CN102706999A - 延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分析化学和药物化学领域，公开了延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取延胡索水溶性非生物碱类提取物，高速离心后过滤；(2)取(1)的上清液干燥后经三甲基硅烷化衍生化处理；(3)将步骤(2)的衍生化产物用气相色谱质谱联用方法分析。本发明可简单、快速、准确地检测延胡索中水溶性非生物碱类化合物成分及其含量，对于充分了解传统良药延胡索的化学成分和控制延胡索水溶性提取物的质量有着重要意义，为延胡索的深入开发提供了研究资料，使研究和生产更加安全、有效和质量可控的延胡索新药成为可能。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学和药物化学领域，具体为分析检测延胡索水溶性非生物碱类化合物的方法。
背景技术
中药延胡索是罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥块茎，性味辛、苦、温，归肝、脾经，具有活血、利气、止痛的功效。主要用于胸胁脘腹疼痛、经闭、痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛等。
在延胡索的药效部位筛选研究中发现，延胡索的80％乙醇提取物过DA201大孔树脂柱，富集的纯水洗脱部位在药效学试验中表现出好的抗心肌缺血作用(大剂量，350mg/kg)。因此，该部位具有一定的研究价值，已有相关专利授权(公开号CN 101284050A)。该水洗脱部分的得率占80％乙醇提取物的60％左右，经可见分光光度法测定不含生物碱。相对于研究较充分的生物碱类成分，延胡索中水溶性非生物碱类化合物研究甚少，已见报道的化合物只有香草酸、对羟基苯甲酸、延胡索酸、延胡索多糖等几种，是否含有大极性的醇、酸、单糖和低聚糖类等化合物，以及如何进行分析检测和定性，至今还没有相关研究报道。
天然产物中的大极性化合物，具有种类多，极性接近，含量少，大都含有一个或多个羟基，羧基或氨基等特点，此类化合物的研究工作量大，周期长，植物化学工作者一直没有太好的分离纯化办法。虽然有厂家不断推出新的液相制备色谱柱，但由于缺乏相应的液相质谱联用的化合物数据库，使分离，检测和结构确证不能同时很好的解决。
气相色谱质谱联用(GC/MS)是一种高效的分析技术，该技术利用气相色 谱的分离能力让混合物中的组分分离，并用质谱鉴定分离出来的组分(定性分析)以及其精确的量(定量分析)，气相和质谱控制、数据的记录、分析都由电脑完成。气质联用具有非常高的灵敏度(10-5克)，并且可以分析的范围非常广泛，如药物的分析、环境污染物的分析、食品添加剂的分析、兴奋剂及毒品鉴定等。
为了解决挥发性、热稳定性差的化合物在气相色谱中的应用，可以采用衍生化试剂进行衍生化处理，提高化合物的挥发性、热稳定性。常用的衍生试剂有：硅烷化试剂、酰基化试剂和烷基化试剂。其中硅烷化衍生化法，特别是三甲基硅烷化在气相色谱分析中用途最大。许多被认为是不具有挥发性的或是在200～300℃热不稳定的含有羟基或氨基的化合物，经过硅烷化后成功的进行色谱分析，通过后者的分析检测可以对目标化合物进行定性和(或)定量分析。
但由于天然产物中大极性化合物种类多，采用常规的硅烷化衍生化法虽使衍生物挥发性增强，制备快速、简便，衍生化反应可在室温下几分钟完成，适用于醛糖、酮糖、甙、糖醇、糖醛酸和脱氧糖等的衍生化。但其也存在巨大的缺点：由于天然产物中组份众多，各种大小分子化合物、单糖异构体和不同大小环的特殊单糖的存在，造成色谱峰多于组分单糖的数目，从而导致混合物的定性定量分析复杂化，无法有效的完成对天然产物中有效成分的分析，因此目前本法未有在天然产物分析中实际应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简单、快速准确的方法，对延胡索中的水溶性非生物碱类化合物(即大极性醇，酸，单糖和低聚糖类等化合物)进行检测分析。
同时通过本发明还可对延胡索中非生物碱类化合物含量进行检测以此监控延胡索药材质量。这是因为，延胡索水溶性非生物碱类化合物中的酸和糖类物质的含量直接影响了延胡索水溶性提取物的抗心肌缺血作用(即总黄酮的药效作用)。
在本发明研究过程中发现，大分子物质将严重影响气相色谱质谱联用方法的检测结果，因此，在延胡索水溶性非生物碱类化合物含量检测中必须进 行前处理，将大分子物质清除干净，去除其对检测结果的影响。
本发明的具体步骤包括：
(1)取延胡索水溶性非生物碱类提取物，高速离心后过滤；
(2)取(1)的上清液干燥后进行三甲基硅烷化衍生化处理；
(3)将步骤(2)的衍生化产物用气相色谱质谱联用方法分析。
步骤(1)具体方法为：
(a)延胡索粉碎后用30wt％～70wt％的乙醇溶液提取2～4次，过滤，取滤液；每次乙醇溶液重量为延胡索药材药粉的4～8倍；
优选方案为：取延胡索药材粗粉，50wt％乙醇溶液提取三次，每次乙醇溶液的用量为延胡索药材粗粉重量的6倍；
(b)将滤液浓缩至六分之一到五分之一体积，加入无水乙醇，调节乙醇浓度80wt％～85wt％，8000～12000rpm高速离心4～10min后过滤，取滤液；
(c)将滤液过大孔树脂柱，并用3～6倍柱体积的纯水洗脱；大孔树脂优选DA201，收集4倍柱体积的纯水洗脱获得的部位。
取(c)的水洗脱部位，干燥后进行三甲基硅烷化衍生化处理；
