5μmSunfireC18柱
流速：3mL/min.
温度：30℃
UV检测范围：210至350nm
质谱：使用交替扫描正负模式电喷雾离子化在质谱仪上记录
溶剂：A：0.1%v/v甲酸于水中的溶液
B：0.1%v/v甲酸于乙腈中的溶液
梯度：时间(min.)A%B%
0973
0.1973
4.20100
4.80100
4.9973
5.0973。
系统C
柱：50mm×2.1mmID，1.7μmAcquityUPLCBEHC18
流速：1mL/min.
温度：40℃
UV检测范围：210至350nm
质谱：使用交替扫描正负模式电喷雾离子化在质谱仪上记录
溶剂：A：10mM用氨水溶液调节至pH10的碳酸氢铵于水中的溶液
B：乙腈
梯度：时间(min.)A%B%
0991
1.5397
1.9397
2.00100。
系统D
柱：50mm×4.6mmID，3.5μmXBridgeC18柱
流速：3mL/min.
温度：30℃
UV检测范围：210至350nm
质谱：使用交替扫描正负模式电喷雾离子化在质谱仪上记录
溶剂：A：10mM用氨水溶液调节至pH10的碳酸氢铵于水中的溶液
B：乙腈
梯度：时间(min.)A%B%
0991
0.1991
4.0397
5.0397。
色谱纯化通常使用预装的硅胶筒来进行。FlashmasterII为自动化多用户快速色谱法系统(可从ArgonautTechnologiesLtd获得)，其使用一次性正相固相萃取(SPE)筒(2g至100g)。其提供了四元在线溶剂混合以使梯度方法得以运行。样品采用管理溶剂、流速、梯度特征和采集条件的多功能开放获取软件来排列。所述系统装配有Knauer可变波长UV检测器和两个GilsonFC204馏分采集器，其能够实现自动化截峰、采集和追踪。
使用氮气流的溶剂除去是在30-40oC在GreenHouseBlowdown系统(可从RadleysDiscoveryTechnologiesSaffronWalden,Essex,CB113AZ,UK获得)上进行的。
1HNMR谱是在CDCl3或DMSO-d 6 中在BrukerDPX400或BrukerAvanceDRX或VarianUnity400光谱仪(均在400MHz运行)上记录的。所使用的内标为四甲基硅烷或残余的质子化溶剂，对于CDCl37.25ppm或对于DMSO-d 6 2.50ppm。
质量定向的自动制备性HPLC(MassdirectedautopreparativeHPLC)是在下面给出的条件下进行的。UV检测为来自210nm至350nm波长的平均化的信号且质谱是使用交替扫描正负模式电喷雾离子化在质谱仪上记录的。
方法A
方法A是在XBridgeC18柱(通常为150mm×19mmi.d.5μm包装直径)在环境温度进行的。所采用的溶剂为：
A=10mM用氨水溶液调节至pH10的碳酸氢铵水溶液，
B=乙腈。
中间体
中间体1：2,6-二氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤
向2,6-二氯嘌呤(25.0g)(可商购自例如Aldrich)中加入乙酸乙酯(260mL)，然后加入对甲苯磺酸(0.253g)。将混合物加热至50℃，然后将3,4-二氢-2H-吡喃(16.8g)(可商购自例如Aldrich)加入。然后将反应混合物在50℃加热4小时。将反应混合物在真空中蒸发，得到标题化合物，为黄色固体(36.9g)。
1HNMR(CDCl3)：8.35(1H,s),5.77(1H,dd),4.20(1H,m),3.79(1H,m),2.20-1.65(6H,m)。
中间体1A
将乙酸(1.2L，1当量)和对甲苯磺酸吡啶鎓(530g，0.1当量)溶解于二氯甲烷(6L)中。将溶液冷却至0℃。小心地加入二氢吡喃(2.52L，1.35当量)于二氯甲烷(2.5L)中的溶液，历时至少15min。保持温度低于5℃。一旦加入完毕，将溶液升温至20℃并搅拌过夜。加入水(5.0L)并且在除去水层之前将所得双相剧烈搅拌。然后将有机相用饱和碳酸氢钠溶液(5.0L)洗涤并用硫酸镁干燥。将干燥的有机相在旋转蒸发器上浓缩，将压力减至20mbar(50℃)以确保除去DCM和过量的二氢吡喃。得到产物，为无色至淡黄色液体(2.61kg，95%理论收率)。
中间体2：2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
