CN102718657A

CN102718657A - 一种异甜菊醇化合物及其制备与应用

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Publication number: CN102718657A
Application number: CN2012101926060A
Authority: CN
Inventors: 石浩; 吴婷婷
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2012-06-08
Filing date: 2012-06-08
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2032-06-08
Also published as: CN102718657B

Abstract

本发明公开了一种式（Ⅰ）所示的异甜菊醇化合物及其制备方法和在抑制A549肺癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、Bewo人绒毛膜癌细胞株或Hela人子宫颈癌细胞株活性中的应用，

式（Ⅰ）中，R₁为乙酰氧基或羟基，R₂为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基。

Description

一种异甜菊醇化合物及其制备与应用

（一）技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物——异甜菊醇化合物和该类化合物的制备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

（二）背景技术

恶性肿瘤是危害人们生命健康的重大疾病，据报道，全世界有4000多万人患恶性肿瘤，其中每年新增患者900多万、死亡700多万，我国年均癌症发病人数约180万～200万，死亡人数约140万～150万。目前恶性肿瘤发生与死亡还有日趋严重的趋势，有些地区已经成为人口死亡的首要原因。因此，开发新颖的抗肿瘤药物具有重要的意义。

由于从天然植物中提取的含有α-亚甲基环戊酮活性基团的二萜类化合物具有抗肿瘤活性，化合物分子中的α,β-不饱和酮结构片断是其活性中心，其作用机制是通过一个类似于迈克尔加成的反应，使活性中心与肿瘤细胞中的巯基酶相结合而发生作用。甜菊糖是从甜叶菊的叶子中提取的一类天然甜味剂，对自发性高血压大鼠和麻醉犬具有降血压作用；也可促进Ⅱ型糖尿病患者胰岛素的释放，从而具有降血糖作用，另外甜菊糖苷还具有抗心肌缺血损伤及抗菌抗炎的作用。异甜菊醇可由甜菊糖在酸性条件下水解得到，用酸水解甜菊糖苷时，在糖苷键水解的同时甜菊糖苷元发生Wagner–Meerwein重排，结构骨架由贝壳杉烯型二萜骨架转变成贝叶烷型二萜骨架。异甜菊醇有降低血糖、心肌保护、降低血压、抑制癌细胞生长及可用于Ⅱ型糖尿病的治疗的作用，通过对异甜菊醇分子进行结构改造，向其分子中引入α-亚甲基环戊酮活性基团，可增强其抗菌、抗肿瘤活性，获得新的抗肿瘤化合物。因此对异甜菊醇进行结构修饰，制备具有抗肿瘤活性的二萜化合物新药，具有非常重要的意义。

（三）发明内容

本发明目的是提供一类新的具有抗肿瘤活性的化合物--异甜菊醇化合物和该类化合物的制备方法，及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种式（I）所示的异甜菊醇化合物，

式（I）中，R₁为乙酰氧基或羟基，R₂为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基。

进一步，所述异甜菊醇化合物优选为下列之一：

本发明提供一种式（IX）所示制备式（I）所示化合物的中间体，

式（IX）所示化合物中的R₂为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基。

本发明还提供一种式（XI）所示制备式（I）所示化合物的中间体，

式（XI）所示化合物中的R₂为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基。

本发明还提供一种所述的异甜菊醇化合物的制备方法，所述的方法为：将化合物前体原料用有机溶剂溶解，在1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯（DBU）催化剂作用下，于60～90℃温度下连续反应8~24小时（优选80℃反应10小时），所述的前体原料为式（IX）所示化合物或式（XI）所示化合物；反应结束后将各自的反应液调节至中性后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层浓缩后进行硅胶柱层析，收集洗脱液用重结晶溶剂重结晶，分别得到式（I-A）或式（I-B）所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的异甜菊醇化合物；所述有机溶剂为吡啶、三乙胺或甲苯中的一种；

式（I-A）、式（I-B）所示化合物中的R₂均为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基。

进一步，所述DBU催化剂的体积用量以前体原料（即式（IX）所示化合物或式（XI）所示化合物）的物质的量计均为0.3～2mL/mmol前体原料（优选0.5mL/mmol）。

进一步，所述有机溶剂体积用量以前体原料（即式（IX）所示化合物或式（XI）所示化合物）的物质的量计均为2.5～10mL/mmol前体原料（优选5mL/mmol）。

进一步，所述反应液后处理的方法为：反应结束后，将各自的反应液加水稀释，用酸（优选质量浓度10%HCl水溶液）调节pH=7，再用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层用水洗涤后再用干燥剂（优选无水硫酸镁）干燥、过滤，取滤液浓缩至干，获得浓缩物，将浓缩物以体积比5~20∶1的石油醚与丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，TLC（展开剂为体积比3~10∶1的石油醚与丙酮混合液）跟踪收集Rf值为0.3~0.4时的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后再用石油醚重结晶，取晶体自然挥发干燥即制得式（I）所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的异甜菊醇化合物。

更进一步，所述的式（IX）所示化合物按如下方法制备：①将式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠溶于水中，室温搅拌16h，向反应体系中加入氢氧化钾，回流反应3h，冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸调节pH值至5，然后加入乙醚萃取，取上层有机相用水洗涤后以无水硫酸镁干燥，过滤，滤除干燥剂，滤液浓缩至干后再用甲醇重结晶，滤除母液，取晶体自然挥发干燥，获得式（III）所示化合物；所述式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠、氢氧化钾的质量比为1∶1.5∶4.17，所述水的体积用量以式（II）所示甜菊糖苷质量计为41.7mL/g；②将式(III)所示的甜菊醇溶于二氯甲烷a中，-5℃下缓慢滴加二氯甲烷b和间氯过氧苯甲酸（MCPBA）的混合溶液，室温下搅拌反应5h，滴加KI至反应液变红色，再用饱和硫代硫酸钠水溶液滴定至反应液变成白色后，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，获得水相a和有机相a，有机相a再用饱和食盐水洗涤，获得有机相b和水相b，有机相b再经水洗涤，无水硫酸钠干燥除去水分，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至干，得到式（IV）所示化合物；所述式(III)所示的甜菊醇与MCPBA的物质的量之比为1∶1~5（优选1∶1）；所述二氯甲烷总体积（二氯甲烷a和二氯甲烷b体积之和）用量以甜菊醇物质的量计为10~40mL/mmol，优选20mL/mmol（二氯甲烷a的体积用量能溶解甜菊醇即可）；③将式（IV）所示化合物与碳酸钾混合后溶于二甲基亚砜中，加入溴代烷烃，30~60℃下反应5~10h（优选40℃反应8h），反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物用石油醚重结晶，滤除母液，取晶体自然挥发干燥，获得式（V）所示化合物；所述式（IV）所示化合物与碳酸钾、溴代烷烃的物质的量之比为1∶1∶1～2（优选1∶1∶1.2），所述二甲基亚砜的体积用量以式（IV）所示化合物物质的量计为5～20mL/mmol（优选10mL/mmol），所述溴代烷烃中的烷烃基为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基；④将式(V)所示化合物溶于无水甲醇中，再加入质量浓度10%～98%（优选10%）H₂SO₄水溶液，40～80℃下反应4～16h（优选60℃下反应10h），调节反应液pH值至7，加水稀释后用氯仿萃取，下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以洗脱剂溶解，以石油醚∶丙酮体积比=3～5∶1为洗脱剂进行硅胶柱层析，TLC（展开剂为石油醚∶丙酮体积比=3∶1）跟踪收集含目标组分的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后得到式（VI）所示化合物；所述无水甲醇体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为10～30mL/mmol（优选18.75mL/mmol），所述硫酸水溶液的体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为1～10mL/mmol（优选2mL/mmol）；⑤将式（VI）所示化合物与乙醇钠混合，在20～50℃（优选30℃）下滴加质量浓度37%的甲醛水溶液，20～50℃反应4～16h（优选30℃反应10h）后，将反应液调节pH值至7后加水稀释，再用氯仿萃取，取下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以体积比1∶1的石油醚和丙酮混合液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.3时的化合物，即为式(VII)所示化合物；所述式（VI）所示化合物与乙醇钠中钠的物质的量之比为1∶10～30（优选1∶17.5），所述甲醛水溶液的体积用量以式（VI）所示化合物物质的量计为0.2～5mL/mmol（优选1.5mL/mmol）；⑥将式（VII）所示化合物溶于冰乙酸中，再滴加质量浓度10%HCl水溶液，在室温下反应8～12h（优选10h）后，将反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以体积比3∶1的石油醚和丙酮混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.4时的化合物，即为式（VIII）所示化合物；所述冰乙酸、HCl水溶液的体积用量以式（VII）所示化合物物质的量计分别为5～10mL/mmol（优选5mL/mmol）、0.1mL/mmol；⑦将式（VIII）所示化合物溶于二氯甲烷c中，在重铬酸钾吡啶盐（PDC）a作用下，在5～25℃搅拌2～12h（优选室温下反应5h），或将化合物（VIII）溶于甲苯，重铬酸钾吡啶盐（PDC）b作用下，60～90℃搅拌2～12h，将反应液用硅胶和乙酸乙酯的以质量体积比1∶2的混合液作为介质进行抽滤，获得滤液c和滤饼c，将滤饼c（即硅胶）用乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液d，合并滤液c和滤液d并浓缩至干，获得式（IX）所示化合物粗品；所述式（VIII）所示化合物与重铬酸钾吡啶盐a或重铬酸钾吡啶盐b的物质的量之比均为1∶2～10（优选1∶4），所述二氯甲烷c的体积用量以式（VIII）所示化合物物质的量计为10～50mL/mmol（优选30mL/mmol），所述甲苯的体积用量以式（VIII）所示化合物物质的量计分别为5～20mL/mmol（优选20mL/mmol）；

式（V）、（VI）、（VII）、（VIII）、（IX）中R₂相同且均为CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂C₆H₅、CH₂CH₂CH₂CH₃、CHCH₃CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

进一步，所述的式（XI）所示化合物按如下方法制备：（1）式(VII)所示的ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸酯（2mmol）与冰乙酸1～10mL和质量浓度10%HCl水溶液0.1mL在5～25℃反应2～8h后，得到化合物(X)；式(VII)所示化合物的制备方法同上所述；（2）(X)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸酯在PDC作用下，将16位羟基氧化成酮基，得到化合物(XI)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸酯。

本发明所述的式（XI）所示化合物制备方程式为：

式（X）、（XI）中R₂相同且均为CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂C₆H₅、CH₂CH₂CH₂CH₃、CHCH₃CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

更进一步，所述的式（XI）所示化合物按如下方法制备：1）将式(VII)所示化合物溶于冰乙酸中，再滴加质量浓度10%HCl水溶液，在5～25℃反应2～8h（优选室温反应4h）后，反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相，经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以体积比5∶2～5的石油醚和丙酮混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.3～0.5时的化合物，即得到式(X)所示化合物；所述冰乙酸、HCl水溶液的体积用量以式(VII)所示化合物物质的量计分别为1～10mL/mmol（优选2.5mL/mmol）、0.05mL/mmol；2）将式(X)所示化合物溶于二氯甲烷d中，在PDC作用下，室温搅拌反应5h，将反应液用硅胶与乙酸乙酯以质量体积比1∶2的混合液作为介质进行抽滤，获得滤液e和滤饼e，将滤饼e用乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液f，合并滤液e和滤液f并浓缩至干，即为式(XI)所示化合物粗品；所述式(X)所示化合物与PDC的物质的量之比为1∶2～10（优选1∶4），所述二氯甲烷d的体积用量以式(X)所示化合物物质的量计为10～50mL/mmol（优选30mL/mmol）。