三甲基硅烷化衍生化处理的步骤包括：将延胡索水溶性非生物碱类提取物与干燥的三甲基硅烷化试剂混合，以吡啶或甲氧胺盐酸盐的吡啶溶液为催化剂，68～75℃下密闭反应0.5～1小时；所述三甲基硅烷化试剂为双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与三甲基氯硅烷的混合物，两者体积比优选为99∶1；
优选方案是：称取经氮气吹干的样品于衍生化瓶中，然后加入催化剂吡啶和经氮气吹干的硅烷化试剂(99％BSTFA+1％TMS)，于70℃恒温水浴中密闭反应1小时，冷却，得三甲基硅烷化反应溶液。
收集所得到的衍生化产物，采用气相色谱质谱联用方法分析，气相色谱条件为：采用非极性毛细管柱；进样口温度：256～262℃；检测器温度：256～262℃；程序升温：初始温度88～92℃，保持3～5分钟，以5.5～7℃/min的速率升至200～202℃，保持4～6分钟，再以每分钟8～12℃速率升至246～255℃，保持 8～15分钟；载气为高纯氮气、氖气或氦气，载气流速为1.7～2ml/min；分流进样，分流比9∶1～10∶1；进样量：2～5μl；
质谱条件为：离子源温度：218～225℃，传输杆温度：245～254℃，电子轰击能量：50～100eV；灯丝电流：35～45μA，检测电压：2500～3000V。
步骤(3)气相色谱条件的一个优选实施方案是：非极性毛细管柱；进样口温度：260℃；检测器温度：260℃；程序升温：初始温度90℃，保持4分钟，以每分钟6℃升至200℃，保持5分钟，再以每分钟10℃升至250℃，保持10分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟1.9ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
步骤(3)质谱条件的一个优选实施方案是：离子温度：220℃，传输杆温度：250℃，电子轰击能量：70eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
步骤(3)气相色谱条件的另一个优选实施方案是：非极性毛细管柱；进样口温度：258℃；检测器温度：258℃；程序升温：初始温度91℃，保持3.5分钟，以每分钟6.5℃升至202℃，保持6分钟，再以每分钟9℃速率升至252℃，保持12分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟2ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
步骤(3)质谱条件的另一个优选实施方案是：离子源温度：222℃，传输杆温度：252℃，电子轰击能量：80eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
根据本发明，可以检测出约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物。按照色谱峰面积归一化法计算，实施例4～9中磷酸、D-吡喃葡萄糖、环己六醇、乳糖的含量如表1所示。
表1 实施例4～9中磷酸、D-吡喃葡萄糖、环己六醇、乳糖的含量
| 实施例 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| 磷酸 | 6.45％ | 6.51％ | 6.72％ | 6.78％ | 5.44％ | 7.30％ |
| D-吡喃葡萄糖 | 2.52％ | 2.59％ | 2.53％ | 2.52％ | 2.52％ | 2.61％ |
| 环己六醇 | 12.13％ | 12.32％ | 12.09％ | 12.02％ | 12.13％ | 13.67％ |
| 乳糖 | 15.91％ | 15.76％ | 15.85％ | 16.51％ | 15.91％ | 14.31％ |
本发明中发现，实施例1中的延胡索水溶性非生物碱类化合物中的总黄酮类具有较好的抗心肌缺血作用，实施例2次之，实施例3最差。这可能是由于 磷酸等酸性物质增加了总黄酮类物质的溶解性，而D-吡喃葡萄糖、乳糖等糖类物质减少溶液中氧的含量，有助于黄酮类物质的稳定性，这两者都具有保护总黄酮的作用。
本发明提供了一种简单、快速、准确的方法，考察了延胡索水溶性非生物碱类化合物的提取条件，采用50wt％的乙醇溶液最大化的提取了延胡索中的水溶性非生物碱类化合物，再用高速离心的方法出去蛋白质、高聚糖等大分子化合物；其次，还对衍生化条件进行了工艺优化，摸清了衍生化的最佳反应试剂、时间和温度等条件，提高了衍生化的生成率；最后，还对气相色谱质谱联用的检测条件进行了摸索，找到了最优的检测条件。这三个措施部分解决了延胡索中水溶性非生物碱类化合物成分(即大极性醇，酸，单糖和低聚糖类等化合物)在气相色谱法中由于衍生物导致的色谱峰多于单糖的数目问题，使利用气相色谱法进行延胡索中水溶性非生物碱类化合物成分(即大极性醇，酸，单糖和低聚糖类等化合物)的定性和定量检测分析成为可能，而且本发明建立了一套评价延胡索水溶性非生物碱类化合物标准的质量体系(如以磷酸、D-吡喃葡萄糖、环己六醇、乳糖等为评价指标，糖类物质含量越多，则总黄酮物质越稳定，其抗心肌缺血作用越强)，这些发明对于充分了解传统良药延胡索的化学成分及控制延胡索水溶性提取物的质量有着重要意义，为延胡索的深入开发提供了研究资料，使研究和生产更加安全、有效和质量可控的延胡索新药成为可能。
附图说明
图1为实施例1总离子流图。
图2为实施例1磷酸的三甲基硅烷化产物的MS/MS质谱图。
图3为实施例1D-吡喃葡萄糖的三甲基硅烷化产物的MS/MS质谱图.
图4为实施例1环己六醇的三甲基硅烷化产物的MS/MS质谱图。
