CN102676490B

CN102676490B - 一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102676490B
Application number: CN 201210157894
Authority: CN
Inventors: 张辉; 王冉; 包红朵
Original assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Jiangsu Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2012-05-21
Filing date: 2012-05-21
Publication date: 2013-07-31
Anticipated expiration: 2032-05-21
Also published as: CN102676490A

Abstract

本发明涉及属于生物工程领域，特别涉及一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶（或称裂解酶）及其作为抗菌物质在奶牛乳房炎防治和食品污染控制中的应用；一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶，其特征在于：其氨基酸序列为SEQ ID No.2。利用生物工程技术开发能够高效杀灭金黄色葡萄球菌的酶制剂，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性的灭活金黄色葡萄球菌，为目前防治奶牛乳房炎和控制食品中金黄色葡萄球菌污染提供一种安全、无毒副作用的酶制剂来源。

Description

一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及属于生物工程领域，特别涉及一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶（或称裂解酶）及其作为抗菌物质在预防奶牛乳房炎和食品污染控制中的应用。

背景技术

奶牛乳房炎不仅给世界乳品工业带来巨大的经济损失，而且还危害到公共卫生和人类健康。研究资料显示，金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要病原菌，由此引起的奶牛乳房炎病例达74％，在我国病例中该比例高达90％-95％，由此引起的奶产品的损失高达3.5亿。

引起奶牛乳房炎的主要原因是病原微生物感染，其中以金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）、链球菌和大肠杆菌为主，约占奶牛乳房炎病例的90％以上。其中SA则是引起乳房炎的最主要病原菌，也是临床上最难治疗造成经济损失最大的致病菌，可致人或动物的各种化脓性疾病、乳腺炎、败血症等。奶牛乳房炎最直接的治疗途径是使用抗生素，但治疗过程中乳汁会残留抗生素，从而会对人体产生一定的危害，更为严重的是，病原会因抗生素的长期摄入及高效量的滥用产生耐药毒力株。随着抗生素的广泛应用，金黄色葡萄球菌对抗生素不仅产生耐药，且表现为多重耐药，给临床治疗带来了巨大困难。

噬菌体是一类细菌依赖性的病毒，又称细菌病毒。裂解性噬菌体感染细菌后，可在宿主菌内快速增殖，并使之裂解，故又称毒性噬菌体。溶壁酶是双链DNA噬菌体所特有的，是在感染宿主晚期由噬菌体表达的一类肽糖水解酶，该酶通过水解细菌细胞壁肽糖上糖与肽间的酰胺键或肽内氨基酸残基间的连键最终使宿主细胞裂解。溶壁酶不仅特异性作用于宿主，且作用时间短，作用谱较噬菌体广。溶壁酶具有高效、特异且不产生抗性等特点，目前在食品及医药行业已有成功应用的报道。金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶能够特异性裂解李斯特菌，因而具有杀菌作用。在食品中，金黄色葡萄球菌溶壁酶能够作为抗菌剂来控制细菌污染，具有潜在的开发和应用价值。

发明内容

发明目的

本发明的一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶。

技术方案

一种金黄色葡萄菌噬菌体溶壁酶，其特征在于其氨基酸序列为Seq ID NO.2。

一种金黄色葡萄菌噬菌体溶壁酶的编码基因，其特征在于其核苷酸序列为Seq ID NO.1。

一种表达金黄色葡萄菌噬菌体溶壁酶的制备方法，其特征在于步骤1）中采用引物5’- ATT GGA TCC GGT AGG TGT TGA CCA ATG TTG -3’见Seq ID NO.3和引物5’- CTT AAG CTTTAA ATC GTG CTA AAC TTA CC -3’ 见Seq ID NO.4从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组中扩增李斯特菌噬菌体溶壁酶基因；

具体步骤如下

1) 从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组中扩增金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶基因；

