CN102727484A - 水飞蓟宾在制备治疗老年痴呆症药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了水飞蓟宾用于制备预防或治疗老年痴呆症药物中的用途，属于医药领域。水飞蓟宾用于人或哺乳动物老年痴呆症的治疗或预防时，可以单独用药，也可以与其他药物作用机制不同的老年痴呆症药物联合用药；联合用药不仅能够降低药物毒副作用，而且可以取得协同治疗的效果。水飞蓟宾可以显著抑制β淀粉样蛋白的沉积，其用于老年痴呆症预防或治疗疗效确切，副作用小，因此具有广阔的医学应用前景。

Description

水飞蓟宾在制备治疗老年痴呆症药物中的用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种已知药物的新用途，具体的说涉及水飞蓟宾在制备治疗老年痴呆症药物中的用途。

背景技术

老年痴呆症，又称阿尔茨海默病(Alzhimer’s Disease，AD)，是一种中枢神经系统的退行性疾病，其临床表现为认知和记忆能力的不断恶化，日常生活能力进行性减退以及出现各种精神分裂症状和行为障碍。随着疾病的发展，患者会逐渐丧失生活自理能力，给患者的个人家庭和社会带来沉重的负担。患病率研究显示，美国在2000年的阿尔茨海默病例数为450万例，年龄每增加5岁，阿尔茨海默病病人的百分数将上升2倍，也就是说，60岁人群的患病率为6％，而85岁人群的患病率为30％。目前我国超过60岁的老人约有1.29亿，占总人口的10.15％。因而，重视老年痴呆症的预防和治疗具有十分重要的社会意义和临床意义。

老年痴呆症的发病机制目前仍不明确，关于老年痴呆症发病机制的主流学说是β淀粉样蛋白级联假说。该假说认为β淀粉样蛋白样前体(APP)异常降解生成过量的Aβ蛋白，并在脑内沉积形成老年斑的核心，其可激活小胶质细胞，引起炎症反应，损伤线粒体引起能量代谢障碍，生成过多氧自由，导致机体的氧化应激损害，激活细胞凋亡途径。另一方面，Aβ蛋白还能激活蛋白激酶，促使tau蛋白异常磷酸化，损伤胆碱能神经元，引起中枢胆碱能系统的病变。这些病理变化又促进Aβ蛋白的生成和异常堆积，产生正反馈的级联放大效应，最终导致神经元的减少和递质释放异常。

目前治疗AD的药物主要包括以下几个方面：①乙酰胆碱酯酶抑制剂，针对AD患者脑内胆碱能神经元大量丢失，乙酰胆碱递质严重缺乏，运用乙酰胆碱酯酶抑制剂，可增加脑内乙酰胆碱的含量，促进神经元的恢复。这一类的药物现在主要有他克林、多奈哌齐、利斯的明等②抗炎药物，由于在老年斑淀粉样变核心的周围存在着反应性的胶质细胞，有人因此提出AD的慢性炎症学说，并利用合适的抗炎药物来达到预防和治疗的目的。这一类的药物有阿司匹林等。③兴奋性谷氨酸受体拮抗剂，保护细胞免受兴奋性递质细胞毒性作用的攻击。这一类的药物有美金刚等。④神经生成因子，它能特异性的作用于神经元，刺激神经元的可塑性，促进神经元的生长、存活，维护细胞的功能。⑤其他，如雌激素的替代疗法，脑细胞代谢激活剂，钙离子拮抗剂的运用等。虽然上述药物在临床应用上已经显示一定的疗效，但长期使用过程中存在着严重的不可避免的副作用。如他克林具有严重的肝脏毒性，需要定期监测肝功能，故他克林现在已极少用于病人。

上述化学药物均能对老年性痴呆起到积极治疗效果，但化学合成药物毒副作用也严重困扰着医学界，人们开始更多的关注天然药物，近年来，天然药物应用于AD的防治已积累了大量的宝贵经验，运用天然药物治疗AD主要有如下两点优势：（1）作用于多靶点并能对人体机能经行整体性的调节；（2）副作用小。因此，天然药物对于AD的治疗具有更大的优势和更广阔的前景。

