具体实施方式:
以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。
实施例1:对氯肉桂醛和肉桂醛体外抗菌活性的比较
(1)试验材料:
①培养基:
I、LB液体培养基:用于培养大肠杆菌和沙门氏菌,配方如下:
II、TSB液体培养基,使用时添加体积百分比2%的小牛血清,用于金黄色葡萄球菌的培养,配方如下:
III、液体硫乙醇酸盐培养基(FT培养基):用于产气荚膜梭菌的培养,配方如下:
②菌株:大肠杆菌CAU0159、大肠杆菌CAU0195、大肠杆菌CAU0147、鸭沙门氏菌CAU0118、猪霍乱沙门氏菌CEC19940146、金黄色葡萄球菌CAU0871、金黄色葡萄球菌CAU0868、金黄色葡萄球菌CAU0869、产气荚膜梭菌CAU0859、产气荚膜梭菌CAU0855、产气荚膜梭菌CAU0795:均购自国家兽医微生物菌种保存中心。
③测试样品:
对氯肉桂醛和肉桂醛均购自SIGMA公司。
(2)试验方法(试管二倍稀释法)
试验方法采用试管二倍稀释法,以肉桂醛对金黄色葡萄球菌的抗菌活性测试为例(测试其他化合物对不同细菌抗菌活性的方法与此相同)。若测试样品对大肠杆菌和沙门氏菌的抗菌活性时,培养基用LB液体培养基。而测试样品对产气荚膜梭菌的抗菌活性时,用新鲜的FT培养基,培养时表面覆盖一层石蜡油,以维持厌氧环境。具体的试验方法如下:
A、挑选12支无菌试管编号1~12;
B、无菌加入9.5毫升TSB液体培养基至第1管内,无菌加入5.0毫升TSB液体培养基至第2到11管内;
C、在第1管中加入肉桂醛(质量分数2%)溶液0.5毫升,然后将第1管混合均匀后取5.0毫升至第2管,按上述操作,依次将上一管的5.0ml至下一管,直至第10管,再从第10管取5.0毫升丢去,第11管为不加测试样品作阳性对照;
D、另准备TSB液体培养基管(第12管)5.0毫升不加测试样品、细菌,作为阴性对照;
E、第1~11管分别加入待测试的细菌(细菌浓度约为108cfu/ml)菌液50.0微升(细菌菌龄为16-18h);
F、37℃静止培养16h。
G、结果判定:肉眼观察有无细菌生长,阳性可见混浊生长,阴性可见澄清(阴性和阳性对照必须正确)。按试管编号,不出现细菌生长的最后一管中药物浓度即为肉桂醛对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(μg/mL)。
(3)试验结果
试验结果如表1所示,对氯肉桂醛和肉桂醛均具有广谱抗菌活性,对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌和产气荚膜梭菌)和革兰氏阴性细菌(大肠杆菌和沙门氏菌)均有较强的抑制活性,最小抑菌浓度在31.25~500μg/mL,但对氯肉桂醛的抗菌活性较肉桂醛强1~2倍。
表1:对氯肉桂醛和肉桂醛对不同细菌的体外抑制活性(单位:μg/mL)
菌株及编号 |
对氯肉桂醛(μg/mL) |
肉桂醛(μg/mL) |
大肠杆菌CAU0159 |
250 |
500 |
大肠杆菌CAU0195 |
250 |
500 |
大肠杆菌CAU0147 |
250 |
500 |
鸭沙门氏菌CAU0118 |
250 |
500 |
猪霍乱沙门氏菌CEC19940146 |
250 |
500 |
金黄色葡萄球菌CAU0871 |
62.5 |
250 |
金黄色葡萄球菌CAU0868 |
125 |
250 |
金黄色葡萄球菌CAU0869 |
31.25 |
125 |
产气荚膜梭菌CAU0859 |
125 |
250 |
产气荚膜梭菌CAU0855 |
62.5 |
250 |
产气荚膜梭菌CAU0795 |