2,6-二氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤(36.9g)(例如，按中间体1的方法制备)与2M氨于异丙醇(250mL)中的溶液在50℃加热5小时。在环境温度放置过夜之后，加入额外量的2M氨于异丙醇(100mL)中的溶液以打散所得团块，并将反应混合物加热额外的9小时，直到反应完成。向反应混合物中加入水(70mL)并将黄色固体滤出。将所述固体用异丙醇:水(5:1(v/v)，60mL)洗涤，然后在抽吸下风干以得到第一批产物(crop)。将滤液在放置过夜后重新过滤以分离沉淀并将两批固体在真空中干燥。第一批是纯的，而第二批物质显示出非常少量的杂质(第一批未见分离的宽信号3.5ppm)但在其它方面是相同的。固体第一批(28.4g)，固体第二批(3.42g)。
1HNMR(CDCl3)：8.01(1H,s),5.98(2H,宽峰s),5.70(1H,dd),4.16(1H,m),3.78(1H,m),2.15-1.60(6H,重叠m)。
中间体2(替代方法)：2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
向2,6-二氯嘌呤(25g)(可商购自例如Aldrich)于无水乙酸乙酯(200mL)中的溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(235mg)(可商购自例如Aldrich)。将反应加热至50℃并一次性加入3,4-二氢-2H-吡喃(18.1ml)(可商购自例如Aldrich)。将反应在50℃搅拌1小时并减压除去溶剂。由此得到黄色固体。将该固体(约36g)于2.0M氨的异丙醇(460mL)溶液中的混悬液用相连接的冷凝器在氮气下在60℃加热4小时。将反应倒入水(50mL)中并放置至冷却过夜。将沉淀过滤并在旋转蒸发器(60℃)上干燥30分钟，得到标题化合物，为米色固体，31g(93%，2个步骤)。
(C10H12ClN5O)+的MS计算值=254,256
MS实测值(电喷雾)：(M)+=254,256(3：1)
1HNMR((CD3)2SO)：δ8.43(1H,s),7.82(2H,s),5.55(1H,dd),4.00(1H,m),3.69(1H,m),2.21(1H,m),1.95(2H,m),1.74(1H,m),1.56(2H,m)。
中间体3：2-氟-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
将N,O-二(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(975mL，3.988mol)加入于10L受控的实验室反应器中的2-氟-1H-嘌呤-6-胺(200g，1.306mmol)(可商购自例如AlliedSignal)于无水乙腈(4L)中的搅拌混悬液中，并将所得混合物加热至回流并在该温度保持2小时。然后将循环器重新设定程序并将反应混合物冷却至0℃。然后经由滴液漏斗缓慢地加入四氢吡喃乙酸酯(tetrahydropyranylacetate)(制备方法描述于TetrahedronLetters,2006,47(27)，4741并且也描述于中间体1A中)(282g，1.959mol)于无水乙腈(500mL)中的溶液，随后经由滴液漏斗滴加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(283mL，1.567mol)。没有观察到显著的放热。将循环器温度重新调节至10℃并持续搅拌额外的1小时。然后通过加入1M碳酸钠(4L)将混合物猝灭。观察到固体沉淀，并将pH调成碱性。将额外的水加入混悬液(1L)中，静置后分离各层，水层含有大量固体无机物。大部分含水和无机固体得以分离。有机层仍然含有大量固体，将其搅拌下冷却至0℃以促使进一步沉淀。将固体通过过滤收集并将垫(pad)用水彻底洗涤然后在40℃真空干燥过夜，得到标题化合物，为奶油色固体(152.8g)。
LCMS(系统D)：tRET=1.71min；MH+=238。
中间体4：2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
方法A