水飞蓟宾，又名水飞蓟素（Silymarin)，是从菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取所得的一种天然黄酮木脂素类化合物。水飞蓟宾呈黄色粉末，味苦，熔点在167℃，当温度达到180℃时开始分解。水飞蓟宾可溶于丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇，微溶于氯仿，几乎不溶于水。其分子式为C₂₅H₂₂O₁₀，摩尔质量为482.12。

水飞蓟宾临床上主要用于治疗中毒性及酒精相关性肝病的治疗，在美国和欧洲还可作为抗氧化食品添加剂。药理学研究表明，水飞蓟宾能够清除机体内自由基，延缓衰老，对抗脂质过氧化，抑制一氧化氮的产生，减轻对组织细胞的毒素，保护肝细胞膜、改善肝功能，降血脂和保护心肌等作用。近年来，水飞蓟宾显示出的保肝和抗氧化以外的活性而备受关注，其中其表现出的抗癌和肿瘤预防作用已经显示出很好的开发潜力。

孙羿等在《水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制》一文中通过实验证实水飞蓟宾可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖，并能下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。任孟军等在《水飞蓟宾对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其机制研究》通过实验证实水飞蓟宾可通过下调HepG2中PCNA及Ki-67蛋白的表达，改变细胞周期进程，诱导细胞凋亡来发挥其抑制细胞增殖的作用。中国专利申请201110109653.X公开了一种在水飞蓟种皮中提取水飞蓟素的方法，该方法使用溶剂对水飞蓟种皮进行提取，并浓缩回收溶剂后得到水飞蓟素，其提取质量可以达到或超过国际标准。中国专利申请201010238453.X公开了水飞蓟或水飞蓟宾用于治疗神经受损的用途，该专利申请证实了水飞蓟宾对脊髓损伤及脊髓相关的疾病具有积极的治疗作用，但该专利申请并未涉及其对中枢神经系统的作用机制以及中枢神经系统疾病的治疗效果。根据目前所检索到的现有技术，现阶段国内外关于水飞蓟宾在神经系统中的作用研究还比较少，特别是在中枢神经系统退行性疾病的研究方面更是鲜有报道。本发明旨在探讨水飞蓟宾对神经退行性疾病特别是老年性痴呆症的作用。

发明内容

为了克服目前老年痴呆症治疗药物药效不明确、药物毒副作用大的特点，为了提高广大老年痴呆症患者的认知能力和生活能力，本发明提供一种新型老年痴呆症治疗药物，该药物以水飞蓟宾为主要药物活性成分。如前所述，水飞蓟宾临床上常用于中毒性及酒精相关性肝病的治疗，因此本发明涉及水飞蓟宾的一种药物用途，即水飞蓟宾用于制备预防或治疗老年痴呆症药物中的用途。本发明所提供的药物用于老年痴呆症的治疗或预防时疗效确切，药物毒副作用小，具有广泛的医学应用前景。

本发明的目的之一在于公开水飞蓟宾用于预防或制备治疗老年痴呆症的药物中的用途。发明人经过探索性试验发现，水飞蓟宾化合物具有显著地抑制β淀粉样蛋白沉积的作用。本发明实施例10采用圆二色谱法的检测候选药物干预β淀粉样蛋白聚集作用，研究结果表明：这类化合物可以抑制Aβ的聚集，以高剂量组最为明显，并且无细胞毒性。Aβ的聚集与老年斑的形成以及老年痴呆症的发生和进展之间具有十分密切的关系，因此可以预见本发明中水飞蓟宾用于老年痴呆症的预防或治疗会改善患者的病情或延缓疾病的发生起到积极的作用。

本发明所述的水飞蓟宾对老年痴呆症的治疗作用主要是由于其对Aβ的聚集的抑制作用，其与其他采用不同治疗机制的老年痴呆症药物联用可以取得意想不到的治疗或预防效果。实验证明，药物联用不仅可以增强药物的治疗效果，而且可以降低药物不良反应以及机体对药物的耐药性。这些药物可以是如下药物中的一种或几种：乙酰胆碱酯酶（AchE）抑制剂、脑代谢激活剂、非甾体抗炎药物、自由基清除剂、毒蕈碱受体激动剂。其中乙酰胆碱酯酶（AchE）抑制剂优选为他克林、盐酸多奈哌齐、酒石酸卡巴拉汀、加兰他敏和盐酸美金刚中的一种或多种；脑代谢激活剂优选为吡拉西坦、甲磺酸双氢麦角碱、己酮可可碱和麦角溴烟酯中的一种或多种；非甾体抗炎药物优选为阿司匹林；自由基清除剂优选为退黑素、姜黄素、去铁敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎特和维生素C中的一种或多种；毒蕈碱受体激动剂优选为占诺美林。

