CN102727874B - 重组水蛭素滴眼液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种以透明质酸钠为辅料的重组水蛭素滴眼液及其制备方法。本发明的技术特征在于重组水蛭素滴眼液中包含有透明质酸钠，它具有防止药液外溢流失、使药物长时间滞留病灶区的作用。本发明还公布了重组水蛭素滴眼液的制备方法，该方法保证了滴眼液的澄明度及稳定性。本发明制备的重组水蛭素滴眼液除包含重组水蛭素、透明质酸钠以外，还包括等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂以及药学上可接受的载体。具体制备方法是将透明质酸钠、等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂溶解于药学上可接受的载体中形成滴眼液空白基质，然后将重组水蛭素溶解于滴眼液空白基质中，过滤除菌、分装，制得重组水蛭素滴眼液。制得的重组水蛭素滴眼液pH值为4.0～7.5。药效学实验结果表明，本发明所述方法制备的重组水蛭素滴眼液具有防治白内障的作用。

Description

重组水蛭素滴眼液及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含透明质酸钠的重组水蛭素滴眼液及其制备方法。

背景技术

水蛭素是一类最初从医用水蛭唾液腺中分离得到的由65～66个氨基酸组成的多肽物质，主要有HV1、HV2、HV3三种同源性很高的异构体(Hirudin variant)。水蛭素可以通过直接抑制凝血酶的活性而有效地抑制动脉、静脉血栓的形成及弥散性血管内凝血(DIC)，因此，水蛭素在预防和治疗深度静脉血栓、冠状动脉血栓、以及心绞痛等疾病方面具有极高的应用价值。

目前，国外已有两个重组水蛭素产品批准上市：1.Desirudin(商品名：Revasc，瑞士Novartis产品)；2.Lepirudin(商品名：Refludan，英国Pharmion及美国BerlexLaboratories产品)。两者结构上仅在N-端存在微小差异，Desirudin为Val1-Val2，而Lepirudin为Leu1-Tyr2。Desirudin用于手术时深度静脉血栓(DVT)的预防与治疗，Lepirudin用于肝素诱导的血小板减少性疾病病人的抗凝治疗。此外，水蛭素在防治不稳定性心绞痛、弥散性血管内凝血、脑凝血、血栓静脉炎及冠状动脉血栓等方面都具有巨大的潜在临床应用价值。

吴梧桐等(中国发明专利，专利号：03132224.7)药理试验证明重组水蛭素对D-半乳糖及亚硒酸钠诱导的白内障均具有显著防治效果，其发明的重组水蛭素滴眼液，采用壳聚糖为增稠剂，主要用于治疗白内障。然而，壳聚糖大分子具有活泼的羟基和氨基，在一定的条件下，容易发生水解、烷基化、酰基化、羧甲基化、磺化、硝化、卤化、氧化、还原、缩合和络合等化学反应，并生成各种性质不确定的壳聚糖衍生物。

增稠剂大多数以物理增稠的原理来提高药物的生物利用度，且必须达到一定浓度才可起作用。但是，物理增稠发挥的增效作用比较有限，当粘度达到一定值时，药效就不会随着粘度的增大而增加。这类增稠剂常用的有：泊洛沙姆、卡波姆、羟丙甲纤维素等。

此外，在这些增稠剂中，有些是牛顿流体，眨眼时会有疼痛感，且对pH和/或温度敏感，另外一些还有较多的配伍禁忌。例如，泊洛沙姆温度敏感性凝胶，虽然在25℃以上可由液相转变为半固体，但当回到低温时，半固体凝胶却很难回到液体状态，因此用于大生产其工艺难以控制。另外，卡波姆凝胶由于盐类电解质可使其粘性下降，碱土金属离子以及阳离子聚合物等也可与之结合成不溶性的盐，强酸也可以使其失去粘性，因此，卡波姆有较多的配伍禁忌。羟丙甲纤维素等纤维素衍生物、聚乙烯醇以及聚乙烯吡咯烷酮等作为滴眼液的增稠剂，其缺点主要是它们属于牛顿流体，粘度随浓度的增大而提高但不受切变力(如眨眼时的切变力)的影响，有时为了产生明显的增稠作用，必须添加其至一定浓度，然而当粘度达到一定的程度时，会使眼睑不易眨动且对敏感的眼组织产生刺激，令使用者难以耐受^[1]。

因此，需要使用另外一种增稠剂，它一方面可以使重组水蛭素长时间滞留病灶区，又不会对敏感的眼组织产生刺激作用，同时还可以保证重组水蛭素滴眼液的储存稳定性。

发明内容

本发明提供了一种含有透明质酸钠的重组水蛭素滴眼液，其中所含的透明质酸钠具有防止药液外溢流失、使药物长时间滞留病灶区的特点。

本发明还提供了制备上述滴眼液的方法，它包括先溶胀透明质酸钠，然后分别溶解重组水蛭素、等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂，并调节重组水蛭素滴眼液的pH值为4.0～7.5。