将叔丁醇钠(48.5g，505mmol)分批加入在室温搅拌的(S)-2-戊醇(185ml)(可商购自例如JulichChiralSolutions)中，直到成均相(注意：反应是放热的)。加入2-氯-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(32g，126mmol)(例如，按中间体2的方法制备)并将反应混合物在70℃加热72小时。将反应冷却至室温并在乙酸乙酯(500mL)和水(500mL)之间分配。将有机相用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。将残余物与乙醚研磨并过滤固体物质。将沉淀重新用乙醚洗涤并将滤液合并并蒸发。将粗制的物质(大约30g)溶解于DMSO:甲醇(1:1)中并用色谱法在反相(C18)柱(330g)上纯化(使用25-65%乙腈(+0.1%TFA)-水(+0.1%TFA)的梯度，8个柱体积)，将馏分立即用饱和碳酸钠水溶液中和。将合适的馏分合并并在二氯甲烷和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。通过将有机相通过疏水玻璃料使其干燥，过滤并蒸发，得到标题化合物，为浅奶油色泡沫(14.97g)。
LCMS(系统B)：tRET=2.21min;MH+306。
方法B
将叔丁醇钠(206g，2.144mol)加入于2L圆底烧瓶中的(S)-2-戊醇(720mL，6.58mol)(可商购自例如JulichChiralSolutions)中。将混合物在50℃搅拌，直到所有的叔丁醇钠都已溶解。然后分批加入2-氟-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(例如，按中间体3的方法制备)(130g，548mmol)，历时5分钟。3小时后，LCMS分析显示起始原料完全消耗，并将混合物倒入至冰/水(3L)中，然后用甲基叔丁基醚萃取。由此导致乳液形成，并将混合物滤过硅藻土并分离有机相。然后将水层用固体NaCl处理，然后重新用甲基叔丁基醚萃取。将有机萃取物合并并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，然后蒸发，得到标题化合物，为淡棕色胶状物(158.59g)。
LCMS(系统D)：tRET=2.65min;MH+306。
中间体5：8-溴-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
在<5℃在氮气气氛下历时5分钟将N-溴琥珀酰亚胺(12.16g，68.3mmol)分批加入2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(14.9g，48.8mmol)(例如，按中间体4的方法制备)于氯仿(80mL)中的搅拌过的溶液中。将反应混合物在<5℃搅拌5小时，然后用饱和碳酸氢钠溶液(80mL)、然后用水(80mL)洗涤。将泡沫溶解于二氯甲烷(50mL)中并用水(50mL)、然后用盐水(50mL)洗涤。将合并的水相用二氯甲烷(50mL)洗涤。将合并的有机层通过疏水玻璃料干燥，并真空除去溶剂，得到标题化合物，为橙色泡沫(18.5g)。
LCMS(系统D)：tRET=3.06min;MH+384/386。
中间体5(替代方法)：8-溴-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
将2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1050g)溶解于DCM(10.5L)中，得到黄色/橙色溶液，将其冷却至0℃。以3个相等的部分20分钟间隔地加入N-溴琥珀酰亚胺(922g，1.5当量)并将所得反应混合物在0-5℃搅拌4小时。然后通过加入500g硫代硫酸钠五水合物于5.0L水中的溶液将反应猝灭。将所得双相在20℃充分混合，然后分离各相。将有机相再次用500g硫代硫酸钠五水合物于5.0L水中的溶液洗涤，然后用500g磷酸氢二钾于5.0L水中的溶液洗涤，最后用5.0L水洗涤。将有机相用硫酸镁(822g)干燥并在旋转蒸发器上蒸发，直到发泡变得受抑制。然后通过反复的加入和除去甲醇将混合物溶剂交换至甲醇中，直到足够的DCM已经被除去(由NMR证实)。得到产物，为含有夹带的溶剂的红色/棕色胶状物(1.28kg(针对溶剂校正的)，96%理论收率)。
中间体6：2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺
在氮气气氛下将8-溴-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(例如，按中间体5的方法制备)(7.1g，18.48mmol)溶解于无水甲醇(70mL)中并滴加甲醇钠(25%)于甲醇(8mL)中的溶液。在氮气气氛下在90℃将溶液加热至回流4小时。加入额外的甲醇钠于甲醇(25%溶液，3mL)中的溶液并将反应在60℃搅拌额外的16小时。加入额外部分的甲醇钠于甲醇(25%溶液，5mL)中的溶液并将反应在90℃搅拌额外的7小时。将溶剂在旋转蒸发器上除去并将粗产物在乙酸乙酯(75mL)和饱和氯化铵溶液(75mL)之间分配。将有机层用盐水(75mL)洗涤。将溶剂在旋转蒸发器上除去，得到标题化合物，为淡橙色泡沫(6g)。
LCMS(系统C)：tRET=1.14min;MH+336,337。
中间体7：2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，三氟乙酸盐
将2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(6g，17.89mmol)(例如按中间体6的方法制备)溶解于甲醇(50mL)中。滴加三氟乙酸(20.67mL，268mmol)，并将混合物在氮气气氛下在20℃搅拌72小时。在真空中除去溶剂，并将所得固体用乙酸乙酯洗涤并过滤。将滤液除去并将残余物用乙酸乙酯洗涤。将合并的固体残余物在真空干燥箱中干燥2小时得到标题化合物，为米色固体(5.3g)。
LCMS(系统C)：tRET=0.76min;MH+252,253。
中间体7(替代方法)：2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，三氟乙酸盐
将8-溴-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-(四氢-2H-吡喃-2-基)-9H-嘌呤-6-胺(1.26kg，已针对残余溶剂进行校正)溶解于无水甲基四氢呋喃(MeTHF)(11.4L)中并加入25%甲醇钠于甲醇(2.65L，3.5当量)中的溶液。将所得反应混合物加热至65+/-5℃保持3h。将完成的反应冷却至室温并用20%w/v氯化铵水溶液(2×6.3L)和盐水(6.3L)洗涤。将有机相用MgSO4(1.8kg)干燥并过滤，用MeTHF(6.3L)洗涤。将合并的有机相通过真空蒸馏蒸发至6.3L。加入MeOH(2.5L)和TFA(1.26L，5当量)并将混合物加热至60℃保持1.5小时。加入环戊基甲基醚(CPME)(6.3L)并通过真空蒸馏将混合物减少至6.3L。再次加入CPME(6.3L)并将反应进一步浓缩至6.3L，此时有固体沉淀出来。将所述浆液冷却至10℃然后老化30min。将产物过滤并用TBME(2×3.8L)洗涤并在40℃真空干燥，得到白色固体(886g，74%理论收率)。
中间体8：9-(5-氯戊基)-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺
在氮气下将2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，三氟乙酸盐(600mg，1.642mmol)(例如，按中间体7的方法制备)和碳酸钾(567mg，4.11mmol)在60℃于DMF(10mL)中搅拌1小时。将反应冷却至室温，此时加入1-溴-5-氯戊烷(可例如商购自Aldrich)(0.216mL，1.642mmol)和三乙胺(0.343mL，2.464mmol)并将混合物在20℃在氮气下搅拌16小时。然后将混合物用水(10mL)和盐水(10mL)稀释并用二氯甲烷(2×10mL)萃取。将合并的有机萃取物蒸发并将残余物溶解于二氯甲烷中并通过柱色谱法纯化，使用FlashmasterII(70g氨基丙基筒)，采用0-100%乙酸乙酯于环己烷中的溶液的梯度，历时40分钟。将合适的馏分合并并在真空中蒸发，得到标题化合物，为黄色胶状物(430mg)。
LCMS(系统D)：tRET=4.15min；MH+=356,358。
中间体8(替代方法，为硫酸盐)：9-(5-氯戊基)-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，硫酸盐
将氢氧化钠(2M,2.52L，2.3当量)加入2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，三氟乙酸盐(800g，1.0当量)于NMP(3.08L)中的溶液中。加入1-溴-5-氯戊烷(432mL，1.5当量)。将反应混合物加热至50℃保持6h。将反应混合物冷却至20-25℃。加入乙酸乙酯(8.0L)，随后加入水(1.6L)。搅拌10分钟后，将各相分离，然后将有机相用水(1.6L)洗涤。将乙酸乙酯相进一步用乙酸乙酯(4.0L)稀释并加热至50℃。滴加硫酸(117mL，1当量)。将反应混合物历时1.5小时冷却至10℃并老化半小时。将产物通过过滤分离成白色固体，在滤器上用乙酸乙酯(2.4L)洗涤并在40℃减压干燥(570g，57%理论收率)。
