CN102716070A - 松属素环糊精或环糊精衍生物包合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了松属素环糊精或环糊精衍生物包合物，应用环糊精或环糊精衍生物对松属素进行包合，该包合物含松属素和环糊精或环糊精衍生物，二者的摩尔比为1:1~100。提高松属素的水溶性，能更好的发挥松属素的治疗作用，该包合物适宜制备临床所需的固体剂型、液体剂型；包括输液、水针、粉针、口服液、糖浆剂、片剂、胶囊、颗粒剂、分散片。这种包合物可以制备预防和\或治疗心脑血管疾病，尤其是脑卒中的药物，还可以制备预防和\或治疗细菌和\或真菌感染的药物。

Description

松属素环糊精或环糊精衍生物包合物

本专利申请是分案申请，原案的申请号200810084682.3，申请日2008年03月18日，发明名称是：“松属素环糊精或环糊精衍生物包合物”

技术领域

本发明涉及松属素环糊精或环糊精衍生物包合物、其制备方法、含有这类松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的药物组合物以及在制备药物中的用途。属于医药技术领域。

背景技术

松属素（pinocembrin），又名乔松素、生松素，化学名5，7-二羟基黄烷酮（5,7-Dihydroxyflavanone）、2,3-二氢-5,7-二羟基-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮（2,3-Dihydro-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one），是一种不溶于水的二氢黄酮类化合物，结构如下：

松属素化学结构中含有一个手性中心，天然松属素立体结构为S构型，比旋度[α]_D ¹⁵为-45.3（c,0.9,丙酮为溶剂）。

(S)-松属素是从蜂胶（propolis）中提取出的一种天然产物。另外在瑞士五针松,桉树叶、阿拉伯树胶等很多植物的提取物中也发现了这种化合物（CombinedChemical Dictionary 2004）。松属素除从蜂胶中分离得到外，在瑞士五针松，桉树，赤扬等植物中也可分离出该化合物，但含量均很低，现在松属素也可通过合成获得，这使得松属素的大量得到变成现实（程永浩，段亚波，戚燕，郭晓赟，童元峰，杜冠华，吴松，化学试剂。2006,28(7)：437）。

文献报道松属素对多种致病细菌和真菌敏感，尤其是对一些耐药菌株表现出较高的抗菌效果（Hyun Koo,Pedro L.Rosalen,Jaime A.Cury，Yong K.Park,andWilliam H.Bowen,Antimicrob.Agents&Chemother.2002,46(5),1302-1309）。我们经过大量的药理试验，发现左旋松属素对脑卒中具有很好的疗效，且毒副作用很低（中国专利200410037860.9）；合成消旋松属素的活性与左旋松属素相当，从而间接证明右旋松属素与左旋体的药理作用相似。药效学及毒理研究显示，静脉注射和腹腔注射给药LD₅₀大于700毫克/千克，较有效剂量高100倍以上。因此，松属素的效果好，毒性小，药理作用与现有同类药物比较有明显的优势，适应症为多发疾病，具有良好的市场前景。

由于松属素不溶于水，口服吸收较差，作为口服或注射给药均存在一定的困难。特别是用于治疗脑卒中等急性病症时，需要所使用的药物制剂能达到快速释放、快速起效，采用静脉注射是临床上治疗急性病症的最常用方法。而将松属素制成注射剂，必须首先解决其不溶于水的问题。

发明内容

为解决现有技术中松属素不溶于水，口服吸收较差，难以口服或注射给药的技术问题，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种松属素环糊精或环糊精衍生物包合物

本发明提供了制备这类松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的方法

本发明提供了含有这类松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的药物组合物

本发明提供了还这类松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的用途。

具体而言，为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：一种松属素环糊精或环糊精衍生物包合物：含有松属素和环糊精或环糊精衍生物，松属素与环糊精或环糊精衍生物的分子摩尔比为1:1~1:100；优选的分子摩尔比为1:1~1:10。

所述松属素选自左旋松属素、右旋松属素、外消旋松属素；

所述环糊精包括，但不限定于α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精；优选的是β-环糊精。

所述环糊精衍生物包括，但不限定于羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、二羟丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、葡萄糖-环糊精、麦芽糖-环糊精、麦芽三糖-环糊精、羧甲基-环糊精、磺烷基-环糊精；优选的是羟丙基-β-环糊精。

本发明的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物该包合物可以是液体或固体，可以开发成临床所适用的多种固体剂型和液体剂型。

本发明制备松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的采用如下技术方案：

将环糊精或环糊精衍生物加入中溶媒，制成重量浓度范围为1~60%，优选5~60%的环糊精或环糊精衍生物的溶液或混悬液，加入松属素，搅拌或研磨混合，即得液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物。液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物可以是溶液或混悬液，搅拌至澄清透明的，即得液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物溶液。

