CN102686208A

CN102686208A - 包含过氧化苯甲酰的微胶囊和包含所述微胶囊的局部用组合物

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Publication number: CN102686208A
Application number: CN2010800553902A
Authority: CN
Inventors: D·戈尔茨坦; T·萨吉; Y·亚斯曼; O·普瑞沃洛瓦; L·本诺塔贝特
Original assignee: Tagra Biotechnologies Ltd
Current assignee: Tagra Biotechnologies Ltd
Priority date: 2009-10-07
Filing date: 2010-10-07
Publication date: 2012-09-19
Also published as: BR112012007798A2; WO2011042902A3; US9682031B2; MX2012004211A; WO2011042902A2; US20120258177A1

Abstract

本发明提供包含过氧化苯甲酰的微胶囊，和包含所述微胶囊和任选的其它活性成分的局部用组合物，所述局部用组合物尤其用于治疗痤疮。

Description

包含过氧化苯甲酰的微胶囊和包含所述微胶囊的局部用组合物

技术领域

本发明涉及包含过氧化苯甲酰的微胶囊，和包含所述微囊化的过氧化苯甲酰和任选的其它活性成分的局部用组合物，所述局部用组合物尤其用于治疗痤疮。

背景技术

寻常痤疮是一种常见的皮肤病症，在青春期最常发生。它表现为非炎症性毛囊丘疹或粉刺，更为严重的形式则表现为炎症性丘疹(papule)、脓疱(pustule)和结节(nodule)。受痤疮影响较多的区域有脸部、上胸部和背部。痤疮病灶通常称为粉刺(pimple)、瘢点(blemish)、斑点(spot)、丘疹(zit)，或简单地称为痤疮(acne)。在严重痤疮病症中，天然存在的细菌痤疮丙酸杆菌(Propionibacteriumacnes)可引起炎症，从而导致微小粉刺或粉刺周围的真皮中产生炎症性病灶(丘疹、感染的脓疱，或结节)，这会引起发红且可能引起瘢痕形成或色素沉着过多。

因为痤疮几乎影响特定时间点的每个青少年，所以疗法的选择应主要基于病灶类型和痤疮严重程度，但和疾病相关的社会心理障碍和瘢痕形成的存在也可能影响治疗的方式。治疗组合可在很多情况中显著降低痤疮的数量和严重性。

过氧化苯甲酰(C₆H₅CO)₂O₂是一种无色、无嗅、无味的结晶固体，它在常规室温下稳定，但在密闭环境中和经历研磨、加热或接触火焰时易燃且会爆炸。它是一种强效氧化剂，但对人无毒且不会引起局部有害反应，并且已经用作痤疮治疗中的有效抗菌剂和角质层分离剂。

含有2.5％-5％和10％浓度的杀菌剂过氧化苯甲酰的凝胶、乳膏、洗剂和软膏被用于治疗轻度至中度痤疮。除了在其疗效上用作角质层分离剂以外，过氧化苯甲酰还通过杀死痤疮丙酸杆菌同时不像抗生素一样产生细菌耐药性来防止新的病灶。然而，过氧化苯甲酰通常引起干燥、局部刺激和发红，并且可能引起过度的皮肤刺激。过氧化苯甲酰的水溶性较差，并且在其它溶剂中化学上不稳定，这对于调配具有最佳生物利用度、稳定性和耐受性的局部用产品提出了挑战。此外，在过氧化苯甲酰构成悬浮态晶体的一些市售产品中，过氧化苯甲酰可在皮肤表面上聚集成大的团块，因而无法很好地渗透入皮脂腺。

为了提供有效的BPO递送系统，已经进行了许多尝试。US 4,056,611公开了一种治疗痤疮的治疗组合物，它是由过氧化苯甲酰微细粒子在水性醇媒介物中的稳定分散液组成。US 4,401,835公开了一种制备结晶形式的过氧化苯甲酰的方法，所述晶体的大小可低于10微米，以及将其掺入化妆和药物制剂中的方法。US 6,491,953公开了一种控释组合物，它包含吸附性聚合物、活性剂和释放延缓剂，所述活性剂可为过氧化苯甲酰，其中所述组合物具有改善的在延长的时段内释放活性剂的能力。

最近已经综述了增加基于过氧化苯甲酰的痤疮治疗的功效和耐受性的方法(Fakhouri T，Yentzer BA，Feldman SR.Advancement in benzoyl peroxide-basedacne treatment：methods to increase both efficacy and tolerability.J Drugs Dermatol.8(7)：657-61，2009)。在引用例如Jelvehgari等人.(2006)的此综述中已经讨论了包含微粒递送系统的新颖媒介物，Jelvehgari等人.(2006)公开了一种由乙基纤维素微粒组成的过氧化苯甲酰的微海绵递送系统，它是使用乳化溶剂扩散方法，通过将含有过氧化苯甲酰、乙基纤维素和二氯甲烷的有机内相加入到搅拌的含有聚乙烯醇的水相中而制备。微海绵的显微照片显示它们为球形，具有孔隙且平均粒径在230-450μm的范围内(Jelvehgari M，Siahi-Shadbad MR，Azarmi S，Martin GP，Nokhodchi A.The microsponge delivery system of benzoyl peroxide：preparation，characterization and release studies.Int J Pharm.308(1-2)：124-32，2006)。

非常需要提供稳定的、允许过氧化苯甲酰立即释放到皮肤且在保持治疗痤疮的有效性的同时产生减少的刺激性的过氧化苯甲酰制剂。

本申请的同一申请人的US 6,932,984和WO 2007/023495公开了一种使用非氯化溶剂，通过溶剂去除方法对物质进行微囊化的方法。所述方法仅基于物理过程，且不会引起原料的原始物理和/或化学性质、生物学活性和安全性在所述过程中发生任何变化。本方法使微胶囊在制剂制备期间具有物理稳定性，能很好地封闭活性剂，保护微胶囊内部的活性剂，防止微囊化的活性剂扩散到水基制剂中的外部水相中，和实现仅在施用于皮肤时才发生最佳控释。

发明内容

发明人现已发现，通过使用利用非氯化溶剂的溶剂去除方法，可获得含过氧化苯甲酰的微胶囊，其实现过氧化苯甲酰的最佳保护/隔离同时在接触皮肤时实现最佳释放。

本发明因此涉及局部施用的稳定微胶囊，其包含0.1-99％过氧化苯甲酰和由选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚、纤维素酯或其组合的成壁聚合物材料形成的外壳。

本发明进一步涉及制备所述微胶囊的方法，和包含所述微胶囊的局部施用的水基组合物，所述水基组合物尤其用于治疗痤疮。

本发明进一步涉及含有绿色颜料的微胶囊，和包含所述微胶囊的局部施用的组合物。

附图说明

图1A-1E显示游离BPO的扫描电子显微镜(SEM)图像，放大倍数为x16000(1A)、x8000(1B)、x4000(1C)、x1000(1D)和x125(1E)。

图2A-2C显示PMMA-BPO微胶囊(样品#2)的SEM图像，放大倍数为x4000(2A)、x1000(2B)和x500(2C)。在2A中，指示了外壳厚度。在2B和2C中，指示了示例性微胶囊的直径。

图3A-3C显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#10)的SEM图像，放大倍数为x4000(3A)、x1000(3B)和x250(3C)。在3A中，指示了外壳厚度。

图4A-4C显示三月桂精-乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#16)的SEM图像，放大倍数为x4000(4A)、x1000(4B)和x400(4C)。

图5A-5B显示三月桂精-乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#21)的SEM图像，放大倍数为x8000(5A)和x400(5B)。

图6A-6B显示在施加轻微压力之前(6A)和之后(6B)，凝胶中BPO微胶囊的光学显微镜图像。

图7描绘使用刚果红溶液测试的定性扩散研究的结果：右侧烧杯-未加入过氧化苯甲酰(BPO)的刚果红溶液；中间烧杯-因为游离BPO的氧化，刚果红的颜色变为黄色；左侧烧杯-在存在本发明的BPO微胶囊的情况下，刚果红溶液的颜色没有变化。