中间体9：2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-9H-嘌呤-6-胺
9-(5-氯戊基)-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺(例如，按中间体8的方法制备)(80mg，0.225mmol)、三乙胺(0.031mL，0.225mmol)和哌啶(0.045mL，0.45mmol)混悬于DMF(3mL)中并将混合物加热至70℃保持18小时。除去溶剂并将残余物在二氯甲烷(4mL)和饱和碳酸氢钠(4mL)之间分配。将水相用额外的二氯甲烷重新萃取，将合并的有机萃取物浓缩，并将残余物溶解于1:1甲醇:DMSO(1mL)中并通过MDAP(方法A)纯化。将含有产物的馏分合并并在氮气流下蒸发，得到标题化合物(47.2mg)。
LCMS(系统D)：tRET=3.11min;MH+=405。
实施例
参考实施例1：6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮
将氯化氢于二噁烷(4M，0.71mL)中的溶液加入2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-9H-嘌呤-6-胺(例如，按中间体9的方法制备)(0.046g，0.126mmol)于甲醇(3mL)中的溶液中。将所得混合物在室温静置过夜，然后在氮气下吹干(blowndown)。将残余物溶解于甲醇中并装载于2g氨基丙基SPE筒(用甲醇预处理)上，用甲醇洗脱并将所得溶液在氮气下吹干，得到标题化合物，为黄色固体(40.97mg)。
LCMS(系统D)：tRET=2.70min;MH+=391
将类似地制备的样品(1.7g)从乙酸乙酯(大约50mL)中重结晶。收集晶体，用冰冷的乙酸乙酯(15mL)洗涤并在50℃真空干燥3小时，得到标题化合物，为奶油状结晶固体(1.33g)。
起始熔点(DSC)：207.4℃(参见图2)
XRPD：(参见图1和表1)。
参考实施例1：(替代方法)：6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮
将9-(5-氯戊基)-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-8-(甲基氧基)-9H-嘌呤-6-胺，硫酸盐(254g，1.0当量)溶解于DMSO(1.27L)和哌啶(280mL，5当量)中。将反应混合物加热至70±3℃保持15.5h。将反应混合物冷却至20±3℃。加入甲苯(2.5L)，随后加入水(1.25L)。搅拌10分钟之后，将各相分离并将上面的甲苯相用水(0.5L)洗涤。加入盐酸(2.24mol)于水(1.5L)中的溶液。将混合物搅拌10分钟，然后使其与下面所保留的(水)相分离。将水溶液加热至50±3℃保持17h，然后冷却至20±3℃。滴加氢氧化钠水溶液(2M，约840mL)，直到溶液具有10-11的pH。将所得混悬液冷却至10±3℃，老化额外的30min.，然后过滤。将滤饼用水(7.6L)洗涤，并将产物用氮气流(nitrogenbleed)在60℃减压干燥至恒重(207g，95%th)。
多态性
按照下述方法对6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮进行X射线粉末衍射(XRPD)和差示扫描量热法(DSC)。
XRPD
XRPD数据是在配备有X’Celerator检测器的PANalyticalX’PertPro粉末衍射仪上获得的。采集条件为：放射源：CuKα，发生器电压：40kV，发生器电流：45mA，起始角：2.0?2θ，结束角：40.0?2θ，步长：0.0167?2θ。每步的时间为31.750s。样品是通过将几毫克样品载于Si晶片(零背景)板上形成粉末的薄层而制备的。
特征峰位和计算的d间距(d-spacing)总结于表1中。它们是使用Highscore软件由原始数据计算的。峰位置的实验误差为大约±0.1?2θ。相对峰强度将因优选取向而变化。
表1
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的固体状态形式1的特征性XRPD峰位
