CN102666581A - 用于抑制移植物排斥的方法和组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于调节受试者的免疫应答的方法。优选实施例提供用于减少或抑制受试者，优选人类受试者的移植物排斥的方法和组合物。可以通过投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合物以抑制或降低免疫细胞的生物活性或减少移植物部位处促炎性分子的量来抑制或减少受试者的移植物排斥。ThI、ThI 7和Th22细胞是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。

Description

用于抑制移植物排斥的方法和组合物
相关申请案的交叉参考
本申请案主张2009年8月31日申请的美国临时专利申请案第61/238,605号、2009年12月4日申请的美国临时专利申请案第61/266,854号、2009年10月26日申请的美国临时专利申请案第61/254,930号、2009年12月15日申请的美国临时专利申请案第61/286,537号以及2010年8月30日申请的美国临时专利申请案第61/378,361号的优先权。
技术领域
本发明的领域大体上是免疫学领域，尤其涉及用于治疗移植物排斥的方法和组合物。
背景技术
外科技术和免疫抑制疗法的持续发展使得器官移植成为了需要移植物的患者的特别成功的治疗选择。从1970年代环孢霉素(cyclosporine)的革命性的发现开始，免疫抑制方案得到了长足发展，并且使例如心脏、肾和骨髓等许多类型器官和组织移植物的存活率明显增加。举例来说，当前的统计学证实一年肝移植存活率超过80％(皮赖(Pillai)等人，世界胃肠病学杂志(World J Gastroenterol)，15(34)：4225-4233(2009))。
手术移植器官和组织的成功在很大程度上取决于临床医师调节移植物受体的免疫应答的能力。如果移植的外来组织要存活和发挥作用，就必须控制针对所述组织的免疫应答。在移植物排斥期间，移植物受体正常作用的免疫系统将移植的器官识别为“非自身”组织，随后对移植的器官施加免疫应答。如果不加检查，那么免疫应答将产生众多最终会导致移植器官生物功能丧失或死亡的细胞和蛋白质，并且还会在移植物受体体内引起其它严重毒副作用。
移植物排斥是人类体内长期移植物存活的最大障碍。
T细胞在移植物排斥中起到关键作用(盖蒂A.(Gandhi，A.)等人，器官移植当代视点(Curr Opin Organ Transplant)，13：622-626(2008))。预防移植物排斥的大多数疗法都集中在抑制T细胞活化。原生T细胞的完全活化需要两种信号(维森提F.(Vincennti，F.)等人，过敏与临床免疫学杂志(J Allergy Clin Immunol)，121(2)：299-306)。第一种信号具有抗原特异性，并且由T细胞受体与抗原提呈细胞(antigen presentingcell，APC)上的MHC和抗原肽复合物相互作用所提供。第二种信号或共刺激信号是由APC上例如CD80和CD86等分子与原生T细胞上的同源受体之间相互作用所提供。细胞因子(包括IL-2)的存在刺激活化过程，导致T细胞增殖。如果T细胞因此路径阻断而不能接收共刺激信号，那么其会变得无变应性并经历细胞凋亡。
CD80(B7-1)和CD86(B7-2)是共刺激分子B7超家族的成员，其各自可接合刺激性CD28受体和抑制性CTLA-4(CD 152)受体。结合经由T细胞受体进行的信号传导，CD28连接将增加T细胞的抗原特异性增殖；增进细胞因子产生；刺激分化和效应功能；并促进T细胞存活(兰萧(Lenshow)等人，免疫学年鉴(Annu.Rev.Immunol.)，14：233-258(1996)；查姆博(Chambers)和埃里森(Allison)，免疫学当代视点(Curr.Opin.Immunol.)，9：396-404(1997)；以及雷斯梅尔(Rathmell)和汤普森(Thompson)，免疫学年鉴，17：781-828(1999))。相比之下，经由CTLA-4进行的信号传导被认为传递抑制T细胞增殖、IL-2产生和细胞周期进程的负信号(克鲁梅尔(Krummel)和埃里森(Allison)，实验医学杂志(J.Exp.Med)，183：2533-2540(1996)；和沃伦斯(Walunas)等人，实验医学杂志，183：2541-2550(1996))。
当前的免疫抑制剂包括钙调磷酸酶(calcineurin)抑制剂，例如环孢霉素和他克莫司(tacrolimus)。这些试剂抑制非T细胞独有的细胞内蛋白酶钙调磷酸酶。由于钙调磷酸酶存在于其它细胞类型中，故钙调磷酸酶抑制剂在其它组织中引起副作用。mTOR抑制剂(例如西罗莫司(sirolimus))类似地在其它组织中具有副作用，因为其抑制非T细胞特异性信号转导路径。(艾玛穆雷J.(Emamaullee，J.)等人，生物疗法专家观点(Expert Opin.Biol Ther.)9(6)：789-796(2009))。结合于T细胞上的受体的基于抗体的试剂提供高于钙调磷酸酶抑制剂的选择性，但通常对免疫系统提供可持续数月的更有效的抑制作用。
CTLA-4在T细胞活化后表达，并用于下调T细胞应答。CTLA-4结合于CD 80和CD 86配体的亲合力(avidity)高于结合CD28，并与CD28竞争下调T细胞活性。经显示，具有CTLA-4细胞外结构域的融合蛋白选择性防止经由CD28进行的T细胞活化(艾勒格M.(Alegre，M.)等人，现代药物设计(Current Pharmacoloical Design)，12：149-160)。
因此，本发明一个目的是提供用于抑制或减少移植物排斥的方法和组合物。
本发明另一目的是提供用于延长同种异体移植物存活率的方法和组合物。
本发明另一目的是提供用于抑制或减少移植物抗宿主疾病的方法和组合物。
本发明另一目的是提供T细胞特异性免疫抑制剂。
本发明另一目的是提供通过抑制原生T细胞发育成Th1、Th17或Th22细胞中任一者来抑制移植物排斥的方法和组合物。
本发明另一目的是提供通过抑制或减少促炎性分子的产生并由此抑制或减少移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。
本发明一个目的是提供用于抑制移植物排斥的方法和组合物，其抑制T细胞增殖、减少或抑制T细胞产生促炎性分子、减少或抑制Th1、Th17或Th22细胞分化和效应功能以及减少或抑制Th1、Th17或Th22细胞存活。
本发明另一目的是提供通过增强Treg的抑制作用来抑制移植物排斥的方法和组合物。
本发明另一目的是提供通过增强Treg对Th1、Th17和Th22路径的抑制作用以降低产生的IFN-γ、IL-17和其它发炎性分子的水平并由此抑制或减少炎症、同种异体反应性(alloreactivity)和移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。
本发明另一目的是提供通过投予直接作用于Treg的试剂以促进或增进IL-10产生，从而进一步抑制发炎性分子的产生并由此抑制或减少移植物排斥来抑制移植物排斥的方法和组合物。
本发明另一目的是提供用于抑制移植物排斥的方法和组合物，其增加或促进Treg活性、增加原生T细胞分化成Treg、增加Treg的数量或增加Treg的存活率。
本发明另一目的是提供用于调节Th1、Th17或Th22T细胞的促炎性活性，同时增加或促进Treg活性的组合物和方法。
本发明另一目的是提供用于抑制移植物排斥的组合疗法。
发明内容
本发明提供用于调节受试者的免疫应答的方法。优选实施例提供通过投予有效量的B7-H4多肽或其片段或融合蛋白，以抑制或降低免疫细胞的生物活性，或减少促炎性分子(例如促炎性细胞因子)的量来减少或抑制受试者，优选人类受试者的移植物排斥的方法和组合物。最优选的实施例是B7-H4-Ig融合蛋白。示范性促炎性分子包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP。Th1、Th17和Th22是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。B7-H4多肽或其片段或融合蛋白也可用于靶向分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。此外，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可靶向Treg以增大对例如IL-17等发炎性分子产生的抑制作用。B7-H4多肽或者其片段或融合物也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10产生，从而进一步抑制发炎性分子的产生，或增强Treg的抑制作用，并由此抑制或减少移植物排斥。
B7-H4多肽或其片段或融合物作用于多种路径中的多个点。举例来说，其可抑制原生T细胞发育成Th1、Th17、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。或者，其可与Th1、Th17、Th22和/或其它细胞相互作用以抑制或减少促炎性分子的产生，或抑制Th1、Th17和Th22细胞的增殖。另外，其可与Treg协作以增大对Th1、Th17和/或Th22细胞的抑制作用，由此降低产生的IFN-γ和/或IL-17的水平。其也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10的产生，由此抑制Th1和/或Th17路径。此外，其还可通过增进移入组织区域中Treg细胞的分化、募集和/或扩增来起作用。
待处理的移植材料可以是细胞、组织、器官、肢体、手指或脚趾(digit)或身体(优选人体)的一部分。移植物通常为同种异体的或异种的。B7-H4多肽或者其片段或融合物可全身或局部投予。在一些实施例中，B7-H4多肽、其片段或融合物是在移植之前、同时或之后投予移植部位。在一个实施例中，B7-H4多肽、其片段或融合物经肠胃外(例如通过皮下注射)投予移植部位。在其它实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物是离体直接投予待移植的细胞、组织或器官。在一个实施例中，在移植前、移植后或二者，移植材料与B7-H4多肽或者其片段或融合物接触。在其它实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物投予免疫组织或器官，例如淋巴结或脾。也提供编码B7-H4多肽的载体。这些载体可用于在体内或离体将B7-H4局部传递到例如胰岛细胞。示范性载体是腺病毒载体。
B7-H4多肽或者其片段或融合物可与一种或一种以上其它治疗剂组合投予，所述其它治疗剂包括(但不限于)针对其它淋巴细胞表面标记物(例如CD40)或针对细胞因子的抗体；其它融合蛋白，例如CTLA-4-Ig
Figure BDA0000158178250000061
TNFR-Ig
Figure BDA0000158178250000062
或其它免疫抑制药物、抗增殖剂、细胞毒性剂，或可能有助于免疫抑制的其它化合物。在一个实施例中，所述其它治疗剂是CTLA-4融合蛋白，例如CTLA-4Ig(阿巴西普(abatacept))。在一个优选实施例中，所述其它治疗剂是称为贝拉西普(belatacept)的CTLA-4-Ig融合蛋白，其含有两个在体内明显增加其与CD86的亲合力的氨基酸取代(L104E和A29Y)。
另一实施例提供用于治疗有需要的受试者的移植物抗宿主疾病(graft versus host disease，GVHD)的一种或一种以上症状的方法和组合物，其是通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以减轻一种或一种以上GVHD相关性症状实现。
另一实施例提供一种用于治疗糖尿病的方法，其通过将产胰岛素细胞移植到有需要的受试者体内，并投予有效量B7-H4多肽、其融合物或者编码B7-H4多肽或B7-H4融合蛋白的载体以抑制或减少所述产胰岛素细胞的移植物排斥来实现。
也提供一种用于抑制或减少慢性移植物排斥的方法。所述方法包括对有需要的受试者投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物，以相对于对照物抑制或减少慢性移植物排斥。
附图说明
图1是诱发糖尿病并用同种异体胰岛移植治疗，并且在第0天、第2天、第4天、第6天和第8天投予B7-H4-Ig(0.25mg)的示意性说明。
图2是用B7-H4-Ig(实线)或对照物(虚线)治疗的小鼠的胰岛存活百分比与移植后天数的关系的线图。
图3是移植物抗宿主疾病分析法的实验设计的示意图。使4组小鼠经历骨髓移植。第I组具有同种同基因骨髓移植物。第II组具有同种异体骨髓移植物，并在第0天、第1天、第7天和第14天用对照IgG(0.5mg)治疗。第III组具有同种异体骨髓移植物，并在第0天、第1天、第7天和第14天用B7-H4-Ig(0.5mg)治疗。第IV组具有同种异体骨髓移植物，并在第0天、第1天、第7天和第14天用磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline，PBS)治疗。
图4A是显示图3中治疗的第II组和第III组小鼠的腹泻临床评分的柱形图。对照IgG(实心阴影)。B7-H4-Ig(空心框)。图4B是显示图3中治疗的小鼠的体重减轻百分比的柱形图。对照IgG(实心阴影)。
图5是显示图3中治疗的小鼠的存活率百分比与骨髓移植后天数的关系的线图。同种同基因移植物(实心方形)、用对照IgG治疗的同种异体移植物(空心三角形)、用B7-H4-Ig治疗的同种异体移植物(实心三角形)、用磷酸盐缓冲生理盐水治疗的同种异体移植物(空心圆形)。如箭头所指示，在第0天、第1天、第7天和第14天注射0.5mg指定蛋白质。
具体实施方式
I.定义
术语“同种同基因”是指遗传上相同或密切相关的生物体、细胞、组织、器官等。
术语“同种异体”是指生物体、细胞、组织、器官等来自或源自于同一物种的个体，但其中所述生物体、细胞、组织、器官等在遗传学上彼此不同。
术语“异种移植物”是指供体与受体属于不同物种的移植物。
术语“移植物排斥”是指移植物受体上或移植物受体中移植的细胞、组织、器官等的部分或完全破坏。
术语“宿主”或“受试者”是指作为移植的细胞、组织、器官等的受体的生物体(优选所述生物体是哺乳动物)、组织、器官等。当提到移植物宿主、受试者或受体时，术语“宿主”、“受体”或“受试者”在本文中可互换使用。
“在治疗上有效抑制移植物排斥的量”是指B7-H4-Ig当投予移植物受体时相对于未治疗对照抑制(部分或完全)移植物排斥的量。
本文中使用的“发炎性分子”是指细胞因子、金属蛋白酶和其它分子，包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP。
II.B7-H4和其融合蛋白
A.B7-H4
B7-H4是B7蛋白质家族的成员，并涉及T细胞信号传导路径。原生T细胞的完全活化需要两种信号(维森提F.等人，过敏与临床免疫学杂志，121(2)：299-306)。第一种信号具有抗原特异性，并且由T细胞受体与抗原提呈细胞(APC)上的MHC和抗原肽复合物相互作用所提供。第二种信号或共刺激信号是由APC上例如CD80和CD86等分子与原生T细胞上例如CD28等同源受体之间相互作用所提供。最详尽表征的T细胞共刺激路径是B7-CD28，其中B7-1(CD80)和B7-2(CD86)各自可接合刺激性CD28受体和抑制性CTLA-4(CD152)受体。结合经由T细胞受体进行的信号传导，CD28连接将增加T细胞的抗原特异性增殖；增进细胞因子产生；刺激分化和效应功能；并促进T细胞存活(兰萧等人，免疫学年鉴，14：233-258(1996)；查姆博和埃里森，免疫学当代视点，9：396-404(1997)；以及雷斯梅尔和汤普森，免疫学年鉴，17：781-828(1999))。相比之下，经由CTLA-4进行的信号传导被认为传递抑制T细胞增殖、IL-2产生和细胞周期进程的负信号(克鲁梅尔和埃里森，实验医学杂志，183：2533-2540(1996)；和沃伦斯等人，实验医学杂志，183：2541-2550(1996))。B7家族的其它成员包括B7-H1(董(Dong)等人，自然-医学(Nature Med)，5：1365-1369(1999)；和弗雷曼(Freeman)等人，实验医学杂志，192：1-9(2000))、B7-DC(曾(Tseng)等人，实验医学杂志，193：839-846(2001)；和拉奇曼(Latchman)等人，自然-免疫学(Nature Immunol)，2：261-268(2001))、B7-H2(王(Wang)等人，血液(Blood)，96：2808-2813(2000)；斯瓦洛(Swallow)等人，免疫学(Immunity)，11：423-432(1999)；和吉永(Yoshinaga)等人，自然(Nature)，402：827-832(1999))和B7-H3(查普沃(Chapoval)等人，自然-免疫学，2：269-274(2001))以及B7-H4(崔(Choi)等人，免疫学杂志(J.Immunol)，171：4650-4654(2003)；西卡(Sica)等人，免疫学，18：849-861(2003)；普拉萨德(Prasad)等人，免疫学，18：863-873(2003)；和臧(Zang)等人，美国国家科学院院刊(Proc.Natl Acad Scl U.S.A.)，100：10388-10392(2003))。B7-H1和B7-DC是PD-1的配体，B7-H2是ICOS的配体，且B7-H3和B7-H4此时仍为孤儿配体(orphan ligand)(董(Dong)等人，免疫学研究(Immunol Res.)，28：39-48(2003))。