图8显示和仅外部水相中的BPO浓度相比，在40℃下温育之前和之后总凝胶制剂中的BPO浓度。微胶囊掺入凝胶制剂中并在40℃下温育86天。没有观察到BPO从微胶囊显著扩散到制剂外部介质中。

图9显示在40℃下温育30天时，含有1％游离视黄醇的凝胶中的BPO微胶囊的稳定性和游离BPO(5％最终BPO浓度)的稳定性的对比。

图10显示在37℃下温育1-2天的时期之后BPO的抗微生物活性。值为平均值±SD。N＝3。*指示Tukey-Kramer多重比较的P值为至少0.05。

图11A-11B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#65)的SEM图像，放大倍数为x2000(11A)和x1000(11B)。在11B中，指示了示例性微胶囊的直径。

图12A-12B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#67)的SEM图像，放大倍数为x4000(12A)和x500(12B)。在12B中，指示了示例性微胶囊的直径。

图13A-13B显示PMMA-BPO微胶囊(样品#75)的SEM图像，放大倍数为x10000(13A)和x1000(13B)。在13B中，指示了示例性微胶囊的直径。

图14A-14B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#77)的SEM图像，放大倍数为x5000(14A)和x500(14B)。

图15A-15B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#81)的SEM图像，放大倍数为x5000(15A)和x1000(15B)。

图16A-16B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#90)的SEM图像，放大倍数为x5000(16A)和x1000(16B)。在16B中，指示了示例性微胶囊的直径(从a到b的距离)。

图17A-17B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#91)的SEM图像，放大倍数为x5000(17A)和x1000(17B)。在17B中，指示了示例性微胶囊的直径(从a到b的距离)。

图18A-18C显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#92)的SEM图像，放大倍数为x5000(18A)、x5000(18B)和x1000(18C)。在18C中，指示了示例性微胶囊的直径(从a到b的距离)。

图19A-19B显示PMMA-BPO微胶囊(样品#93)的SEM图像，放大倍数为x5000(19A)和x1000(19B)。在19B中，指示了示例性微胶囊的直径(从a到b的距离)。

图20A-20B显示乙基纤维素-BPO微胶囊(样品#95)的SEM图像，放大倍数为x5000(20A)和x1000(20B)。在20B中，指示了示例性微胶囊的直径(从a到b的距离)。

图21显示包含BPO微胶囊(样品#65、#67、#75、#77和#81)的水性凝胶制剂中的BPO稳定性。在40℃下温育90天之后，微胶囊中和未封装BPO中的BPO浓度的下降可忽略不计。

图22A-22B显示包含BPO微胶囊(样品#65、#90、#91、#92和#93)的水性凝胶制剂中克林霉素磷酸酯的稳定性，克林霉素磷酸酯在商业产品中的稳定性，和单独克林霉素磷酸酯的稳定性的比较。(22A)在包含BPO微胶囊的水性凝胶制剂中，克林霉素磷酸酯比在商业产品1和2中更稳定50-100％。(22A)增加微胶囊中BPO的填充量导致在40℃下温育30天之后克林霉素磷酸酯的稳定性提高。

图23说明氧化铬绿颜料加工直到微胶囊形成中的各个阶段：(1)氧化铬绿粒子(原料)的不规则聚集体；(2)在冷却之后，热熔颜料粒子和三山嵛精的不规则聚集体；(3)用蜡封装的颜料粒子的精细研磨；(4)(3)的第二层包衣。

具体实施方式

在一个方面中，本发明涉及局部施用的稳定微胶囊，其包含0.1-99％过氧化苯甲酰和由选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚、纤维素酯或其组合的成壁聚合物材料形成的外壳。

如本文所用的术语“微胶囊”是指球形微粒，它是由用作成壁材料的聚合物外壳和封装的过氧化苯甲酰组成，所述过氧化苯甲酰位于微胶囊核心内且亦部分存在于外壳基质中，但不存在于外壳外表面上。微胶囊和微球体截然不同，微球体是由分散在聚合物中的活性物质的球形均质颗粒组成，在严格意义上是球形的空心粒子。

术语“成壁聚合物”是指形成微胶囊的外壁或外层或外壳的组分的聚合物，或如本文所定义的两种以上不同聚合物的组合。术语“聚合物外壳”是指含有一种或多种成壁聚合物且任选地含有例如塑化剂等其它组分的聚合物层。

如本文所用的术语“稳定”是指过氧化苯甲酰在微胶囊内的稳定性，也就是说，封装操作保护过氧化苯甲酰且防止其从微胶囊释放/扩散到水基制剂中。

下文所述的用于制备本发明微胶囊的方法是基于本申请的申请人在上文提到的US 6,932,984和WO 2007/023495中所公开的微囊化溶剂去除方法。根据此项技术，活性成分存在于微胶囊核心中。此项技术杜绝了每个微囊化的成分在制造和长期储存期间发生化学和交联反应、降解、变色或效能损失，且活性成分是“根据需要释放”，也就是说，通过在皮肤上摩擦释放。

根据本发明，和US 6,932,984和WO 2007/02349中公开的活性成分相反，过氧化苯甲酰不仅存在于微胶囊核心内，而且部分溶解在聚合物外壳中。然而，在外壳的外表面不存在过氧化苯甲酰。微胶囊防止过氧化苯甲酰从微胶囊释放/扩散到皮肤上使用的水基制剂中。此外，在和皮肤接触后，过氧化苯甲酰不仅通过在皮肤上摩擦(如关于其它活性成分的US 6,932,984和WO 2007/02349中所公开)，而且通过扩散或通过摩擦和扩散的组合而从微胶囊中释放。

本发明的微胶囊的平均粒径在约1μm至约500μm的范围内。在某些实施方案中，平均粒径低于130μm，优选低于100μm，且可能在10μm至130μm、10μm至100μm、20μm至90μm、30μm至70μm或40μm至60μm的范围内。在优选实施方案中，微胶囊的平均粒径为30μm至70μm，例如30μm、40μm、50μm、60μm或70μm。

成壁聚合物材料可为聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚或纤维素酯或其组合。在一些优选实施方案中，聚合物为聚甲基丙烯酸酯，更优选为聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸(PMMA)或B型甲基丙烯酸铵酯共聚物(也称为Eudragit

)。在其它优选实施方案中，聚合物为纤维素醚或纤维素酯，例如但不限于甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸纤维素、乙酸邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素。在其它优选实施方案中，成壁聚合物材料为所述聚合物的组合，例如但不限于B型甲基丙烯酸铵酯共聚物(Eudragit

)和PMMA或乙基纤维素(EC)的组合。

本发明的微胶囊可另外包含一种或多种添加剂，所述添加剂选自一种或多种塑化剂、蜡、氮化硼或其组合。在一个实施方案中，添加剂为一种或多种塑化剂，所述塑化剂选自三辛精(tricaprylin；TC)、三月桂精(trilaurin；TL)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB)、肉豆蔻酸异丙酯、油酸单甘油酯、三棕榈精(tripalmitin)、三醋精(triacetin)或石蜡油。在另一个实施方案中，添加剂为蜡，所述蜡选自蜂蜡、abil蜡(abil wax)、羊毛脂、三异硬脂精(triisostearin)、异硬脂醇异硬脂酸酯、硬脂酸、鲸蜡醇、棕榈酸、硬脂酸甘油酯或丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯(PGMP)。在另一个实施方案中，添加剂为脂肪酸。在另一个实施方案中，添加剂为氮化硼(BN)。

在本发明的一些实施方案中，微胶囊不含添加剂。举例来说，如下文表4实施例3(样品1-4、7)和表7实施例11(样品65、75、77、91和92)中所示，制备的微胶囊含有过氧化苯甲酰和由PMMA、乙基纤维素或PMMA/Eudragit

的组合形成的外壳，但不含添加剂。

在其它实施方案中，本发明的微胶囊含有一种或多种塑化剂。举例来说，如下文表4实施例3(样品5-6、8-12、15-16、22-23)中所示，制备的微胶囊含有过氧化苯甲酰和(i)乙基纤维素外壳，其另外包含塑化剂柠檬酸三乙酯(TEC)、三月桂精(TL)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)，或TL/ABTC或ATBC/苯甲酸烷酯(AB)的混合物；(ii)EC/Eudragit