2) 构建表达金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶的重组表达载体；

3) 将重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达金黄色葡萄球噬菌体溶壁酶的工程菌；

4) 异丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷诱导表达，获得重组基因表达产物；

5) 将重组基因表达产物，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组的金黄色葡萄球噬菌体溶壁酶；

6) 将纯化的溶壁酶产物经去毒素试剂盒进行去毒处理即≤0.01 EU/μg内毒素。

一种含有所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶的编码基因的质粒。

一种含有所述的质粒的重组菌

所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备防治奶牛乳房炎药物的应用。

所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球菌污染或过度生长药物应用。

所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球污染或过度生长药物应用，其特征在于所述的食品为由肉类，或蛋类，或奶制品，或粮食，或蔬菜，或它们之间的组合加工的固体或液体类食品。

所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球污染或过度生长药物应用，其特征在于重组表达的金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶产物制成抗菌剂。

所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球污染或过度生长药物应用，其特征在于：将纯化的溶壁酶产物与赋形剂复配后，用来抑制食品中金黄色葡萄球菌的污染。

所述原核细胞表达载体为pET-28a(+)。

所述溶壁酶基因被插入pET-28a(+)的BamHⅠ和Hind Ⅲ酶切位点。

所述的工程菌为大肠杆菌BL21(DE3)，培养温度为37℃。

所述诱导表达所用的诱导剂为IPTG，诱导浓度为0.5～1.0 μmol/L，诱导表达的温度为28～30℃。

所述的分离纯化步骤包括镍亲和层析。

有益效果

利用生物工程技术开发能够高效杀灭金黄色葡萄球菌的酶制剂，该制剂可以单独或复配使用，能够特异性灭活金黄色葡萄球菌，为目前防治奶牛乳房炎及控制食品中金黄色葡萄球菌污染提供一种安全、无毒副作用的酶制剂来源。

附图说明

图1 溶壁酶LysM9基因的构建和鉴定

泳道1：重组质粒pET-lysM9 BamHⅠ/HindⅢ双酶切鉴定

泳道2：pET28a(+) 载体BamHⅠ酶切鉴定

M: 1Kb DNA ladder

图2 重组溶壁酶LysM9表达产物的鉴定分析

泳道1：诱导表达DE3(pET-lysM9) 1.0 mM IPTG

泳道2：未诱导DE3(pET-lysM9)

M: 蛋白分子质量Maker

图3重组溶壁酶LysM9对金黄色葡萄球菌的杀菌能力分析

图4重组溶壁酶LysM9在食品的中杀菌效果分析

具体实施方式

本发明试验用噬菌体宿主菌金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus，ATCC 25923）购自美国标准菌种收藏中心（ATCC）。λ噬菌体基因组快速提取试剂盒（北京艾比根生物技术有限公司，AB114）。

实施例1噬菌体分离制备及基因组提取

噬菌体分离制备

本发明样品采自江苏南京西岗奶牛场牛奶样品，在牛奶样品中加入1ml 金黄色葡萄球菌过夜培养物，再加入无菌CaCl₂母液至终浓度1.25mM混匀后，加入20ml TSB-YE培养基，室温作用30min，再放置于30℃，待培养至6～8h后，取上述培养物以13000×g.min^-1，4℃，离心30min，取上清；再用0.22μm滤膜过滤上清，形成噬菌体原液。

取噬菌体原液0.1ml，进行10倍稀释，取10²、10⁴和10⁶稀释液各0.1ml与过夜培养的宿主菌液0.1ml混匀，室温作用15min后，加入约5ml 0.7% LB培养基，混匀后迅速倾倒入TSA-YE平板上层，摇匀平置5min，待其凝固，置于30℃温箱培养12h后观察，获得形成噬菌斑的双层平板，并命名该噬菌体为BpM-9。

噬菌体基因组DNA的提取

将制备的噬菌体原液用λ噬菌体基因组快速提取试剂盒方法提取噬菌体基因组，具体按试剂盒说明进行。

实施例2：溶壁酶LysM9基因（lysM9）的克隆、表达载体的构建

a、根据LysM9基因编码序列设计一对特异性引物：

M9-1: 5’- ATT GGA TCC GGT AGG TGT TGA CCA ATG TTG -3’，见SEQ ID NO.3;