本发明还提供所述的异甜菊醇化合物在抑制A549肺癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、Bewo人绒毛膜癌细胞株或Hela人子宫颈癌细胞株活性中的应用。

本发明所述有机相a和有机相b均为有机相，所述水相a和水相b均为水相，为便于区分不同步骤获得的物质不同而命名；本发明所述滤饼a~滤饼e均为滤饼，所述滤液a~滤液f均为滤液，为便于区分而命名；所述二氯甲烷a~二氯甲烷d均为二氯甲烷，为便于区分不同步骤加入二氯甲烷的量不同而命名。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种异甜菊醇化合物及其制备方法与应用，本发明异甜菊醇化合物提供了一种新的、有抗肿瘤活性的抗肿瘤药物，为新药筛选提供研究基础，具有重大应用前景；本发明异甜菊醇化合物制备流程简单，利于产业化生产。

（四）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸(IV)的制备

（1）12g甜菊糖苷(II)，18g高碘酸钠于500mL水中溶解，在室温下搅拌约16h后，向反应体系中加入50g氢氧化钾继续搅拌，并且油浴加热回流3h后，冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸调节pH至5.0左右，然后将反应液用90mL×3乙醚萃取，合并上层有机相并用100mL×2水洗涤，无水硫酸镁干燥，砂芯漏斗抽滤，旋蒸得白色固体，即为甜菊醇粗品，粗品用甲醇重结晶有白色针状晶体析出，滤除母液，取晶体自然挥发干燥，得式(III)所示的甜菊醇；（2）化合物(III)1.590g（5mmol）溶解于75mL的二氯甲烷中，在冰盐浴（-5℃）下，缓慢滴加25mL二氯甲烷和0.860g(5mmol)MCPBA混合溶液，1h后滴加完毕，撤掉冰盐浴，室温（25℃）搅拌5h后，滴加几滴KI，反应液变红，用饱和硫代硫酸钠滴定，直到反应液变成白色后，反应液用40mL×2饱和碳酸氢钠洗涤，获得水相a和有机相a，有机相a再用40mL×2饱和食盐水洗涤，获得水相b和有机相b，有机相b再用50mL×2的水洗涤，无水硫酸钠干燥除水，砂芯漏斗抽滤，滤液旋蒸至干，得到白色固体即化合物(IV)ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸。

实施例2ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸乙酯(V-1)的制备

将实施例1方法制备的化合物(IV)1.344g(4mmol)、1.104g(4mmol)K₂CO₃溶于40mLDMSO，加入4.8mmol溴乙烷，油浴40℃反应8h后，加入40mL水稀释后用30mL×3的乙酸乙酯萃取，合并上层有机相用50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥，砂芯漏斗抽滤，滤液旋蒸至干，得到黄色固体粗品，粗品加入少量石油醚洗涤2次，过滤、滤饼干燥得到白色固体，即为式(V-1)所示ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸乙酯：产率：83%，熔点：138-140℃.IR(cm^-1):3433,2961,2932,2900,2850,1724,1469,1448,1390,1366,1260,1227,1144,1100,1022,977,940,790;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.12(m,2H),2.95(d,J=4.5Hz,1H),2.80(d,J=4.5Hz,1H),2.33(s,1H),2.20(t,J=10.1Hz,2H),1.92-1.80(m,6H),1.78(m,1H),1.71(m,2H),1.64-1.59(m,1H),1.47(m,3H),1.39(dd,J=11.2,2.2Hz,1H),1.29(t,J=7.1Hz,3H),1.18(s,3H),1.08-0.96(m,3H),0.89(s,3H),0.87-0.80(m,1H).

实施例3ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸丙酯(V-2)的制备

以4.8mmol的1-溴-丙烷代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，以油浴30℃反应10h代替实施例2中的油浴40℃反应8h，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸丙酯(V-2)：产率：86%，熔点：114-115℃.IR(cm^-1):3438,2959,2848,1722,1468,1441,1391,1252,1225,1145,1099,949;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.06-3.95(m,2H),2.94(d,J=4.5Hz,1H),2.79(d,J=4.5Hz,1H),2.33(s,1H),2.20(d,J=11.2Hz,2H),1.92-1.74(m,7H),1.74-1.65(m,4H),1.62(m,1H),1.47(m,3H),1.40-1.36(m,1H),1.19(s,3H),1.06(dd,J=11.8,2.5Hz,1H),0.99(t,J=7.4Hz,3H),0.88(s,3H),0.83(dd,J=13.8,4.4Hz,1H).

实施例4ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸异丙酯(V-3)的制备

以4.8mmol的2-溴-丙烷代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，以油浴60℃反应5h代替实施例2中的油浴40℃反应8h，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸异丙酯(V-3)：产率：80%，熔点：118-120℃.IR(cm^-1):3468,2983,2849,1721,1468,1449,1376,1321,1261,1227,1158,1099,1022,937,801,769;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ5.00(m,1H),2.95(d,J=4.5Hz,1H),2.80(d,J=4.5Hz,1H),2.63(s,1H),2.35(s,1H),2.20(m,2H),1.92-1.80(m,6H),1.77(m,1H),1.64-1.59(m,2H),1.46(m,3H),1.39(dd,J=7.8,3.5Hz,1H),1.26(d,J=6.5Hz,3H),1.24(d,J=6.2Hz,3H),1.17(s,3H),1.05(dd,J=11.5,2.9Hz,1H),1.01-0.94(m,2H),0.91(s,3H),0.87-0.79(m,1H).

实施例5ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸苄酯(V-4)的制备

以4mmol苄溴代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，以20mL DMSO代替实施例2中的40mLDMSO，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸苄酯(V-4)：产率：78%，熔点：64-65℃.IR(cm^-1):3538,3088,3067,3033,2996,2863,1728,1639,1496,1449,1364,1322,1221,1151,1101,1022,941,798,723,689;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.41-7.32(m,5H),5.16(d,J=12.3Hz,1H),5.05(d,J=12.4Hz,1H),2.94(d,J=4.5Hz,1H),2.79(d,J=4.5Hz,1H),2.32(s,1H),2.25-2.12(m,2H),1.86(m,4H),1.79(m,2H),1.74(t,J=4.9Hz,1H),1.71-1.68(m,1H),1.67(s,1H),1.64-1.57(m,2H),1.49-1.41(m,3H),1.35(dd,J=11.3,2.1Hz,1H),1.21(s,3H),1.09-0.94(m,3H),0.85(dd,J=13.5,3.5Hz,1H),0.80(s,3H).

实施例6ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸正丁酯(V-5)的制备

以8mmol的1-溴-丁烷代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，以80mLDMSO代替实施例2中的40mL DMSO，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸正丁酯(V-5)：产率：82%，熔点：90-94℃.IR(cm^-1):3459,2950,2847,1723,1466,1452,1247,1225,1145,1099,1021,939,770;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.12-4.00(m,2H),2.95(d,J=4.5Hz,1H),2.80(d,J=4.5Hz,1H),2.33(s,1H),2.23-2.17(m,2H),1.92-1.78(m,7H),1.76(t,J=5.1Hz,1H),1.74-1.70(m,1H),1.64(m,5H),1.51-1.45(m,3H),1.27(m,1H),1.18(s,3H),1.06(dd,J=11.9,2.4Hz,1H),1.03-0.99(m,1H),0.96(t,J=7.4Hz,3H),0.88(s,3H),0.83(dd,J=13.4,4.9Hz,1H).

实施例7ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸仲丁酯(V-6)的制备

以8mmol的2-溴-丁烷代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸仲丁酯(V-6)：产率：86%，熔点：56℃.IR(cm^-1):3470,3935,2848,1720,1468,1444,1378,1322,1226,1155,1123,1102,923,769;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.89-4.81(m,1H),2.95(d,J=4.5Hz,1H),2.80(d,J=4.5Hz,1H),2.34(d,J=3.6Hz,1H),2.22(m,1H),1.93-1.81(m,6H),1.78(m,1H),1.73(m,2H),1.70-1.62(m,2H),1.58(s,3H),1.47(m,3H),1.39(d,J=11.2Hz,1H),1.27(d,J=2.1Hz,3H),1.19(t,J=4.8Hz,3H),1.08-103(m,1H),0.99-0.94(m,3H),0.93(s,3H),0.88-0.81(m,1H).

实施例8ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸异丁酯(V-7)的制备

以4.8mmol异丁基溴代替实施例2中的4.8mmol溴乙烷，其他操作同实施例2，获得ent-13-羟基-16α,17-环氧-贝壳杉烷-19酸异丁酯(V-7)：产率：83%，熔点：142-144℃.IR(cm^-1):3470,2947,2847,1724,1468,1447,1365,1247,1226,1145,1105,1022,940,919,800,769;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.83(m,2H),2.95(d,J=4.5Hz,1H),2.80(d,J=4.5Hz,1H),2.33(s,1H),2.20(d,J=11.1Hz,2H),1.96(m,1H),1.93-1.81(m,6H),1.77(m,1H),1.71(m,2H),1.65-1.60(m,2H),1.47(m,3H),1.39(dd,J=11.2,2.2Hz,1H),1.20(s,3H),1.07(dd,J=11.8,2.5Hz,1H),0.99(d,J=2.9Hz,3H),0.98(d,J=2.9Hz,3H),0.88(s,3H),0.86-0.81(m,1H).

实施例9ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸乙酯(VI-1)的制备

将实施例2方法制备的化合物(V-1)4mmol溶解于75mL无水甲醇中，加入8mL的质量浓度10%H₂SO₄水溶液，油浴60℃反应10h后，用饱和碳酸氢钠调节pH=7，反应液分别加入40mL水稀释后用30mL×3的氯仿萃取，合并上层有机相并用50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥除水，砂芯漏斗抽滤，滤液旋蒸至干，得到黄色油状物（浓缩物），将浓缩物以石油醚∶丙酮体积比=4∶1为洗脱剂进行硅胶柱层析，根据TLC（展开剂为石油醚∶丙酮体积比=3∶1）跟踪收集含目标组分的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后得到纯品化合物，即为式(VI-1)所示的ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸乙酯，产率：65%，油状物。IR(cm^-1):3491,2939,2837,1728,1463,1381,1320,1243,1227,1183,1127,1083,1029,963;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.10(dd,J=7.1,2.0Hz,2H),3.64(d,J=11.4Hz,1H),3.52(d,J=11.3Hz,1H),2.67(dd,J=18.8,3.8Hz,1H),2.19(d,J=13.2Hz,1H),1.90(s,1H),1.87-1.76(m,5H),1.75-1.67(m,3H),1.53(m,1H),1.48-1.35(m,2H),1.31(dd,J=11.5,3.8Hz,1H),1.26(t,J=2.7Hz,3H),1.19(s,3H),1.16-1.11(m,1H),1.02(m,1H),0.88(m,2H),0.73(s,3H).