由于现代动物福利的提高和饮食的复杂性，动物患病病机率也明显增加。本发明所述的用途治疗对象可以为人或者动物，所述动物优选为哺乳动物。本发明所述水飞蓟宾的用途中，水飞蓟宾可以单独给药也可以联合其他老年痴呆症药物给药，其用于预防或治疗老年痴呆症时可以根据病情和药物性质选择合适的给药途径，优选为口服给药，人用给药量为0.1mg/kg·d~5mg/kg·d，优选为0.5mg/kg·d~3.5mg/kg·d，其他动物的给药剂量可以按照人与动物体表面积换算而得到，这对于本领域技术人员是已知的。用于治疗或预防老年痴呆症的给药剂型可以为本发明上述所述的药物制剂，如片剂、胶囊剂、缓释剂或混悬剂。

本发明目的之二是公开含有水飞蓟宾并能够实现上述用途的药物制剂。以上所述的用途中，发明人通过试验将其制备成了比较稳定的口服制剂，如片剂、胶囊剂，缓释剂、混悬剂。其中片剂含有两种以上如下辅料：淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、羟丙基纤维素、淀粉浆乳糖、甘露醇、微粉硅胶、交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮；所述胶囊剂含有两种以上如下辅料：可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素和微粉硅胶；所述混悬剂含有两种以上如下辅料：硫酸锌、樟脑醑、羧甲基纤维素钠、甘油、卡波姆；所述缓释片或缓释胶囊中含有两种以上如下辅料：微晶纤维素、乳糖、甲基纤维素（MC）、乙基纤维素（EC）、羟乙基纤维素（HEC）、羟丙甲基纤维素（HPMC）、羟丙基纤维素（HPC）、羧甲基纤维素（CMC）、预凝胶淀粉。上述含有水飞蓟宾的药物制剂中，每一制剂单位含有水飞蓟宾的有效量为0.1mg-200mg。

本发明公开了水飞蓟宾用于制备治疗老年痴呆症药物中的用途，其与现有技术相比，具有以下突出的优势：

1)水飞蓟宾可以显著地抑制β淀粉样蛋白沉积，其用于老年痴呆症的预防或治疗时疗效确切，剂量明确，单独用于老年痴呆症的治疗或预防时，可以显著延缓老年痴呆症的发病进程，大大改善患者的认知能力和生活质量。

2)水飞蓟宾为天然植物中提取的活性成分，其用于老年痴呆症的治疗或预防时副作用低，患者的用药依从性高，其与其它治疗老年痴呆症的化学药物联用可以显著降低化学药物的用量，从而降低化学药物的毒副作用。

3)水飞蓟宾与其它作用机制并对老年痴呆症起到治疗作用的药物联用时，其药物作用机制互补，可以起到对老年痴呆症预防或治疗的协同作用。

说明书附图

图1为各供试品的圆二色谱吸收曲线，涉及的曲线自上到下依次为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组的圆二色谱吸收曲线。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应当知晓本发明的具体实施例并不以任何方式限制本发明，且在本发明基础上所作出的任何等同替换均落入本发明的保护范围。

实施例1水飞蓟宾片剂制备

制备工艺：称取处方量的水飞蓟宾、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60%乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥后完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例2水飞蓟宾片剂制备

制备工艺：称取处方量的水飞蓟宾、微晶纤维素和羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的8%淀粉浆溶液，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥后完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例3水飞蓟宾片剂制备

制备工艺：称取处方量的、水飞蓟宾、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60%乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥后完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例4水飞蓟宾片剂制备

制备工艺：称取处方量的、水飞蓟宾、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取适宜量的60%乙醇，加入于混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥后完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混和均匀，压片，即得。

实施例5水飞蓟宾片剂制备

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取、水飞蓟宾与乳糖、甘露醇混合均匀后，再分别加入处方量的微粉硅胶、微晶纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠，混合均匀，加入60%乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，湿颗粒于60℃干燥，16目筛整粒，加入硬脂酸镁混合均匀，压片，即得。