M9-2: 5’- CTT AAG CTTTAA ATC GTG CTA AAC TTA CC -3’ ，见SEQ ID NO.4;以噬菌体基因组为模板用上述特异性引物扩增LysM9基因全长序列，1%琼脂糖电泳，鉴定扩增片段的大小；

b、切胶回收（1.5kb片段）扩增正确的目的片段，胶回收试剂盒将片段纯化回收，并将该片段与pMD18-T载体于16℃连接过夜，次日转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布于含有氨苄青霉素（100 μg/ml）的平板，并将转化的阳性克隆进行测序鉴定，将其命名为溶壁酶LysM9基因，其核苷酸序列为Seq ID NO.1；

c、将测序列正确的片段用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切，37℃，水浴孵育2 h，1%琼脂糖电泳，胶回收试剂盒将片段纯化回收，并将该片段与pET28a(+) 载体于16℃连接过夜，次日转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。将转化的菌液涂布于含有卡那青霉素（100 μg/ml）的LB平板，37℃培养过夜；

d、阳性克隆的鉴定挑取阳性克隆接种于含卡那青霉素（100 μg/mL）的LB液体培养基中，37℃培养过夜后，碱裂法提取质粒，用BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切鉴定，同时用BamHⅠ单酶切的pET-28a(+)空质粒作为对照。将鉴定正确的质粒命名为pET-lysM9，重组菌命名为DE3(pET-lysM9)。

结果如图1所示，重组质粒pET-lysM9用BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切后，分别在5.4kb和1.5 kb处出现pET28a(+)载体带和lysM9基因带，大小与预期相符，表明构建正确。

实施例3：溶壁酶LysM9蛋白的诱导表达及纯化

将重组菌DE3(pET-lysM9) 接种到含卡那青霉素（100 μg/mL）的LB培养液中，37℃振荡过夜培养；次日，按1:100比例转接至100mL LB培养基中，37℃振荡培养至OD₆₀₀值约为0.5时，加入IPTG至终浓度1mmol/L，28℃诱导5 h。收集菌体，超声波破碎细胞，4℃，10,000rpm/min离心10min，收集上清，并将上清经0.22μm滤膜过滤，SDS-PAGE分析裂解上清中的蛋白表达情况。将过滤的裂解上清用His亲和层析镍柱（GE Healthcare, Sweden）纯化，具体按试剂盒说明步聚进行。获得蛋白命名为溶壁酶lysM9，将纯化的溶壁酶lysM9产物经去毒素试剂盒（Novagen公司）进行去毒处理（≤0.01 EU/μg内毒素）。

SDS-PAGE分析结果如图2所示，重组菌DE3(pET-lysM9) 经IPTG诱导后，其上清中在约60 kD（其中蛋白本身约为53.8而与his融合表达后大小约为60kD）的位置有较粗的诱导蛋白条带，与预期大小相符，从而表明，重组菌DE3(pET-lysM9)构建正确，且表达的溶壁酶蛋白产物LysM9为可溶性蛋白。

实施例4：重组溶壁酶LysM9特异性裂解金黄色葡萄球菌

将金黄色葡萄球菌ATCC 25923培养至OD₆₀₀=0.8，用PBS洗涤后重悬，取900μl，加入100 μl (50μg) 纯化的溶壁酶产物，混匀，室温下作用1h，用分光光度计动态测定菌液的OD₆₀₀值，OD₆₀₀的下降表明细菌被裂解。

结果如图3所示，纯化的溶壁酶LysM9产物对金黄色葡萄球菌具有良好的裂解活性。

实施例5：溶壁酶LysM9在食品中的灭菌作用

将巴氏杀菌牛奶分装为两组，A组接种宿主菌10⁵cfu/mL，加入100μg 的溶壁酶LysM9蛋白；B组中仅加入10⁵cfu/mL宿主菌作为对照，同时设PBS对照。将制备好的样品分别置于25℃，分别于0min，30min和60min检测宿主菌数量。