图5为实施例1乳糖的三甲基硅烷化产物的MS/MS质谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明：
仪器与材料
GCT-Premier GC-TOF气相色谱串接质谱仪(Waters公司)；
高速离心机(北京京立离心机有限公司)；
延胡索为浙江东阳071201批、浙江磐安071012批和安徽芜湖071222批；
DA201大孔树脂(南开大学化工厂)；
高纯氮(纯度：99.999％)；吡啶为分析纯；
三甲基硅烷化试剂：双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)与三甲基氯硅烷(TMCS)混合物(阿拉丁试剂(中国)有限公司)，两者体积比为99∶1。其他所用试剂为分析纯。
实施例1 延胡索的水溶性非生物碱类化合物的制备(1)
延胡索药材粗粉(浙江东阳071201批)5kg，用50wt％乙醇溶液在室温下提取三次，每次使用30kg乙醇溶液，每次提取时间为1～2小时；将提取液浓缩至六分之一至五分之一体积，加入无水乙醇，调节乙醇浓度至85％，转速为10000r/min高速离心5分钟后过滤，取滤液，过DA201大孔树脂柱(药材与树脂重量比例1∶20)，收集4倍柱体积的纯水洗脱部位，浓缩，经氮气吹干至无水恒重。
实施例2 延胡索的水溶性非生物碱类化合物的制备(2)
延胡索药材粗粉(浙江磐安071012批)5kg，用50wt％乙醇溶液在室温下提取三次，每次使用30kg乙醇溶液，每次提取时间为1～2小时；其余同实施例1。
实施例3 延胡索的水溶性非生物碱类化合物的制备(3)
材料为延胡索药材粗粉(安徽芜湖071222批)5kg，其余同实施例1。
实施例4 三甲基硅烷化，气相色谱质谱法分析延胡索中水溶性非生物碱类化合物
1.三甲基硅烷衍生化 称取3.0mg实施例1所制备的干燥样品于衍生化瓶中，然后加入吡啶0.5ml，经氮气吹干的双(三甲基硅烷基)三氟乙 酰胺∶三甲基氯硅烷(v/v)＝99∶1(99％BSTFA+1％TMS)1ml，旋紧螺旋帽，于70℃恒温水浴中密闭反应0.5小时，冷却，得三甲基硅烷化反应溶液。取上清液进样分析。
2.气相(GC)条件色谱柱：HP-5毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)；进样口温度：260℃，检测器温度260℃；程序升温：初始温度90℃，保持4分钟，以每分钟6℃升至200℃，保持5分钟，再以每分钟10℃升至250℃，保持10分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟1.9ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
3.质谱(MS)条件离子源温：220℃，传输杆温度：250℃，电子轰击能量：70eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
4.结果
在总离子流图(图1)中，可以检测到约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物的硅烷化产物。按照色谱峰面积归一化法计算，其中磷酸(图2)的含量占6.4％，D-吡喃葡萄糖(图3)的含量占2.5％，环己六醇(图4)的含量占12.1％，乳糖(图5)的含量占15.8％。
对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表2。
表217个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.159 | 甲基三羟基硅烷 | 1.07 |
| 5.675 | 2-羟基丙酸 | 0.39 |
| 10.959 | 甘油 | 0.68 |
| 11.292 | 磷酸 | 6.45 |
| 11.792 | 丁二酸 | 0.28 |
| 12.326 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.46 |
| 14.543 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.37 |
| 15.793 | 苹果酸 | 0.94 |
| 18.710 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.17 |
[0061]
| 20.643 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.19 |
| 22.127 | 枸橼酸 | 4.87 |
| 23.543 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.28 |
| 25.610 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.24 |
| 26.427 | 软脂酸 | 3.4 |
| 28.510 | 环己六醇 | 12.13 |
| 30.872 | 硬脂酸 | 0.73 |
| 34.111 | 乳糖 | 15.91 |
实施例5
称取3.0mg实施例1所制备的干燥样品于衍生化瓶中，然后加入吡啶0.5ml，(99％BSTFA+1％TMS)0.5ml，旋紧螺旋帽，于70℃恒温水浴中密闭反应1小时，冷却，得三甲基硅烷化反应溶液。取上清进样分析。