B7-H4是T细胞应答的负调控子。人类与小鼠B7-H4共有87％氨基酸一致性，表明重要的在进化上保守的功能。人类和小鼠B7-H4mRNA在淋巴(脾和胸腺)和非淋巴器官(包括肺、肝、睾丸、卵巢、胎盘、骨骼肌、胰腺和小肠)中广泛表达，但利用免疫组织化学方法在正常人类组织中未检测到B7-H4蛋白。关于B7-H4蛋白表达的有限研究表明，B7-H4不在新分离的人类T细胞、B细胞、DC和单核细胞上表达，但其可在体外刺激后在这些细胞类型上诱导。免疫组织化学染色显示，B7-H4在肺、卵巢和头颈肿瘤中高度表达，并且逆转录酶聚合酶链反应(reverse-transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)分析表明，小鼠B7-H4也在包括前列腺、肺和结肠癌在内的大量肿瘤细胞系中高度表达。
使用B7-H4转染子和固定的B7-H4-Ig融合蛋白进行的功能研究证实，B7-H4传递抑制TCR介导的CD4+和CD8+T增殖、细胞周期进程和IL-2产生的信号。B7-1共刺激不能克服B7-H4-Ig诱导的抑制作用。与体外活性一致，B7-H4基因敲除小鼠产生自体免疫性。
B.示范性B7-H4多肽和融合蛋白
提供的融合蛋白含有与其它多肽偶联形成融合蛋白的B7-H4多肽。B7-H4融合多肽具有第一融合搭配物，其包含(i)与第二多肽直接融合或(ii)任选与融合第二多肽的连接肽序列融合的B7-H4蛋白的全部或一部分。融合蛋白任选含有用以使两种或两种以上融合蛋白二聚或多聚的结构域。肽/多肽连接子结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽或第二多肽)中的一者内。类似地，用以使融合蛋白二聚或多聚的结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽、第二多肽或肽/多肽连接子结构域)中的一者内。在一个实施例中，二聚/多聚结构域与肽/多肽连接子结构域是相同的。
本文揭示的融合蛋白具有式I：
N-R1-R2-R3-C
其中“N”表示融合蛋白的N末端，“C”表示融合蛋白的C末端，“R1”是B7-H4多肽，“R2”是任选存在的肽/多肽连接子结构域，且“R3”是第二多肽。或者，R3可为B7-H4多肽，且R1可为第二多肽。
融合蛋白可为二聚合或多聚合的。二聚或多聚反应可通过二聚或多聚结构域在两种或两种以上融合蛋白之间发生。或者，融合蛋白的二聚或多聚反应可通过化学交联发生。形成的二聚体或多聚体可为均二聚体/均多聚体或杂二聚体/杂多聚体。
A.B7-H4多肽
在一个优选实施例中，B7-H4多肽来自哺乳动物物种。在最优选的实施例中，B7-H4多肽为鼠类、非人类灵长类动物(黑猩猩(Pantroglodytes)、恒河猴(Macaca mulatto)或食蟹猴(Macaca fascicularis))或人类来源。适用的鼠类B7-H4多肽与由基因库寄存编号(GenBankAccession Number)NM_178594或AY280973的核酸所编码的B7-H4多肽具有至少约80％、85％、90％、95％或100％序列一致性。适用的鼠类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号AAH32925.1或NP 848709.2的B7-H4多肽具有至少约80％、85％、90％、95％或100％序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与由基因库寄存编号AK026071的核酸所编码的B7-H4多肽具有至少约80％、85％、90％、95％或100％序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号NP 078902.2或BAB 15349.1的B7-H4多肽具有至少约80％、85％、90％、95％或100％序列一致性。
鼠类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcat catcctggct    60
ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcat cacggtcacg    120
accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc    240
cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc    300
acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg    360
cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaagg caaagggaat    420
gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgt ggactataat    480
gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc    540
tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacac cagctttgag    600
ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccgggga catcaaagtg    720
acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctgg gccttccccg    780
tgtgtttttt cttctgcctt tgtggctggc tgggcactcc tatctctctc ctgttgcctg    840
atgctaagat ga                                                        852
(SEQ ID NO：1)。
鼠类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSGPSP CVSSSAFVAG WALLSLSCCL MLR                      283
(SEQIDNO：2)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSGP SPCVSSSAFV AGWALLSLSC CLMLR                               275
(SEQ ID NO：3)、
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG PSPCVSSSAF    240
VAGWALLSLS CCLMLR                                                    256
(SEQ ID NO：4)、
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSGPSP CVFSSAFVAG WALLSLSCCL MLR                      283
(SEQ ID NO：5)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
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ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSGP SPCVFSSAFV AGWALLSLSC CLMLR                               275
(SEQ ID NO：6)或
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG PSPCVFSSAF    240
VAGWALLSLS CCLMLR                                                    256
(SEQ ID NO：7)
人类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct    60
ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact    120
actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc    240
catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg    300
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caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat    420
gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat    480
gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc    540
tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag    600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg    720
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tgtgtctctt ctttctttgc catcagctgg gcacttctgc ctctcagccc ttacctgatg    840
ctaaaataa                                                            849
(SEQ ID NO：8)。
人类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFFAISW ALLPLSPYLM LK                       282
(SEQ ID NO：9)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
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SHLQLLNSKA SLCVSSFFAI SWALLPLSPY LMLK                                274
(SEQ ID NO：10)、
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
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ISWALLPLSP YLMLK                                                     255
(SEQ ID NO：11)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
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QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFFAISW ALLPLSPYLM LK                       282
(SEQ ID NO：12)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
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KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
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(SEQ ID NO：13)或
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
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MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFFA    240
ISWALLPLSP YLMLK                                                     255
(SEQ ID NO：14)。
非人类灵长类动物的B7-H4多肽可与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL    60
SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD    120
AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTVVWASQ    180
IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE    240
IKRRSHLQLL NSKASLCVSS FFAISWALLP LSPYLMLK                            278
(SEQ ID NO：15)或
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFFA    240
ISWALLPLSP YLMLK                                                     255
(SEQ ID NO：16)或
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFLAISW ALLPLAPYLM LK    282
(SEQ ID NO：17)或
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFLA    240
I SWALLPLAP YLMLK                                                    2S5
(SEQ ID NO：18)或
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFLAISW ALPPLAPYLM LK                       282
(SEQ ID NO：19)或
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFLA    240
ISWALPPLAP YLMLK                                                     255
(SEQ ID NO：20)，
其中SEQ ID NO：15和16是黑猩猩(chimapanzee/Pan troglodytes)多肽序列，SEQ ID NO：17和18是恒河猴(rheSuS monkey/Macacamulatto)多肽序列，且SEQ ID NO：19和20是食蟹猴(cynomolgusmonkey/Macaca faSciculariS)多肽序列。
编码B7-H4多肽的核酸可经过优化以在所选表达宿主中表达。密码子可用编码同一氨基酸的替代性密码子取代，以说明获得B7-H4核酸序列的哺乳动物与表达宿主之间密码子用法的差异。按这种方式，可使用表达宿主优选的密码子合成核酸。
1.B7-H4多肽的片段
B7-H4蛋白在细胞外含有两个免疫球蛋白结构域，即IgV结构域(或V结构域)和IgC结构域(或C结构域)，其与抗体的可变结构域和恒定结构域相关。这些结构域可由所属领域技术人员通过搜索家族和结构域数据库来鉴别。根据来自分离的IgV结构域的功能数据，以及通过类比其它B7家族成员，相信IgV结构域负责受体结合。细胞外结构域中的每一Ig结构域都包括在结构域内半胱氨酸残基之间形成的一个二硫键，这是此折叠特有的并且对于结构-功能极为重要。在SEQID NO：2、5、9和12中，对于IgV结构域，这些半胱氨酸位于残基56和130处，且对于IgC结构域则位于残基168和225处。此外，在IgV结构域中存在一个预测的N连接糖基化位点，并且在IgC结构域中存在6个糖基化位点，这些糖基化位点在小鼠与人类B7-H4序列之间保持不变。