结果如图4所示，25 ℃作用30min 后，宿主菌数量有所下降；至60min后，宿主菌数量下降约4 log₁₀，与对照组呈显著性差异，从而表明溶壁酶LysM9在食品中有良好的杀菌作用。

实施例6 溶壁酶LysM9在防治奶牛乳炎中的抗菌效果

选自某奶牛场已诊断为患乳牛乳房炎病牛15头，随机分为3组。A组为溶壁酶治疗组：先挤干奶，再将乳房洗净擦干后用含有溶壁酶LysM9的溶液（500 μg/50ml）直接涂擦患病乳区。B组抗生素治疗组：将青霉素160万单位和链霉素80万单位直接乳房灌注。C组为对照组，仅洗净擦干，不用任何药物。A组及B组用药均为每天早晚各2次，连用5天为一个疗程。

疗效判定：用药1疗程后，根据临床症、乳汁质量以及体细胞数进行判断。（1）治愈：乳房红、肿、热、痛消失，乳汁肉眼观察正常，产奶量回升，体细胞数显著降低；

（2）基本治愈：乳房红、肿、热、痛明显减轻，但刚开始挤出的乳汁中还有少许奶块或絮状物，产奶量逐渐回升，体细胞数下降；

治愈与基本治愈之和为总有效率；

（3）无效：乳房红、肿、热、痛无明显好转，乳汁中仍有发黄或絮状物存在，产奶量无回升甚至下降，体细胞数无显著下降或有上升趋势。

由表1可以看出，经溶壁酶治疗的A组，体细胞数与初始数量比较显著下降；B组与初始体细胞数比较，无显著差异；而对照组中，体细胞数没有显著变化，且随着乳房炎的发病而有所上升。

通过临床症状乳房红、肿、热、痛以及乳汁的观察以及体细胞数的综合判断，治疗效果见表2，A组中2头治愈，2头基本治愈，1头治疗无效，总有效率为80%；B组中总有效率为40%；对照组症状无明显减轻且有加重。因此可见，溶壁酶LysM9能够有防治奶乳牛乳房炎，而抗生素组由于病原的耐药特性而不能有效治疗奶牛乳房炎。

表1 不同药物治疗奶牛乳房炎病牛的体细胞数检测结果

组别	治疗药物	治疗前体细胞数（万/ml）	治疗后体细胞数(万/ml)
				A	溶壁酶	101.0±35.1	48.5±35.1
B	青链霉素	99.5±56.7	84.5±46.7
				C	对照无	95.0±42.7	105.0±39.4

表2 不同药物治疗奶牛乳房炎病牛的疗效

组别	治疗药物	治疗头数	治愈头数	基本治愈头数	无效头数	总有效率（%）
							A	溶壁酶	5	2	2	1	80
B	青链霉素	5	1	1	3	40
							C	对照	5	0	0	5	0