实施例10ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸丙酯(VI-2)的制备

以实施例3方法制备的化合物(V-2)代替实施例9中的化合物(V-1)，以4mL的质量浓度98%H₂SO₄水溶液代替实施例9中的8mL质量浓度10%H₂SO₄水溶液，石油醚∶丙酮体积比=5∶1为洗脱剂代替实施例9中的石油醚∶丙酮体积比=4∶1为洗脱剂，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸丙酯(VI-2)：产率：70%，熔点：69-70℃。IR(cm^-1):3500,2944,2847,1726,1463,1384,1319,1257,1226,1160,1124,1084,1030,949;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.14(q,J=7.2Hz,2H),4.05-3.97(m,2H),2.68(dd,J=18.8,3.8Hz,1H),2.21(dd,J=12.7,5.0Hz,2H),1.96-1.90(m,1H),1.90-1.83(m,3H),1.80(m,3H),1.76-1.69(m,3H),1.68-1.65(m,2H),1.52(m,1H),1.48-1.43(m,1H),1.39(m,1H),1.32(dd,J=11.6,3.8Hz,1H),1.21(s,3H),1.17-1.13(m,1H),1.04(dd,J=13.5,4.2Hz,1H),0.98(t,J=7.4Hz,3H),0.92(m,1H),0.73(s,3H).

实施例11ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸异丙酯(VI-3)的制备

以实施例4方法制备的化合物(V-3)代替实施例9中的化合物(V-1)，以40℃下反应16h代替实施例9中的80℃下反应4h，石油醚∶丙酮体积比=5∶1为洗脱剂代替实施例9中的石油醚∶丙酮体积比=4∶1为洗脱剂，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸异丙酯(VI-3)：产率：68%，熔点：91-92℃。IR(cm^-1):3486,2937,2847,1734,1466,1376,1241,1226,1185,1108,936,848;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.99(m,1H),3.64(dd,J=11.1,3.6Hz,1H),3.54(dd,J=11.4,4.9Hz,1H),3.39(s,1H),2.68(dd,J=18.8,3.8Hz,1H),2.22(dd,J=9.0,3.8Hz,1H),1.95-1.90(m,1H),1.87-1.77(m,6H),1.72(m,3H),1.68-1.63(m,1H),1.52(m,1H),1.47-1.42(m,1H),1.37(m,1H),1.32(dd,J=11.5,3.8Hz,1H),1.24(d,J=2.9Hz,3H),1.23(d,J=3.0Hz,3H),1.19(s,3H),0.94(m,1H),0.76(s,3H).

实施例12ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸苄酯(VI-4)的制备

以实施例5方法制备的化合物(V-4)代替实施例9中的化合物(V-1)，以80℃下反应4h代替实施例9中的60℃反应10h，石油醚∶丙酮体积比=3∶1为洗脱剂代替实施例9中的石油醚∶丙酮体积比=4∶1为洗脱剂，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸苄酯(VI-4)：产率：55%，熔点：156-157℃。IR(cm^-1):3441,3090,3062,3035,2932,2847,1727,1495,1455,1388,1257,1125,1175,1084,1056,1036,963,741,695,607;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.40-7.32(m,5H),5.13(d,J=12.3,1H),5.07(d,J=12.3,1H),3.58(m,2H),2.60(dd,J=18.9,3.8Hz,1H),2.22(t,J=12.4Hz,2H),1.92(d,J=11.4Hz,1H),1.86(d,J=18.1Hz,2H),1.79(m,3H),1.70(t,J=12.4Hz,3H),1.52(dd,J=13.8,3.8Hz,1H),1.45(m,2H),1.37(m,1H),1.30(dd,J=11.6,3.8Hz,1H),1.23(s,3H),1.15(dd,J=12.1,2.0Hz,1H),1.04(m,1H),0.92(m,1H),0.62(s,3H).

实施例13ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸正丁酯(VI-5)的制备

以实施例6方法制备的化合物(V-5)代替实施例9中的化合物(V-1)，以40mL无水甲醇代替实施例9中的75mL无水甲醇，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸正丁酯(VI-5)：产率：68%，熔点：82℃。IR(cm^-1):3443,2943,2874,1726,1449,1390,1241,1226,1182,1151,1083,973,951,848,773;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.08-3.98(m,2H),3.64(dd,J=11.3,6.3Hz,1H),3.52(d,J=8.8Hz,1H),2.67(dd,J=18.9,3.9Hz,1H),2.24(m,1H),1.92(d,J=11.6Hz,1H),1.89-1.77(m,5H),1.77-1.66(m,5H),1.66-1.58(m,2H),1.52(m,1H),1.48-1.44(m,1H),1.41(dd,J=14.9,7.4Hz,3H),1.31(dd,J=11.5,3.8Hz,1H),1.20(s,3H),1.14(dd,J=12.0,2.0Hz,1H),1.02(m,1H),0.95(t,J=7.4Hz,3H),0.93-0.88(m,1H),0.72(s,3H).

实施例14ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸仲丁酯(VI-6)的制备

以实施例7方法制备的化合物(V-6)代替实施例9中的化合物(V-1)，以120mL无水甲醇代替实施例9中的75mL无水甲醇，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸仲丁酯(VI-6)：产率：68%，熔点：58-60℃。IR(cm^-1):3498,2942,2846,1733,1451,1376,1242,1225,1184,1153,1119,1087,1056,1034,970,873,734,708;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.83(dd,J=12.4,6.3Hz,1H),3.65(dd,J=11.4,7.6Hz,1H),3.53(dd,J=11.4,5.0Hz,1H),2.69(dd,J=18.8,3.8Hz,1H),2.25(dd,J=7.6,5.1Hz,1H),2.21(d,J=13.6Hz,1H),1.92(d,J=13.8Hz,1H),1.90-1.83(m,3H),1.83-1.76(m,3H),1.72(dd,J=18.7,7.7Hz,3H),1.62(s,3H),1.53(m,2H),1.48-1.35(m,2H),1.32(dd,J=11.5,3.8Hz,1H),1.26(dd,J=8.9,4.3Hz,2H),1.21(d,J=2.7Hz,3H),1.15(dd,J=11.9,1.8Hz,1H),1.00(m,1H),0.93(t,J=7.4Hz,3H),0.77(s,3H).

实施例15ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸异丁酯(VI-7)的制备

以实施例8方法制备的化合物(V-7)代替实施例9中的化合物(V-1)，其他操作同实施例9，获得ent-13-羟甲基-16-氧-19-贝叶烷酸异丁酯(VI-7)：柱层析（石油醚∶丙酮=4∶1），产率：65%，熔点：107-108℃。IR(cm^-1):3475,2954,2846,1727,1463,1382,1369,1257,1226,1157,1126,1084,996;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.87(dd,J=10.7,6.5Hz,1H),3.78(dd,J=10.7,6.3Hz,1H),3.65(dd,J=11.4,7.6Hz,1H),3.54(dd,J=11.4,5.1Hz,1H),2.68(dd,J=18.8,3.8Hz,1H),2.25-2.19(m,2H),1.99-1.91(m,2H),1.90-1.84(m,3H),1.83-1.76(m,3H),1.76-1.69(m,3H),1.53(m,1H),1.49-1.42(m,1H),1.42-1.35(m,1H),1.32(dd,J=11.5,3.8Hz,1H),1.22(s,3H),1.16(dd,J=11.9,2.0Hz,1H),1.04(m,1H),0.98(d,J=1.4Hz,3H),0.97(d,J=1.4Hz,3H),0.92(dd,J=13.3,4.3Hz,1H),0.73(s,3H).

实施例16ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(VII-1)的制备

将0.8g Na加入40mL的无水乙醇中，室温搅拌直到Na完全溶解后，加入2mmol实施例9方法制备的化合物(VI-1)，油浴30℃，滴加质量浓度37%的甲醛水溶液3mL，保温反应10h后，用稀盐酸调节反应液pH=7后加入40mL水稀释并用30mL×3的氯仿萃取，合并下层有机相用50mL×3的水洗涤，无水硫酸钠干燥除水，砂芯漏斗抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至无液体溜出，得到黄色油状物，制备薄层层析分离（展开剂：石油醚∶丙酮=1∶1（体积比）），收集Rf值为0.3时的化合物，得到纯品化合物，即式(VII-1)所示ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(VII-1)：产率：63%，油状物。IR(cm^-1):3457,2923,2849,1714,1463,1375,1259,1155,1038,719,667;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.12(m,3H),4.02-3.96(m,2H),3.51(d,J=9.9Hz,1H),3.44(d,J=10.3Hz,1H),2.10(d,J=9.7Hz,2H),1.88-1.79(m,3H),1.75(d,J=13.3Hz,2H),1.63(dd,J=14.2,3.0Hz,2H),1.43(dd,J=10.3,3.7Hz,1H),1.38(dd,J=11.6,2.1Hz,2H),1.26(t,J=2.7Hz,3H),1.24-1.19(m,2H),1.17(s,3H),1.12-1.05(m,3H),1.03-0.96(m,2H),0.80(s,3H).

实施例17ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(VII-2)的制备

以实施例10方法制备的化合物(VI-2)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以20℃反应16h代替实施例16中的30℃反应10h，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(VII-2)：产率：65%，油状物。IR(cm^-1):3678,2936,2854,1717,1469,1370,1325,1245,1187,1113,1087,948;¹H-NMR(500MHz,DMSO)δ4.32(t,J=4.6Hz,1H),4.20(t,J=5.3Hz,1H),4.11(d,J=4.4Hz,1H),3.90(d,J=3.3Hz,1H),3.39(dd,J=6.9,4.0Hz,2H),3.13(d,J=5.7Hz,1H),2.03(d,J=13.0Hz,1H),1.85-1.72(m,5H),1.66(d,J=13.3Hz,3H),1.59(dd,J=13.9,6.9Hz,4H),1.52-1.44(m,2H),1.38(dd,J=11.8,1.9Hz,4H),1.11(s,3H),1.07(d,J=3.4Hz,1H),1.02-0.96(m,2H),0.92(t,J=5.4Hz,3H),0.89-0.82(m,2H),0.76(d,J=10.5Hz,1H),0.70(s,3H).

实施例18ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(VII-3)的制备

以实施例11方法制备的化合物(VI-3)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以0.46g Na代替实施例16中的0.8gNa，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(VII-3)：产率：71%，熔点：82-84℃。IR(cm^-1):3673,2934,2850,1715,1466,1386,1321,1240,1184,1109,1083,937,853;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.97(m,1H),3.98(d,J=5.0Hz,1H),3.96(d,J=4.9Hz,1H),3.51(t,J=10.1Hz,2H),3.42(d,J=10.4Hz,1H),2.16(d,J=13.4Hz,1H),2.08(d,J=3.6Hz,1H),1.81(m,3H),1.73(s,3H),1.69(dd,J=8.6,4.9Hz,2H),1.62(m,1H),1.45-1.37(m,2H),1.24(d,J=4.8Hz,3H),1.23(d,J=4.7Hz,3H),1.19(s,1H),1.15(s,3H),1.08-0.94(m,4H),0.89(m,1H),0.82(s,3H).