在一个实施例中，第一融合搭配物是B7-H4的片段。如本文中所用，B7-H4的片段是指比全长蛋白质少至少一个氨基酸的多肽的任何子集。适用的片段是保持结合于其一个或一个以上天然受体的能力的片段。作为全长B7-H4的片段的B7-H4多肽结合其天然受体的能力通常是全长B7-H4的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、99％、100％或甚至超过100％。
B7-H4多肽的片段包括可溶性片段。可溶性B7-H4多肽片段是可由产生细胞脱出、分泌或以其它方式提取的B7-H4多肽的片段。可溶性B7-H4多肽片段包括一部分或全部受体多肽细胞外结构域，并且缺乏一部分或全部细胞内和/或跨膜结构域。在一个实施例中，B7-H4多肽片段包括B7-H4多肽的整个细胞外结构域。在其它实施例中，可溶性B7-H4多肽片段包括保持B7-H4生物活性的细胞外结构域的片段。细胞外结构域可包括跨膜结构域的1、2、3、4或5个连续氨基酸，和/或信号序列的1、2、3、4或5个连续氨基酸。或者，细胞外结构域的C末端、N末端或二者可去除1、2、3、4、5个或更多个氨基酸。在一些实施例中，细胞外结构域仅为IgV结构域，或在位于全长蛋白质的残基56和130处的IgV结构域保守半胱氨酸之间的区域。
一般说来，B7-H4多肽或其片段是由包括编码信号序列的序列的核酸表达。信号序列一般从不成熟多肽裂解，产生不含信号序列的成熟多肽。SEQ ID NO：4、7、11、14、16、18和20各自不含信号肽。可使用标准分子生物学技术，用另一多肽的信号序列代替B7-H4的信号序列，以影响多肽的表达水平、分泌、溶解性或其它性质。用来代替B7-H4信号序列的信号序列可以是此项技术中已知的任何序列。SEQID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19各自含有信号肽。
在一个优选实施例中，融合蛋白包括B7-H4的细胞外结构域，或其与Ig Fc区融合的片段。如先前所述，可通过将B7-H4或其片段的细胞外结构域的编码区与人类IgG1或小鼠IgG2a的Fc区融合，来制备重组B7-H4-Ig融合蛋白(查普沃(Chapoval)等人，分子医学方法(Methods Mol Med.)，45：247-255(2000))。
a.鼠类B7-DC细胞外结构域融合搭配物
在一个实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括鼠类B7-H4细胞外结构域或其片段。第一融合搭配物可由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcat catcctggct    60
ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcat cacggtcacg    120
accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc    240
cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc    300
acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg    360
cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaagg caaagggaat    420
gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgt ggactataat    480
gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc    540
tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacac cagctttgag    600
ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccgggga catcaaagtg    720
acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctgg g             771
(SEQ ID NO：21)、
atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgt ccattcagga    60
ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgc ggggaacatt    120
ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaa tggaatagta    180
attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaagga ggggaaagac    240
gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt    300
gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac    360
acatgctata tccggtcctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagta caaaacaggc    420
gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc    480
gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggt ggatcaaggc    540
gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaa tgtgacaatg    600
aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctg tatgatagaa    660
aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagt gaaaaggagg    720
agtcaactgc aactcttgaa tagcggc                                        747
(SEQ ID NO：22)或
atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgt ccattcagga    60
ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgc ggggaacatt    120
ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaa tggaatagta    180
attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaagga ggggaaagac    240
gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt    300
gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac    360
acatgctata tccggacctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagta caaaacaggc    420
gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc    480
gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggt ggatcaaggc    540
gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaa tgtgacaatg    600
aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctg tatgatagaa    660
aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagt gaaaaggagg    720
agtcaactgc aactcttgaa tagcggc                                        747
(SEQ ID NO：23)。
在另一实施例中，第一融合搭配物可与以下鼠类氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSG                                                            249
(SEQ ID NO：24)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
TCYIRTSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSG                                                            249
(SEQ ID NO：25)、
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSG                                                   257
(SEQ ID NO：26)或
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSG                                                   257
(SEQ ID NO：27)。
成熟蛋白质中的信号序列被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ IDNO：28提供了不含信号序列的鼠类氨基酸序列SEQ ID NO：24和SEQID NO：26：
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG               230
(SEQ ID NO：28)。
SEQ ID NO：29提供了不含信号序列的鼠类氨基酸序列SEQ IDNO：25和SEQ ID NO：27：
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG               230
(SEQ ID NO：29)
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括鼠类B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5的56位半胱氨酸到SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。
第一融合搭配物可由与以下编码示范性IgV结构域的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
ggattcggca taagcggcaa gcacttcatc acagttacaa cgtttacaag tgcggggaac    60
attggggaag atggaacatt gtcatgtaca tttgagccag atatcaaact caatggaata    120
gtaattcagt ggcttaagga gggcatcaag ggcctggtcc acgaatttaa ggaggggaaa    180
gacgatctgt ctcagcagca cgagatgttc aggggcagaa ccgccgtctt cgcagaccag    240
gttgtggtag gcaacgccag tttgcggctg aaaaacgtgc agctgactga cgccggcacc    300
tacacatgct atatccggtc ctctaagggc aaggggaacg ctaatctcga gtacaaaaca    360
ggcgcctttt ctatgccaga gatcaac                                        387
(SEQ ID NO：30)或
ggattcggca taagcggcaa gcacttcatc acagttacaa cgtttacaag tgcggggaac    60
attggggaag atggaacatt gtcatgtaca tttgagccag atatcaaact caatggaata    120
gtaattcagt ggcttaagga gggcatcaag ggcctggtcc acgaatttaa ggaggggaaa    180
gacgatctgt ctcagcagca cgagatgttc aggggcagaa ccgccgtctt cgcagaccag    240
gttgtggtag gcaacgccag tttgcggctg aaaaacgtgc agctgactga cgccggcacc    300
tacacatgct atatccggac ctctaagggc aaggggaacg ctaatctcga gtacaaaaca    360
ggcgcctttt ctatgccaga gatcaac                                        387
(SEQ ID NO：31)。
第一融合搭配物可与以下鼠类氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEIN                                                            129
(SEQ ID NO：32)或
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEIN                                                            129
(SEQ ID NO：33)。
b.人类细胞外结构域融合搭配物
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括人类B7-H4细胞外结构域或其片段。第一融合搭配物可由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct    60
ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact    120
actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc    240
catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg    300
acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg    360
caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat    420
gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat    480
gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc    540
tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag    600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg    720
acagaatcgg agatcaaaag gcggagt                                        747
(SEQ ID NO：34)、
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct    60
ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact    120
actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc    240
catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg    300
acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg    360
caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat    420
gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat    480
gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc    540
tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag    600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg    720
acagaatcgg agatc                                                     735
(SEQ ID NO：35)、
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct    60
ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact    120
actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc    240
catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg    300
acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg    360
caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat    420
gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat    480
gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc    540
tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag    600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg    720
acagaatcgg agatcaaaag gcggagtcac ctacagctgc taaactcaaa ggcttct       777
(SEQ ID NO：36)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tct                                                                  723
(SEQ ID NO：37)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat c             711
(SEQ ID NO：38)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctcacctac agctgctaaa ctcaaaggct tct                                 753
(SEQ ID NO：39)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tct                                                                  723
(SEQ ID NO：40)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat c             711
(SEQ ID NO：41)或
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctcacctac agctgctaaa ctcaaaggct tct                                 753
(SEQ ID NO：42)。
在另一实施例中，第一融合搭配物可与以下人类氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
S                                                                    241
(SEQ ID NO：43)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEI       237
(SEQ ID NO：44)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SHLQLLNSKA S                                                         251
(SEQ ID NO：45)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
S                                                                    241
(SEQ ID NO：46)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEI       237
(SEQ ID NO：47)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SHLQLLNSKA S                                                         251
(SEQ ID NO：48)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRS                                                            249
(SEQ ID NO：49)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEI                                                                245
(SEQ ID NO：50)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKAS                                                 259
(SEQ ID NO：51)、
MASLGQILEW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRS                                                            249
(SEQ ID NO：52)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEI                                                                245
(SEQ ID NO：53)或
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKAS                                                 259
(SEQ ID NO：54)。
成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ IDNO：55提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO：43和SEQID NO：49：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS                       222
(SEQ ID NO：55)。
SEQ ID NO：56提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ IDNO：46和SEQ ID NO：52：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS                       222
(SEQ ID NO：56)。
SEQ ID NO：57提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ IDNO：44和SEQ ID NO：50：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI                            218
(SEQ ID NO：57)。
SEQ ID NO：58提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ IDNO：47和SEQ ID NO：53：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI                            218
(SEQ ID NO：58)。
SEQ ID NO：59提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ IDNO：45和SEQ ID NO：51：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS            232
(SEQ ID NO：59)。
SEQ ID NO：60提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ IDNO：48和SEQ ID NO：54：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS            232
(SEQ ID NO：60)。
在其它实施例中，最后的丙氨酸和丝氨酸残基从SEQ ID NO：45、48、51、54、59和60去除。
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括人类B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：12的56位半胱氨酸到SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：12的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。
第一融合搭配物可由与以下编码示范性IgV结构域的核苷酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核苷酸序列编码：
ggcttcggca tcagtggacg gcacagtatc acagtgacca ccgtcgcctc cgctggcaat    60
ataggtgagg atggcatcca gtcctgtacc tttgagccgg acatcaaact gtctgacata    120
gtgatacaat ggctgaagga gggggtgctc ggtctggtac atgagtttaa ggaagggaag    180
gatgaactgt ccgagcagga tgagatgttc cgggggagga ccgctgtgtt cgccgatcag    240
gtaatcgtcg gaaatgcaag tctcagattg aaaaatgtgc aactgactga tgctggcacg    300
tataaatgct acattatcac aagtaagggc aaaggaaatg ctaaccttga gtataaaaca    360
ggcgcattct caatgcccga ggtcaat                                        387
(SEQ ID NO：61)或
ggcttcggca tcagtggacg gcacagtatc acagtgacca ccgtcgcctc cgctggcaat    60
ataggtgagg atggcatcct gtcctgtacc tttgagccgg acatcaaact gtctgacata    120
gtgatacaat ggctgaagga gggggtgctc ggtctggtac atgagtttaa ggaagggaag    180
gatgaactgt ccgagcagga tgagatgttc cgggggagga ccgctgtgtt cgccgatcag    240
gtaatcgtcg gaaatgcaag tctcagattg aaaaatgtgc aactgactga tgctggcacg    300
tataaatgct acattatcac aagtaagggc aaaggaaatg ctaaccttga gtataaaaca    360
ggcgcattct caatgcccga ggtcaat                                        387
(SEQ ID NO：62)。
第一融合搭配物可与以下人类氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVN                                                            129
(SEQ ID NO：63)或
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVN                                                            129
(SEQ ID NO：64)。
c.非人类灵长类动物细胞外结构域融合搭配物
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括非人类灵长类动物B7-H4细胞外结构域或其片段。示范性非人类灵长类动物包括(但不限于)黑猩猩、恒河猴和食蟹猴。
第一融合搭配物可与以下黑猩猩氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISG RHSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL    60
SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD    120
AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTVVWASQ    180
IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE    240
IKRRS                                                                245
(SEQ ID NO：65)、
MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL    60
SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD    120
AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTVVWASQ    180
IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE    240
I                                                                    241
(SEQ ID NO：66)或
MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL    60
SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD    120
AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTVVWASQ    180
IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE    240
IKRRSHLQLL NSKAS                                                     255
(SEQ ID NO：67)。
成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。