SEQUENCE LISTING

<110> 江苏省农业科学院

<120> 一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶及其制备方法和应用

<130>

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 1455

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

atgttgataa caaaaaacct agcagaaaaa tggtttgata attcattagc gaagcagttc 60

aatcctgatt tgttttatgg atttcagtgc tacgattacg caaatatgtt ttttatgata 120

gcaacaggcg aaaggttaca aggtttatac gcttataata ttccatttga taataaagca 180

aggattgaaa aatacgggca aataattaaa aactatgata gctttttacc gcaaaagttg 240

gacattgtcg ttttcccgtc aaagtatggt ggcggagctg gacatgttga aattgttgag 300

agcgctaatc taaacacttt cacatcgttt ggccaaaatt ggaatggtaa aggttggaca 360

aatggcgttg cgcaacctgg ttggggtccc gaaaccgtta caagacatgt tcattattac 420

gatgacccaa tgtattttat tagattaaat ttcccagata aagtaagtgt tggagataaa 480

gctaaaagcg ttattaagca agcaactgcc aaaaagcaag cagtaattaa acctaaaaaa 540

attatgcttg tagccggtca tggttataac gatcctggag cagtcggaaa cggaacaaat 600

gaacgtgatt ttatccgtaa atatataaca ccaaatatcg ctaagtattt aagacatgca 660

ggtcacgaag ttgcattata tggtggctca tgtcaatcac aagatatgta tcaagatact 720

gcttacggtg ttaatgtagg aaataataaa gattatggct tatattgggt taaatcacat 780

gggtatgaca ttgttctaga gattcattta gacgcagcag gagaaagtgc aagtggtggg 840

catgttatta tttcaagtca attcaatgca gatactattg ataaaagtat acaagatgtt 900

attaaaaata acttaggaca aataagaggt gtaacacctc gtattgattt actaaacgtt 960

aatgtatcag cagaaataaa tataaactat ggtttatctg aattaggttt tattactaat 1020

aaaaatgata tggattggat taagaaaaac tatgacttgt attctaaatt aatagccggt 1080

gcgattcatg gtaagcctat aggtggtttg gtagctggta acgttaaaac atcagctaaa 1140

aaccaaaaaa atccaccagt gccagcaggt tatacacttg ataaaaacaa tgtaccgtat 1200

aaaaaagaga ctggttatta cacagttgcc aatgttaaag gtaataacgt aagggacggc 1260

tattcaacta attcaagaat tacaggtgta ttacctaata acgcaacaat taaatctgac 1320

ggcgcatatt gcatcaatgg ctatagatgg attacttata ttgctaatag tggacaacgt 1380

cgttatatag agacaggaga ggtagacaag gcaggtaata gaataagtag ttttggtaag 1440

tttagcacga tttag 1455

<210> 2

<211> 484

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Met Leu Ile Thr Lys Asn Leu Ala Glu Lys Trp Phe Asp Asn Ser Leu