外壳，以及作为塑化剂的ATEC或ATBC；或(iii)PMMA/Eudragit

外壳，以及作为塑化剂的三辛精(TC)或乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)。所述微胶囊可含有另一种有益添加剂，例如氮化硼(BN)，以及塑化剂，例如三月桂精(参看表4中的样品13-14)。

在其它实施方案中，本发明的微胶囊含有蜡作为添加剂。举例来说，如下文表7实施例11(样品95)中所示，制备的微胶囊含有过氧化苯甲酰和乙基纤维素外壳，另外包含丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯(PGMP)作为蜡。

在一些其它实施方案中，本发明的微胶囊含有塑化剂和蜡这两者作为添加剂。举例来说，如下文表4实施例3(样品17-21)中所示，制备的微胶囊含有过氧化苯甲酰和乙基纤维素外壳，另外包含塑化剂/蜡组合作为添加剂，例如三月桂精/蜂蜡、三月桂精/羊毛脂、三月桂精/三异硬脂精、三月桂精/异硬脂醇异硬脂酸酯、三月桂精/abil wax。塑化剂/蜡的其它组合也可使用且被本发明涵盖，例如但不限于三月桂精/硬脂酸、三月桂精/鲸蜡醇、三月桂精/棕榈酸和三月桂精/硬脂酸甘油酯。

本发明的微胶囊中过氧化苯甲酰的量在20-99％、40-95％或优选60-90％的范围内。根据聚合物和存在的添加剂，聚合物占微胶囊总重的重量比有所变化。

在另一方面中，本发明涉及一种制备本发明的微胶囊的方法，所述方法包含：

a)任选地在一种或多种添加剂的存在下，制备过氧化苯甲酰和成壁聚合物材料在乙酸乙酯中的有机溶液；

b)在搅拌下将所述有机溶液和含有乳化剂的水溶液混合以形成乳液；

c)向(b)中形成的乳液中加入过量的含有和(b)中相同的乳化剂的水，以引起有机溶剂自乳液中萃取出，从而获得微胶囊；

d)任选地使微胶囊沉降；和

e)通过过滤分离c)或d)的所述微胶囊，随后用水或10％乙醇洗涤，且任选地干燥湿胶囊。

在一个实施方案中，添加剂为塑化剂，例如但不限于三辛精(TC)、三月桂精(TL)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB)、肉豆蔻酸异丙酯、油酸单甘油酯、三棕榈精、三醋精、石蜡油或其组合。在另一个实施方案中，添加剂为蜡，例如但不限于蜂蜡、abil wax、羊毛脂、三异硬脂精、异硬脂醇异硬脂酸酯、硬脂酸、鲸蜡醇、棕榈酸、硬脂酸甘油酯、丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯(PGMP)或其组合。在另一个实施方案中，添加剂为脂肪酸。在另一个实施方案中，添加剂为氮化硼(BN)。

步骤(b)和(c)中所用的乳化剂优选为聚乙烯醇。如果微胶囊进行沉降(步骤(d))，那么沉降时间在8-48小时、优选12-16小时的范围内。

如上所述，本发明的方法是基于溶剂去除方法且使用非氯化溶剂。在步骤(b)制备的乳液中，液滴大小在约40μm至200μm范围内。在从液滴萃取有机溶剂期间，聚合物硬化且形成包裹过氧化苯甲酰和所存在的任何添加剂的固体薄壁。通过悬浮和过滤分离软的微胶囊，随后洗涤，从而获得湿的成批微胶囊。利用适当设备，在受控条件下对微胶囊执行干燥过程，获得自由流动的粉末。在某些实施方案中，省略干燥步骤，且微胶囊在20％水中保持浆液/糊剂形式。所述溶剂去除方法具有以下优势：(i)允许生物学活性组分在极端条件下具有物理化学稳定性；(ii)允许生物学活性组分根据需要释放到皮肤上；(iii)允许制剂具有均质质地；和(iv)允许活性组分的高填充量(高达99％的过氧化苯甲酰)。

本发明的微胶囊有利地保护例如过氧化苯甲酰等敏感成分免于遭受环境的有害影响，例如氧化或水解。微胶囊的聚合物外壳是密闭的，且防止过氧化苯甲酰从微胶囊扩散到水性环境中，即使来自外相的少量水会渗透入微胶囊中。换句话说，所述聚合物外壳允许所述微囊化的过氧化苯甲酰掺入水基(例如水包油型(o/w))乳膏或局部用水性凝胶中，同时不会影响活性成分的稳定性。

和例如脂质体、纳米粒子、基质、海绵、环糊精和二氧化硅等其它封装方法相反，本发明的微胶囊可以很好地隔离活性剂，实现高填充量、物理稳定性和在制剂中的均质性，在极端条件下保护活性剂，以及能够在皮肤上触发释放行为。当前可用的封装方法都不能同时提供微胶囊在制剂制备期间的物理稳定性，很高的封闭活性剂的能力，对微胶囊内部的活性剂的保护作用，和在施用于皮肤时的最佳控释。

如实施例1-3所示，过氧化苯甲酰(BPO)被本发明的溶剂去除方法成功地/有效地封装。所述方法仅基于物理过程，且不会引起原料的原始物理和/或化学性质、生物学活性和稳定性在所述过程中发生任何变化。本发明的微胶囊的制造产率为80％以上。

本文(实施例5和6)显示掺入模型制剂中的本发明的BPO微胶囊在压力测试条件下防止了不合需要的化学反应。微胶囊定性地(实施例5)和定量地(实施例6)证实了保护作用。图7证实BPO微胶囊防止了刚果红和BPO反应，因此防止了BPO氧化。此外，在压力稳定性测试中(在40℃下温育86天后)，微胶囊中BPO浓度的降低可忽略不计(图8和图21)。

本文(实施例13)另外证实了BPO在微胶囊中的较高填充量(高于80％)引起组合物中的克林霉素磷酸酯的稳定性得到提高。

扫描电子显微术(SEM)结果显示微胶囊为具有聚合物外壳的球形，所述聚合物外壳具有光滑表面(图2A-2C)或粗糙的通气表面(不光滑的浅表面)(图3A-3C、4A-4C、5A-5B、11A-11B、12A-12B、13A-13B、14A-14B、15A-15B、16A-16B、17A-17B、18A-18C、19A-19B和20A-20B)。图3A、13A、17A、18A和20A包含BPO微胶囊的横截面，这些图证实外壳中各种直径的球形空穴并不跨越外壳的总宽度，且不是常规的孔隙，因为它们没有像沟槽一样从两侧都开口。因此，尽管存在粗糙的穿孔表面，外壳也不是多孔的且不会允许被封装的BPO发生泄漏。

和常规研磨技术所制备的BPO组合物相比，改良的BPO组合物具有小粒径，且避免了研磨所需的时间和相关潜在风险。BPO絮凝剂的小粒径导致对于指定浓度的BPO来说，皮肤上活性成分的表面积得到提高。

如图6A-6B所示，微胶囊仅在施加适度压力后才可破裂，且在摩擦时观察到微胶囊释放BPO。观察到良好程度的微胶囊软化。

如实施例14所示，本发明的BPO微胶囊在单次接触48小时后没有引起刺激。此外，所述微胶囊中所含的成壁聚合物在Draize重复刺激斑贴测试(RIPT)中在第10次施用时没有诱导接触性皮肤刺激，如实施例15所示。含有微囊化BPO的非刺激性组合物可用于制备适合和皮肤接触使用以便局部治疗痤疮或其它皮肤病的产品。

在包含对氧化或水解敏感的活性成分的水基局部用制剂的设计中，本发明的微胶囊显示了市场潜力。此外，本发明的微胶囊所提供的长期稳定性和控释可能性允许生物学活性成分在制造设施中制造经过很长时间之后递送到皮肤上。

在另一方面中，本发明涉及一种包含本发明微胶囊的用于局部施用的组合物。

在一个实施方案中，过氧化苯甲酰在组合物中的最终浓度在0.1-10％、更优选1-5％(w/w)的范围内。

本发明的组合物可为适合局部施用的任何形式，例如但不限于皮肤护理用的凝胶、乳膏、软膏、糊剂或洗剂。在一些优选实施方案中，组合物为水基凝胶形式。过氧化苯甲酰是亲脂性的，并且因为当施用现有醇基制剂时会引起刺激，所以关于水基凝胶制剂的进一步开发具有吸引力。乳膏制剂可为水基制剂或油基制剂。