SEQ ID NO：68提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ IDNO：65：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS                       222
(SEQ ID NO：68)。
SEQ ID NO：69提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ IDNO：66：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI                            218
(SEQ ID NO：69)。
SEQ ID NO：70提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ IDNO：67：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS            232
(SEQ ID NO：70)。
第一融合搭配物可与以下恒河猴氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRS                                                            249
(SEQ ID NO：71)、
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEI                                                                245
(SEQ ID NO：72)或
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKAS                                                 259
(SEQ ID NO：73)。
成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。
SEQ ID NO：74提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ IDNO：71：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS                       222
(SEQ ID NO：74)。
SEQ ID NO：75提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ IDNO：72：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI                            218
(SEQ ID NO：75)。
SEQ ID NO：76提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ IDNO：73：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTE8EIKR RSHLQLLNSK AS            232
(SEQ ID NO：76)。
第一融合搭配物可与以下食蟹猴氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQILFW SIISIIEILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCT EEP   60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRS                                                            249
(SEQ ID NO：77)、
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEI                                                                245
(SEQ ID NO：78)或
MASLGQILFW SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKAS                                                 259
(SEQ ID NO：79)。
成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。
SEQ ID NO：80提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ IDNO：77：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS                       222
(SEQ ID NO：80)。
SEQ ID NO：81提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ IDNO：78：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGDIKVTESEI                             218
(SEQ ID NO：81)。
SEQ ID NO：82提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ IDNO：79：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS            232
(SEQ ID NO：82)。
在其它实施例中，最后的丙氨酸和丝氨酸残基从SEQ ID NO：67、70、73、76、79和82去除。
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括黑猩猩B7-H4的IgV结构域。在另一实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO：15的52位半胱氨酸到SEQ ID NO：15的126位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。
第一融合搭配物可与以下示范性IgV结构域的以下黑猩猩氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVN                                                            129
(SEQ ID NO：83)。
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括恒河猴B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO：17的56位半胱氨酸到SEQ ID NO：17的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。
第一融合蛋白可与以下示范性IgV结构域的恒河猴氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVN                                                            129
(SEQ ID NO：84)。
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括食蟹猴B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO：19的56位半胱氨酸到SEQ ID NO：19的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。
第一融合蛋白可与以下示范性IgV结构域的食蟹猴氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVN                                                            129
(SEQ ID NO：85)。
d.B7-H4细胞外结构域片段
B7-H4细胞外结构域可含有信号肽的一个或一个以上氨基酸或B7-H4的假定跨膜结构域。在分泌期间，裂解的信号肽的氨基酸的数量可视表达系统和宿主而变化。此外，C末端或N末端失去一个或一个以上氨基酸并且保持结合B7-H4受体的能力的B7-H4细胞外结构域的片段可用作所揭示的融合蛋白的融合搭配物。
举例来说，可用作第一融合搭配物的适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：27的32-257、32-256、32-255、32-254、32-253、32-252、32-251、32-250、32-249、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、31-252、31-251、31-250、31-249、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、30-250、30-249、29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、29-250、29-249、28-257、28-256、28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、28-250、28-249、27-257、27-256、27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、27-250、27-249、26-257、26-256、26-255、26-254、26-253、26-252、26-251、26-250、26-249、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、25-250、25-249、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251、24-250、24-249，或
SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、23-249、23-248、23-247、23-246、23-245、23-244、23-243、23-242、23-241、22-249、22-248、22-247、22-246、22-245、22-244、22-243、22-242、22-241、21-249、21-248、21-247、21-246、21-245、21-244、21-243、21-242、21-241、20-249、20-248、20-247、20-246、20-245、20-244、20-243、20-242、20-241、19-249、19-248、19-247、19-246、19-245、19-244、19-243、19-242、19-241、18-249、18-248、18-247、18-246、18-245、18-244、18-243、18-242、18-241、17-249、17-248、17-247、17-246、17-245、17-244、17-243、17-242、17-241、16-249、16-248、16-247、16-246、16-245、16-244、16-243、16-242、16-241。
其它适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：5的28-257、28-258、28-259、28-260、28-261、28-262、28-263、29-257、29-258、29-259、29-260、29-261、29-262、29-263、30-257、30-258、30-259、30-260、30-261、30-262、30-263、31-257、31-258、31-259、31-260、31-261、31-262、31-263、32-257、32-258、32-259、32-260、32-261、32-262、32-263，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
其它适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：33中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但不限于)：
SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25的16-144、16-145、16-146、16-147、16-148、16-149、16-150、16-151、16-152、17-144、17-145、17-146、17-147、17-148、17-149、17-150、17-151、17-152、18-144、18-145、18-146、18-147、18-148、18-149、18-150、18-151、18-152、19-144、19-145、19-146、19-147、19-148、19-149、19-150、19-151、19-152、20-144、20-145、20-146、20-147、20-148、20-149、20-150、20-151、20-152、21-144、21-145、21-146、21-147、21-148、21-149、21-150、21-151、21-152、22-144、22-145、22-146、22-147、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、23-144、23-145、23-146、23-147、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、24-144、24-145、24-146、24-147、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152，或
SEQ ID NO：26或SEQ ID NO：27的24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
可用作第一融合搭配物的示范性适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：49或SEQ ID NO：52的32-249、32-248、32-247、32-246、32-245、32-244、32-243、32-242、32-241、31-249、31-248、31-247、31-246、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、30-249、30-248、30-247、30-246、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、29-249、29-248、29-247、29-246、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、28-249、28-248、28-247、28-246、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、27-249、27-248、27-247、27-246、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、26-249、26-248、26-247、26-246、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、25-249、25-248、25-247、25-246、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241，或
SEQ ID NO：50或SEQ ID NO：53的32-245、32-244、32-243、32-242、32-241、32-240、32-239、32-238、32-237、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、31-240、31-239、31-238、31-237、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、30-240、30-239、30-238、30-237、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、29-240、29-239、29-238、29-237、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、26-240、26-239、26-238、26-237、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、25-240、25-239、25-238、25-237、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237，或
SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：54的32-259、32-258、32-257、32-256、32-255、32-254、32-253、32-252、32-251、31-259、31-258、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、31-252、31-251、30-259、30-258、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、29-259、29-258、29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、28-259、28-258、28-257、28-256、28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、27-259、27-258、27-257、27-256、27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、26-259、26-258、26-257、26-256、26-255、26-254、26-253、26-252、26-251、25-259、25-258、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、24-259、24-258、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251，或
SEQ ID NO：43或SEQ ID NO：46的24-241、24-240、24-239、24-238、24-237、24-236、24-235、24-234、24-233、23-241、23-240、23-239、23-238、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、22-241、22-240、22-239、22-238、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、21-241、21-240、21-239、21-238、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、20-241、20-240、20-239、20-238、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233、19-241、19-240、19-239、19-238、19-237、19-236、19-235、19-234、19-233、18-241、18-240、18-239、18-238、18-237、18-236、18-235、18-234、18-233、17-241、17-240、17-239、17-238、17-237、17-236、17-235、17-234、17-233、16-241、16-240、16-239、16-238、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233，或
SEQ ID NO：44或SEQ ID NO：47的24-237、24-236、24-235、24-234、24-233、24-232、24-231、24-230、24-229、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、23-232、23-231、23-230、23-229、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、22-232、22-231、22-230、22-229、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、21-232、21-231、21-230、21-229、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233、20-232、20-231、20-230、20-229、19-237、19-236、19-235、19-234、19-233、19-232、19-231、19-230、19-229、18-237、18-236、18-235、18-234、18-233、18-232、18-231、18-230、18-229、17-237、17-236、17-235、17-234、17-233、17-232、17-231、17-230、17-229、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233、16-232、16-231、16-230、16-229，或
SEQ ID NO：45或SEQ ID NO：48的24-251、24-250、24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、23-251、23-250、23-249、23-248、23-247、23-246、23-245、23-244、23-243、22-251、22-250、22-249、22-248、22-247、22-246、22-245、22-244、22-243、21-251、21-250、21-249、21-248、21-247、21-246、21-245、21-244、21-243、20-251、20-250、20-249、20-248、20-247、20-246、20-245、20-244、20-243、19-251、19-250、19-249、19-248、19-247、19-246、19-245、19-244、19-243、18-251、18-250、18-249、18-248、18-247、18-246、18-245、18-244、18-243、17-251、17-250、17-249、17-248、17-247、17-246、17-245、17-244、17-243、16-251、16-250、16-249、16-248、16-247、16-246、16-245、16-244、16-243。
其它适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：12的27-249、27-250、27-251、27-252、27-253、27-254、27-255、27-256、27-257、27-259、27-260、
28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255、28-256、28-257、28-259、28-260、
29-249、29-250、29-251、29-252、29-253、29-254、29-255、29-256、29-257、29-259、29-260、
30-249、30-250、30-251、30-252、30-253、30-254、30-255、30-256、30-257、30-259、30-260、
31-249、31-250、31-251、31-252、31-253、31-254、31-255、31-256、31-257、31-259、31-260、
32-249、32-250、32-251、32-252、32-253、32-254、32-255、32-256、32-257、32-259、32-260，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
其它适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO：63或SEQ ID NO：64中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但不限于)：
SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：48中任一者的16-144、16-145、16-146、16-147、16-148、16-149、16-150、16-151、16-152、17-144、17-145、17-146、17-147、17-148、17-149、17-150、17-151、17-152、18-144、18-145、18-146、18-147、18-148、18-149、18-150、18-151、18-152、19-144、19-145、19-146、19-147、19-148、19-149、19-150、19-151、19-152、20-144、20-145、20-146、20-147、20-148、20-149、20-150、20-151、20-152、21-144、21-145、21-146、21-147、21-148、21-149、21-150、21-151、21-152、22-144、22-145、22-146、22-147、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、23-144、23-145、23-146、23-147、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、24-144、24-145、24-146、24-147、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152，或
SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：53或SEQ ID NO：54中任一者的24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
可用作第一融合搭配物的示范性适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：71或SEQ ID NO：77的32-249、32-248、32-247、32-246、32-245、32-244、32-243、32-242、32-241、31-249、31-248、31-247、31-246、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、30-249、30-248、30-247、30-246、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、29-249、29-248、29-247、29-246、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、28-249、28-248、28-247、28-246、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、27-249、27-248、27-247、27-246、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、26-249、26-248、26-247、26-246、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、25-249、25-248、25-247、25-246、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241，或
SEQ ID NO：72或SEQ ID NO：78的32-245、32-244、32-243、32-242、32-241、32-240、32-239、32-238、32-237、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、31-240、31-239、31-238、31-237、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、30-240、30-239、30-238、30-237、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、29-240、29-239、29-238、29-237、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、26-240、26-239、26-238、26-237、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、25-240、25-239、25-238、25-237、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237，或
SEQ ID NO：73或SEQ ID NO：79的32-259、32-258、32-257、32-256、32-255、32-254、32-253、32-252、32-251、31-259、31-258、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、31-252、31-251、30-259、30-258、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、29-259、29-258、29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、28-259、28-258、28-257、28-256、28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、27-259、27-258、27-257、27-256、27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、26-259、26-258、26-257、26-256、26-255、26-254、26-253、26-252、26-251、25-259、25-258、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、24-259、24-258、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251，或
SEQ ID NO：65的28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、26-240、26-239、26-238、26-237、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、25-240、25-239、25-238、25-237、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237、23-245、23-244、23-243、23-242、23-241、23-240、23-239、23-238、23-237、22-245、22-244、22-243、22-242、22-241、22-240、22-239、22-238、22-237、21-245、21-244、21-243、21-242、21-241、21-240、21-239、21-238、21-237、20-245、20-244、20-243、20-242、20-241、20-240、20-239、20-238、20-237，或
SEQ ID NO：66的28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、28-236、28-235、28-234、28-233、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、27-236、27-235、27-234、27-233、26-241、26-240、26-239、26-238、26-237、26-236、26-235、26-234、26-233、25-241、25-240、25-239、25-238、25-237、25-236、25-235、25-234、25-233、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237、24-236、24-235、24-234、24-233、23-241、23-240、23-239、23-238、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、22-241、22-240、22-239、22-238、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、21-241、21-240、21-239、21-238、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、20-241、20-240、20-239、20-238、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233，或