1 5 10 15

Ala Lys Gln Phe Asn Pro Asp Leu Phe Tyr Gly Phe Gln Cys Tyr Asp

20 25 30

Tyr Ala Asn Met Phe Phe Met Ile Ala Thr Gly Glu Arg Leu Gln Gly

35 40 45

Leu Tyr Ala Tyr Asn Ile Pro Phe Asp Asn Lys Ala Arg Ile Glu Lys

50 55 60

Tyr Gly Gln Ile Ile Lys Asn Tyr Asp Ser Phe Leu Pro Gln Lys Leu

65 70 75 80

Asp Ile Val Val Phe Pro Ser Lys Tyr Gly Gly Gly Ala Gly His Val

85 90 95

Glu Ile Val Glu Ser Ala Asn Leu Asn Thr Phe Thr Ser Phe Gly Gln

100 105 110

Asn Trp Asn Gly Lys Gly Trp Thr Asn Gly Val Ala Gln Pro Gly Trp

115 120 125

Gly Pro Glu Thr Val Thr Arg His Val His Tyr Tyr Asp Asp Pro Met

130 135 140

Tyr Phe Ile Arg Leu Asn Phe Pro Asp Lys Val Ser Val Gly Asp Lys

145 150 155 160

Ala Lys Ser Val Ile Lys Gln Ala Thr Ala Lys Lys Gln Ala Val Ile

165 170 175

Lys Pro Lys Lys Ile Met Leu Val Ala Gly His Gly Tyr Asn Asp Pro

180 185 190

Gly Ala Val Gly Asn Gly Thr Asn Glu Arg Asp Phe Ile Arg Lys Tyr

195 200 205

Ile Thr Pro Asn Ile Ala Lys Tyr Leu Arg His Ala Gly His Glu Val

210 215 220

Ala Leu Tyr Gly Gly Ser Cys Gln Ser Gln Asp Met Tyr Gln Asp Thr

225 230 235 240

Ala Tyr Gly Val Asn Val Gly Asn Asn Lys Asp Tyr Gly Leu Tyr Trp

245 250 255

Val Lys Ser His Gly Tyr Asp Ile Val Leu Glu Ile His Leu Asp Ala

260 265 270

Ala Gly Glu Ser Ala Ser Gly Gly His Val Ile Ile Ser Ser Gln Phe

275 280 285

Asn Ala Asp Thr Ile Asp Lys Ser Ile Gln Asp Val Ile Lys Asn Asn

290 295 300

Leu Gly Gln Ile Arg Gly Val Thr Pro Arg Ile Asp Leu Leu Asn Val

305 310 315 320

Asn Val Ser Ala Glu Ile Asn Ile Asn Tyr Gly Leu Ser Glu Leu Gly

325 330 335

Phe Ile Thr Asn Lys Asn Asp Met Asp Trp Ile Lys Lys Asn Tyr Asp

340 345 350

Leu Tyr Ser Lys Leu Ile Ala Gly Ala Ile His Gly Lys Pro Ile Gly

355 360 365

Gly Leu Val Ala Gly Asn Val Lys Thr Ser Ala Lys Asn Gln Lys Asn

370 375 380

Pro Pro Val Pro Ala Gly Tyr Thr Leu Asp Lys Asn Asn Val Pro Tyr

385 390 395 400

Lys Lys Glu Thr Gly Tyr Tyr Thr Val Ala Asn Val Lys Gly Asn Asn

405 410 415

Val Arg Asp Gly Tyr Ser Thr Asn Ser Arg Ile Thr Gly Val Leu Pro

420 425 430

Asn Asn Ala Thr Ile Lys Ser Asp Gly Ala Tyr Cys Ile Asn Gly Tyr

435 440 445

Arg Trp Ile Thr Tyr Ile Ala Asn Ser Gly Gln Arg Arg Tyr Ile Glu

450 455 460

Thr Gly Glu Val Asp Lys Ala Gly Asn Arg Ile Ser Ser Phe Gly Lys

465 470 475 480

Phe Ser Thr Ile

<210> 3

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

attggatccg gtaggtgttg accaatgttg 30

<210> 4

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

cttaagcttt aaatcgtgct aaacttacc 29

Claims

1.一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶，其特征在于其氨基酸序列为Seq ID NO.2。

2.一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶的编码基因，其特征在于其核苷酸序列为Seq ID NO.1。

3.一种含有权利要求2所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶的编码基因的质粒。

4.一种含有权利要求3所述的质粒的重组菌。

5.一种表达李斯特菌噬菌体溶壁酶的制备方法，其特征在于步骤1）中采用引物5’- ATT GGA TCC GGT AGG TGT TGA CCA ATG TTG -3’和引物5’- CTT AAG CTTTAA ATC GTG CTA AAC TTA CC -3’从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组DNA中扩增金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶基因；

具体步骤如下

从金黄色葡萄球菌噬菌体基因组中扩增金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶基因；

构建表达金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶的重组表达载体；

将重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达金黄色葡萄球噬菌体溶壁酶的工程菌；

异丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷诱导表达，获得重组基因表达产物；

将重组基因表达产物，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组的金黄色葡萄球噬菌体溶壁酶；

将纯化的溶壁酶产物经去毒素试剂盒进行去毒处理即≤0.01 EU/μg内毒素。

6.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备防治奶牛乳房炎药物的应用。

7.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球菌污染或过度生长药物的应用。

8.根据权利要求7所述的一种金黄色葡萄球菌噬菌体溶壁酶在制备抑制金黄色葡萄球菌污染或过度生长的药物的应用，其特征在于所述的金黄色葡萄球菌污染为对肉类，或蛋类，或奶制品，或粮食，或蔬菜，或它们之间的组合加工的固体或液体类食品的污染；所述的应用是指制备抑制所述的金黄色葡萄球菌污染为对肉类，或蛋类，或奶制品，或粮食，或蔬菜，或它们之间的组合加工的固体或液体类食品的污染的药物的应用。