本发明的组合物是由本领域中众所周知的方法制备。当制备凝胶时，使用胶凝剂，例如天然树胶，例如黄原胶。

包含过氧化苯甲酰微胶囊的本发明组合物尤其可用于治疗痤疮。事实上，微胶囊的功效在临床研究中得到了证实，其中在用包含本发明的过氧化苯甲酰微胶囊的凝胶制剂治疗的患者中，痤疮严重度在4周内从第2级降到第0级(数据未提供)。

因为在许多情况下认为过氧化苯甲酰若以联合疗法用于治疗痤疮时功效更高，所以本发明也涵盖另外包含一种或多种选自抗生素和维生素A或其衍生物的活性剂的组合物。

在一个实施方案中，组合物包含抗生素，例如克拉霉素(clarithromycin)、红霉素(erythromycin)、克林霉素(clindamycin)或阿奇霉素(azithromycin)，优选在一些商业制剂中和过氧化苯甲酰一起用于治疗痤疮的克林霉素。在实施例13中，制备包含本发明的BPO微胶囊和克林霉素磷酸酯的凝胶制剂，并检查其稳定性。已知组合物中的BPO和克林霉素在一起引起克林霉素分解。令人惊讶地，我们发现增加BPO微胶囊中的BPO填充量可导致在40℃下温育90天后，包含封装BPO和克林霉素磷酸酯的凝胶制剂中的克林霉素稳定性得到提高(图22B)。

和过氧化苯甲酰组合使用的维生素A可为视黄醇(维生素A的动物形式)，且维生素A衍生物可为视黄醛(醛形式)、视黄酸(酸形式)(例如维甲酸(全反式视黄酸))或视黄基酯(例如视黄醇棕榈酸酯)。在优选实施方案中，维生素A为视黄醇。

我们发现在同一组合物中组合BPO和维生素A或维生素A衍生物引起BPO和维生素A都发生降解。然而，如图9所示，当BPO被封装在本发明的微胶囊中时，降解要比游离BPO低得多。

抗生素和维生素A或其衍生物可各自在单独微胶囊中微囊化，或可以游离形式在组合物中存在。

痤疮治疗中的问题之一为治疗活性成分虽可缓解痤疮的炎症性病灶，但无法影响外部临床体征，例如红斑、毛细管扩张或发红。这些外部临床体征对患者的社会和职业生活具有影响，尤其困扰治疗中的青少年。

为了克服或减少这些外部临床体征，本发明提供医药组合物，其包含用于治疗痤疮的治疗剂且另外包含用于同时治疗痤疮病理和其相关临床体征的染料。在一些优选实施方案中，治疗剂和染料在物理和化学稳定的组合物中被单独微囊化，从而控制被封装药剂之间任何可能的不当相互作用，并维持活性剂的生物利用度。

用于中和痤疮患者面部上的弥漫性发红的染料应具有在色环上和红色相反的颜色，且应当为绿色。根据本发明可使用任何合适的绿色染料/颜料。在优选实施方案中，绿色染料为绿色颜料，例如氧化铬绿，优选在平均大小为约70μm的微胶囊中微囊化。在施用于皮肤上时，外壳破裂且颜料被立即释放出来，从而通过隐藏病灶同时遮盖皮肤发红并给予患者以即刻起效的感觉。

因此，根据本发明，使用在成壁聚合物材料外壳中包含绿色染料的用于局部施用的微胶囊，所述成壁聚合物材料选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚或纤维素酯或其组合。在某些实施方案中，绿色染料为氧化铬绿颜料，且成壁聚合物材料为乙基纤维素和Eudragit

的组合。这些微胶囊还包含蜡，优选三山嵛精，且还可包含白色颜料，优选TiO₂，以及另外的添加剂，例如氮化硼。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于治疗痤疮的局部使用的组合物，其包含作为治疗剂的过氧化苯甲酰，更具体地为本发明的微囊化过氧化苯甲酰，和作为染料的氧化铬绿，所述染料优选如本文所述被微囊化。此组合物可另外包含其它活性剂，例如上文所述的抗生素和/或维生素A或其衍生物。

氧化铬绿的微囊化是根据以上引用的US 6,932,984和WO 2007/02349中描述的溶剂去除方法进行。然而，颜料在实际微囊化之前必须经历预处理。预处理涉及将颜料和蜡、优选三山嵛精掺混。将蜡加热直到获得熔体，在加热下(80-100℃)逐渐加入颜料以获得均质分散液，将热熔体倒在铝箔上，冷却到室温，切成薄片，然后研磨成粉末。颜料粉末然后在由如本文定义的一种或多种合适的成壁聚合物(优选Eudragit

和乙基纤维素的组合)形成的外壳中微囊化。可将添加剂加入到微胶囊中，例如氮化硼(用于软化)和TiO₂(白色颜料)。

根据本发明，制备氧化铬绿颜料微胶囊的方法包括：

a)加热蜡、优选三山嵛精直到获得熔体，在加热(80-100℃)下将颜料加入到蜡熔体中以得到均质分散液，冷却，切割形成的固体并研磨成粉末；

b)任选地在一种或多种添加剂的存在下，制备a)的颜料粉末和选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚或纤维素酯或其组合的成壁聚合物材料在乙酸乙酯中的有机溶液；

c)在搅拌下将所述有机溶液和含有乳化剂的水溶液混合以形成乳液；

d)向形成的乳液中加入过量的含有和(c)中相同的乳化剂的水，以引起有机溶剂自乳液中萃取出，从而获得微胶囊；

e)任选地静置一段时间足以允许微胶囊沉降；和

f)通过过滤分离d)或e)的所述微胶囊，随后用水或10％乙醇洗涤，且干燥湿胶囊。

在某些实施方案中，成壁材料为B型甲基丙烯酸铵酯共聚物和乙基纤维素的组合，添加剂为TiO₂和BN。

本发明的组合物可另外包含在局部应用中所用的成分，例如用于皮肤舒缓的组分。

过氧化苯甲酰连同抗生素和/或维生素A或其衍生物的特定组合能够通过同时激活用于治疗痤疮的不同机制而实现最佳治疗功效，所述不同机制包括减少油性物质从皮脂腺的过度分泌，清除堵塞毛孔的死亡皮肤细胞，和处理被堵塞毛囊中的细菌。特定组合物连同微囊化技术一起能够实现对痤疮的最佳治疗。具体来说，组合物在使用后在病灶部位提供治疗有效量的活性剂(提高利用度)，实现降低的全身吸收，并获得提高的安全性特征。

包含封装BPO的本发明的组合物提供许多优势，包括：高填充量(最高99％，相比之下现有封装方法中最高仅为20％)；微胶囊在制备过程中具有很高的物理稳定性；微胶囊中的BPO受到保护，从而使保存期是未封装BPO的20到30倍；微胶囊的大小和形状很均匀，从而允许在施用于皮肤上时均匀且恒定地释放BPO；微胶囊在组合物中的分散很均匀，这确保了BPO在组合物中的均匀浓度；只有在皮肤上摩擦时才获得最佳的控释，且在病灶处具有直接的生物学活性(一方面聚合物外壳是坚硬且不可渗透的，另一方面又足够软从而允许在皮肤上施用时释放BPO)；组合物中存在若干种活性剂的组合，同时避免它们之间的不当相互作用；和生物相容性(水基非油性制剂，其避免现有解决方案中所表现出的副作用，例如刺激、发红和刺痛)。

本发明的组合物为水基制剂，其单独包含高效的局部抗菌剂过氧化苯甲酰或组合地包含过氧化苯甲酰和维生素A或其衍生物，其通过特殊的微胶囊包衣而避免环境降解。这些组合物具有优势，一方面提供灵活性且缺少光泽(由醇性和脂肪制剂引起)，另一方面增强新颖微囊化产品的效率。