SEQ ID NO：67的28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、28-250、28-249、28-248、28-247、27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、27-250、27-249、27-248、27-247、26-255、26-254、26-253、26-252、26-251、26-250、26-249、26-248、26-247、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、25-250、25-249、25-248、25-247、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251、24-250、24-249、24-248、24-247、23-255、23-254、23-253、23-252、23-251、23-250、23-249、23-248、23-247、22-255、22-254、22-253、22-252、22-251、22-250、22-249、22-248、22-247、21-255、21-254、21-253、21-252、21-251、21-250、21-249、21-248、21-247、20-255、20-254、20-253、20-252、20-251、20-250、20-249、20-248、20-247。
其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：19的27-249、27-250、27-251、27-252、27-253、27-254、27-255、27-256、27-257、27-259、27-260、
28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255、28-256、28-257、28-259、28-260、
29-249、29-250、29-251、29-252、29-253、29-254、29-255、29-256、29-257、29-259、29-260、
30-249、30-250、30-251、30-252、30-253、30-254、30-255、30-256、30-257、30-259、30-260、
31-249、31-250、31-251、31-252、31-253、31-254、31-255、31-256、31-257、31-259、31-260、
32-249、32-250、32-251、32-252、32-253、32-254、32-255、32-256、32-257、32-259、32-260，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段：
SEQ ID NO：15的23-245、23-246、23-247、23-248、23-249、23-250、23-251、23-252、23-253、23-254、23-255、
24-245、24-246、24-247、24-248、24-249、24-250、24-251、24-252、24-253、24-254、24-255、
25-245、25-246、25-247、25-248、25-249、25-250、25-251、25-252、25-253、25-254、25-255、
26-245、26-246、26-247、26-248、26-249、26-250、26-251、26-252、26-253、26-254、26-255、
27-245、27-246、27-247、27-248、27-249、27-250、27-251、27-252、27-253、27-254、27-255、
28-245、28-246、28-247、28-248、28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：84或SEQ ID NO：85中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但不限于)：
SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66或SEQ ID NO：67中任一者的20-148、20-149、20-150、20-151、20-152、20-153、20-154、20-155、20-156、21-148、21-149、21-150、21-151、21-152、21-153、21-154、21-155、21-156、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、22-156、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、23-153、23-154、23-155、23-156、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、20-156、25-148、25-149、25-150、25-151、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、26-148、26-149、26-150、26-151、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、27-148、27-149、27-150、27-151、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、28-148、28-149、28-150、28-151、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156，或
SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78或SEQ ID NO：79中任一者的24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，
任选在N末端附接信号肽的1到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO：2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。
2.B7-H4多肽变异体
有用的变异体包括由本文所述任一分析法指示增加生物活性或者增加蛋白质半衰期或稳定性的变异体。B7-H4多肽和B7-H4片段，或其具有B7-H4活性的融合物可经过工程改造以增加生物活性。在一个优选实施例中，已经用至少一个增加分子与免疫细胞(例如T细胞)的结合并将抑制信号传输到T细胞中的氨基酸取代、缺失或插入来修饰B7-H4多肽或融合蛋白。
其它优选的变异体是工程改造成相对于其它免疫细胞选择性结合于一种类型的T细胞的B7-H4多肽。举例来说，B7-H4多肽可经过工程改造以优先结合于Treg、Th0、Th1、Th17或Th22细胞。优先结合是指与一种类型的细胞的结合比与另一种类型的细胞的结合高至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更高。
B7-H4的其它变异体可工程改造成与免疫细胞的结合低于野生型B7-H4。这些变异体可与具有较强结合性质的变异体组合使用，以适度的影响调节免疫应答。
最后，变异的B7-H4多肽可工程改造成具有比野生型长的半衰期。这些变异体通常经过修饰以抵抗酶降解作用。示范性修饰包括抵抗酶降解作用的经过修饰的氨基酸残基和经过修饰的肽键。此项技术中已知实现此目的的各种修饰。举例来说，B7-H4的近膜区包括二碱性基元KRRS，其可潜在地被例如蛋白酶的蛋白原转化酶家族成员识别并裂解。此基元(KRRS)可被去除以增加半衰期。这些变异体可经过修饰以调整在血清和内体pH下与受体的亲和力对B7-H4多肽、其片段或融合物的半衰期的影响。
B.第二多肽
B7-H4多肽可与第二多肽融合。第二多肽的存在可改变B7-H4融合多肽的溶解性、稳定性、亲和力和/或价态。本文中使用的“价态”是指每一分子可用的结合位点的数量。在一个实施例中，第二多肽是来自不同来源或不同蛋白质的多肽。
在一个实施例中，第二多肽含有免疫球蛋白重链恒定区的一个或一个以上结构域，优选具有对应于人类免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和CH3区或对应于鼠类免疫球蛋白Cγ2a链的铰链区、CH2区和CH3区的氨基酸序列。SEQ ID NO：88和89提供了人类免疫球蛋白Cγ1的铰链区、CH2区和CH3区的示范性序列。
在一种优选的二聚融合蛋白中，所述二聚体由两个Ig重链的铰链区中Cys残基共价键接产生，所述Cys残基是在二聚化正常Ig重链中以二硫键连接的相同Cys残基。所述蛋白质称为B7-H4-Ig。
在一个实施例中，免疫球蛋白恒定结构域可含有一个或一个以上增强B7-H4多肽、其融合蛋白或片段与特定细胞类型的结合、增加其生物利用率或增加其稳定性的氨基酸插入、缺失或取代。适合的氨基酸取代包括保守性和非保守性取代，如上文所述。
在另一实施例中，第二多肽可具有可使其它分子结合于B7-H4融合蛋白的连结结构域(conjugation domain)。在一个此类实施例中，连结的分子能够使融合蛋白靶向特定器官或组织。在另一此类实施例中，连结的分子是可增强或加强B7-H4融合蛋白的作用的另一免疫调节剂。在另一实施例中，连结的分子是聚乙二醇(Polyethylene Glycol，PEG)。
融合蛋白的Fc部分可随同种型或亚类而变化，可为嵌合或杂交的，和/或可经过修饰例如以改进效应功能、半衰期的控制、组织可接近性，加强生物物理特性(例如稳定性)并改进生产效率(且降低成本)。可用于构建所揭示的融合蛋白的许多修饰以及其制备方法是此项技术中已知的，参看例如穆勒(Mueller)等人，分子免疫学(Mol Immun.)，34(6)：441-452(1997)；许旺(Swann)等人，免疫学当代视点(Cur.Opin.Immun.)，20：493-499(2008)；和普雷斯塔(Presta)，免疫学当代视点，20：460-470(2008)。在一些实施例中，Fc区是原生IgG1、IgG2或IgG4Fc区。在一些实施例中，Fc区是杂交区，例如由IgG2/IgG4Fc恒定区组成的嵌合区。Fc区修饰包括(但不限于)经修饰以防止结合于Fcγ受体和补体的IgG4；经修饰以改进与一种或一种以上Fcγ受体的结合的IgG1；经修饰以使效应功能(氨基酸变化)最少的IgG1；具有改变的/无聚糖(通常通过改变表达宿主)的IgG1；以及具有改变的与FcRn的pH依赖性结合的IgG1。Fc区可包括完整铰链区，或不完整铰链区。
用利妥昔单抗(rituximab)(针对CD20的嵌合小鼠/人类IgG1单克隆抗体)治疗非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)或瓦尔登史特姆氏巨球蛋白血症(Waldenstrom′s macroglobulinemia)患者的治疗成果与个体对与人类IgG1的Fc结构域具有不同固有亲和力的Fcγ受体等位基因变异体的表达有关。具体说来，具有低亲和力活化Fc受体CD16A的高亲和力等位基因(FcγRIIIA)的患者显示出较高的应答率，并且在非霍奇金氏淋巴瘤的情况下显示出提高的无发展存活率。在另一实施例中，Fc结构域可含有一个或一个以上减少与低亲和力抑制性Fc受体CD32B(FcγRIIB)结合并保持与低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)结合的野生型水平或增进与低亲和力活化Fc受体CD16A(FcγRIIIA)结合的氨基酸插入、缺失或取代。
另一实施例包括与FcR的结合减少且半衰期增加的IgG2-4杂交物和IgG4突变体。代表性IG2-4杂交物和IgG4突变体描述于安格S.(Angal，S.)等人，分子免疫学(Molecular Immunology)，30(1)：105-108(1993)；穆勒J.(Mueller，J.)等人，分子免疫学，34(6)：441-452(1997)；以及颁予王(Wang)等人的美国专利第6,982,323号中。在一些实施例中，例如缺失IgG1和/或IgG2结构域，安格等人描述IgG1和IgG2的丝氨酸241被脯氨酸置换。
在一个优选实施例中，Fc结构域含有增强与CD16A的结合的氨基酸插入、缺失或取代。人类IgG1Fc结构域中增加与CD16A的结合并减少与CD32B的结合的大量取代是此项技术中已知的，并描述于斯塔文哈根(Stavenhagen)等人，癌症研究(Cancer Res.)，57(18)：8882-90(2007)中。与CD32B的结合减少和/或与CD16A的结合增加的示范性人类IgG1Fc结构域变异体含有F243L、R929P、Y300L、V305I或P296L取代。这些氨基酸取代可在人类IgG1Fc结构域中以任何组合形式存在。在一个实施例中，人类IgG1Fc结构域变异体含有F243L、R929P和Y300L取代。在另一实施例中，人类IgG1Fc结构域变异体含有F243L、R929P、Y300L、V305I和P296L取代。在另一实施例中，人类IgG1Fc结构域变异体含有N297Q取代，而此突变消除了FcR结合。
C.肽或多肽连接子结构域
所揭示的B7-H4融合蛋白任选含有使B7-H4多肽与第二多肽分离的肽或多肽连接子结构域。
1.抗体的铰链区
在一个实施例中，连接子结构域含有免疫球蛋白铰链区。在一个优选实施例中，铰链区源自于人类免疫球蛋白。可获得铰链的适合的人类免疫球蛋白包括IgG、IgD和IgA。在一个优选实施例中，铰链区源自于人类IgG。此项技术中众所周知免疫球蛋白铰链区和其它结构域的氨基酸序列。
在一个实施例中，B7-H4融合多肽含有由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核酸编码的人类免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和CH3区：
gagcctaagt catgtgacaa gacccatacg tgcccaccct gtcccgctcc agaactgctg    60
gggggaccta gcgttttctt gttcccccca aagcccaagg acaccctcat gatctcacgg    120
actcccgaag taacatgcgt agtagtcgac gtgagccacg aggatcctga agtgaagttt    180
aattggtacg tggacggagt cgaggtgcat aatgccaaaa ctaaacctcg ggaggagcag    240
tataacagta cctaccgcgt ggtatccgtc ttgacagtgc tccaccagga ctggctgaat    300
ggtaaggagt ataaatgcaa ggtcagcaac aaagctcttc ccgccccaat tgaaaagact    360
atcagcaagg ccaagggaca accccgcgag ccccaggttt acacccttcc accttcacga    420
gacgagctga ccaagaacca ggtgtctctg acttgtctgg tcaaaggttt ctatccttcc    480
gacatcgcag tggagtggga gtcaaacggg cagcctgaga ataactacaa gaccacaccc    540
ccagtgcttg atagcgatgg gagctttttc ctctacagta agctgactgt ggacaaatcc    600
cgctggcagc agggaaacgt tttctcttgt agcgtcatgc atgaggccct ccacaaccat    660
tatactcaga aaagcctgag tctgagtccc ggcaaa                              696
(SEQ ID NO：86)或
gacaagaccc atacgtgccc accctgtccc gctccagaac tgctgggggg acctagcgtt    60
ttcttgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctcatgatct cacggactcc cgaagtaaca    120
tgcgtagtag tcgacgtgag ccacgaggat cctgaagtga agtttaattg gtacgtggac    180
ggagtcgagg tgcataatgc caaaactaaa cctcgggagg agcagtataa cagtacctac    240
cgcgtggtat ccgtcttgac agtgctccac caggactggc tgaatggtaa ggagtataaa    300
tgcaaggtca gcaacaaagc tcttcccgcc ccaattgaaa agactatcag caaggccaag    360