本发明还说明了透明质酸钠、等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂在制备滴眼液中的用途。

本发明所述的透明质酸钠(SH)为增稠剂，透明质酸钠是透明质酸(HA)的钠盐形式。透明质酸又称玻璃酸，是以N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸为双糖重复单元构成的粘多糖类物质，通常以其钠盐形式存在，平均分子量可以是60～280万。不同分子量的透明质酸钠粘度不同，因此其用途也不同。本发明所述透明质酸钠的分子量大约是130万，属于滴眼液级别。透明质酸钠广泛存在于动物组织细胞间质和眼玻璃体中，主要的生理功能是保持组织水分和润滑作用等。药学家研究发现，透明质酸钠不仅具有卡波姆、泊洛沙姆、羟丙甲纤维素、壳聚糖等高分子粘性物质的优点，还具有良好的生物相容性，在增加药物黏度的同时，克服了眼睑不易眨动的缺点，使其成为滴眼液的良好载体^[2]。凌沛学^[3]研究发现透明质酸钠还能降低滴眼剂中防腐剂的不良反应。正常情况下，使用含有透明质酸钠的滴眼液时，眼表自然存在的透明质酸钠形成一层膜覆盖于角膜上皮表面，角膜上皮具有与透明质酸钠特异性结合位点，所以含透明质酸钠的药物可以长时间存留于眼表，有利于眼组织对药物长久有效的吸收。因此，透明质酸钠生物相容性极好，不但可以增粘，而且可以保湿，从而能在改善视力的同时保持眼部较长时间的湿润，对改善视力起到了辅助作用。本发明所述的透明质酸钠可以使用市售产品。

本发明所述的等渗调节剂可以是本领域常用的等渗调节剂，其主要作用是调节滴眼液的渗透压，增加患者使用的顺依性，可选用氯化钠、硼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液中的一种或几种。在本发明的实施例中，使用的等渗调节剂为氯化钠和硼酸盐缓冲液。

本发明所述的金属络合剂是本领域中的常用组分，其主要作用是防止滴眼液配制过程中各种金属离子的影响，其选择和含量皆遵循本领域的常规考虑。在本发明的实施例中，使用的金属络合剂为乙二胺四乙酸二钠，它是本领域制剂中的常规金属络合剂。

本发明所述的防腐剂是本领域制剂中的常规眼用防腐剂，其选择和含量皆遵循本领域的常规考虑，可选用对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞或者苯扎溴铵中的一种或几种混合物。在本发明的实施例中使用的防腐剂为对羟基苯甲酸乙酯，它是本领域制剂中的常规眼用防腐剂。

本发明所述的pH调节剂是本领域中的常用组分，其选择和含量皆可遵循本领域中的常规考虑，可选用氢氧化钠或者盐酸中的一种或两种。

本发明所述的药学上可接受的载体是指在滴眼液中常用的载体。本发明中所述药学上可接受的载体是液体。在本发明的实施例中，所述药学上可接受的载体选用注射用水。

本发明的重组水蛭素滴眼液的制备方法十分简单，可以采用常规的滴眼液生产工艺生产，简单物理混合即可。

本发明的重组水蛭素滴眼液，由于加入了透明质酸钠，它具有防止药液外溢流失、使药物长时间滞留病灶区的作用，同时使眼表湿润舒适。此外，所述的滴眼液制备方法保证了滴眼液的澄明度及储存稳定性。

具体实施方式

下面结合实施例细说明本发明，这些实施例只是用于举例说明的目的，并不限制本发明的范围：

实施例1

重组水蛭素滴眼液配方：

制备工艺：

1.在60-80℃的水浴条件下，快速搅拌并缓缓将0.1g透明质酸钠加入到70ml注射用水中，使其完全分散，充分溶胀，勿使粘结成团，搅拌30分钟左右即可完全溶解。

2分别将硼酸、硼砂、氯化钠、乙二胺四乙酸钠和对羟基苯甲酸乙酯加入到上述透明质酸钠溶液中，搅匀溶解，然后定容至100ml，即得pH7.4的滴眼液空白基质。

3.将重组水蛭素III加入到上述滴眼液空白基质中，搅匀溶解，通过0.22um滤器过滤除菌，然后分装，即得重组水蛭素III滴眼液。

实施例2

兔眼刺激实验

将实施例1中重组水蛭素III滴眼液按照新药临床前指导原则方法^[4]进行刺激性考察，选择健康新西兰兔4只，左眼每日给重组水蛭素III滴眼液5次，右眼给生理盐水做空白对照，在1，24，48，72h进行眼部检查，观察结膜、角膜、虹膜及其他可见损伤，连续观察7d，根据眼刺激反应分值标准记录眼部反应的分值(结果见表1)。