微囊化可以将两种或三种被封装的活性药物成分组合在单个稳定制剂中。药物组合可提供提高的功效，这导致更好的临床结果和患者依从性。由于出现痤疮丙酸杆菌的耐抗生素菌株，针对痤疮的抗微生物治疗因此变得复杂。通过审慎地使用类维生素A(retinoid)联合新颖的有效抗生素以减少炎症和感染可抑制增加的痤疮丙酸杆菌耐药性。因此，这些新型的封装活性药物成分将为皮肤科医生提供众多局部安全的新型创新产品，这些产品能够有效地治疗现有产品难以治愈的轻度至适度重度的痤疮病灶。

本文(实施例8，尤其图8，和实施例13，尤其图21和22A-22B)证实了这种改良技术可延长活性成分和制剂的保存期，同时确保安全性并实现适当的化妆功效。此外，已经发现，由于这些新颖微胶囊的特殊外壁特征，活性成分在水基产品中可保留在微胶囊内，且在施用于皮肤时通过对该局部产品施加物理压力来实现成分的释放(图6A-6B)。所有的胶囊在局部用组合物中都维持其原始形状。活性成分受到胶囊壁充分保护，从而避免和组合物内的其它成分、特别是水进行接触。只有在微胶囊经历挤压动作时，大部分活性成分才会释放到目标区域。

绿色颜料是使用如上文所述的封装方法封装，从而获得微胶囊的白色粉末。将含有绿色颜料的这些微胶囊掺入抗痤疮制剂(乳液、乳膏、凝胶等)没有改变制剂的基础颜色。只有在施用时，才会因胶囊破裂而出现绿色的外观。绿色颜料的作用是遮盖炎症过程所致的发红，且给予患者以即刻起效的感觉。

本发明现将通过以下非限制性实施例来说明。

实施例

物质

以下列出实施例中使用的物质，同时列出其在本文中使用的缩写和其供应商：过氧化苯甲酰(BPO 75％；Aldrich)；乙基纤维素(EC；ASHA CellulosePVT，Ltd.，India)；柠檬酸三乙酯(TEC)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)和乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)，购自Unitex Chemical Corporation，Greensboro，NC；聚乙烯醇(PVA 4％；Kuraray，Japan)；Aerosil 200胶态二氧化硅(WackerChemie AG，Germany)；聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸(PMMA；平均分子量约15,000；Sigma-Aldrich)；B型甲基丙烯酸铵酯共聚物(EuRSPO；Eudragit

Rohm)；三辛精(TC，Abitex Corp.)；三月桂精(TL；Stearinerie Dubois Fils，France)；蜂蜡(PEG-7聚二甲基硅氧烷蜂蜡、蜂蜡硅化的水分散性6423 WD硅化蜂蜡)和合成羊毛脂(双-二甘油-多酰基己二酸酯-2)，两者皆购自Kahl，Poland；苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB；Polygon ChemicalLtd.)；氮化硼(BN；Mizushima Ferroalloy Co Ltd，Japan)；三异硬脂精(Phoenix Chemicals Inc.的Pelemol GTIS)；异硬脂醇异硬脂酸酯(A&EConnock)；Abil蜡(鲸蜡基聚二甲基硅氧烷Abil wax 9814，GoldschmidtChemical Corp.)；Geogard(Lonza，Switzerland)；黄原胶(Roeper GmbH，Germany)；丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯(Gattfoss′e，Toronto，Canada)；氧化铬绿(Sun Chemical)；Syncrowax HRC(三山嵛精，Croda，UK)；二氧化钛-X402(Kemira)。

实施例1.制备过氧化苯甲酰微胶囊的通用程序

通过溶剂去除方法制备微胶囊，所述方法包括：

a)任选地与一种或多种添加剂，例如塑化剂、蜡或其混合物一起，制备过氧化苯甲酰和成壁聚合物材料在乙酸乙酯中的有机溶液；

c)向形成的乳液中加入过量的含有和(b)中相同的乳化剂的水，以引起有机溶剂自乳液中萃取出，从而获得微胶囊；

d)任选地静置一段时间足以允许微胶囊沉降；和

e)通过过滤分离所述微胶囊，随后用水或10％乙醇洗涤(以去除乙酸乙酯残余物)，且任选地干燥湿胶囊。

实施例2.制备含有过氧化苯甲酰的乙基纤维素微胶囊

2.1制备有机相(“母料”)：通过在搅拌下将33g成壁聚合物乙基纤维素N7(33g)逐渐加入到400g乙酸乙酯中并充分搅拌到混合物均匀(约15分钟)来制备有机相(本文称为“母料”(MB))。将塑化剂柠檬酸三乙酯(1g)加入到此混合物中，进一步搅拌约3分钟。然后将BPO(75％过氧化苯甲酰，88g，等于66g的100％BPO)逐渐加入到混合物中，继续搅拌直到获得透明溶液(表1中详述组成)。

表1.MB(有机相)组成

2.2制备乳液：通过混合水(1055g)和聚乙烯醇(PVA 4％，70g)来制备水溶液，使得水相包含0.25％PVA。以400RPM搅拌10分钟将乙酸乙酯(125g)加入到水相。以800RPM搅拌将以上2.1的母料逐渐加入到乙酸乙酯/水乳液中，另外搅拌10分钟(表2中详述组成)。

表2.乳液组成

2.3萃取程序：通过混合13150g水和165g PVA溶液4％来制备萃取相(表3中详述组成)。以600RPM搅拌将以上2.2的乳液逐渐加入到萃取相中，另外搅拌15分钟。萃取相然后静置一整夜，沉降出形成的微胶囊。

表3.萃取内容物

物质	100g部分中的填充量(g)
		PVA溶液4％	165
水	13150
		乳液	1772

2.4洗涤和干燥程序：通过过滤分离以上2.3的沉降微胶囊，其为“滤饼”形式。将水(0.6L)加入到过滤的“滤饼”中，混合15分钟，然后过滤。然后将微胶囊“滤饼”放入容器中，碾碎，并在室温下干燥48小时。将干胶囊和Aerosil200胶态二氧化硅(总重的0.5％)混合并用自动筛分机进行筛分。经筛分的含有过氧化苯甲酰的微胶囊保持在室温下。

获得的BPO微胶囊的平均粒径为50μm，BPO含量(通过HPLC测量)为65％，且制造产率为82％。

实施例3.制备其它BPO微胶囊

使用以上实施例1和实施例2中详述的程序制备各种类型的包含BPO的微胶囊。不同微胶囊的组成、平均粒径和BPO含量在以下表4中详述。

成壁聚合物为单独的聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸(PMMA)(样品1-3)或PMMA和B型甲基丙烯酸铵酯共聚物(Eudragit

)的组合(样品4-6)，单独的乙基纤维素(EC N7或N45)(样品7-14和17-23)或乙基纤维素和Eudragit

的组合(样品15-16)。在样品1-4和7中没有使用塑化剂。在其它样品中，使用单独的或组合形式的以下塑化剂：乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、三辛精(TC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、三月桂精(TL)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)或苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB)。在样品17-21中，组合使用以下蜡和塑化剂三月桂精：蜂蜡、羊毛脂、三异硬脂精、异硬脂醇异硬脂酸酯和abil蜡。在样品13和14中，组合使用氮化硼和塑化剂三月桂精。

表4.BPO微胶囊原型

*在SEM中测试的样品

PMMA-聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸，EuRSPO-EudragitEC-乙基纤维素。

实施例4.制备包含BPO微胶囊的凝胶制剂

通过加热到50-60℃将Geogard(0.7g；同时兼具三种不同防腐剂途径、即酸、醇和季铵化合物的活性的防腐剂)溶解在水(100g)中。在适度混合下缓慢加入黄原胶(1g)直到形成黄原胶凝胶。然后通过简单混合向凝胶中加入BPO微胶囊。

实施例5.游离BPO和BPO微胶囊的扫描电子显微镜图像

5.1制备PMMA-BPO微胶囊：如以上实施例1和实施例2中所详述，制备包含66％BPO和34％PMMA的微胶囊(以上表4中的样品2)。微胶囊的平均粒径为50μm。