将松属素环糊精或环糊精衍生物包合物溶液冷冻干燥或喷雾干燥或蒸馏浓缩除去溶剂，即得固体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物。

制备固体松属素糊精或环糊精衍生物包合物过程中，还可以将液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物溶液先浓缩至糊精或环糊精衍生物重量浓度范围在10~15%的溶液，再进行冷冻干燥，即得固体松属素糊精或环糊精衍生物包合物。

本发明中松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的制备方法，也可以是将环糊精或环糊精衍生物置于胶体磨或研钵中，加入适量的适宜溶媒搅拌，使成糊状物，将松属素加入上述糊状物中，研磨1~5小时，得均一的粘稠糊状物，过滤，浓缩或冷冻干燥，即得固体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物。

溶解环糊精或环糊精衍生物的适宜溶媒选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙三醇、丙酮至少一种，包括两种或两种以上的混合溶媒，其中优选的是水。

制备中加入松属素可以是松属素固体或用适量有机溶剂溶解的松属素溶液。

本发明提供了一种药物组合物，其包括松属素环糊精或环糊精衍生物包合物和制药学上可接受的载体。本发明的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物可采用本领域专业人员所公知的方法，制成可作为人用药物使用的适当的使用形式或剂量形式。。单剂量规格为含活性药物松属素1－1000mg，优选单剂量规格为含活性药物松属素50－250mg。

所述的药物组合物，包括但不限定于，液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物直接用于制备的输液、水针、粉针、口服液、糖浆剂等液体剂型；固体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物制成片剂、胶囊、颗粒剂、分散片、口崩片、含片等多种固体剂型。

优选的液体剂型包括松属素羟丙基-β-环糊精包合物的注射液，注射液的浓度为0.01~3%(g/ml)，注射液的pH值为3～10；注射液中可含有氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂及盐酸、氢氧化钠等pH调剂剂。

所述的粉针剂包括松属素羟丙基-β-环糊精包合物的粉针剂，粉针剂溶解后的pH值为3～10，注射液中可含有甘露醇、乳糖等支撑剂及盐酸、氢氧化钠等pH调剂。

本发明的有益效果：

通过环糊精或环糊精衍生物对松属素进行包合，使松属素分子包埋于环糊精或环糊精衍生物分子的管状结构中，成为松属素环糊精或环糊精衍生物的包合物，从而提高了松属素的水溶性。经测定在25℃时，松属素羟丙基-β-环糊精包合物在水中的溶解度可达到2000mg/100ml。

本发明的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物使松属素这一活性成分以包合物的形式直接应用于固体、液体剂型。环糊精或环糊精衍生物是一种毒性较小的水溶性药用辅料，用其制备的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物适合于制成多种液体制剂和固体制剂。本发明的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物，具有水溶性好、血管刺激性小的特点，特别适用于制备液体制剂。解决了松属素水溶性低，不能直接用于液体剂型，尤其是注射剂型的技术问题。另外由于提高了水溶性，用其制备的固体制剂具有崩解快、溶出好、生物利用度高的特点，更利于临床应用。

急性毒性试验结果表明：本发明的松属素的环糊精包合物，对于小鼠静脉注射的LD₅₀大于700毫克/千克，较有效剂量高100倍以上，且未见局部刺激。说明本发明的松属素的环糊精包合物安全性良好，适合制备成注射剂型。

药理试验结果表明：本发明的松属素的环糊精包合物能够改善大鼠急性局灶性脑缺血造成的神经行为学损伤；减轻皮层大脑中动脉供应区脑血流的下降程度。可以制备预防和\或治疗心脑血管疾病药物，所述的心脑血管疾病优选是脑卒中。

现有技术中松属素对多种致病细菌和真菌敏感，尤其是对一些耐药菌株表现出较高的抗菌效果，从而推论本发明的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物可以制备预防和\或治疗细菌和\或真菌感染药物。

附图说明

图1.Effects of DL0108 on Bederson’s value of rats damaged by MCAOoperation.

图2.Effects of DL0108 on neurobehavior value of animals damaged by MCAOoperation.

图3.Rcbf in MCA-supplied cortex damaged by MCAO operation of differenttime frame(A).Effects of compound DL0108 on Rcbf value of rats damaged byMCAO operation(B).

图1-图3,Data expressed as mean±S.E.M.were analyzed by one-way ANOVAfollowed with Dunett’s test,n=10.##P<0.01vs.sham group,^*P<0.05vs.vehiclegroup.