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的代表性XRPD衍射图示于图1中。
DSC
DSC热分析图是使用TA仪器热量计获得的。将样品称量于铝锅中，所述铝锅有锅盖置于顶端并轻轻地卷曲而未将所述锅密封。实验是使用10℃min-1.的加热速率进行的。
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的代表性DSC热分析图示于图2中。
实施例2：6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，马来酸盐
制备例1
将6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(例如，按参考实施例1的方法制备)(0.384g，0.98mmol)溶解于异丙醇(4.6mL，12vols)中并加热至40℃。加入马来酸(0.114g，0.98mmol)。获得澄清溶液。在冷却至室温期间，出现沉淀。将浆液过滤，用异丙醇(5mL)洗涤并在40℃减压干燥至恒重。得到6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，马来酸盐(0.305g，61%th)，为白色固体。
1HNMR证实了1:1比例的马来酸:6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δppm,9.85(1H,s,(CH2)3NHCO),8.85(1H,brs,NH+),6.39(2H,s,NH2),6.02(2H,s,HO2C(CH)2),5.00(1H,m,J=6.2Hz,CH3CH),3.68(2H,t,J=6.8,HzNCH2),3.40(2H,m,NCH2),2.98(2H,m,J=8.1HzNCH2),2.82(2H,brs,NCH2),1.85-1.24(16H,m,8×CH2),1.21(3H,d,J=6.1Hz,CHCH3),0.89(3H,t,J=7.3Hz,CH2CH3),2.5(溶剂(DMSO))。
制备例2
使6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮(例如，按参考实施例1的方法制备)(1.46g，3.74mmol)于异丙醇(14.6mL，10vols)中的溶液澄清(在室温滤过BondElut筒)，然后加热至大约50℃。加入马来酸(0.434g，3.74mmol)于异丙醇(2.9mL，2vols)中的溶液。然后向所得溶液中加入晶种并冷却至45℃。加入额外的晶种。将所得浆液冷却至室温并保持过夜(大约16小时)，然后在冰/水浴中冷却30分钟。将浆液过滤，用异丙醇(4.5mL，3体积，然后是3mL，2体积)洗涤。将产物在40℃减压干燥至恒重，得到6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮，马来酸盐(1.305g，69%th)。
XRPD分析(图3)显示该样品为晶体。
生物学数据
根据下述测定或类似的测定对参考实施例1的化合物的体外生物活性进行测试。
使用冷藏的人外周血单核细胞(PBMC)诱导干扰素-α的测定
化合物的制备
将参考实施例1的化合物溶解于DMSO中。用DMSO制备连续2倍稀释液，并将0.25μl分配于384孔透明Greiner聚丙烯板中。
PBMC的制备
从健康的人类供体获得最多200mL血样。将25mL体积的全血覆盖在Leucosep管中的15mLFicoll梯度(Ficollgradients)上，并以1000g离心20min。将位于血浆/histopaque界面处的带中的细胞小心地移出并用PBS洗涤两次(在400g离心5min以进行收获)。将最终的团块再悬浮于冷冻介质(90%热灭活血清，10%DMSO)中至4×107细胞/mL的细胞浓度。然后使用速率控制冷冻机将再悬浮的细胞冷藏(冻结)，并在-140℃储存至多4个月。
孵育和干扰素-α的测定
临测定之前，将冷藏的(冻结)的PBMC的小瓶在37oC水浴中迅速地解冻。制备细胞于台盼蓝中的1:10稀释液并计数。然后将PBMC稀释于生长培养基[含有10%胎牛血清(Invitrogen)、青霉素+链霉抗生物素蛋白(Gibco目录号25030-024，1:50),L-谷氨酰胺2mM和1000单位/mL重组人IFN–γ(Preprotech目录号300-02)的RPMI1640]中至1×106细胞/mL的密度，并以50μL/孔分配于含有0.25μLDMSO或测试化合物于0.25μLDMSO中的溶液的384-孔透明Greiner聚丙烯板中。化合物的最大终浓度一般为50μM或5μM(以获得用于高效化合物的曲线拟合)。将板在37℃在5%CO2中孵育24小时。