125 |
250 |
实施例2:对氯肉桂醛与肉桂醛等对鸡促生长效果的比较
1、试验材料
试验动物,1日龄岭南黄快大肉鸡,广东省农业科学院畜牧研究种鸡场提供。
快大肉鸡全价配合饲料:不含抗生素类生长促进剂,惠州元太饲料有限公司配制。
对氯肉桂醛、邻氯肉桂醛、间氯肉桂醛、肉桂醛均购自SIGMA公司。
2、试验方法
500只1日龄随机分成5组,每组100只。各组在饲料中分别不添加生长促进剂的阴性对照组、添加肉桂醛、间氯肉桂醛、邻氯肉桂醛和对氯肉桂醛的实验组,添加剂量如表2所示,常规饲喂,统计1-21日龄各组试验鸡存活率、增重及饲料报酬。试验过程为网上笼养,自由采食。
表2:对氯肉桂醛和肉桂醛等对肉鸡促生长试验
组别 |
动物数量 |
生长促进剂 |
剂量(ppm) |
阴性对照组 |
100 |
- |
0 |
肉桂醛组 |
100 |
肉桂醛 |
100 |
间氯肉桂醛组 |
100 |
间氯肉桂醛 |
100 |
邻氯肉桂醛组 |
100 |
邻氯肉桂醛 |
100 |
对氯肉桂醛组 |
100 |
对氯肉桂醛 |
100 |
注:-表示未添加生长促进剂。
3、试验结果
各试验组在试验期间的存活率均为100%,且在饲料中添加肉桂醛、间氯肉桂醛、邻氯肉桂醛和对氯肉桂醛均表现对试验鸡有不同程度的促生长效应,其中对氯肉桂醛试验组促生长效果最好,较阴性对照组相比,增重提高8.24%,料肉比改善0.082,其促生长效果明显优于肉桂醛、间氯肉桂醛和邻氯肉桂醛试验组(表3)。
表3:对氯肉桂醛与肉桂醛等对肉鸡促生长效果比较的结果
实施例3:对氯肉桂醛对鸡的促生长试验效果的剂量研究
1、试验材料
试验动物,1日龄岭南黄快大肉鸡,广东省农业科学院畜牧研究种鸡场提供。
快大肉鸡全价配合饲料:不含抗生素类生长促进剂,惠州元太饲料有限公司配制。
对氯肉桂醛购自SIGMA公司;维吉尼亚霉素(50%),美国辉宝公司出品。
2、试验方法
800只1日龄随机分成8组,每组100只。各组在饲料中添加不同剂量的对氯肉桂醛,具体如表4所示,统计1-21日龄各组试验鸡存活率、增重及饲料报酬。试验过程为网上笼养,常规饲喂,自由采食。
表4:不同剂量对氯肉桂醛对肉鸡的促生长
组别 |
动物数量 |
生长促进剂 |
剂量(ppm) |
阴性对照组 |
100 |
- |
0 |
试验组1 |
100 |
对氯肉桂醛 |
10 |
试验组2 |
100 |
对氯肉桂醛 |
25 |
试验组3 |
100 |
对氯肉桂醛 |
50 |
试验组4 |
100 |
对氯肉桂醛 |
100 |
试验组5 |
100 |
对氯肉桂醛 |
200 |
试验组6 |
100 |
对氯肉桂醛 |
500 |
试验组7 |
100 |
维吉尼亚霉素 |
20 |
注:-表示未添加生长促进剂。
3、试验结果
通过试验鸡1-21龄饲养实验结果分析,不同剂量对氯肉桂醛均有不同程度的促生长效应。各试验组的存活率均为100%,但与不加对氯肉桂醛的阴性对照组相比。添加对氯肉桂醛的试验组的增重较阴性对照对照组有1.28~8.49%的提高,且与添加的剂量呈一定相关性。此外,添加对氯肉桂醛的试验组还能不同程度改善饲料报酬,相较阴性对照组而言,降低料肉比0.005~0.076。饲料中添加50ppm对氯肉桂醛即可达到与添加20ppm维吉尼亚霉素相当的促生长效果(表5)。
表5:不同剂量对氯肉桂醛对肉鸡促生长试验的结果
实施例4:对氯肉桂醛对猪的促生长效果试验
1、试验材料
120头三元杂小猪,广东民丰种猪场。
919型猪用全价配合饲料,不含抗生素,广东兄弟德力饲料公司配制。
对氯肉桂醛购自IGMA公司;维吉尼亚霉素(50%),美国辉宝公司出品。
2、试验方法