实施例6水飞蓟宾胶囊剂制备

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取和水飞蓟宾与可压性淀粉、乳糖和低取代羟丙基纤维素混合均匀后，加入60%乙醇溶液制软材，18目筛制颗粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装填胶囊，即得。

实施例7水飞蓟宾混悬剂的制备

制备工艺：称取处方量的水飞蓟宾置乳钵中，加甘油研磨成细糊状，硫酸锌溶于200ml水中，另将羧甲基纤维素钠用200ml水制成胶浆，在搅拌下缓缓加入乳钵中，移入量器中，搅拌下加入硫酸锌溶液，搅匀，在搅拌下以细流加入樟脑醑，加蒸馏水至全量，搅匀，即得。

实施例8水飞蓟宾缓释片的制备

制备工艺：分别称取处方量的水飞蓟宾、乳糖和羧丙基甲基纤维素粉碎后过80目筛后置于乳钵中混合均匀，加入适量80%乙醇制备软材，过筛制备湿粒，60-70℃干燥制备干颗粒后整粒，加入硬脂酸镁压片即可得到水飞蓟宾缓释片剂。

实施例9水飞蓟宾缓释胶囊剂的制备

制备工艺：称取处方量水飞蓟宾与辅料分别粉碎过80目筛后混合均匀，加50%乙醇适量制成软材，经挤出筛板(孔径0.8mm)挤成直径相当的细条状，然后使条状物料进滚圆机使之完全滚圆，取出微丸，于60℃烘干3h左右，使水分含量控制在1%～4%，取18～24目的微丸。测定微丸的含量，确定胶囊的装量，用充填机进行胶囊充填。

实施例10圆二色谱（CD）方法检测候选药物干预β淀粉样蛋白聚集和纤维形成作用。

圆二色谱技术是一种利用平面偏振光研究溶液中蛋白质二级结构的快速、简单、较准确的方法。目前被广泛应用于这些大分子的结构与功能的研究以及配基(小分子或大分子药物)与它们的相互作用研究中，研究不同条件下蛋白二级结构折叠状态的变化。单个Aβ在自然情况下为α螺旋结构，当它聚集沉积时，二级结构会变成以β折叠结构为主。在紫外光谱段180nm–250nm的范围，α螺旋结构的吸收峰为222nm和208nm，β折叠结构的吸收峰在216nm。利用这一特性，我们可以快速Aβ沉积的情况。

1、材料和方法

选用人脑内的Aβ蛋白，溶解在磷酸缓冲液PBS（0.1M，pH=7.4）中，浓度为200μM（即200μmol/L，下同）。用水配置一定浓度的水飞蓟宾水溶液，浓度为200μM，分装储存于-20℃，使用时融化稀释至所需浓度即可。

圆二色谱仪（Chirascan，Applied Photophysics Ltd,Britain）用来检测Aβ二级结构的变化。具体测定方法为：取配置好的100μM的Aβ蛋白溶液，分别按照Aβ：水飞蓟宾为1：0.5、1：1和1：5的比例加入配置好的候选药物溶液，混匀，于37℃中共同孵育48h（诱导Aβ单体聚集）。孵育后，立即进行CD检测。设定圆二色谱仪扫描波长为180nm–250nm，按照指定的时间间隔记录吸收强度，重复测定三次实验所测结果的平均值代表其实验结果。

对照组：将200μM的Aβ蛋白溶液与蒸馏水1：1(v/v)混合的100μM Aβ蛋白溶液。

高浓度组：将200μM的Aβ蛋白溶液与200μM水飞蓟宾药物溶液1：1(v/v)混合；混合后溶液Aβ蛋白浓度为100μM，水飞蓟宾浓度为100μM。

中浓度：将200μM的Aβ蛋白溶液与50μM水飞蓟宾药物溶液1：1(v/v)混合；混合后溶液Aβ蛋白浓度为100μM，水飞蓟宾浓度为25μM。

低浓度组：将200μM的Aβ蛋白溶液与12.5μM水飞蓟宾药物溶液1：1(v/v)混合；混合后溶液Aβ蛋白浓度为100μM，水飞蓟宾浓度为6.25μM。

2、实验结果

各供试品圆二色谱吸收曲线如附图1所示，自上到下依次为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组。其中对照组（Control）组，浓度为100μM，其余各组为药物处理组。由附图1可以看出：