表1各个观察时间各组眼睛最后得分

结论：重组水蛭素III滴眼液给药一侧眼睛眼角膜、虹膜和结膜未出现刺激性，与对照一侧眼睛一样，由此证明重组水蛭素III滴眼液无眼刺激性。

实施例3

稳定性实验

重组水蛭素III滴眼液测定抗凝活力后，分别置于4℃冰箱及室温，在放置1，2，4周和3，6，12个月后，其抗凝活力及pH值没有变化，外观形状、澄明度及无菌检查均符合中华人民共和国药典(二部)附录IIIA对滴眼液的要求。

实施例4

药效学实验

对D-半乳糖诱导的白内障大鼠的治疗作用

实验药物：实施例1中的重组水蛭素III滴眼液

实验动物：SD大鼠，雌雄各半，130±20g

实验方法和结果：

1.SD大鼠白内障模型建立

取24只SD大鼠随机分成4组，每组均为6只(雌雄各半)，分别为正常对照组、模型对照组、白内停对照组和重组水蛭素III滴眼液(2000ATU/ml)组。除正常对照组外，其它组SD大鼠均腹腔注射0.08％的D-半乳糖溶液25mL/kg，相当于20mg/kg，每日分2次给药，上下午各1次，连续给14d，并饮用10％D-半乳糖溶液^[5]，正常对照组按同样方式腹腔注射同体积的生理盐水。造模成功后，各组分别双眼点滴给药，各组给药容积均为100uL/只/次，每日分3次给药，连续30天。

2.重组水蛭素III滴眼液对白内障大鼠的治疗作用

给药30天后，使用复方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙灯显微镜定期观察大鼠晶状体的混浊程度，观察后记录结果。晶状体混浊程度按表3标准分别赋予不同分值，进行组间t检验。模型组大鼠未经药物治疗，随着时间的延长其晶状体的混浊程度越来越高。重组水蛭素III滴眼液组与模型组晶状体混浊程度相比，有极显著差异(p＜0.01)，表明重组水蛭素III滴眼液可显著缓解晶状体混浊(见表2和图1)。

表2rHVIII滴眼液对SD大鼠晶状体混浊程度的影响(

n＝6)

注A：无浑浊B：轻微浑浊C：中等浑浊D：严重浑浊；vs模型组，*p＜0.05，**p＜0.01

给药30天后，将大鼠处死取眼球，分离出晶状体。分别检测大鼠晶状体SOD活性、MDA含量和AR活性。与模型组比较，白内停对照组和重组水蛭素III滴眼液组均能极显著升高SOD活性(p＜0.01)以及极显著降低MDA含量(p＜0.01)，并且能显著降低AR活性(见表3)。

表3重组水蛭素III滴眼液对SD大鼠晶状体SOD活性、MDA含量及AR活性的影响(

n＝6)

注：vs模型组，*p＜0.05，**p＜0.01

实验结论：

重组水蛭素III滴眼液能明显减轻晶状体混浊度，缓解半乳糖性白内障症状的发展，并且能增大SOD活性，降低MDA含量，降低AR活性，显著改善大鼠半乳糖性白内障严重程度。

参考文献

[1]施洁明，何仲贵.表面活性剂在新剂型中的应用[J].中国药房，2003，14(3)：179-181

[2]凌沛学，员象敏等.玻璃酸钠在眼用溶液中的作用[J].中南药学，2004，2(4)：229-231

[3]凌沛学.玻璃酸钠降低滴眼剂中防腐剂不良反应的作用[J].眼科研究，2006，24(4)：438-440

[4]中华人民共和国卫生部药政局.新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学·药理学·毒理学)[S].北京.卫生部药政局

[5]孙宇，李运曼.崔莉等.重组水蛭素对实验性白内障的防治作用[J].中国药科大学学报.2005，36(3)：260-262

附图说明：

图1为各组SD大鼠晶状体在裂隙灯显微镜下的状态(给药30天后)：第一排，正常对照组；第二排，模型对照组；第三排，白内停组；第四排，重组水蛭素III滴眼液给药组

Claims (6)

1.一种含有透明质酸钠的重组水蛭素滴眼液，其特征在于，以透明质酸钠为增稠剂，还含有重组水蛭素、等渗调节剂、金属络合剂、防腐剂、以及药学上可接受的载体；其中，每100ml滴眼液中含0.1g透明质酸钠、0.02g重组水蛭素、1.527g等渗调节剂、0.5g金属络合物和0.03g防腐剂。

2.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的等渗调节剂选自氯化钠、硼酸盐缓冲液或者磷酸盐缓冲液中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的金属络合剂为乙二胺四乙酸二钠。

4.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述的防腐剂为对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯扎溴铵或硫柳汞中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的滴眼液，其特征在于，所述药学上可接受的载体是注射用水。

6.一种制备权利要求1所述滴眼液的方法，其特征在于，将透明质酸钠、等渗调节剂、金属络合剂和防腐剂溶解于药学上可接受的载体制成滴眼液空白基质，然后将重组水蛭素溶解于该滴眼液空白基质中，过滤除菌、分装，制得重组水蛭素滴眼液。

Images