120头断奶仔猪分成4组,每组30头,分别为在饲料中不添加生长促进剂的阴性对照组和实验组。各实验组分别在饲料中添加不同的生长促进剂,其种类和剂量如表6所示,而后自由采食,统计试验期30天各组试验猪的增重及饲料报酬,并分析对氯肉桂醛对试验猪生产性能的影响。
表6:对氯肉桂醛对猪的促生长试验
组别 |
动物数量 |
平均初重(kg) |
生长促进剂 |
浓度(ppm) |
阴性对照组 |
30 |
16.28 |
- |
- |
试验组1 |
30 |
16.17 |
对氯肉桂醛 |
50 |
试验组2 |
30 |
16.25 |
对氯肉桂醛 |
100 |
试验组3 |
30 |
16.39 |
维吉尼亚霉素 |
20 |
注:-表示未添加生长促进剂。
3、试验结果
通过饲养实验结果分析,在饲料中分别添加对氯肉桂醛50ppm、对氯肉桂醛100ppm或维吉尼亚霉素20ppm后,与阴性对照组相比均有明显的促生长作用,相对增重率分别提高7.21%、7.91%和7.38%,料肉比分别降低了0.063、0.076和0.065,添加50ppm对氯肉桂醛对试验猪生产性能的改进与添加20ppm维吉尼亚霉素的效果相当(表7)。
表7:对氯肉桂醛对猪的促生长试验结果
注:-表示未添加生长促进剂。
实施例5:对氯肉桂醛对鸭的促生长效果试验
1、试验材料
1日龄樱桃谷肉鸭,广州农丰种鸭场。
807型全价肉鸭料:不含任何抗生素类生长促进剂,广州惠农饲料厂配制。
对氯肉桂醛,购自SIGMA公司;维吉尼亚霉素(50%),美国辉宝公司出品。
2、试验方法
400只1日龄樱桃谷肉鸭随机分成4组,每组100只。各组在饲料中添加不同生长促进剂(如表8,具体为不添加生长促进剂、对氯肉桂醛和维吉尼亚霉素组),统计1-46日龄各组的存活率、增重和饲料报酬。饲养管理过程为网上笼养、自由采食。
表8:对氯肉桂醛对肉鸭的促生长试验
组别 |
动物数量(只) |
生长促进剂 |
剂量(ppm) |
阴性对照组 |
100 |
- |
- |
试验组1 |
100 |
对氯肉桂醛 |
25 |
试验组2 |
100 |
对氯肉桂醛 |
50 |
试验组3 |
100 |
维吉尼亚霉素 |
10 |
注:-表示未添加生长促进剂。
3、试验结果
饲养实验结果显示,在饲料中分别添加对氯肉桂醛25ppm、对氯肉桂醛50ppm或维吉尼亚霉素10ppm后,与阴性对照组相比均有明显的促生长作用,相对增重率分别提高6.75%、7.90%和6.88%,料肉比分别降低了0.099、0.113和0.106,添加50ppm对氯肉桂醛对试验鸭生产性能的改进与添加10ppm维吉尼亚霉素的效果相当(表9)。
表9:对氯肉桂醛对肉鸭促生长效果试验结果
实施例6:对氯肉桂醛在水产料中的应用
1、试验材料
试验用鱼:所用试验鱼为青鱼,当年鱼种,由广东省惠州市大丰鱼种场提供。健康活泼、规格一致的青鱼种在大网箱中(4×2×1.5m3)饲养4周后才用于正式养殖试验,实验体系为浮性小网箱(规格1.1×1.1×1.1m3),每个小网箱均置有一个充气头,每天24h充气。小网箱与暂养网箱均置于试验场一个3500m2的池塘中,池塘水深~1.5m,池塘水为充分曝气底下水。试验时,将饥饿1d的青鱼192尾随机分成4组,每组设4个重复,每个重复放12尾鱼,整体称重后随机放入12个网箱中,分别饲喂不同的试验饲料。
试验饲料:试验用饲料按表10配方配自行配制,不同试验组按表11分别在饲料中加入不同的生长促进剂。所用饲料原料(含生长促进剂)经超微粉碎后通过江苏牧羊膨化机组制成粒径3mm浮性膨化饲料,出模温度130℃,通过喷油设备外喷3%豆油,阴凉处密封保存备用。
表10:试验用青鱼饲料配方及化学成分(%wt.)