5.2制备乙基纤维素-BPO微胶囊：如以上实施例1和实施例2中所详述，制备包含66％BPO、1％TEC和33％乙基纤维素的微胶囊(以上表4中的样品10)。微胶囊的平均粒径为50μm。

5.3制备三月桂精-乙基纤维素-BPO微胶囊：如以上实施例1和实施例2中所详述，制备包含52％BPO、18％三月桂精、1％ATBC和29％乙基纤维素的微胶囊(以上表4中的样品16)。微胶囊的平均粒径为50μm。

5.4制备三月桂精-乙基纤维素-BPO微胶囊：如以上实施例1和实施例2中所详述，制备包含55％BPO、30％三月桂精和15％乙基纤维素的微胶囊(以上表4中的样品21)。微胶囊的平均粒径为40μm。

5.5制备包含BPO微胶囊的凝胶制剂：如以上实施例4中所述制备黄原胶凝胶。

5.6扫描电子显微术(SEM)：游离BPO的SEM图像指示BPO粒子为聚集体(图1A-1E)。PMMA-BPO微胶囊(如以上章节5.1中所述制备)的SEM图像显示其为具有光滑表面的球形(图2A-2C)。图2A显示具有PMMA聚合物外壳的微胶囊的聚合物外壳光滑且无孔，估计厚度为1.1μm。图3A-3C、4A-4C和5A-5B分别为如以上章节5.2-5.4中所述制备的乙基纤维素-BPO微胶囊的SEM图像。这些图像显示其中成壁聚合物为乙基纤维素的BPO微胶囊的聚合物外壳较厚(4μm)且具有粗糙的通气表面(不光滑的浅表面)(图3A-3C)。图3A中，可以看到各种直径的球形空穴都小于外壳宽度，因此不是常规的孔隙。

实施例6.通过摩擦动作从微胶囊释放BPO

6.1制备PMMA-BPO微胶囊：如以上章节5.1所述制备微胶囊(以上表4中的样品2)。

6.2通过摩擦动作从微胶囊释放BPO：光学显微镜检查揭示凝胶中的完整粒子的平均粒径为大约40μm(图6A)。通过用手指对显微镜的上载玻片施加轻微压力实现活性成分BPO从胶囊的释放。再次检查载玻片，发现存在破裂和变形的微胶囊(图6B)。在软BPO微胶囊中，压力导致脂质-聚合物外壳完全破裂，从而释放出所有被封闭的油相内容物。

实施例7.BPO微胶囊保护BPO不被氧化并防止BPO从微胶囊中释放(定性评估)

7.1制备PMMA-BPO微胶囊：如以上章节5.1所述制备微胶囊(以上表4中的样品2)。微胶囊的平均粒径为50μm。

7.2氧化敏感性实验：使用偶氮染料刚果红作为氧化敏感性组分的模型，BPO/刚果红的比率＝30∶1(w/w)。

利用三个比较系统：

1-BPO微胶囊(样品2)

2-游离BPO

3-无BPO(空白)

为了制备(1)和(2)，将9g(9ml)含有4％(w/w)(游离或被封装的)BPO的水性分散液悬浮于0.1％Tween^TM 20(聚山梨醇酯20)和9g液体媒介物中，并在25ml烧杯中用磁力搅拌子搅拌。在混合30分钟之后，升高系统温度至50-55℃，并加入1ml的1％刚果红水溶液。通过搅拌9ml 0.1％Tween^TM 20和9g液体媒介物并加入1ml的1％刚果红水溶液来制备空白系统(3)。悬浮液搅拌1分钟后，拍摄三个系统的照片。

在图7中可以看出，无BPO的刚果红溶液显示红色，含游离BPO的刚果红溶液因为BPO氧化而从红色变为黄色，含BPO微胶囊的刚果红未改变颜色。图7因此证实BPO微胶囊防止刚果红和BPO反应，从而保护BPO不被氧化，而游离BPO的确和刚果红指示剂反应。

这些结果显示，在温育30分钟后BPO没有从微胶囊释放到刚果红溶液中，因为没有观察到颜色强度的降低。实际上，当游离BPO以与微胶囊中的相同浓度溶解在刚果红溶液中时，立即辨别出漂白效应，而在防止体外BPO释放的微胶囊的情况下红色则没有变化。

实施例8.BPO微胶囊防止BPO从微胶囊释放(定量评估)

8.1制备BPO微胶囊：如以上实施例1和实施例2中所详述，制备包含53％BPO、10％乙基纤维素和37％三月桂精的微胶囊(以上表4中的样品20)。微胶囊的平均粒径为30μm。

8.2化学稳定性测试：以5％的最终BPO浓度将BPO微胶囊掺入凝胶制剂中，并在40℃下温育86天。在掺入凝胶制剂后立即测定BPO浓度，并在86天后测定BPO浓度。通过混合1克凝胶和二氯甲烷/甲醇/乙腈溶液来测定BPO的总浓度。通过离心从凝胶分离微胶囊之后测定水相中的BPO浓度。将水相和二氯甲烷/甲醇/乙腈溶液混合以便萃取BPO，并使用HPLC测定其含量。

图8显示在40℃下温育86天后，微胶囊中BPO的浓度的下降可忽略不计。这些结果也在表5中予以反映。没有观察到BPO从微胶囊显著扩散到制剂外部介质中。

表5.BPO微胶囊的稳定性

时间(天)	0	86
			总计	100％	96.6％
外部	无法检测到	1.2％

实施例9.BPO微胶囊的化学稳定性

9.1制备三月桂精-乙基纤维素-BPO 微胶囊：如以上章节5.4中所详述，制备包含55％BPO、30％三月桂精和15％乙基纤维素的微胶囊(以上表4中的样品21)。微胶囊的平均粒径为40μm。

9.2化学稳定性测试：在40℃下储存后，使用HPLC分析BPO(含有1％游离视黄醇的凝胶制剂中的封装BPO对比游离BPO)。HPLC分析结果显示BPO在含有1％游离视黄醇的凝胶中具有增加的稳定性。稳定性压力测试结果(40℃下储存30天)证实，凝胶制剂(最终BPO浓度为5％)中封装BPO的相对含量降到初始浓度的65％，而裸BPO显示降解程度更高，达到初始浓度的36％(图9)。

实施例10.凝胶制剂中BPO微胶囊的抗微生物活性

使用凝胶制剂(所述凝胶制剂如以上实施例4中所述制备)中的包含54％BPO和10％乙基纤维素的微胶囊(以上表4中的样品20)测试抗微生物活性。如下测试四组：

1.凝胶中的裸BPO

2.凝胶中的BPO微胶囊(样品20)

3.凝胶中破裂的BPO胶囊

4.单独凝胶

所有实验一式三份地进行。将测试的微生物(痤疮丙酸杆菌11827：～10⁴cfu(集落形成单位)/ml)在胰蛋白酶大豆琼脂斜面上生长。培育后，使用无菌磷酸盐缓冲液(pH 7.0)收获细菌，以获得约10⁴cfu/ml的微生物计数。将0.2ml上述悬浮液涂铺在胰蛋白酶大豆琼脂平板上，在室温下静置干燥20分钟。将已经浸在10μl测试的抗菌物质中的6mm直径的无菌盘放在微生物薄膜上，平板在37℃下培育1-2天。进行对照实验，其中在微生物薄膜上不放置抗菌物质。培育之后对平板的检查揭示，测试的物质的抗微生物活性抑制圆盘周围的微生物的生长，从而在圆盘周围留下透明带。抑制带的直径以毫米计。结果在表6和图10中提供。

表6.痤疮丙酸杆菌11827生长抑制

样品	抑制直径(mm)
		对照	0，0，0
凝胶中的裸BPO	8，8，6
		凝胶中的BPO胶囊	6，6，10
凝胶中的破裂BPO胶囊	12，15，17
		单独凝胶	0，6，0

表6和图10中所展现的结果清楚地显示，凝胶中破裂的BPO微胶囊可最有效地抑制细菌生长，甚至比凝胶制剂中的裸BPO还要有效。这些结果表明包含BPO微胶囊的凝胶制剂在皮肤上摩擦时可有效地治疗痤疮。BPO胶囊组和破裂BPO胶囊组之间的Tukey-Kramer多重比较的P值为至少0.05，表明两组之间存在统计学显著差异。