具体实施方式

为更好的理解本发明的技术方案，特给出以下实施例。但不能理解为对本发明的任何限制。本领域技术人员可以对本发明的公开的技术方案做各种改变，这种改变也属于本发明的范围。

实施例1：制备液体松属素羟丙基-β-环糊精包合物溶液

（1）称取40g羟丙基-β-环糊精，倒入400ml蒸馏水中，搅拌溶解；

（2）另称取松属素1g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

（3）混合液以磁力搅拌方法在40~50℃下搅拌20分钟，观察溶液至澄清透明，即得松属素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

实施例2：制备固体松属素羟丙基-β-环糊精包合物

（1）、（2）、（3）同实施例1。

（4）将松属素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液再进行冷冻干燥，即得固体松属素羟丙基-β-环糊精包合物。

实施例3：制备固体松属素羟丙基-β-环糊精包合物

（1）称取20g羟丙基-β-环糊精，放入研钵中加入100ml蒸馏水中，研磨使成糊状；

（2）另称取松属素3g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

（3）将混合液研磨2小时，得到均一糊状物，过滤，减压蒸干，即得固体松属素环糊精衍生物包合物。

实施例4：制备松属素羟丙基-β-环糊精包合物的氯化钠输液

（1）称取20g羟丙基-β-环糊精，倒入200ml蒸馏水中，搅拌溶解，加入0.5g输液用活性炭，搅拌加热至80℃，保温15分钟，过滤脱炭；

（2）另称取松属素2g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

（3）混合液以磁力搅拌方法在40~50℃下搅拌20分钟，观察溶液至澄清透明，得到松属素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

（4）包合物溶液补水至800ml，加入注射用氯化钠7~8g，调节pH8～9，并用0.05M的盐酸或0.05M的氢氧化钠调节PH至3.5~7，补水至1000ml，加入0.1g注射用活性炭，搅拌20分钟。

（5）溶液脱炭灌装115℃，30分钟热压灭菌即得。

实施例5：制备松属素羟丙基-β-环糊精包合物的葡萄糖输液

（1）、（2）、（3）同实施例4。

（4）称取注射用葡萄糖50g，加水搅拌溶解使体积达100ml，加入0.1g活性炭，加热微沸15分钟，过滤脱炭。

（5）葡萄糖液倒入包合物溶液中，补水至800ml，用0.05M的盐酸或0.05M的氢氧化钠调节pH至6－7，补水至1000ml，加入0.1g注射用活性炭，搅拌20分钟。

（6）溶液分别用过滤器或砂滤棒（孔径1.0μm、0.45μm、0.22μm）进行粗滤、精滤，然后灌装115℃，30分钟热压灭菌即得。

实施例6：用松属素羟丙基-β-环糊精包合物制备无菌粉针

（1）在无菌操作室内，称取40g羟丙基-β-环糊精，加水溶解成80ml，加入0.1g活性炭，加热微沸15分钟，过滤脱炭。

（2）另称取松属素1g，加入20ml无水乙醇溶解，将该溶液倒入上述羟丙基-β-环糊精溶液中；

（3）混合液以磁力搅拌方法在40~50℃下搅拌20分钟，搅拌，观察溶液至澄清透明，得到松属素羟丙基-β-环糊精衍生物包合物溶液。

（4）包合物溶液补水至100ml，过0.22μm滤膜，分装于10ml的西林瓶中（2~3ml/瓶），置入冻干机中，冷冻干燥压盖，即得无菌粉针。

实施例7：用β-环糊精包合松属素

称取40gβ-环糊精，加入100ml蒸馏水，加热至40~50℃，使β-环糊精溶解，加入用20ml无水乙醇溶解的1g松属素，磁力搅拌2~3小时后，过滤，冷冻干燥，即得β-环糊精松属素包合物。

实施例8：β-环糊精包合松属素口服胶囊的制备

称取β-环糊精包合松属素20g，将其与80g乳糖按等量倍增法混匀，用水溶解HPMC作为粘合剂制软材，20目筛制粒，60℃下干燥，干颗粒用30目筛整粒，进行中间体检验，按含活性药物50mg/粒装胶囊，抽检，分装，即得。

实施例9：β-环糊精包合松属素口服片剂的制备

称取β-环糊精包合松属素20g，将其与80g乳糖和5g羧甲基淀粉钠按等量倍增法混匀，用水溶解HPMC作为粘合剂制软材，20目筛制粒，60℃下干燥，干颗粒用30目筛整粒，加入微粉硅胶1g,混和均匀，按含活性药物50mg/片压片，进行中间体检验，装胶囊，抽检，分装，即得。

药理实验

松属素羟丙基-β-环糊精包合物对大鼠急性局灶性脑缺血损伤的保护作用

试验方法：按文献报道的MCAO模型方法进行试验（张均田主编，现代药理实验方法，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998年10月第一版