实施例19ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(VII-4)的制备

以实施例12方法制备的化合物(VI-4)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以50℃反应4h代替实施例16中的30℃反应10h，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(VII-4)：产率：67%，熔点：134-136℃。IR(cm^-1):3402,3093,3064,3033,2929,2850,1716,1633,1455,1385,1230,1146,1097,1046,956,756,698;¹H-NMR(500MHz,DMSO)δ7.39-7.35(m,5H),5.02(d,J=1.7Hz,2H),4.30(t,J=4.6Hz,1H),4.20(t,J=5.4Hz,1H),4.10(d,J=4.4Hz,1H),4.03(q,J=7.1Hz,2H),2.06(d,J=11.2Hz,1H),1.80-1.69(m,5H),1.67-1.59(m,4H),1.56(m,2H),1.50-1.42(m,2H),1.12(s,3H),1.01-0.97(m,1H),0.89-0.81(m,3H),0.66(s,3H).

实施例20ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(VII-5)的制备

以实施例13方法制备的化合物(VI-5)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以1.38g Na代替实施例16中的0.8gNa，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(VII-5)：产率：78%，油状物。IR(cm^-1):3764,3421,2931,2857,1717,1643,1464,1368,1237,1151,1122,1069,932,771;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.04(m,2H),4.00-3.95(m,2H),3.52(t,J=10.2Hz,2H),3.45(d,J=10.3Hz,1H),2.20-2.15(m,2H),2.10(m,2H),1.86-1.78(m,2H),1.75(dd,J=8.4,5.1Hz,2H),1.68(d,J=3.5Hz,1H),1.65-1.59(m,3H),1.42(m,3H),1.39-1.36(m,1H),1.23-1.20(m,1H),1.16(s,3H),1.12-0.98(m,4H),0.95(t,J=7.4Hz,3H),0.90(m,2H),0.79(s,3H).

实施例21ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(VII-6)的制备

以实施例14方法制备的化合物(VI-6)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以0.4mL甲醛水溶液代替实施例16中的3mL甲醛水溶液，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(VII-6)：产率：64%，油状物。IR(cm^-1):3761,3455,2973,2857,1716,1634,1459,1381,1234,1149,1120,1026,628;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.82(m,1H),4.32(d,J=6.5,1H),4.30(d,J=3.0,1H),3.51(t,J=10.1Hz,2H),3.43(d,J=10.2Hz,1H),2.07(s,3H),1.83(d,J=12.6Hz,3H),1.74-1.65(m,4H),1.63(m,4H),1.44(t,J=7.5Hz,2H),1.25(d,J=2.8Hz,1H),1.21(d,J=2.7Hz,3H),1.15(s,3H),1.08(m,2H),0.99(t,J=7.2Hz,3H),0.90-0.81(m,2H),0.79(s,3H).

实施例22ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(VII-7)的制备

以实施例15方法制备的化合物(VI-7)代替实施例16中的化合物(VI-1)，以10mL甲醛水溶液代替实施例16中的3mL甲醛水溶液，其他操作同实施例16，获得ent-15β-羟甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(VII-7)：产率：61%，油状物。IR(cm^-1):3747,3408,2958,2845,1719,1468,1383,1325,1228,1150,1122,1096,1047,918,773,727;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ3.95(s,2H),3.81(m,3H),3.46(dd,J=18.9,10.3Hz,2H),3.37(d,J=10.6Hz,1H),2.00-1.91(m,2H),1.85-1.78(m,2H),1.71(m,4H),1.60(d,J=14.1Hz,1H),1.42(d,J=11.5Hz,2H),1.27(d,J=2.3Hz,1H),1.17(s,3H),1.07(d,J=11.9Hz,2H),1.04-0.99(m,2H),0.97(d,J=2.1Hz,3H),0.96(d,J=2.1Hz,3H),0.89(m,1H),0.83(m,1H),0.78(s,3H).

实施例23ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯(VIII-1)的制备

实施例16方法制备的2mmol化合物(VII-1)溶于10mL冰乙酸，滴加0.2mL质量浓度10%HCl水溶液，室温搅拌反应10h后，反应液分别加入30mL水稀释后用30mL×3的乙酸乙酯萃取，合并上层有机相用50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥除水，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至无液体溜出，得到黄色油状物，制备薄层层析分离（展开剂：石油醚∶丙酮=3∶1（体积比）），收集Rf值为0.4时的化合物，得到式(VIII-1)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯(VIII-1)：产率：76%，油状物。IR(cm^-1):3425,2937,2842,1735,1716,1644,1455,1385,1366,1243,1179,1151,1030,977;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.35(dd,J=10.8,5.4Hz,1H),4.10(dd,J=9.6,4.6Hz,2H),3.98-3.93(m,2H),3.83(d,J=11.0Hz,1H),3.75(d,J=4.6Hz,1H),2.28-2.15(m,3H),2.10(s,3H),2.07(s,3H),1.90-1.78(m,4H),1.78-1.70(m,2H),1.67(m,3H),1-47(dd,J=11.8,2.6Hz,1H),1.42(m,1H),1.26(t,J=2.7Hz,3H),1.16(s,3H),1.13-1.05(m,2H),1.02(m,1H),0.97(m,2H),0.91-0.84(m,1H),0.78(s,3H).

实施例24ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(VIII-2)的制备

以实施例17方法制备的化合物(VII-2)代替实施例23中的化合物(VII-1)，以20mL冰乙酸代替实施例23中的10mL冰乙酸，以室温下反应8h代替实施例40中的室温下反应10h，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(VIII-2)：产率：82%，油状物。IR(cm^-1):3503,2933,2851,1736,1718,1467,1386,1363,1241,1179,1152,1036,981,850,774;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.32(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),4.01–3.92(m,4H),3.82(d,J=11.0Hz,1H),3.75(m,1H),2.19(d,J=10.5Hz,2H),2.10(s,3H),2.06(s,3H),1.84(m,4H),1.67(dd,J=14.1,7.0Hz,5H),1.62(s,3H),1.48(d,J=14.4Hz,1H),1.17(s,3H),1.14-1.02(m,4H),0.96(t,J=7.4Hz,3H),0.88(m,2H),0.78(s,3H).

实施例25ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(VIII-3)的制备

以实施例18方法制备的化合物(VII-3)代替实施例23中的化合物(VII-1)，以室温下反应12h代替实施例23中的室温下反应10h，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(VIII-3)：产率：81%，油状物。IR(cm^-1):3456,2942,2845,1738,1717,1465,1385,1366,1239,1157,1108,1027,850,774;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ5.01-4.93(m,1H),4.37(dd,J=10.8,5.1Hz,1H),3.95(t,J=9.9Hz,2H),3.83(d,J=11.0Hz,1H),3.77(d,J=4.5Hz,1H),2.24(m,1H),2.15(s,1H),2.11(s,3H),2.07(s,3H),1.90-1.85(m,1H),1.84-1.76(m,3H),1.76-1.65(m,5H),1.48(dd,J=11.8,2.5Hz,1H),1.42(m,1H),1.24(d,J=6.4Hz,3H),1.22(d,J=6.3Hz,3H),1.15(s,3H),1.08(m,3H),1.01-0.94(m,2H),0.89(m,1H),0.81(s,3H).

实施例26ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(VIII-4)的制备

以实施例19方法制备的化合物(VII-4)代替实施例23中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(VIII-4)：产率：84％，油状物。IR(cm^-1):3463,3092,3064,3037,2938,2849,1738,1718,1466,1386,1364,1241,1158,1110,1021,983,753,695,607;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.52-7.27(m,5H),5.09(d,J=12.3Hz,1H),5.04(d,J=12.3Hz,1H),3.96(dd,J=14.4,7.1Hz,2H),3.85-3.78(m,2H),3.73(dd,J=8.5,4.1Hz,1H),2.24-2.14(m,2H),2.09(d,J=7.0Hz,3H),2.06(d,J=3.0Hz,3H),1.79(m,3H),1.73-1.62(m,4H),1.45(dd,J=11.7,2.6Hz,2H),1.21(t,J=3.4Hz,2H),1.18(s,3H),1.10-0.98(m,3H),0.95(d,J=11.8Hz,1H),0.86(m,1H),0.72(s,3H).

实施例27ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(VIII-5)的制备

以实施例20方法制备的化合物(VII-5)代替实施例23中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(VIII-5)：产率：86%，油状物。IR(cm^-1):3478,2955,2851,1740,1720,1468,1386,1365,1239,1178,1151,1028,981,852,773,606;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.31(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),4.05-4.00(m,2H),3.96(dd,J=10.4,7.0Hz,2H),3.82(d,J=11.0Hz,1H),3.75(d,J=4.1Hz,1H),2.25-2.15(m,1H),2.10(d,J=2.9Hz,3H),2.07(d,J=3.2Hz,3H),1.99(s,1H),1.91-1.80(m,3H),1.77-1.66(m,5H),1.62-1.57(m,2H),1.48(dd,J=11.8,2.6Hz,1H),1.40(m,3H),1.16(s,3H),1.10-0.97(m,5H),0.93(t,J=7.4Hz,3H),0.86(m,1H),0.78(s,3H).

实施例28ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(VIII-6)的制备

以实施例21方法制备的化合物(VII-6)代替实施例23中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(VIII-6)：产率：88%，油状物。IR(cm^-1):3479,2942,2850,1741,1715,1463,1385,1369,1237,1181,1160,1094,1031,982,931,773,606;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.80(dd,J=12.4,6.2Hz,1H),4.34(m,1H),3.97(d,J=5.6Hz,1H),3.92(d,J=11.4Hz,1H),3.83(t,J=10.4Hz,1H),3.76(dd,J=9.3,4.6Hz,1H),3.47(m,1H),2.20(m,2H),2.09(s,3H),2.07(d,J=3.1Hz,3H),2.02-1.92(m,1H),1.91-1.73(m,5H),1.72-1.58(m,6H),1.56-1.50(m,1H),1.48(dd,J=11.7,2.4Hz,1H),1.45-1.37(m,1H),1.19(s,J3H),1.16(d,J=2.7Hz,3H),1.13-1.04(m,2H),1.02-0.94(m,2H),0.90(t,J=7.4Hz,3H),0.81(s,3H).

实施例29ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(VIII-7)的制备

以实施例22方法制备的化合物(VII-7)代替实施例23中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例23，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(VIII-7)：产率：84%，油状物。IR(cm^-1):3481,2953,2864,1745,1717,1468,1388,1374,1239,1184,1165,1097,1033,988,770;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.30(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),3.98(d,J=9.8Hz,1H),3.94(d,J=11.0Hz,1H),3.88-3.83(m,2H),3.82(d,J=6.3Hz,1H),3.75(d,J=4.3Hz,1H),2.22(dd,J=7.7,4.9Hz,1H),2.17(d,J=13.4Hz,1H),2.09(s,3H),2.05(s,3H),1.92(d,J=6.7Hz,1H),1.87-1.78(m,3H),1.73(m,2H),1.68-1.65(m,2H),1.47(dd,J=11.8,2.5Hz,1H),1.42(m,1H),1.20(dd,J=8.9,5.1Hz,2H),1.16(s,3H),1.13-0.98(m,4H),0.95(d,J=1.2Hz,3H),0.93(d,J=1.2Hz,3H),0.91-0.81(m,2H),0.76(s,3H).