采用多同工型免疫测定来量化PBMC上清液中的IFN-α。将兔抗人IFN-α多克隆抗体(目录号31101,StratechScientific)以1:10000稀释于测定缓冲剂(含有10%胎牛血清的RPMI1640，invitrogen)中并将20μL加入MSD(Meso-ScaleDiscovery)单个小点384孔GAR(包被有山羊抗兔抗体)板的每个孔中。将板在剧烈振摇下在室温孵育1小时。用PBS洗涤三次后，将20μL的细胞上清液加入板的各个孔中。然后将板在剧烈振摇下在室温孵育1小时。一对抗IFN-α单克隆抗体(目录号21100和21112，StratechScientific)用硫代-TAG(MSD)标记，以1:1000稀释于测定缓冲剂中并将20μL加入到板的各个孔中。将板在剧烈振摇下在室温进一步孵育1小时。用PBS洗涤三次后，将30μl的×2T缓冲剂(MSD)加入各个孔中并将板在MSDSector6000读板器上读数。
针对1μM瑞喹莫德(n=16)和DMSO(n=16)的内在板对照将数据标准化。pEC50值是通过与ActivityBase中的IRLS的4参数曲线拟合从测试化合物的11点、两倍连续稀液释得出的。
结果
参考实施例1具有>8.3的平均pEC50。
使用新鲜的人外周血单核细胞(PBMC)诱导干扰素-α和TNF-α的测定
化合物制备
使用Biomek2000将参考实施例1的化合物溶解并连续稀释于DMSO中，得到100×所需的浓度范围。使用BiomekFX将1μL的测试化合物转移至96孔组织培养板中。对于每个供体而言，对每种化合物进行一式两份的测定。每个板包含作为标准的TLR7/8激动剂瑞喹莫德的稀释系列且第11列包含1μL的200μM瑞喹莫德(给予2μM的终浓度，用于定义对瑞喹莫德的大约最大应答)。
PBMC的制备
将来自两个人类供体的血样收集于肝素钠(10U/mL)中。将25mL体积的全血覆盖在Leucosep管中的15mLHistopaque上，将所述Leucosep管以800g离心20min，并将位于血浆/histopaque界面处的带小心地移出。将收集的细胞在2500rpm离心10min并将团块重新混悬于10mL培养基(补充有10%v/v胎牛血清(FCS，低内毒素)100U/mL青霉素G、100μg/mL链霉素、10mML-谷氨酰胺和1×非必需氨基酸的RPMI1640(低内毒素))中。使用台盼蓝制备细胞的1:20稀释液并使用血球细胞计数器对细胞进行计数。将PBMC稀释至得到2×106/mL的终浓度，并将100μL该细胞混悬液加入含有1μL稀释的测试化合物的孔中。
孵育以及干扰素-α和TNF-α的测定
将细胞制品孵育24h(37℃，95%空气，5%CO2)，之后使用BiomekFX将上清液样品移出并使用MSD(MesoscaleDiscovery)电化学发光测定平台对IFN-α和TNF-α进行测定。IFN-α测定是采用类似于上面所述进行的。TNF-α测定是按照每个试剂盒说明书(目录号K111BHB)进行的。
释放的细胞因子表示为2μM瑞喹莫德对照(第11列)的百分数。以该百分数对化合物浓度作图，且应答的pEC50是由非线性最小二乘法曲线拟合确定的。对于IFN-α应答，通常选择4参数对数模型。对于TNF应答，在获得清楚的最大应答(即在应答中观察到充分地确定的平台)之处，则通常使用4参数模型。如果曲线的上渐进线没有充分地确定，则通常将曲线拟合限制到100%的最大应答(即对2μM瑞喹莫德的应答)或所测试的最高浓度的应答(如果其高于瑞喹莫德应答)。对于一种或两种细胞因子的一些曲线是钟形的，并且所述钟形应答的下坡上的细胞因子数据(即高于给出最大应答的那些的浓度)通常从拟合中排除，通常除外刚刚超过峰应答的浓度。因此，曲线拟合集中于剂量反应曲线的上坡。
结果
参考实施例1分别显示出≥9和≤6.5的IFN-α和TNF-α诱导的平均pEC50。
使用来自遗传性过敏症的志愿者的新鲜人外周血单核细胞(PBMC)的变应原引发的细胞因子测定
开发了基于得自遗传性过敏症的人类供体的外周血单核细胞(PBMC)与变应原和测试化合物的共培养的测定。培养5-6天后，对细胞上清液进行了有关各种细胞因子的测定。
化合物制备
将参考实施例1的化合物溶解于DMSO中，然后在0.04%DMSO存在下连续稀释于生长培养基(补充有100U/mL青霉素G、100μg/mL链霉素、10mML-谷氨酰胺的RPMI1640培养基)中，得到4×所需的浓度范围。对每种化合物在所有浓度一式三份进行测定。