神经症状学评分（Bederson’s Value）

假手术组动物行为学评分为0分。溶剂对照组动物神经学评分平均值为3.4±0.6分，其中，多数动物表现为手术对侧前肢内旋或内收，侧向挤压对侧肌伸力量减弱，转圈或偶尔转圈行走，评为3分；另外少数动物仅出现前肢内旋和抗力下降，评为2分；个别动物症状较重，缺乏自主活动，评为4分。

化合物松属素羟丙基-β-环糊精包合物（1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg，按活性成分松属素含量计算，代号DL0108，下同）能显著改善动物脑缺血后的神经损伤症状（P<0.05,P<0.01），并呈现剂量－效应关系，且均优于阳性药物尼莫地平（见图1）。

运动能力评价（倾斜板实验）

假手术组大鼠在倾斜板上停留时间平均值为79.3±10.4sec。急性脑缺血损伤后，溶剂组大鼠在倾斜板上停留时间明显缩短，平均值为4.01±1.42sec，与溶剂组相比，松属素羟丙基-β-环糊精包合物（3mg/kg,10mg/kg）能显著延长动物在倾斜板停留时间（P<0.01），呈现剂量－效应关系，松属素羟丙基-β-环糊精包合物（3mg/kg、10mg/kg）剂量组的作用效果优于阳性对照药物尼莫地平（见图2）。

DL0108对大鼠急性脑缺血组织局部脑血流量的影响

MCAO手术造成局部皮层中动脉供血区血流量迅速下降到手术前基础值的20%-30%，缺血24h后（动物处死前）同部位受到侧枝循环代偿，局部脑血流量较手术时有所上升，但仍低于基础值的50%，结果如图.3A所示。

大鼠脑组织缺血24h后，溶剂组rCBF值为基础值的47.6±5.7%，化合物DL0108（10mg/kg）给药组、尼莫地平组rCBF值分别提高为基础值的25.7±5.6%和37.7±5.6%，与溶剂组相比具有显著性差异（P<0.05），结果如图.3B所示。

以上结果证明：松属素羟丙基-β-环糊精包合物能够改善大鼠急性局灶性脑缺血造成的神经行为学损伤；减轻皮层大脑中动脉供应区脑血流的下降程度。

Claims (10)

1.液体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的制备方法，其特征在于：将环糊精或环糊精衍生物加入溶媒中，制成重量浓度范围在1~60%的溶液或混悬液，加入松属素，搅拌或研磨混合，即得松属素环糊精或环糊精衍生物包合物溶液或混悬液。

2.固体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物的制备方法，其特征在于：将松属素环糊精或环糊精衍生物包合物溶液冷冻干燥或者浓缩除去溶剂，即得固体松属素环糊精或环糊精衍生物包合物。

3.根据权利要求1-2中任一的所述的方法，其特征在于，

所述的溶媒选自水、乙醇、甲醇、丙醇、异丙醇、乙二醇、丙三醇、丙酮中至少一种；

加入松属素可以是松属素固体或用适量有机溶剂溶解的松属素溶液。

4.一种药物组合物，其特征在于，包括一种松属素环糊精或环糊精衍生物包合物和制药学上可接受的载体，

所述的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物，含有松属素和环糊精或环糊精衍生物，松属素与环糊精或环糊精衍生物的分子摩尔比为1：1~1：100；

所述环糊精衍生物选自羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、二羟丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、葡萄糖-环糊精、麦芽糖-环糊精、麦芽三糖-环糊精、羧甲基-环糊精、磺烷基-环糊精。

5.根据权利要求4的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物，其特征在于：

所述松属素选自左旋松属素、右旋松属素、外消旋松属素；

所述环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精。

6.根据权利要求4的药物组合物，其特征在于：松属素与环糊精或环糊精衍生物的分子摩尔比为1:1~1:10。

7.根据权利要求5的松属素环糊精或环糊精衍生物包合物，其特征在于：

所述松属素选自左旋松属素、右旋松属素、外消旋松属素；

所述环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精。

8.根据权利要求4-7中任一项的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物包括输液、水针、粉针、口服液、糖浆剂、片剂、胶囊、颗粒剂、分散片、口崩片、含片。

9.一种松属素羟丙基-β-环糊精包合物的注射液，其特征在于，注射液的浓度为0.01~3%(g/ml)，注射液的pH值为3～10，注射液中可含有氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂及盐酸、氢氧化钠等pH调剂剂。

10.一种松属素羟丙基-β-环糊精包合物的粉针剂，其特征在于，粉针剂溶解后的pH值为3～10，注射液中可含有甘露醇、乳糖等支撑剂及盐酸、氢氧化钠等pH调剂剂。

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