其余操作同实施例4，可以检测出约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物。对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表3。
表3 17个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.152 | 甲基三羟基硅烷 | 1.14 |
| 5.679 | 2-羟基丙酸 | 0.41 |
| 10.951 | 甘油 | 0.65 |
| 11.290 | 磷酸 | 6.51 |
| 11.799 | 丁二酸 | 0.29 |
| 12.320 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.44 |
| 14.545 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.36 |
| 15.797 | 苹果酸 | 0.98 |
| 18.719 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.19 |
| 20.650 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.18 |
[0067]
| 22.135 | 枸橼酸 | 4.91 |
| 23.541 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.31 |
| 25.617 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.28 |
| 26.420 | 软脂酸 | 3.51 |
| 28.517 | 环己六醇 | 12.32 |
| 30.876 | 硬脂酸 | 0.71 |
| 34.110 | 乳糖 | 15.76 |
实施例6
称取3.0mg实施例1所制备的干燥样品于衍生化瓶中，加入0.5ml甲氧胺盐酸盐的吡啶溶液，置于70℃烘箱中反应1小时后，再加入经氮气吹干的(99％MSTFA+1％TMS)0.70ml，于70℃恒温水浴中密闭反应1小时，冷却，得三甲基硅烷化反应溶液。取上清进样分析。
其余操作同实施例4，可以检测出约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物。对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表4。
表4 17个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.161 | 甲基三羟基硅烷 | 1.19 |
| 5.679 | 2-羟基丙酸 | 0.40 |
| 10.964 | 甘油 | 0.62 |
| 11.280 | 磷酸 | 6.72 |
| 11.801 | 丁二酸 | 0.26 |
| 12.320 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.49 |
| 14.549 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.39 |
| 15.781 | 苹果酸 | 1.00 |
| 18.717 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.17 |
| 20.651 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.21 |
[0073]
| 22.133 | 枸橼酸 | 4.99 |
| 23.546 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.27 |
| 25.599 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.26 |
| 26.430 | 软脂酸 | 3.31 |
| 28.517 | 环己六醇 | 12.09 |
| 30.881 | 硬脂酸 | 0.76 |
| 34.115 | 乳糖 | 15.85 |
实施例7 三甲基硅烷化，气相色谱质谱法分析延胡索中水溶性非生物碱类化合物
称取3.0mg实施例1所制备的干燥样品于衍生化瓶中，然后加入吡啶0.5ml，经氮气吹干的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺∶三甲基氯硅烷(v/v)＝99∶1(99％BSTFA+1％TMS)1ml，旋紧螺旋帽，于70℃恒温水浴中密闭反应0.5小时，冷却，得三甲基硅烷化反应溶液。取上清进样分析。
气相(GC)条件：色谱柱：HP-5毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)；进样口温度：258℃，检测器温度258℃；程序升温：初始温度91℃，保持3.5分钟，以每分钟6.5℃升至202℃，保持6分钟，再以每分钟9℃升至252℃，保持12分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟2ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
质谱(MS)条件：离子源温：222℃，传输杆温度：252℃，电子轰击能量：80eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表5。