PBMC的制备
将来自已知对梯牧草(Timothygrass)有过敏性反应的志愿者的去纤维蛋白的人血在2500rpm离心15分钟。收集血清的上层并且在56℃加热灭活30分钟(HI-自体血清)。将下层细胞重新悬浮于50mLPBS(+Ca+Mg)中，将25mL稀释的血液覆盖在于50mL管中的20mLLymphoprep(淋巴细胞分离剂)上，然后在2500rpm在室温离心20分钟。将在血清/Lymphoprep界面处的带小心地移出。将收集的细胞用PBS洗涤并以4×106/mL重新悬浮于含有HI-自体血清的生长培养基中。在10μg/mL梯牧草抗原(AlkAbello)和合适的浓度的测试化合物(总体积200μL)的存在下将PBMC以0.4×106细胞/孔接种于平底96孔板中。
孵育和细胞因子测定
将板在37℃在5%CO2中孵育至多6天。收集来自各个孔的细胞培养基并在分析之前在-20℃储存。使用MesoScaleDiscovery10点滴板对上清液中的细胞因子和趋化因子进行了有关人TH1/Th2细胞因子的检测。
在上述测定中，从采用来自三个变应性供体的PBMC进行的单独的研究得到的数据显示参考实施例1以剂量响应的方式减少Th2细胞因子IL-5和IL-13的产生，与变应原对照相比在0.04μM观察到≥50%的减少。
在下述模型中同样对参考实施例1测试体内生物学活性：
对小鼠鼻内给药后干扰素-α诱导的测定
将参考实施例1的化合物溶解于0.2%于盐水中的吐温80中，并在全身麻醉下向雌性BALB/c小鼠(n=6)鼻内给药(总共5μL，在鼻孔之间)。给药之后2小时对动物实施安乐死，取出最终血样并使用ELISA测定测量干扰素-α的血清水平。
在该模型中，参考实施例1显示出21029pg/mL的干扰素-α的平均血清水平。在媒介物处理的对照中没有检测到干扰素-α。
稳定性测试
6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7,9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的马来酸盐在人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)规定的质量指导准则Q1A(R2)(新原料药和制剂的稳定性测试)和Q1B(新原料药和制剂的耐光性测试)中指定的条件下没有显示出显著的降解。

Claims (10)

1.化合物，其为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮：
2.疫苗佐剂，其包括为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
3.免疫原性组合物，其包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
4.疫苗组合物，其包括抗原或抗原组合物和为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物。
5.为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备免疫原性组合物中的用途，所述组合物包括抗原或抗原组合物，用于治疗或预防疾病。
6.为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备疫苗组合物中的用途，所述组合物包括抗原或抗原组合物，用于治疗或预防疾病。
7.为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗变应性疾病和其它炎性病症、感染性疾病和癌症的药物中的用途。
8.为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗变应性鼻炎的药物中的用途。
9.为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物在制备用于治疗哮喘的药物中的用途。
10.药物组合物，其包括为马来酸盐形式的6-氨基-2-{[(1S)-1-甲基丁基]氧基}-9-[5-(1-哌啶基)戊基]-7，9-二氢-8H-嘌呤-8-酮的化合物，以及一种或多种药学上可接受的稀释剂或载体。
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