1)各供试品在波长为216nm处均可检测到明显的吸收峰，即β折叠结构的吸收峰。峰值越低，表明β折叠越多。

2)水飞蓟宾各药物组在波长216nm处的吸收峰与对照组相比均有明显上升，这表明水飞蓟宾可以显著抑制Aβ蛋白β折叠的形成，其β折叠结构减少。随着供试品中水飞蓟宾浓度的提高，吸收峰上升增加，蛋白质β折叠进一步减少，这表明水飞蓟宾对淀粉样蛋白β折叠的形成呈现浓度依赖性。

实施例11本发明水飞蓟宾对Aβ_25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗作用

目前还没有发现AD独特的、公认的、理想的动物模型。现有的AD动物模型有2类：损伤性动物模型和转基因动物模型。损伤性动物模型主要包括物理、化学、有机物损伤和自身免疫损伤模型。转基因动物模型主要指与AD有关的前体样蛋白(APP)、载脂蛋白(Apo)E4、早老蛋白1(PSI)、早老蛋白2(psII)等有关基因的单转基因或多转基因动物模型。转基因模型是目前研究的热点，但造模过程复杂，费用昂贵，传代缺乏稳定性。AD患者主要的神经病理学特征之一是老年斑(sP)沉积，而Aβ是老年斑中的主要成分。体内、外试验都己证实Aβ的神经毒性作用，能导致神经元损伤和认知功能衰退，是AD形成和发展的关键因素，而海马注射A建立的AD大鼠模型却观察到神经元损伤、Aβ沉积、tau蛋白的异常磷酸化(即神经纤维缠结)等多种病理改变。

1材料和方法

1.1实验材料

实验动物为雄性SD大鼠，鼠龄8～12周，体重250-300g，由第二军医大学实验动物中心提供。Aβ_25-35购自美国Sigma公司，Morris水迷宫购自上海吉量公司。

1.2大鼠老年痴呆模型的建立及评价

1.2.1脑室内注射用Aβ_25-35溶液的配制：将Aβ_25-35溶于无菌生理盐水，使Aβ浓度为10mmol／L，置37℃恒温箱内孵育3d进行老化。

1.2.2动物模型的制作：标准环境下饲养，随机分为2组：对照组和模型组，每组10只。2组在鼠龄和体重上无显著性差异。动物予适应性喂养1周后，将大鼠用2％戊巴比妥钠腹腔麻醉(40～50mg／kg体质量)，固定于脑立体定向仪上，剪去头顶部毛发，碘酊消毒后切开皮肤，参照《大鼠脑立体定位图》选择右侧侧脑室为注射靶区，于前囟向后1.0mm，中线旁开1.7mm处，用三棱针钻开颅骨，暴露硬脑膜，再用微量注射器以15μm/s的速度自脑表面垂直进针4.0mm，将10mmol／L Aβ_25-35溶液5μl缓慢注入，留针2min后缓慢撤针，缝合切口。对照组注入等体积无菌生理盐水。

1.2.3Morris水迷宫行为学测定：2组大鼠分别于术后第10天开始进行Morris水迷宫测试。测试程序为定位航行试验：历时5d，前2d为训练适应期，后3d记录成绩，如果大鼠在1min内找到平台，记录其实际逃避潜伏期；如果在1min内仍未找到平台，则由实验者将其引上平台并停留20S，逃避潜伏期记录为1min。

1.2.4动物模型的评价

由下表可以看出，模型组的逃避潜伏期从实验记录的第1天开始对照组就明显延长（P＜0.05或P＜0.01），而模型组3天之间的逃避潜伏期以及对照组3天之间逃避潜伏期无明显差异，表明采用该方法建立的老年痴呆模型可靠准确，可以用于老年痴呆症治疗药物的药效评价。