表5 17个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.150 | 甲基三羟基硅烷 | 1.09 |
| 5.679 | 2-羟基丙酸 | 0.44 |
| 10.966 | 甘油 | 0.72 |
[0081]
| 11.279 | 磷酸 | 6.78 |
| 11.798 | 丁二酸 | 0.25 |
| 12.335 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.43 |
| 14.559 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.42 |
| 15.822 | 苹果酸 | 0.98 |
| 18.701 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.15 |
| 20.637 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.19 |
| 22.140 | 枸橼酸 | 4.79 |
| 23.557 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.25 |
| 25.623 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.27 |
| 26.411 | 软脂酸 | 3.69 |
| 28.524 | 环己六醇 | 12.02 |
| 30.897 | 硬脂酸 | 0.74 |
| 34.130 | 乳糖 | 16.51 |
实施例8
称取3.0mg实施例2所制备的干燥样品于衍生化瓶中，其余操作同实施例4。
可以检测出约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物，对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表6。
表6 17个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.172 | 甲基三羟基硅烷 | 1.31 |
| 5.670 | 2-羟基丙酸 | 0.50 |
| 10.944 | 甘油 | 0.57 |
| 11.305 | 磷酸 | 5.44 |
| 11.792 | 丁二酸 | 0.22 |
| 12.313 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.53 |
[0087]
| 14.553 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.45 |
| 15.782 | 苹果酸 | 0.94 |
| 18.721 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.17 |
| 20.631 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.19 |
| 22.147 | 枸橼酸 | 4.87 |
| 23.530 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.28 |
| 25.631 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.24 |
| 26.435 | 软脂酸 | 3.4 |
| 28.497 | 环己六醇 | 12.13 |
| 30.884 | 硬脂酸 | 0.73 |
| 34.123 | 乳糖 | 15.91 |
实施例9
称取3.0mg实施例3所制备的干燥样品于衍生化瓶中，其余操作同实施例4。
可以检测出约50多种延胡索中水溶性非生物碱类化合物，对延胡索水溶性非生物碱类化合物成分中的17种进行质谱检测，17个化合物同标准品比对一致，相对含量经峰面积归一化法测得，结果见表7。
表7 17个延胡索水溶性非生物碱类化学成分TR和含量
| TR(min) | 延胡索水溶性非生物碱类化合物 | 含量(％) |
| 5.203 | 甲基三羟基硅烷 | 1.36 |
| 5.617 | 2-羟基丙酸 | 0.51 |
| 10.833 | 甘油 | 0.92 |
| 11.311 | 磷酸 | 7.30 |
| 11.825 | 丁二酸 | 0.39 |
| 12.359 | 2，3-二羟基丙酸 | 0.39 |
| 14.501 | 3，4-二羟基，2-羰基呋喃 | 0.49 |
| 15.701 | 苹果酸 | 0.78 |
| 18.121 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.22 |
[0093]
| 20.699 | 核糖酸-1，4-内酯 | 0.20 |
| 22.146 | 枸橼酸 | 5.64 |
| 23.501 | α-D-吡喃葡萄糖 | 1.10 |
| 25.704 | β-D-吡喃葡萄糖 | 1.51 |
| 26.486 | 软脂酸 | 4.21 |
| 28.476 | 环己六醇 | 13.67 |
| 30.903 | 硬脂酸 | 0.59 |
| 33.924 | 乳糖 | 14.31 |
Claims (10)
1.延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取延胡索水溶性非生物碱类提取物，高速离心后过滤；