实施例11.制备其它BPO微胶囊

使用以上实施例1和实施例2中详述的程序制备其它类型的包含较高BPO填充量的微胶囊。不同微胶囊的组成、平均粒径和BPO含量在以下表7中详述。

所用的成壁聚合物在样品65、67、77、81、90、91、92和95中为乙基纤维素(EC-7或EC-45)，或在样品75和93中为聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸(PMMA)。在样品65、75、77、91、92和95中没有使用塑化剂。在样品67、81、90和93中，使用三月桂精(TL)作为塑化剂。在样品67和93中，使用异硬脂醇异硬脂酸酯作为蜡，同时使用三月桂精作为塑化剂。在样品95中，使用丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯作为蜡，但不使用任何塑化剂。

根据以上实施例1和实施例2中详述的方法，制备包含BPO、成壁聚合物且任选地另外包含塑化剂和蜡的微胶囊(如以下表7中所述)。

表7.其它BPO微胶囊

PMMA-聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸，EC-乙基纤维素。

实施例12.BPO微胶囊的扫描电子显微镜图像

使用Zeiss Ultra(Zeiss，Germany)获取BPO微胶囊(如以上实施例11中所述制备)的扫描电子显微镜(SEM)图像。SEM图像显示所有的微胶囊均为球形，且具有粗糙的通气表面(不光滑的浅表面，图11A-11B、12A-12B、13A-13B、14A-14B、15A-15B、16A-16B、17A-17B、18A-18C、19A-19B和20a-20B)。在图3A、13A、17A、18A和20A中，可以看到外壳中的球形空穴不跨越外壳总宽度，因此不是常规的孔隙。

实施例13.BPO微胶囊的稳定性测试

13.1制备包含BPO微胶囊的水性凝胶制剂：通过加热到40-50℃将Geogard(0.7g，Lonza)溶解在水中，并将溶液冷却到室温。任选地将克林霉素磷酸酯溶解在溶液(包含抗生素的制剂)中。在适度混合下缓慢加入黄原胶(1g，Interaxion)直到形成黄原胶凝胶。然后通过简单混合向凝胶中加入BPO微胶囊。以下表8中详述凝胶制剂的组成。

表8.黄原胶凝胶的组成：

13.2BPO在水性凝胶制剂中的化学稳定性：以5％的最终BPO浓度将BPO微胶囊掺入至凝胶制剂(不含克林霉素的凝胶基质)中，并在40℃下温育90天。对仅包含封装BPO的组合物或包含封装BPO联合0.75-1％克林霉素磷酸酯的组合物进行稳定性研究。在掺入至凝胶制剂后立即测定BPO浓度，并在30天、60天和90天后测定BPO浓度。通过混合1克凝胶制剂和二氯甲烷/甲醇/乙腈溶液来测定BPO的总浓度。通过离心从凝胶分离微胶囊之后测定水相中的BPO浓度。将水相和二氯甲烷/甲醇/乙腈溶液混合以便萃取BPO，并使用HPLC测定其含量。

图21显示在40℃下温育90天后，包含BPO微胶囊的凝胶制剂中和包含未封装BPO的制剂中的BPO浓度的降低可忽略不计。

13.3包含BPO微胶囊的水性凝胶制剂中克林霉素磷酸酯的化学稳定性：以5％的最终BPO浓度将BPO微胶囊(如以上实施例11中所述制备)掺入至凝胶制剂(包含0.75-1％克林霉素磷酸酯)中，并在40℃下温育90天。使用HPLC，在掺入至凝胶制剂后立即测定总克林霉素磷酸酯浓度，并在30天、60天和90天后测定总克林霉素磷酸酯浓度。此外，以和包含BPO和1％克林霉素的两种商业产品(商业产品1和商业产品2)类似的方式测量克林霉素磷酸酯浓度，所述商业产品也在40℃下温育90天。

图22A显示和商业产品1和2相比，包含BPO微胶囊的水性凝胶制剂中的克林霉素磷酸酯浓度更加稳定50-100％。图22B显示微胶囊中BPO的填充量越高，在40℃下温育30天后组合物中克林霉素磷酸酯的稳定性就越高。

实施例14.皮肤学刺激测试

以5％(w:w)的最终BPO浓度将BPO微胶囊(如以上实施例11中所述制备的样品#65、#90、#91、#92和#93)掺入至凝胶制剂(如以上实施例13.1中所述制备)。在斑贴测试(Finn Chamber/Hill Top Chamber/Leukotest或任何其它类似腔室)中应用0.07-0.1毫升或克的测试组合物。

在具有正常无患病皮肤的50名志愿者的背部肩胛内区域上或上臂的背侧面上进行测试。用外科胶带将斑贴固定在适当位置，但不包裹躯干或手臂。在单一斑贴测试设计中，在单次接触48小时后，移除测试斑贴并标记测试区域以进行评估。在斑贴移除后1小时、24小时和48小时评估反应。

反应分级如下：0-阴性，正常皮肤；+-未覆盖整个区域的可疑红斑；1-确定的红斑；2-红斑和硬化；3-起疱；4-大疱反应。只有在没有反应时(0级)测试才可被接受。

我们的结果显示在所有测试样品中，在任何志愿者中都没有观察到反应(刺激)。表9和表10分别显示样品#65和#90的示例性结果。

表9.样品#65的皮肤学测试结果

表10.样品#90的皮肤学测试结果

实施例15.Draize重复刺激斑贴测试(RIPT)

通过人类志愿者的Draize重复刺激斑贴测试测定成壁聚合物和添加剂的致敏特性。如以上实施例11中所述制备无BPO的空微胶囊(对应于样品#90和#93)，并掺入至凝胶制剂(如以上实施例13.1中所述制备)中。在斑贴测试(FinnChamber/Hill Top Chamber/Leukotest或任何其它类似腔室)中应用0.07-0.1毫升或克的测试组合物。

在具有正常无患病皮肤的50名志愿者的背部肩胛内区域上或上臂的背侧面上进行测试。用外科胶带将斑贴固定在适当位置，但不包裹躯干或手臂。

在诱导期中，将斑贴施用于其被指定的接触部位并在原位置保留24小时。在诱导期结束时，移除斑贴并检查接触部位的任何皮肤反应。志愿者然后休息24小时，随后再次检查皮肤部位。然后将斑贴施用于和先前所用相同的部位。第二次施用和第一次相同并在原位置保留24小时。重复所述程序直到完成一系列的9次施用。在整个研究中使用相同部位。然后评估施用部位的任何皮肤反应，随后进行下一次(第10次)施用。

在激发期中，在(第9次施用后)休息2周后，如以上所述用相同方式对相同部位施用激发斑贴。24小时后移除激发斑贴，对该部位的刺激或致敏体征进行检查和分级。在激发斑贴施用后48小时(斑贴移除后24小时)和斑贴移除后48小时进行随访检查。

以下表11和表12中描述的结果显示，两种微胶囊原型在第10次施用(激发期)中都没有在人类受试对象中诱导接触性皮肤刺激和/或致敏。

表11.对应于样品#90的空微胶囊的RIPT测试结果

表12.对应于样品#93的空微胶囊的RIPT测试结果

实施例16.氧化铬绿的微囊化

通过以下实验室程序制备微囊化的氧化铬绿：

16.1制造氧化铬绿内部粒子：加热Syncrowax HRC(三山嵛精，1200gr)直到它熔化，在80-100℃在控制下逐渐加入氧化铬绿(800gr)直到获得均质分散液(表13中详述组成)。热熔体然后倒在铝箔上以获得2-3mm的均匀薄层，并使其冷却和硬化。硬熔体然后切割成1-1.5cm的薄片。使用Rotor BeaterMill SR 300(Retsch GmbH，Germany)研磨熔体以获得15％的0-50μm粒子和58％的50-100μm粒子。内部粒子然后和Aerosil 200(总重的0.8％)混合。粒子储存在冰箱中的密闭容器中，以防止粒子在室温下发生聚集。