表1模型组与对照组3天内的逃避潜伏期

组别

第一天

第二天

第三天

对照组	20.54±10.21	19.17±6.42	21.08±5.28
				模型组	41.25±11.24	39.15±6.25	40.27±7.15

2动物造模及分组给药

按照上述造模方法造模，并设置对照组、正常组，每组10只，标准环境下饲养。各组给药方式如下所述：

正常组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

对照组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

模型组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

水飞蓟宾高组：灌胃给予水飞蓟宾28mg/kg/d；

水飞蓟宾低组：灌胃给予水飞蓟宾0.5mg/kg/d；

多奈哌齐组：灌胃给予多奈哌齐0.55mg/kg/d；

复方一组：灌胃给予水飞蓟宾28mg/kg/d和多奈哌齐0.55mg/kg/d；

复方二组：灌胃给予水飞蓟宾0.5mg/kg/d和多奈哌齐0.55mg/kg/d；

上述给药组分别于造模后10天之后给药，第11天记录为第1天，每天给药一次，每天观察动物饮水与饮食情况，分别于给药第1天，给药第5天，给药第10天，给药第15天，给药20天用Morris水迷宫行为学测定方法测定大鼠的逃避潜伏期。最后一次测定完成后处死大鼠。各组大鼠Morris水迷宫行为学测定结果如下表所示。

表2各给药组对水飞蓟宾对Aβ_25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗效果

组别	第1天	第5天	第10天	第15天	第20天
						正常组	10.25±1.24	9.54±1.16	10.14±0.98	10.21±1.26	10.31±2.15
对照组	20.34±10.31	19.57±4.42	21.08±5.28	20.16±6.24	19.95±5.64
						模型组	41.26±10.24	42.16±6.97	41.25±9.24	39.15±6.25	40.27±7.15
水飞蓟宾高组	40.16±9.61	38.25±7.85	34.47±6.24	30.12±5.68	27.65±6.58

水飞蓟宾低组	40.86±10.13	38.64±8.65	35.25±6.35	31.45±5.64	29.64±4.26
						多奈哌齐组	41.06±8.34	38.74±7.68	37.48±5.98	35.16±5.34	33.64±4.26
复方一组	40.28±10.35	36.27±4.65	33.47±5.34	29.54±2.16	25.46±4.86
						复方二组	40.23±9.34	37.27±4.48	32.69±4.84	28.64±3.45	25.67±3.94

由表2可以看出：各给药组第1天的逃避潜伏期物显著性差异，但随着给药时间的延长，各给药组大鼠的逃避潜伏期差异加大，其中水飞蓟宾各给药组以及含有水飞蓟宾的复方组均具有积极的治疗作用。具体表现为：

1)水飞蓟宾各治疗组的大鼠逃避潜伏期与模型组相比具有显著性差异，且无论水飞蓟宾高组还是水飞蓟宾低组与阳性药物多奈哌齐组相比，均显著缩短大鼠的逃避潜伏期，其中药物治疗15天后，其逃避潜伏期与阳性药物的逃避潜伏期具有显著性差异。水飞蓟宾对Aβ_25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗效果呈现剂量依赖性。

2)复方一组和复方二组的大鼠逃避潜伏期与模型组相比具有显著性差异，且复方组无论与水飞蓟宾单药组相比还是与阳性药物多奈哌齐组相比，其大鼠的逃避潜伏期均明显缩短，其中复方药物治疗15天后，其逃避潜伏期与单药治疗组逃避潜伏期相比具有显著性差异。这表明水飞蓟宾对Aβ_25-35所致大鼠老年痴呆模型的治疗作用与多奈哌齐对其治疗作用并不排斥，两种药物对老年痴呆大鼠模型存在协同作用。

实施例12本发明水飞蓟宾对D-半乳糖所致小鼠老年痴呆模型的治疗作用

1材料

D-半乳糖为上海试剂二厂产品；水飞蓟宾由本研究室自制。避暗自动测试仪为成都泰盟科技有限公司产品。

2实验方法

2.1老年痴呆模型小鼠的建立：取昆明系小鼠84只，随机分成7组：模型组、对照组、水飞蓟宾高组、水飞蓟宾低组、多奈哌齐组、复方一组、复方二组。每组12只小鼠。除对照组外各治疗组小鼠每日按120mg/kg腹腔注射D-半乳糖，连续注射4周。各治疗组分别给予下述药物：