实施例30ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯(IX-1)的制备

以实施例23方法制备的1mmol化合物(VIII-1)溶于30mL的二氯甲烷，加入1.504g(4mmol)PDC，25℃搅拌5h后，在300-400目的硅胶10g中加入乙酸乙酯20mL，拌成稠状，倒入砂芯漏斗中，再把反应液倒入其上，抽滤，获得滤饼c和滤液c，将滤饼c（即硅胶）用20mL×2乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液d，合并滤液c和滤液d并旋蒸浓缩至干，得到式(IX-1)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例31ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(IX-2)的制备

以实施例24方法制备的化合物(VIII-2)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，以10mL的二氯甲烷代替实施例30中的30mL的二氯甲烷，以2mmol PDC代替实施例30中的4mmol PDC，以5℃搅拌12h代替实施例30中的25℃搅拌5h，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(IX-2)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例32ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(IX-3)的制备

以实施例25方法制备的化合物(VIII-3)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，以50mL的二氯甲烷代替实施例30中的30mL的二氯甲烷，以10mmol PDC代替实施例30中的4mmol PDC，以25℃搅拌2h代替实施例30中的25℃搅拌5h，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(IX-3)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例33ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(IX-4)的制备

以实施例26方法制备的化合物(VIII-4)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，以5mL的甲苯代替实施例30中的30mL的二氯甲烷，以2mmol PDC代替实施例30中的4mmol PDC，以90℃搅拌2h代替实施例30中的25℃搅拌5h，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(IX-4)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例34ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(IX-5)的制备

以实施例27方法制备的化合物(VIII-5)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，以20mL的甲苯代替实施例30中的30mL的二氯甲烷，以10mmolPDC代替实施例30中的4mmolPDC，以60℃搅拌12h代替实施例30中的25℃搅拌5h，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(IX-5)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例35ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(IX-6)的制备

以实施例28方法制备的化合物(VIII-6)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(IX-6)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例36ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(IX-7)的制备

以实施例29方法制备的化合物(VIII-7)代替实施例30中的化合物(VIII-1)，其他操作同实施例30，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(IX-7)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例37：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(X-1)的制备

将实施例16方法制备的2mmol化合物（VII-1）溶解于5mL冰乙酸，滴加0.1mL质量浓度10%HCl水溶液，25℃搅拌反应4h后，反应液分别加入30mL水后用30mL×3的乙酸乙酯萃取，合并上层有机相用50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸浓缩至无液体溜出，得到黄色油状物，制备薄层层析分离（展开剂：石油醚∶丙酮=5∶2（体积比）），收集Rf值为0.3时的化合物，得到式(X-1)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(X-1)：产率：58%，油状物。IR(cm^-1):3396,2956,2921,2869,2357,1737,1716,1468,1381,1367,1238,1220,1179,1149,1047,1033,988;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.36(dd,J=10.8,5.4Hz,1H),4.10(q,J=7.1Hz,2H),3.98(dd,J=13.7,6.7Hz,1H),3.86(m,1H),3.52(d,J=10.2Hz,1H),3.43(d,J=10.3Hz,1H),2.26-2.20(m,1H),2.18(s,3H),1.85-1.77(m,6H),1.70(m,3H),1.48-1.37(m,3H),1.29(t,J=2.7Hz,3H),1.17(s,3H),1.10-1.05(m,2H),1.01(dd,J=13.4,4.1Hz,1H),0.90(m,3H),0.79(s,3H).

实施例38：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(X-2)的制备：

以实施例17方法制备的化合物(VII-2)代替实施例37中的化合物(VII-1)，以5℃反应8h代替实施例37中25℃反应4h，以2mL冰乙酸代替实施例37中的5mL冰乙酸，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(X-2)产率：62%，油状物。IR(cm^-1):3436,2928,2853,2366,1718,1467,1384,1372,1326,1248,1178,1150,1039,980,945;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.32(dd,J=10.8,5.2Hz,1H),4.02-3.94(m,4H),3.85(d,J=5.5Hz,1H),3.65(s,1H),2.14(d,J=10.8Hz,2H),2.06(s,3H),1.86(m,4H),1.69(dd,J=14.5,7.4Hz,5H),1.65(s,3H),1.49(m,1H),1.18(s,3H),1.15-1.06(m,4H),0.98(t,J=5.4Hz,3H),0.92(m,2H),0.79(s,3H).

实施例39：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(X-3)的制备：

以实施例18方法制备的化合物(VII-3)代替实施例37中的化合物(VII-1)，以25℃反应2h代替实施例37中25℃反应4h，以20mL冰乙酸代替实施例37中的5mL冰乙酸，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(X-3)：产率：61%，油状物。IR(cm^-1):3478,2935,2845,2348,1738,1716,1639,1458,1387,1365,1325,1242,1181,1157,1110,1038,855;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.98(m,1H),4.38(dd,J=10.7,5.1Hz,1H),3.98(d,J=11.0Hz,1H),3.87(d,J=10.9Hz,1H),3.52(d,J=7.1Hz,1H),3.44(d,J=10.3Hz,1H),2.23(m,1H),2.08(s,3H),1.90(d,J=12.4Hz,1H),1.82(m,2H),1.76(s,1H),1.71-1.62(m,6H),1.46(dd,J=11.8,2.6Hz,1H),1.39(dd,J=11.8,2.6Hz,1H),1.24(d,J=4.7Hz,3H),1.23(d,J=4.7Hz,3H),1.16(s,3H),1.10-1.05(m,2H),1.04-1.00(m,1H),0.96(m,1H),0.93-0.86(m,2H),0.83(s,3H).

实施例40：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(X-4)的制备：

以实施例19方法制备的化合物(VII-4)代替实施例37中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(X-4)：产率：65％，油状物。IR(cm^-1):3423,3096,3077,3034,2958,2851,2357,1726,1716,1456,1384,1360,1238,1179,1146,1040,959,749,698;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.41-7.30(m,5H),5.11(d,J=12.1Hz,1H),5.05(d,J=12.2Hz,1H),4.00-3.95(m,1H),3.86(d,J=10.8Hz,1H),3.84-3.79(m,1H),3.51(d,J=10.3Hz,1H),3.41(d,J=10.3Hz,1H),2.22(s,1H),2.17-2.14(m,1H),2.07(s,3H),1.99(dd,J=9.4,4.6Hz,1H),1.90-1.84(m,1H),1.83-1.76(m,2H),1.72(dd,J=8.5,4.2Hz,2H),1.68-1.63(m,3H),1.57(m,1H),1.42(dd,J=11.8,2.3Hz,1H),1.37(dd,J=11.6,2.5Hz,1H),1.19(s,3H),1.10-1.07(m,1H),1.06-1.00(m,2H),0.90(m,2H),0.70(s,3H).

实施例41：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(X-5)的制备：

以实施例20方法制备的化合物(VII-5)代替实施例37中的化合物(VII-1)，收集Rf值为0.5时的化合物代替实施例37中收集Rf值为0.3时的化合物，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(X-5)：产率：64%，油状物。IR(cm^-1):3465,2942,2827,2360,1739,1719,1473,1389,1377,1329,1253,1181,1156,1043,981,854,776;¹H-NMR(500MHz,DMSO)δ4.03(d,J=7.1Hz,1H),3.95(m,2H),3.87(d,J=10.8Hz,1H),3.68(d,J=10.8Hz,1H),3.63(dd,J=8.7,4.1Hz,1H),3.59-3.56(m,1H),2.05-2.03(m,1H),2.01(d,J=3.3Hz,1H),1.99(s,3H),1.82(d,J=13.8Hz,1H),1.78-1.71(m,2H),1.65(m,3H),1.61-1.52(m,4H),1.49(dd,J=11.5,4.9Hz,1H),1.37(dd,J=14.7,7.5Hz,3H),1.31-1.22(m,2H),1.18(t,J=7.1Hz,1H),1.10(s,3H),1.02-0.96(m,2H),0.90(t,J=7.4Hz,3H),0.86-0.77(m,2H),0.69(s,3H).

实施例42：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(X-6)的制备：

以实施例21方法制备的化合物(VII-6)代替实施例37中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(X-6)：产率：71%，油状物。IR(cm^-1):3453,2932,2821,2354,1744,1723,1464,1385,1371,1251,1187,1159,1130,1059,982,773;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.85-4.77(m,1H),4.34(m,1H),3.96(d,J=11.6Hz,1H),3.84(dd,J=12.5,4.4Hz,1H),3.50(d,J=10.4Hz,1H),3.41(d,J=10.4Hz,1H),2.23(dd,J=9.3,5.1Hz,1H),2.17(m,1H),2.10(s,3H),1.91-1.78(m,4H),1.74(d,J=15.5Hz,2H),1.68(m,3H),1.64-1.58(m,1H),1.57-1.50(m,1H),1.42(m,2H),1.25(dd,J=7.6,2.4Hz,1H),1.21(s,3H),1.15(d,J=3.3Hz,3H),1.13-1.02(m,3H),1.02-0.93(m,2H),0.91(t,J=7.5Hz,3H),0.82(s,3H).

实施例43：ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(X-7)的制备：

以实施例22方法制备的化合物(VII-7)代替实施例37中的化合物(VII-1)，其他操作同实施例37，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16α-羟基-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(X-7)：产率：75%，熔点：135-137℃。IR(cm^-1):3442,2925,2878,2351,1741,1720,1471,1381,1368,1247,1182,1155,1126,1050,992,775;¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ4.32(dd,J=10.7,5.2Hz,1H),3.99(t,J=10.3Hz,1H),3.87(d,J=6.5Hz,1H),3.85(d,J=6.4Hz,1H),3.77(dd,J=10.7,6.4Hz,1H),3.52(dd,J=10.2,5.3Hz,1H),3.43(dd,J=10.2,3.9Hz,1H),2.25-2.16(m,2H),2.11(s,3H),1.94(m,1H),1.83(m,2H),1.76(d,J=14.1Hz,3H),1.70(dd,J=11.2,3.4Hz,2H),1.46-1.37(m,2H),1.2-1.20(m,1H),1.18(s,3H),1.15-0.99(m,4H),0.96(d,J=1.3Hz,3H),0.95(d,J=1.3Hz,3H),0.94-0.86(m,2H),0.79(s,3H).