(2)取(1)的上清液干燥后进行三甲基硅烷化衍生化处理；
(3)将步骤(2)的衍生化产物用气相色谱质谱联用方法分析。
2.权利要求1所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述延胡索水溶性非生物碱类提取物的制备方法为，延胡索粉碎后用30wt％～70wt％乙醇溶液提取，过滤，滤液浓缩至六分之一到五分之一体积，加入无水乙醇，调节乙醇浓度至80wt％～85wt％，8000～12000rpm高速离心4～10min后过滤，取滤液过大孔树脂柱，并用纯水洗脱。
3.权利要求2所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，用3～6倍柱体积纯水洗脱。
4.权利要求1所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，步骤(2)所述三甲基硅烷化衍生化处理的步骤包括：将干燥的延胡索水溶性非生物碱类提取物和干燥的三甲基硅烷化试剂混合，以吡啶或甲氧胺盐酸盐的吡啶溶液为催化剂，68～75℃下密闭反应0.5～1小时。
5.权利要求1所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述三甲基硅烷化试剂为双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与三甲基氯硅烷的混合物。
6.权利要求1所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，步骤(3)所述气相色谱质谱联用方法分析，气相色谱条件为：采用非极性毛细管柱；进样口温度：256～262℃；检测器温度：256～262℃；程序升温：初始温度88～92℃，保持3～5分钟，以5.5～7℃/min的速率升至200～202℃，保持4～6分钟，再以每分钟8～12℃速率升至246～255℃，保持8～15分钟；载气为高纯氮气、氖气或氦气，载气流速为1.7～2ml/min；分流进样，分流比9∶1～10∶1；进样量：2～5μl；
质谱条件为：离子源温度：218～225℃，传输杆温度：245～254℃，电子轰击能量：50～100eV；灯丝电流：35～45μA，检测电压：2500～3000V。
7.权利要求1或6所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述的气相色谱条件为：
非极性毛细管柱；进样口温度：260℃；检测器温度：260℃；程序升温：初始温度90℃，保持4分钟，以每分钟6℃升至200℃，保持5分钟，再以每分钟10℃速率升至250℃，保持10分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟1.9ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
8.权利要求1或6所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述的质谱条件为：离子源温度：220℃，传输杆温度：250℃，电子轰击能量：70eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
9.权利要求1或6所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述的气相色谱条件为：
非极性毛细管柱；进样口温度：258℃；检测器温度：258℃；程序升温：初始温度91℃，保持3.5分钟，以每分钟6.5℃升至202℃，保持6分钟，再以每分钟9℃速率升至252℃，保持12分钟；载气为高纯氮气，载气流速为每分钟2ml；分流进样，分流比10∶1；进样量：2μl。
10.权利要求1所述延胡索水溶性非生物碱类化合物的分析检测方法，其特征在于，所述的质谱条件为，离子源温度：222℃，传输杆温度：252℃，电子轰击能量：80eV，灯丝电流：40μA，检测电压：2700V。
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Denomination of invention: Analytical Methods for Water Soluble Non Alkaloid Compounds of Corydalis yanhusuo Effective date of registration: 20221024 Granted publication date: 20160330 Pledgee: Bank of China Limited Lanxi Sub-branch Pledgor: ZHEJIANG CONBA PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2022980019363 |
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Granted publication date: 20160330 Pledgee: Bank of China Limited Lanxi Sub-branch Pledgor: ZHEJIANG CONBA PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Registration number: Y2022980019363 |