表13：内部粒子内容物

16.2制备含有氧化铬绿内部粒子的母料：在室温下搅拌10分钟将EuRSPO(75g)和乙基纤维素(15g)逐渐加入1000ml乙酸乙酯中直到获得澄清溶液。将二氧化钛(45g)逐渐加入溶液中并搅拌5分钟。在搅拌下向混合物中逐渐加入氮化硼(15g)并搅拌5分钟。混合物然后转移到均化器(

CL54)中，并均化7分钟直到获得均质混合物。然后将绿色内部粒子(以上16.1中获得)在搅拌下逐渐加入到混合物中，并另外搅拌7分钟(表14中详述组成)。

表14：母料内容物

#	物质	100g干产物中的填充量(％)	颜料悬浮液的填充组分(g)
				1	EuRSPO	25	75
2	乙基纤维素No7	5	15
				3	TiO2	15	45
4	BN	5	15
				5	绿色内部粒子	50	150
6	乙酸乙酯		900

EuRSPO-Eudragit

16.3制备乳液：通过混合水(4283.4g)和聚乙烯醇(PVA4％，132.6g)来制备水溶液，使得水相包含0.12％PVA。以400RPM搅拌10分钟将乙酸乙酯(384g)加入到水相中。以400RPM搅拌将母料(以上16.2中制备的颜料悬浮液)逐渐加入到乙酸乙酯/水乳液中，再搅拌另外10分钟(表15中详述组成)。母料/乳液(w/w)的比率＝1/4；温度≤16℃。

表15：乳液内容物

16.4萃取程序：萃取相由26400g水组成(参看表16)。以150RPM在非常充分的搅拌下，使用手动泵将以上16.3的乳液(包含母料和水溶液)逐渐加入到萃取相中，再搅拌另外20分钟。萃取混合物然后静置一整夜，沉降出形成的微胶囊(温度20-23℃)。

表16：萃取内容物

16.5洗涤和干燥程序：通过过滤分离以上16.4的沉降微胶囊，其为“滤饼”形式。将水(2L)加入至被过滤的“滤饼”中(干产物/水的重量比(w/w)-至少1/7)，搅拌10分钟，随后过滤。此洗涤和过滤步骤重复两次。微胶囊“滤饼”然后放入容器中，并用刮勺碾碎(湿滤饼内容物为约20％胶囊和80％水)。容纳有湿胶囊的容器放在冷冻干燥箱(Cham)中，微胶囊在-38℃和0.1-0.4mBar下冷冻干燥48小时。干胶囊和Aerosil 200胶态二氧化硅(总重的0.8％)混合并用自动筛分机(Arij-Levy)进行筛分。被筛分的含有氧化铬绿的微胶囊然后冷藏。

获得的绿色颜料微胶囊的平均粒径为约70μm。图23显示氧化铬绿粒子(原料)的聚集体为绿色，相比被封装的颜料粒子则为白色(因为TiO₂的缘故)。在涂布之后，绿色颜料在外壳破裂时立即释放。

Claims

1.一种局部施用的稳定微胶囊，其包含0.1-99％过氧化苯甲酰和由选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚、纤维素酯或其组合的成壁聚合物材料形成的外壳。

2.根据权利要求1所述的稳定微胶囊，其中在和皮肤接触后，所述过氧化苯甲酰通过在皮肤上摩擦、扩散或两者的组合从所述微胶囊中释放。

3.根据权利要求1或2所述的稳定微胶囊，其中所述微胶囊的平均粒径在选自约1μm至约500μm、10μm至130μm、10μm至100μm、20μm至90μm、30μm至70μm或40μm至60μm的范围内。

4.根据权利要求3所述的稳定微胶囊，其中所述微胶囊的平均粒径低于100μm，优选为30μm至70μm。

5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的稳定微胶囊，其中每个微胶囊包含20-99％、40-95％或优选60-90％过氧化苯甲酰。

6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的稳定微胶囊，其中所述成壁材料为聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸、B型甲基丙烯酸铵酯共聚物、纤维素乙醚、纤维素乙酯或其组合。

7.根据权利要求6所述的稳定微胶囊，其中所述成壁材料为聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸或乙基纤维素，任选地组合B型甲基丙烯酸铵酯共聚物。

8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的稳定微胶囊，其另外包含一种或多种添加剂，所述添加剂选自一种或多种塑化剂、蜡或氮化硼。

9.根据权利要求8所述的稳定微胶囊，其中所述添加剂为一种或多种塑化剂，所述塑化剂选自三辛精(TC)、三月桂精(TL)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB)、肉豆蔻酸异丙酯、油酸单甘油酯、三棕榈精、三醋精、石蜡油；蜡，所述蜡选自蜂蜡、abil蜡、羊毛脂、三异硬脂精、异硬脂醇异硬脂酸酯、硬脂酸、鲸蜡醇、棕榈酸、硬脂酸甘油酯、丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯；或其组合。

10.根据权利要求6所述的稳定微胶囊，其中所述成壁材料为乙基纤维素或聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸，所述稳定微胶囊另外包含塑化剂三月桂精(TL)，任选地组合蜡异硬脂醇异硬脂酸酯或蜡丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯。

11.根据权利要求6所述的稳定微胶囊，其中所述成壁材料为乙基纤维素，所述稳定微胶囊另外包含选自三月桂精/蜂蜡、三月桂精/羊毛脂、三月桂精/三异硬脂精、三月桂精/异硬脂醇异硬脂酸酯、三月桂精/abil蜡、三月桂精/硬脂酸、三月桂精/鲸蜡醇、三月桂精/棕榈酸、三月桂精/丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯和三月桂精/硬脂酸甘油酯的塑化剂/蜡组合。

12.一种制备根据权利要求1至11中任一权利要求所述的微胶囊的方法，其包括：

c)向(b)中形成的乳液中加入过量的含有和(b)中相同的乳化剂的水，以引起所述有机溶剂自所述乳液中萃取出，从而获得微胶囊；

d)任选地使所述微胶囊沉降；和

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述成壁材料为聚(甲基丙烯酸甲酯)-共聚-甲基丙烯酸、B型甲基丙烯酸铵酯共聚物、纤维素乙醚、纤维素乙酯或其组合。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述添加剂为塑化剂，所述塑化剂选自三辛精(TC)、三月桂精(TL)、乙酰基柠檬酸三丁酯(ATBC)、乙酰基柠檬酸三乙酯(ATEC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、苯甲酸C₁₂-C₁₅烷酯(AB)、肉豆蔻酸异丙酯、油酸单甘油酯、三棕榈精、三醋精、石蜡油或其组合；蜡，所述蜡选自蜂蜡、abil蜡、羊毛脂、三异硬脂精、异硬脂醇异硬脂酸酯、硬脂酸、鲸蜡醇、棕榈酸、丙二醇单棕榈酸硬脂酸酯和硬脂酸甘油酯；非蜡脂肪酸；氮化硼(BN)；或其组合。

15.一种局部施用的组合物，其包含根据权利要求1至11中任一权利要求所述的过氧化苯甲酰微胶囊。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述组合物中过氧化苯甲酰的最终浓度在0.1-10％、优选1-5％的范围内。

17.根据权利要求15或16所述的组合物，其另外包含一种或多种选自抗生素和维生素A或其衍生物的活性剂，所述活性剂任选地在单独的微胶囊中微囊化。

18.根据权利要求17所述的组合物，其中所述抗生素为克拉霉素、红霉素、克林霉素或阿奇霉素，且所述维生素A或其衍生物为视黄醇、视黄醛、视黄酸或视黄醇酯。

19.根据权利要求15至18中任一权利要求所述的组合物，其另外包含绿色染料，所述绿色染料任选地在由选自聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、纤维素醚或纤维素酯或其组合的成壁聚合物材料形成的外壳中微囊化。

20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述绿色染料为氧化铬绿颜料，且所述成壁聚合物材料为乙基纤维素和B型甲基丙烯酸铵酯共聚物的组合，所述组合物任选地另外包含白色颜料，优选TiO₂，和另外的添加剂，例如氮化硼。

21.根据权利要求15至20中任一权利要求所述的组合物，其采用皮肤护理用的乳膏、软膏、糊剂、洗剂形式，或凝胶形式，优选水基凝胶。

22.根据权利要求15至21中任一权利要求所述的组合物，其用于治疗痤疮。