实施例44：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(XI-1)的制备

将实施例37方法制备的1mmol化合物(X-1)溶于30mL的二氯甲烷，再加入1.504g(4mmol)PDC，25℃搅拌5h后，在300-400目的硅胶10g中加入乙酸乙酯20mL，拌成稠状，倒入砂芯漏斗中，再把反应液倒入其上，抽滤，获得滤液e和滤液e，将滤饼e（即硅胶）用20mL×2乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液f，合并滤液e和滤液f并旋蒸至干，得到式(XI-1)所示的ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例45：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(XI-2)的制备

以实施例38方法制备的化合物(X-2)代替实施例44中的化合物(X-1)，以10mL的二氯甲烷代替实施例44中30mL的二氯甲烷，以2mmol PDC代替实施例44中4mmol PDC，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(XI-2)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例46：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(XI-3)的制备

以实施例39方法制备的化合物(X-3)代替实施例44中的化合物(X-1)，以50mL的二氯甲烷代替实施例44中30mL的二氯甲烷，以10mmol PDC代替实施例44中4mmol PDC，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(XI-3)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例47：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(XI-4)的制备

以实施例40方法制备的化合物(X-4)代替实施例44中的化合物(X-1)，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(XI-4)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例48：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(XI-5)的制备

以实施例41方法制备的化合物(X-5)代替实施例44中的化合物(X-1)，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(XI-5)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例49：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(XI-6)的制备

以实施例42方法制备的化合物(X-6)代替实施例44中的化合物(X-1)，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(XI-6)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例50：ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(XI-7)的制备

以实施例43方法制备的化合物(X-7)代替实施例44中的化合物(X-1)，其他操作同实施例44，获得ent-15β-乙酰氧甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(XI-7)粗品，不经精制纯化，直接用于下一步反应。

实施例51：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯(I-1)的制备

称取实施例30方法所制备的1mmol化合物(IX-1)，溶解在5mL三乙胺中，搅拌下，再加入0.5mL DBU，油浴60℃，反应24h后，在反应液中加入40mL水，反应液用质量浓度10%HCl调节pH=7后用30mL×3的乙酸乙酯萃取，合并有机相，再用50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥除去水分，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至无液体溜出，得到黄色油状物（浓缩物），将浓缩物以少量洗脱剂溶解进行硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚∶丙酮=10∶1（体积比）），根据TLC（展开剂为石油醚∶丙酮=5∶1（体积比））跟踪收集Rf值为0.3~0.4时的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后得纯化合物，ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸乙酯(I-1)，产率：81%，熔点:113-135℃，IR(cm^-1):3450,2955,2937,2881,2853,2351,1734,1718,1634,1468,1450,1364,1230,1169,1151,1101,1029,944;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.12(s,1H),5.53(s,1H),4.19-4.08(m,4H),2.21(d,J=13.2Hz,1H),2.18-2.09(m,1H),2.06-2.03(m,1H),2.02(s,3H),1.82-1.72(m,3H),1.72-1.65(m,2H),1.62-1.51(m,3H),1.46-1.41(m,2H),1.36(dd,J=12.9,3.8Hz,1H),1.29(t,J=7.1Hz,3H),1.26(d,J=5.3Hz,1H),1.24(s,3H),1.23-1.19(m,1H),1.04(m,1H),0.88(m,1H),0.64(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ207.26,177.15,170.92,153.93,116.79,65.33,60.04,57.17,56.60,50.26,48.17,43.82,43.54,40.41,38.75,38.02,37.98,32.74,28.96,21.80,20.76,20.18,18.96,14.13,12.41;EI-MS(m/z):417[M+H]⁺.

实施例52：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(I-2)的制备

以实施例31方法所制备的化合物(IX-2)代替实施例51中的化合物(IX-1)，以2.5mL三乙胺代替实施例51中5mL三乙胺，以0.3mLDBU代替实施例51中0.5mLDBU，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸丙酯(I-2)，产率：84%，熔点:91-92℃，IR(cm^-1):3424,2957,2940,2872,2855,2345,1735,1719,1635,1466,1453,1364,1255,1229,1166,1148,1101,1034,950,798;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.12(s,1H),5.52(s,1H),4.14(m,2H),4.01(t,J=6.6Hz,2H),2.22(d,J=13.5Hz,1H),2.18–2.08(m,1H),2.02(s,3H),1.83-1.70(m,4H),1.67(dd,J=8.2,5.6Hz,3H),1.62-1.51(m,3H),1.44(d,J=11.3Hz,2H),1.36(dd,J=12.7,3.8Hz,1H),1.30-1.25(m,2H),1.24(s,3H),1.08-1.01(m,1H),0.99(t,J=7.4Hz,3H),0.88(m,1H),0.63(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ207.23,177.27,170.90,153.93,116.76,65.93,65.34,57.20,56.64,50.26,48.20,43.94,43.55,40.43,38.73,38.02,32.75,29.67,29.01,21.92,21.81,20.74,20.18,18.98,12.38,10.74;EI-MS(m/z):430.

实施例53：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(I-3)的制备

以实施例32方法所制备的化合物(IX-3)代替实施例51中的化合物(IX-1)，以10mL三乙胺代替实施例51中5mL三乙胺，以2mLDBU代替实施例51中0.5mLDBU，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(I-3)，产率：84%，熔点:98-99℃，IR(cm^-1):3448,2976,2945,2878,2848,2348,1743,1710,1635,1454,1381,1360,1240,1155,1107,1038,1025,986,957;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.10(s,1H),5.50(s,1H),4.99(m,1H),4.16(d,J=11.3Hz,1H),4.09(d,J=11.1Hz,1H),2.15-2.06(m,1H),2.01(s,3H),2.00-1.92(m,1H),1.80-1.70(m,4H),1.70-1.64(m,2H),1.61-1.50(m,2H),1.46-1.39(m,2H),1.35(dd,J=12.6,3.8Hz,1H),1.24(d,J=2.9Hz,3H),1.23(d,J=2.9Hz,3H),1.21(s,3H),1.18(d,J=2.6Hz,1H),1.01(m,1H),0.87(m,2H),0.65(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ207.26,176.56,170.89,154.01,116.66,67.17,65.33,60.36,57.13,56.54,50.25,48.17,43.83,43.56,40.46,38.83,38.06,32.75,30.88,28.93,21.77,21.62,20.74,20.18,18.94,12.58;EI-MS(m/z):430.

实施例54：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(I-4)的制备

以实施例33方法所制备的化合物(IX-4)代替实施例51中的化合物(IX-1)，以5mL甲苯代替实施例51中5mL三乙胺，以油浴90℃反应8h代替实施例51中油浴60℃反应24h，以20∶1的石油醚与丙酮混合液为洗脱剂代替实施例51中的石油醚∶丙酮=10∶1（体积比）洗脱剂，以石油醚∶丙酮=10∶1（体积比）为TLC展开剂代替实施例51中的石油醚∶丙酮=5∶1（体积比）为TLC展开剂，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸苄酯(I-4)，产率：83%，熔点:84-86℃，IR(cm^-1):3458,3027,3003,2953,2937,2878,2848,2350,1742,1721,1633,1455,1384,1367,1236,1140,1100,1031,953,760,700;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.37-7.31(m,5H),5.98(s,1H),5.22(s,1H),5.17(d,J=12.1Hz,1H),4.98(d,J=12.1Hz,1H),4.14(d,J=11.2Hz,1H),4.06(d,J=11.3Hz,1H),2.23(d,J=13.1Hz,1H),1.99(s,3H),1.99-1.90(m,3H),1.84-1.66(m,4H),1.65-1.60(m,2H),1.56-1.42(m,3H),1.31(dd,J=12.9,3.6Hz,1H),1.25(s,3H),1.23-1.16(m,2H),1.04(m,1H),0.85(m,1H),0.50(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ207.27,176.94,170.89,153.67,135.94,128.65,128.54,128.27,116.88,66.26,65.31,57.10,56.64,50.23,48.13,44.02,43.46,40.36,38.73,38.08,37.95,32.72,28.87,21.81,20.75,20.15,18.91,12.34;EI-MS(m/z):478.

实施例55：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(I-5)的制备

以实施例34方法所制备的化合物(IX-5)代替实施例51中的化合物(IX-1)，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(I-5)，产率：83%，油状物，IR(cm^-1):3453,2957,2939,2884,2856,2354,1732,1719,1632,1464,1451,1366,1235,1170,1154,1105,1033,982,773;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.15(s,1H),5.60(s,1H),4.15(m,2H),4.08-4.05(m,2H),2.68(dd,J=18.6,3.7Hz,1H),2.31(m,1H),2.13(dd,J=12.5,4.2Hz,1H),2.03(s,3H),1.95(dd,J=11.6,2.6Hz,1H),1.86(m,3H),1.82-1.76(m,5H),1.53(d,J=11.7Hz,2H),1.33(dd,J=11.9,4.3Hz,3H),1.23(s,3H),1.14(dd,J=12.1,1.9Hz,1H),0.95(t,J=7.4Hz,3H),0.92(d,J=4.2Hz,1H),0.73(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ204.15,177.50,170.89,153.23,117.96,65.11,64.10,57.06,55.05,52.25,48.67,46.07,43.95,41.41,40.41,39.83,39.38,38.80,38.10,32.33,30.62,28.99,21.68,19.47,18.97,13.71,12.41;EI-MS(m/z):445[M+H]⁺.

实施例56：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(I-6)的制备

以实施例35方法所制备的化合物(IX-6)代替实施例51中的化合物(IX-1)，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(I-6)，产率：86%，油状物，IR(cm^-1):3422,2961,2848,2393,1743,1720,1638,1455,1383,1364,1261,1146,1026,802;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.12(s,1H),5.51(s,1H),4.85(m,1H),4.13(d,J=7.5,1H),4.09(d,J=7.0,1H),2.06(s,3H),1.80(d,J=12.6Hz,3H),1.76-1.69(m,4H),1.62(m,5H),1.40(t,J=7.5Hz,2H),1.23(d,J=2.8Hz,1H),1.20(d,J=3.0Hz,1H),1.20(d,J=3.5,3H),1.08(m,2H),0.98(t,J=7.2Hz,3H),0.95(s,3H),0.91-0.85(m,2H),0.79(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.60,177.12,170.89,156.18,117.28,86.77,65.02,60.42,57.15,54.34,50.42,43.72,42.56,40.94,39.74,38.32,34.94,33.20,31.02,29.80,29.08,25.12,22.36,21.17,19.68,19.06,14.34,13.38;EI-MS(m/z):445[M+H]⁺.

实施例57：ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(I-7)的制备

以实施例36方法所制备的化合物(IX-7)代替实施例51中的化合物(IX-1)，其他操作同实施例51，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-乙酰氧甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(I-7)，产率：84%，油状物，IR(cm^-1):3466,2957,2852,2363,1746,1715,1633,1468,1382,1366,1150,1100,1040,986,799,604;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.10(s,1H),5.51(s,1H),4.16(d,J=11.3Hz,1H),4.09(d,J=11.2Hz,1H),3.89-3.84(m,1H),3.80-3.74(m,1H),2.21(d,J=13.4Hz,2H),2.01(s,3H),1.94(m,2H),1.85-1.77(m,3H),1.73-1.64(m,5H),1.57(m,3H),1.44(m,2H),1.24(s,3H),1.06(dd,J=13.5,4.1Hz,1H),0.98(d,J=3.1Hz,3H),0.97(d,J=3.3Hz,3H),0.86(dd,J=13.3,4.3Hz,1H),0.62(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ207.23,177.28,170.89,153.90,116.75,70.66,65.33,57.18,56.64,50.93,50.25,48.18,44.01,43.54,40.41,38.70,38.01,35.42,32.73,29.05,27.66,21.83,20.74,20.17,19.34,18.98,12.35;EI-MS(m/z):445[M+H]⁺.