原料组成 |
含量(%) |
原料组成 |
含量(%) |
鱼粉 |
9.0 |
豆油 |
3.0 |
肠衣粉 |
3.0 |
磷脂菜粕 |
9.0 |
豆粕 |
12.0 |
谷朊粉 |
4.0 |
菜粕 |
12.0 |
血球粉 |
2.0 |
味精蛋白 |
3.0 |
Vc-磷酸酯 |
0.1 |
次粉 |
12.6 |
磷酸二氢钙 |
1.8 |
面粉 |
17.0 |
氯化胆碱 |
0.2 |
膨润土 |
0.70 |
多维 |
0.1 |
米糠 |
10.0 |
微矿预混剂 |
0.5 |
表11:对氯肉桂醛对鱼的促生长试验分组
组别 |
药物 |
剂量(ppm) |
不给药对照组 |
- |
- |
对氯肉桂醛组 |
对氯肉桂醛 |
25 |
对氯肉桂醛组 |
对氯肉桂醛 |
50 |
黄霉素组 |
黄霉素 |
5 |
2、试验方法
试验管理:试验采用人工限食投喂,投食量每周调整一次,四组投喂水平(按初始体重)完全一致,每天投喂两次(7:30和15:00)。试验为期8周。试验期间定时对水质进行监控,养殖全程水温26.88±3.08℃、DO>5.0mg O L-1、pH 7.8、氨氮<0.50mg N L-1、亚硝酸盐氮<0.05mg N L-1。
参数统计:试验结束后,停喂1d后对各网箱鱼进行整体称重,计算其增重率(WG,%)、饵料系数(FCR)和存活率(SR,%)。计算公式如下:
增重率(WG,%)=100×(平均末重-平均初重)/平均初重;
饵料系数(FCR)=摄食量/鱼体增重;
存活率(SR,%)=100×试验结束时鱼数量/试验开始时鱼数量。
3、试验结果
对氯肉桂醛和黄霉素对鱼的促生长试验结果见表12。结果显示添加对氯肉桂醛25ppm试验组、对氯肉桂醛50ppm试验组和黄霉素组在增重、饲料系数方面均优于不给药物对照组,具有明显的促生长效应,其中增重率分别提高6.56%、7.83%和9.72%,饵料系数降低5.44%、5.72%和5.22%。结果提示,对氯肉桂醛可用作鱼类动物的生长促进剂。
表12:对氯肉桂醛在水产料中的应用试验结果
参数 |
对照组 |
对氯肉桂醛25ppm组 |
对氯肉桂醛50ppm组 |
黄霉素4ppm组 |
初重(g) |
248.20±36.18 |
247.62±42.33 |
249.07±46.55 |
248.35±39.38 |
末重(g) |
592.50±55.50 |
607.36±56.31 |
614.08±48.22 |
617.0±47.75 |
增重率(%) |
138.72±12.45 |
145.28±11.38 |
146.55±13.35 |
148.44±17.80 |
饵料系数(FCR) |
1.398±0.11 |
1.322±0.09 |
1.318±0.10 |
1.325±0.09 |
存活率SR(%) |
100 |
100 |
100 |
100 |