正常组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

对照组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

模型组：灌胃给予相同体积的生理盐水；

水飞蓟宾高组：灌胃给予水飞蓟宾55mg/kg/d；

水飞蓟宾低组：灌胃给予水飞蓟宾1mg/kg/d；

多奈哌齐组：灌胃给予多奈哌齐1.1mg/kg/d；

复方一组：灌胃给予水飞蓟宾55mg/kg/d和多奈哌齐1.1mg/kg/d；

复方二组：灌胃给予水飞蓟宾1mg/kg/d和多奈哌齐1.1mg/kg/d；

2.2避暗实验行为学检测

避暗自动测试仪的活动箱分明暗两室，两室之间有一洞口，箱底通以铜栅。正式实验前对各组小鼠进行训练，将小鼠头背着洞口放人明室．先适应环境3min，然后给暗室铜栅通36V电流，小鼠进入暗室后受到电击即逃到明室，铜栅持续通电5min，此为训练过程。24h后进行小鼠的记忆测验，记录小鼠第一次进入暗室的时间(避暗潜伏期)，若小鼠5min内仍未进入暗室。其潜伏期计作300s。

3统计学方法

实验数据用表示，用SPSS11.5软件包进行统计分析，采用ANOVA和LSD’Sposthoc test进行统计学分析，以P<0.05表示有显著性差异。

4实验结果

水飞蓟宾对老年痴呆模型小鼠避暗实验的影响如表3所示。

表3水飞蓟宾对老年痴呆模型小鼠避暗潜伏期的影响

组别	n	避暗潜伏期（s）
			模型组	12	22.65±5.62
对照组	12	90.54±12.64
			水飞蓟宾高组	12	95.24±11.24
水飞蓟宾低组	12	76.84±9.65
			多奈哌齐组	12	65.19±10.76
复方一组	12	125.67±12.67
			复方二组	12	114.25±9.58

由表3可以看出，水飞蓟宾治疗组相对于模型组小鼠避暗潜伏期显著延长（P＜0.01），提示水飞蓟宾对老年痴呆小鼠模型具有显著的预防和治疗效果，其治疗效果优于多奈哌齐组。具体表现为：

1)水飞蓟宾各治疗组的小鼠避暗潜伏期与模型组相比具有显著性差异，且无论水飞蓟宾高组还是水飞蓟宾低组与阳性药物多奈哌齐组相比，均显著缩短小鼠避暗潜伏期，存在显著性差异。水飞蓟宾对小鼠老年痴呆模型的治疗效果呈现剂量依赖性。

2)复方一组和复方二组的小鼠避暗潜伏期与模型组相比具有显著性差异，且复方组无论与水飞蓟宾单药组相比还是与阳性药物多奈哌齐组相比，其小鼠避暗潜伏期均明显缩短，具有显著性差异。这表明水飞蓟宾对小鼠老年痴呆模型的治疗作用与多奈哌齐对其治疗作用并不排斥，两种药物对老年痴呆小鼠模型存在协同作用。

将本发明实施例14或实施例15中阳性药物换作其他老年痴呆症治疗药物，水飞蓟宾与该阳性药物对老年性痴呆均取得显著协同作用，这表明水飞蓟宾作用于老年性痴呆的机制与其他药物作用于老年痴呆症的药物并不冲突，其可以联合使用，并能够取得治疗上的协同作用。

Claims (8)

1.水飞蓟宾在制备预防或治疗老年痴呆症药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物中还含有如下药物中的一种或几种：乙酰胆碱酯酶（AchE）抑制剂、脑代谢激活剂、非甾体抗炎药物、自由基清除剂、毒蕈碱受体激动剂。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述乙酰胆碱酯酶（AchE）抑制剂选自他克林、盐酸多奈哌齐、酒石酸卡巴拉汀、加兰他敏和盐酸美金刚中的一种或多种；脑代谢激活剂选自吡拉西坦、甲磺酸双氢麦角碱、己酮可可碱、麦角溴烟酯中的一种或多种；非甾体抗炎药物优选为阿司匹林；自由基清除剂为退黑素、姜黄素、去铁敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎特和维生素C中的一种或多种；毒蕈碱受体激动剂为占诺美林。

4.如权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于水飞蓟宾的治疗对象为人或动物。

5.如权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于水飞蓟宾的人用给药量为0.1mg/kg·d~5mg/kg·d。

6.如权利要求5任一所述的用途，其特征在于水飞蓟宾的人用给药量为0.5mg/kg·d~3.5mg/kg·d。

7.如权利要求1-3任一所述的用途，其特征在于所述的药物为片剂、胶囊剂、缓释剂或混悬剂。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于所述的药物中每一制剂单位中含有水飞蓟宾的含量为0.1mg-200mg。

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