实施例58：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(I-8)的制备

称取实施例44方法所制备的1mmol化合物(XI-1)，溶解在5mL吡啶中，搅拌下，再加入0.5mL DBU，油浴80℃，反应10h后，在反应液中加入40mL水，用质量浓度10%HCl水溶液调节反应液pH=7后用30mL×3的乙酸乙酯萃取，合并上层有机相，再50mL×3的水洗涤，无水硫酸镁干燥除去水分，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至无液体溜出，得到黄色油状物（浓缩物），将浓缩物以少量洗脱剂溶解进行硅胶柱层析（洗脱剂：石油醚∶丙酮=5∶1（体积比）），根据TLC（展开剂为石油醚∶丙酮=3∶1（体积比））跟踪收集Rf值为0.3~0.4时的洗脱液，将洗脱液浓缩至干得化合物ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸乙酯(I-8)，产率:83%，油状物，IR(cm^-1):3441,2980,2931,2874,2843,2344,1716,1632,1470,1461,1377,1241,1168,1103,977;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.16(s,1H),5.61(s,1H),4.12(dd,J=10.1,7.1Hz,2H),2.34-2.29(m,1H),2.22(m,1H),2.17-2.09(m,1H),2.09-2.02(m,3H),1.96(dd,J=11.6,2.7Hz,1H),1.88(m,1H),1.82-1.74(m,2H),1.69(m,2H),1.45(m,2H),1.38-1.32(m,3H),1.30(d,J=5.2Hz,2H),1.29(s,3H),1.04(m,2H),0.93-0.84(m,3H),0.65(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ204.16,176.82,153.11,117.99,62.31,60.13,57.09,56.53,46.11,44.25,43.89,40.46,39.80,38.89,37.92,31.08,29.80,29.05,21.78,20.25,19.08,14.29,12.57;EI-MS(m/z):371[M-3H]⁺.

实施例59：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(I-9)的制备

以实施例45方法所制备的化合物(XI-2)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸丙酯(I-9)，产率:85%，油状物，IR(cm^-1):3445,2983,2936,2876,2846,2347,1719,1638,1474,1467,1379,1245,1171,1108,951,850,776;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.10(s,1H),5.52(s,1H),4.07-4.03(m,1H),3.98-3.93(m,1H),3.68(d,J=11.4Hz,1H),3.56(d,J=11.4Hz,1H),2.21(d,J=13.3Hz,2H),1.94-1.87(m,3H),1.79(m,5H),1.58(d,J=4.9Hz,1H),1.55(d,J=4.6Hz,1H),1.51-1.44(m,3H),1.38(m,4H),1.24(s,3H),1.07(d,J=4.0Hz,1H),1.04(d,J=4.1Hz,1H),0.89(t,J=6.9Hz,3H),0.63(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ206.91,177.32,154.34,116.72,65.94,57.62,56.65,52.10,48.23,43.96,40.48,38.79,38.05,32.64,31.58,30.90,29.02,22.64,21.82,20.54,19.00,14.10,12.39,10.76;EI-MS(m/z):389[M+H]⁺.

实施例60：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(I-10)的制备

以实施例46方法所制备的化合物(XI-3)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丙酯(I-10)，产率:81%，油状物，IR(cm^-1):3448,2982,2934,2875,2848,2348,1718,1629,1468,1458,1375,1238,1162,1107,1040,1021,941;¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.08(s,1H),5.49(s,1H),5.04-4.93(m,1H),3.71(m,1H),3.65(s,1H),3.54(d,J=11.4Hz,1H),2.09(m,1H),2.00(m,3H),1.88-1.74(m,3H),1.71(d,J=6.9Hz,1H),1.67(d,J=2.4Hz,1H),1.64(d,J=2.5Hz,1H),1.59-1.46(m,2H),1.46-1.37(m,2H),1.35(dd,J=7.6,3.5Hz,2H),1.24(d,J=2.4Hz,3H),1.23(d,J=2.6Hz,3H),1.20(s,3H),1.01(m,1H),0.87(m,2H),0.65(s,3H);¹³C-NMR(125MHz,CDCl₃)δ206.91,177.32,154.34,116.72,65.94,65.49,57.62,56.65,52.10,48.23,44.06,40.48,38.79,38.10,38.05,31.58,30.90,29.02,22.64,21.82,20.54,19.00,14.10,10.76;EI-MS(m/z):388.

实施例61：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(I-11)的制备

以实施例47方法所制备的化合物(XI-4)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸苄酯(I-11)，产率:87%，油状物，IR(cm^-1):3470,3092,3065,3032,2943,2845,2253,1721,1631,1455,1387,1369,1324,1234,1174,1100,1040,954,798,753,698;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.38-7.34(m,5H),5.99(s,1H),5.23(s,1H),5.19(d,J=12.1Hz,1H),4.99(d,J=12.2Hz,1H),3.67(d,J=11.5Hz,1H),3.54(d,J=11.2Hz,1H),2.35(s,1H),2.24(d,J=13.2Hz,1H),1.97(m,2H),1.93(dd,J=13.5,3.1Hz,1H),1.82-1.75(m,2H),1.68(d,J=10.0Hz,2H),1.62(dd,J=11.2,2.7Hz,1H),1.54-1.46(m,2H),1.44-1.41(m,1H),1.26(s,3H),1.22(d,J=2.6Hz,1H),1.20-1.15(m,2H),1.05(m,1H),0.88(m,1H),0.52(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ210.68,176.66,153.84,135.68,128.45,128.35,128.07,116.62,66.21,65.35,60.37,57.48,56.63,52.08,48.15,44.05,40.43,38.81,38.14,32.67,28.92,21.89,20.57,19.01,14.29,12.45;EI-MS(m/z):437[M+H]⁺.

实施例62：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(I-12)的制备

以实施例48方法所制备的化合物(XI-5)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸正丁酯(I-12)，产率：82%，油状物，IR(cm^-1):3443,2955,2869,2348,1721,1633,1463,1384,1237,1152,1099,1040,941,771;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.11(s,1H),5.52(s,1H),4.05(t,J=5.4,2H),3.67(d,J=7.3Hz,1H),3.56(d,J=7.2Hz,1H),2.35-2.31(m,1H),2.24-2.18(m,2H),2.02(s,3H),1.93(m,1H),1.83-1.77(m,3H),1.71(d,J=12.0Hz,2H),1.54(m,3H),1.36(d,J=11.3Hz,2H),1.23(s,3H),1.20(d,J=2.1Hz,2H),1.04(m,2H),0.96(t,J=7.4Hz,3H),0.73(d,J=3.9Hz,1H),0.63(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ210.68,177.02,154.09,116.50,65.36,64.07,57.56,56.61,52.12,48.20,44.05,43.95,40.49,38.81,38.11,38.08,32.70,30.65,29.06,21.88,20.60,19.54,19.08,13.79,12.49;EI-MS(m/z):403[M+H]⁺.

实施例63：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(I-13)的制备

以实施例49方法所制备的化合物(XI-6)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸仲丁酯(I-13)，产率：84%，油状物，IR(cm^-1):3460,2937,2850,2341,1716,1631,1457,1379,1323,1237,1158,1093,1039,983,896,774;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.11(s,1H),5.53(s,1H),4.86-4.83(m,1H),4.14(d,J=7.3Hz,1H),3.57(d,J=11.5Hz,1H),2.21(m,2H),2.17-2.11(m,1H),1.93(d,J=12.5Hz,1H),1.90-1.85(m,1H),1.84-1.78(m,3H),1.71(d,J=13.4Hz,2H),1.67-1.64(m,2H),1.52(d,J=5.2Hz,1H),1.50(d,J=5.5Hz,1H),1.47-1.42(m,2H),1.36(m,2H),1.24(s,3H),1.20(d,J=3.5,3H),0.94(t,J=3.3,3H),0.90-0.86(m,1H),0.79(d,J=2.5Hz,1H),0.68(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.57,170.93,152.56,114.48,71.81,64.58,60.43,54.73,52.87,51.96,50.99,48.36,46.67,44.13,42.93,38.34,35.65,33.73,31.00,29.14,27.62,21.16,19.16,16.63,14.32;EI-MS(m/z):403[M+H]⁺.

实施例64：ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(I-14)的制备

以实施例50方法所制备的化合物(XI-7)代替实施例58中的化合物(XI-1)，其他操作同实施例58，获得ent-15-亚甲基-16-氧-13-羟甲基-19-贝叶烷酸异丁酯(I-14)，产率：88%，油状物，IR(cm^-1):3472,2959,2874,2342,1720,1631,1468,1382,1363,1236,1151,1102,1039,991,949,773,605;¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ6.05(s,1H),5.47(s,1H),4.09(m,2H),3.17(d,J=11.9Hz,1H),3.03(d,J=12.0Hz,1H),2.19(s,1H),1.95-1.93(m,1H),1.90-1.88(m,1H),1.66(m,5H),1.51(m,3H),1.37-1.32(m,2H),1.15(s,3H),1.04(d,J=7.3Hz,1H),0.93(d,J=1.5Hz,3H),0.92(d,J=1.3Hz,3H),0.90-0.83(m,3H),0.59(s,3H);¹³C-NMR(100MHz,CDCl₃)δ206.64,177.04,154.08,116.60,70.59,69.45,66.99,65.27,57.55,56.62,52.12,48.18,44.02,40.47,39.63,38.77,32.67,30.91,29.30,27.71,21.91,20.57,19.41,15.06,12.45;EI-MS(m/z):403[M+H]⁺.

实施例65：抗A549肺癌细胞株活性测试

测试方法：体外抗肿瘤活性测试方法：

A、原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性噻唑蓝(MTT)还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

B、细胞：A549（中国科学院上海生命科学院细胞库），肺癌细胞株。

C、实验步骤

(1)样品的准备：将实施例51~64所制备的化合物(I-1)~(I-14)1mg用40μL的DMSO溶解配置成25mg/mL的母液，再用DMEM培养基（每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清）连续稀释成化合物(I-1)~(I-14)浓度为100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL的样品液。

(2)细胞的培养

取对数生长期A549细胞一瓶，弃培养液，将细胞用EDTA-胰酶消化液于37℃培养箱消化约15s，将消化后的细胞用DMEM培养基稀释成1×10⁶个/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100μL，置37℃，5％CO₂培养箱中培养24h后，加入上述配制的样品液，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO₂培养箱中培养72h后，在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT溶液，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪（XD-711，上海迅达医疗器械有限公司产品）在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，根据LOGIT法计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度（IC₅₀）。抗肿瘤活性测试结果见表1所示。

表1：化合物对A549的IC₅₀(μg/mL)

表1可以看出，按照抗肿瘤活性的评价标准（化合物IC₅₀＜10μg／m1则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用；IC₅₀＜30μg／m1则判断样品在体外对肿瘤细胞有具有较强的增殖抑制作用），化合物I-2、I-11具有显著的抗A549肺癌细胞活性；化合物I-1、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-9、I-12、I-13、I-14对A549肺癌细胞具有较强的增殖抑制作用。

实施例66：抗HL-60人白血病细胞株活性测试

以HL-60人白血病细胞株（中国科学院上海生命科学院细胞库）代替实施例65中的A549肺癌细胞株，进行抗肿瘤活性测试，其他操作同实施例65，结果如表2所示：

表2：化合物对HL-60的IC₅₀(μg/mL)

表2看出：化合物I-4、I-14具有显著的抗HL-60人白血病细胞活性；化合物I-2、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-13对HL-60人白血病细胞具有较强的增殖抑制作用。

实施例67：抗Bewo人绒毛膜癌细胞株活性测试

以Bewo人绒毛膜癌细胞株（中国科学院上海生命科学院细胞库）代替实施例65中的A549肺癌细胞株，进行抗肿瘤活性测试，其他操作同实施例65，试验结果如表3所示：

表3：化合物对Bewo的IC₅₀(μg/mL)

表3可以看出，化合物I-5、I-7、I-11具有显著的抗Bewo人绒毛膜癌细胞活性；化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-6、I-9、I-12、I-13对Bewo人绒毛膜癌细胞具有较强的增殖抑制作用。

实施例68：抗Hela人子宫颈癌细胞株活性测试

以Hela人子宫颈癌细胞株（中国科学院上海生命科学院细胞库）代替实施例65中的A549肺癌细胞株，进行抗肿瘤活性测试，其他操作同实施例65，试验结果如表4所示：

表4：化合物对Hela的IC₅₀(μg/mL)

表4可以看出，化合物I-2、I-3、I-4、I-7、I-11对Hela人子宫颈癌细胞具有较强的增殖抑制作用。

Claims

1.一种式（Ⅰ）所示的异甜菊醇化合物，

2.一种式（IX）所示制备式（I）所示化合物的中间体，

3.一种式（XI）所示制备式（I）所示化合物的中间体，

4.一种如权利要求1所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述的方法为：将化合物前体原料用有机溶剂溶解，在1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯催化剂作用下，于60~90℃温度下连续反应8~24小时，所述的前体原料为式（IX）所示化合物或式（XI）所示化合物；反应结束后将各自的反应液调节至中性后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层浓缩后进行硅胶柱层析，收集洗脱液用重结晶溶剂重结晶，分别得到式（I-A）或式（I-B）所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的异甜菊醇化合物；所述有机溶剂为吡啶、三乙胺或甲苯中的一种；

5.如权利要求4所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述催化剂的体积用量以前体原料物质的量计均为0.3~2mL/mmol前体原料。

6.如权利要求4所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述有机溶剂体积用量以前体原料物质的量计均为2.5~10mL/mmol前体原料。

7.如权利要求4所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述反应液后处理的方法为：反应结束后，将各自反应液加水稀释，用酸调节pH=7，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用水洗涤后再用干燥剂干燥、过滤，取滤液浓缩至干，获得浓缩物，将浓缩物以体积比5~20∶1的石油醚与丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析，TLC跟踪收集Rf值为0.3~0.4时的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后再用石油醚重结晶，取晶体自然挥发干燥即制得式（I）所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的异甜菊醇化合物。

8.如权利要求4所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述的式（IX）所示化合物按如下方法制备：①将式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠溶于水中，室温搅拌16h，向反应体系中加入氢氧化钾，回流反应3h，冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸调节pH值至5，然后加入乙醚萃取，取上层有机相用水洗涤后以无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干后再用甲醇重结晶，取晶体自然挥发干燥即获得式（III)）所示化合物；所述式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠、氢氧化钾的质量比为1∶1.5∶4.17，所述水的体积用量以式（II）所示甜菊糖苷质量计为41.7mL/g；②将式(III)所示的甜菊醇溶于二氯甲烷a中，-5℃下缓慢滴加二氯甲烷b和间氯过氧苯甲酸的混合溶液，室温下搅拌反应5h，滴加KI至反应液变红色，再用饱和硫代硫酸钠水溶液滴定至反应液变成白色后，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，获得水相a和有机相a，有机相a再用饱和食盐水洗涤，获得有机相b和水相b，有机相b再经水洗涤，无水硫酸钠干燥去水分，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至干，得到式（IV）所示化合物；所述式(III)所示的甜菊醇与间氯过氧苯甲酸的物质的量之比为1∶1~5；所述二氯甲烷a和二氯甲烷b总体积用量以甜菊醇物质的量计为10~40mL/mmol；③将式（IV）所示化合物与碳酸钾混合后溶于二甲基亚砜中，加入溴代烷烃，30~60℃下反应5~10h，反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物用石油醚重结晶，滤除母液，取晶体自然挥发干燥，获得式（V）所示化合物；所述式（IV）所示化合物与碳酸钾、溴代烷烃的物质的量之比为1∶1∶1~2，所述二甲基亚砜的体积用量以式（IV）所示化合物物质的量计为5~20mL/mmol，所述溴代烷烃中的烷烃基为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基；④将式(V)所示化合物溶于无水甲醇中，再加入质量浓度10~98%H₂SO₄水溶液，40~80℃下反应4~16h，调节反应液pH值至7，加水稀释后用氯仿萃取，下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以石油醚∶丙酮体积比=3～5∶1为洗脱剂进行硅胶柱层析，TLC跟踪收集含目标组分的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后得到式（VI）所示化合物；所述无水甲醇体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为10~30mL/mmol，所述硫酸水溶液的体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为1~10mL/mmol；⑤将式（VI）所示化合物与乙醇钠混合，在20~50℃下滴加质量浓度37%的甲醛水溶液，20~50℃反应4~16h后，将反应液调节pH值至7后加水稀释，再用氯仿萃取，取下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干后获得浓缩物，将浓缩物以体积比1∶1的石油醚和丙酮混合液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.3时的化合物，即为式(VII)所示化合物；所述式（VI）所示化合物与乙醇钠中钠的物质的量之比为1∶10~30，所述甲醛水溶液的体积用量以式（VI）所示化合物物质的量计为0.2~5mL/mmol；⑥将式（VII）所示化合物溶于冰乙酸中，再滴加质量浓度10%HCl水溶液，在室温下反应8~12h后，将反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干后获得浓缩物，将浓缩物以体积比3∶1的石油醚和丙酮混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.4时的化合物，即为式（VIII）所示化合物；所述冰乙酸、HCl水溶液的体积用量以式（VII）所示化合物物质的量计分别为5~10mL/mmol、0.1mL/mmol；⑦将式（VIII）所示化合物溶于二氯甲烷c中，在重铬酸钾吡啶盐a作用下，5~25℃搅拌2~12h，或将化合物（VIII）溶于甲苯，重铬酸钾吡啶盐b作用下，60～90℃搅拌2～12h，将反应液用硅胶和乙酸乙酯以质量体积比1∶2的混合液作为介质进行抽滤，获得滤液c和滤饼c，将滤饼c用乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液d，合并滤液c和滤液d并浓缩至干，获得式（IX）所示化合物；所述式（VIII）所示化合物与重铬酸钾吡啶盐a或重铬酸钾吡啶盐b的物质的量之比均为1∶2~10，所述二氯甲烷c的体积用量以式（VIII）所示化合物物质的量计为10~50mLmmol；所述甲苯的体积用量以式（VIII）所示化合物物质的量计分别为5～20mL/mmol；

式（V）、（VI）、（VII）、（VIII）、（IX）中R₂均为CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂C₆H₅、CH₂CH₂CH₂CH₃、CHCH₃CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

9.如权利要求4所述的异甜菊醇化合物的制备方法，其特征在于所述的式（XI）所示化合物按如下方法制备：（1）将式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠溶于水中，室温搅拌16h，向反应体系中加入氢氧化钾，回流反应3h，冷却至室温，缓慢滴加冰醋酸调节pH值至5，然后加入乙醚萃取，取上层有机相用水洗涤后以无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩至干后再用甲醇重结晶，取晶体自然挥发干燥即获得式（III)）所示化合物；所述式（II）所示甜菊糖苷与高碘酸钠、氢氧化钾的质量比为1∶1.5∶4.17，所述水的体积用量以式（II）所示甜菊糖苷质量计为41.7mL/g；（2）将式(III)所示的甜菊醇溶于二氯甲烷a中，-5℃下缓慢滴加二氯甲烷b和间氯过氧苯甲酸的混合溶液，室温下搅拌反应5h，滴加KI至反应液变红色，再用饱和硫代硫酸钠水溶液滴定至反应液变成白色后，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，获得水相a和有机相a，有机相a再用饱和食盐水洗涤，获得有机相b和水相b，有机相b再经水洗涤，无水硫酸钠干燥去水分，抽滤除去干燥剂，滤液旋蒸至干，得到式（IV）所示化合物；所述式(III)所示的甜菊醇与间氯过氧苯甲酸的物质的量之比为1∶1~5；所述二氯甲烷a和二氯甲烷b总体积用量以甜菊醇物质的量计为10~40mL/mmol；（3）将式（IV）所示化合物与碳酸钾混合后溶于二甲基亚砜中，加入溴代烷烃，30~60℃下反应5~10h，反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物用石油醚重结晶，滤除母液，取晶体自然挥发干燥，获得式（V）所示化合物；所述式（IV）所示化合物与碳酸钾、溴代烷烃的物质的量之比为1∶1∶1~2，所述二甲基亚砜的体积用量以式（IV）所示化合物物质的量计为5~20mL/mmol，所述溴代烷烃中的烷烃基为乙基、丙基、异丙基、苄基、正丁基、仲丁基或异丁基；（4）将式(V)所示化合物溶于无水甲醇中，再加入质量浓度10~98%H₂SO₄水溶液，40~80℃下反应4~16h，调节反应液pH值至7，加水稀释后用氯仿萃取，下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以石油醚∶丙酮体积比=3～5∶1为洗脱剂进行硅胶柱层析，TLC跟踪收集含目标组分的洗脱液，将洗脱液浓缩至干后得到式（VI）所示化合物；所述无水甲醇体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为10~30mL/mmol，所述硫酸水溶液的体积用量以式(V)所示化合物物质的量计为1~10mL/mmol；（5）将式（VI）所示化合物与乙醇钠混合，在20~50℃下滴加质量浓度37%的甲醛水溶液，20~50℃反应4~16h后，将反应液调节pH值至7后加水稀释，再用氯仿萃取，取下层有机相经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干后获得浓缩物，将浓缩物以体积比1∶1的石油醚和丙酮混合液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.3时的化合物，即为式(VII)所示化合物；所述式（VI）所示化合物与乙醇钠中钠的物质的量之比为1∶10~30，所述甲醛水溶液的体积用量以式（VI）所示化合物物质的量计为0.2~5mL/mmol；（6）将式(VII)所示化合物溶于冰乙酸中，再滴加质量浓度10%HCl水溶液，在5~25℃反应2~8h后，反应液加水稀释后用乙酸乙酯萃取，取上层有机相，经水洗、无水硫酸镁干燥除去水分、抽滤除去干燥剂、滤液浓缩至干，将浓缩物以体积比5∶2~5的石油醚和丙酮混合溶液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.3~0.5时的化合物，即得到式(X)所示化合物；所述冰乙酸、HCl水溶液的体积用量以式(VII)所示化合物物质的量计分别为1~10ml/mmol、0.05ml/mmol；（7）将式(X)所示化合物溶于二氯甲烷d中，在重铬酸钾吡啶盐作用下，室温搅拌反应5h，将反应液用硅胶与乙酸乙酯以质量体积比1∶2的混合液作为介质进行抽滤，获得滤液e和滤饼e，将滤饼e用乙酸乙酯洗涤、抽滤，获得滤液f，合并滤液e和滤液f并浓缩至干，即为式(XI)所示化合物；所述式(X)所示化合物与重铬酸钾吡啶盐的物质的量之比为1∶2~10，所述二氯甲烷d的体积用量以式(X)所示化合物物质的量计为10~50ml/mmol；

式（X）、（XI）中R₂均为CH₂CH₃、CH₂CH₂CH₃、CH(CH₃)₂、CH₂C₆H₅、CH₂CH₂CH₂CH₃、CHCH₃CH₂CH₃或CH₂CH(CH₃)₂。

10.如权利要求1所述的异甜菊醇化合物在抑制A549肺癌细胞株、HL-60人白血病细胞株、Bewo人绒毛膜癌细胞株或Hela人子宫颈癌细胞株活性中的应用。