ggacaacccc gcgagcccca ggtttacacc cttccacctt cacgagacga gctgaccaag    420
aaccaggtgt ctctgacttg tctggtcaaa ggtttctatc cttccgacat cgcagtggag    480
tgggagtcaa acgggcagcc tgagaataac tacaagacca cacccccagt gcttgatagc    540
gatgggagct ttttcctcta cagtaagctg actgtggaca aatcccgctg gcagcaggga    600
aacgttttct cttgtagcgt catgcatgag gccctccaca accattatac tcagaaaagc    660
ctgagtctga gtcccggcaa a                                              681
(SEQ ID NO：87)。
由SEQ ID NO：86编码的人类免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列：
EPKSCDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF    60
NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT    120
ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP    180
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK            232
(SEQ ID NO：88)。
由SEQ ID NO：87编码的人类免疫球蛋白Cγ1链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列：
DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD    60
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK    120
GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS    180
DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK                  227
(SEQ ID NO：89)。
铰链可进一步缩短成去除SEQ ID NO：89的氨基酸1、2、3、4、5或其组合。在一个实施例中，SEQ ID NO：89的氨基酸1和2缺失。
在另一实施例中，B7-H4融合多肽含有由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核酸编码的鼠类免疫球蛋白Cγ2a链的铰链区、CH2区和CH3区：
gagccaagag gtcctacgat caagccctgc ccgccttgta aatgcccagc tccaaatttg    60
ctgggtggac cgtcagtctt tatcttcccg ccaaagataa aggacgtctt gatgattagt    120
ctgagcccca tcgtgacatg cgttgtggtg gatgtttcag aggatgaccc cgacgtgcaa    180
atcagttggt tcgttaacaa cgtggaggtg cataccgctc aaacccagac ccacagagag    240
gattataaca gcaccctgcg ggtagtgtcc gccctgccga tccagcatca ggattggatg    300
agcgggaaag agttcaagtg taaggtaaac aacaaagatc tgccagcgcc gattgaacga    360
accattagca agccgaaagg gagcgtgcgc gcacctcagg tttacgtcct tcctccacca    420
gaagaggaga tgacgaaaaa gcaggtgacc ctgacatgca tggtaactga ctttatgcca    480
gaagatattt acgtggaatg gactaataac ggaaagacag agctcaatta caagaacact    540
gagcctgttc tggattctga tggcagctac tttatgtact ccaaattgag ggtcgagaag    600
aagaattggg tcgagagaaa cagttatagt tgctcagtgg tgcatgaggg cctccataat    660
catcacacca caaagtcctt cagccgaacg cccgggaaa                           699
(SEQ ID NO：90)
由SEQ ID NO：90编码的鼠类免疫球蛋白Cγ2a链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列：
EPRGPTIKPC PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCVVV DVSEDDPDVQ    60
ISWFVNNVEV HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER    120
TISKPKGSVR APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEWTNN GKTELNYKNT    180
EPVLDSDGSY FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSVVHEGLHN HHTTKSFSRT PGK           233
(SEQ ID NO：91)
在另一实施例中，连接子结构域含有如上文所述的免疫球蛋白铰链区，并且进一步包括一个或一个以上额外的免疫球蛋白结构域。
2.其它肽/多肽连接子结构域
其它适合的肽/多肽连接子结构域包括天然存在或非天然存在的肽或多肽。肽连接子序列为至少2个氨基酸长。优选肽或多肽结构域为柔性肽或多肽。“柔性连接子”在本文中是指含有两个或两个以上由肽键连接的氨基酸残基的肽或多肽，柔性连接子使两个以此方式连接的多肽的旋转自由度高于在柔性连接子不存在下两个连接的多肽的旋转自由度。此种旋转自由度使得由柔性连接子连接的两个或两个以上抗原结合位点各自更有效地接近目标抗原。示范性柔性肽/多肽包括(但不限于)氨基酸序列Gly-Ser、Gly-Ser-Gly-Ser(SEQ ID NO：92)、Ala-Ser、Gly-Gly-Gly-Ser(SEQ ID NO：93)、(Gly4-Ser)3(SEQ ID NO：94)和(Gly4-Ser)4(SEQ ID NO：95)。此项技术中众所周知其它的柔性肽/多肽序列。
D.二聚、多聚和靶向结构域
本文中揭示的融合蛋白任选含有用以使两种或两种以上融合蛋白二聚或多聚的二聚或多聚结构域。用以使融合蛋白二聚或多聚的结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽、第二多肽或肽/多肽连接子结构域)中的一者内。
1.二聚结构域
“二聚结构域”是由至少两个氨基酸残基或至少两个肽或多肽(其可具有相同或不同的氨基酸序列)缔合形成。所述肽或多肽彼此可通过共价和/或非共价缔合相互作用。优选二聚结构域含有至少一个半胱氨酸，其能够与搭配物融合蛋白上的半胱氨酸形成分子间二硫键。二聚结构域可含有一个或一个以上半胱氨酸残基，以致二硫键可形成于搭配物融合蛋白之间。在一个实施例中，二聚结构域含有1、2或3个到约10个半胱氨酸残基。在一个优选实施例中，二聚结构域是免疫球蛋白铰链区。
其它示范性二聚结构域可为此项技术中已知的任何结构域，并且包括(但不限于)卷曲螺旋、酸片(acid patch)、锌指、钙手(calciumhand)、CH1-CL对、与工程改造的“鼓起(knob)”和/或“突起(protruberance)”的“界面(interface)”(如美国专利第5,821,333号中所述)、亮氨酸拉链(例如来自jun和/或fos)(美国专利第5,932,448号)、SH2(src同系物2)、SH3(src同系物3)(韦德尔(Vidal)等人，生物化学(Biochemistry)，43，7336-44((2004))、磷酸酪氨酸结合(phosphotyrosine binding，PTB)(周(Zhou)等人，自然(Nature)，378：584-592(1995))、WW(苏朵(Sud01)，生物物理学与分子生物学进展(Prog.Biochys.Mol Bio.)，65：113-132(1996))、PDZ(金(Kim)等人，自然(Nature)，378：85-88(1995)；科曼(Komau)等人，科学(Science)，269：1737-1740(1995))14-3-3、WD40(胡(Hu)等人，生物化学杂志(J Biol Chem.)，273，33489-33494(1998))EH、Lim、异亮氨酸拉链、受体二聚体对(例如白细胞介素-8受体(IL-8R)；和整合素(integrin)杂二聚体，例如LFA-1和GPIIIb/IIIa)或其二聚区域、二聚配体多肽(例如神经生长因子(nerve growth factor，NGF)、神经营养因子-3(neurotrophin-3，NT-3)、白细胞介素-8(IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、VEGF-C、VEGF-D、PDGF成员和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor，BDNF)(阿卡瓦(Arakawa)等人，生物化学杂志，269(45)：27833-27839(1994)和雷德结瓦斯基(Radziejewski)等人，生物化学(Biochem.)，32(48)：1350(1993))，并且也可为这些结构域的亲和力改变的变异体。多肽对可借助此项技术中已知的方法(包括酵母双杂交筛选法)鉴别。酵母双杂交筛选法描述于美国专利第5,283,173号和第6,562,576号中。一对相互作用结构域之间的亲和力可使用此项技术中已知的方法确定，包括如片平(Katahira)等人，生物化学杂志，277，9242-9246(2002))中所述的方法。或者，可例如使用WO 01/00814中所述的方法，针对杂二聚化筛选肽序列文库。适用于蛋白质-蛋白质相互作用的方法也描述于美国专利第6,790,624号中。
2.多聚结构域
“多聚结构域”是使三个或三个以上肽或多肽彼此通过共价和/或非共价缔合相互作用的结构域。适合的多聚结构域包括(但不限于)卷曲螺旋结构域。卷曲螺旋是通常在组装(折叠)形成多聚螺旋束的7个氨基酸(七肽重复区)或11个氨基酸(十一肽重复区)的序列中具有主要疏水性残基间隔3和4个残基的邻近模式的肽序列。也涵盖序列包括具有3和4个残基间隔的一些不规则分布的卷曲螺旋。疏水性残基尤其是疏水性氨基酸Val、Ile、Leu、Met、Tyr、Phe和Trp。“主要疏水性”意指至少50％的残基必须选自所提到的疏水性氨基酸。
卷曲螺旋结构域可来源于层粘连蛋白(laminin)。在细胞外空间中，杂三聚的卷曲螺旋蛋白层粘连蛋白在基底膜形成中起到重要作用。很明显，多官能寡聚结构是层粘连蛋白的功能所必需的。卷曲螺旋结构域也可来源于三个(TSP-1和TSP-2)或五个(TSP-3、TSP-4和TSP-5)链连接的凝血栓蛋白(thrombospondin)，或来源于COMP(COMPcc)(郭(Guo)等人，欧洲分子生物学学会会刊(EMBO J.)，1998，17：5265-5272)，其折叠成平行的五条链的卷曲螺旋(马拉斯科维奇(Malashkevich)等人，科学(Science)，274：761-765(1996))。
来源于其它蛋白质的其它卷曲螺旋结构域以及介导多肽多聚作用的其它结构域是此项技术中已知的，并且适用于所揭示的融合蛋白。
在另一实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可经过诱导以结合于第二多价多肽(例如抗体)形成多聚体。适用于使B7-H4多肽、其融合蛋白或片段多聚的抗体包括(但不限于)IgM抗体和交联的多价IgG、IgA、IgD或IgE复合物。
3.靶向结构域
B7-H4多肽和融合蛋白可含有靶向结构域以使分子靶向体内特定部位。优选的靶向结构域使分子靶向炎症区域。示范性靶向结构域是对发炎组织或包括(但不限于)IL 17、IL-4、IL-6、IL-12、IL-21、IL-22和IL-23的促炎性细胞因子具有特异性的抗体或其抗原结合片段。在例如多发性硬化等神经病症的情况下，靶向结构域可使分子靶向CNS，或可结合于血管上皮上的VCAM-1。其它靶向结构域可为对促炎性分子具有特异性的肽适体。在其它实施例中，B7-H4融合蛋白可包括对例如T细胞等免疫细胞表面上呈现的多肽具有特异性的结合搭配物。在其它实施例中，靶向结构域特异性靶向活化的免疫细胞。优选作为目标的免疫细胞包括Th0、Th1、Th17和Th22T细胞；分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21以及MMP和Treg的发炎性分子的其它细胞。举例来说，针对Treg的靶向结构域可特异性结合CD25。
在另一实施例中，B7-H4多肽、其片段或融合物可含有靶向结构域以使分子靶向所移植的器官或组织。举例来说，靶向结构域可为抗体、其抗原结合片段或对所移植的器官或组织的类型具有特异性的细胞的表面上呈现的多肽的另一特异性结合搭配物。
E.示范性融合蛋白
代表性鼠类B7-H4融合蛋白是由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核酸编码：
atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcat catcctggct    60
ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcat cacggtcacg    120
accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc    240
cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc    300
acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg    360
cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaagg caaagggaat    420
gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgt ggactataat    480
gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc    540
tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacac cagctttgag    600
ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccgggga catcaaagtg    720
acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctgg ggagccaaga    780
ggtcctacga tcaagccctg cccgccttgt aaatgcccag ctccaaattt gctgggtgga    840
ccgtcagtct ttatcttccc gccaaagata aaggacgtct tgatgattag tctgagcccc    900
atcgtgacat gcgttgtggt ggatgtttca gaggatgacc ccgacgtgca aatcagttgg    960
ttcgttaaca acgtggaggt gcataccgct caaacccaga cccacagaga ggattataac    1020
agcaccctgc gggtagtgtc cgccctgccg atccagcatc aggattggat gagcgggaaa    1080
gagttcaagt gtaaggtaaa caacaaagat ctgccagcgc cgattgaacg aaccattagc    1140
aagccgaaag ggagcgtgcg cgcacctcag gtttacgtcc ttcctccacc agaagaggag    1200
atgacgaaaa agcaggtgac cctgacatgc atggtaactg actttatgcc agaagatatt    1260
tacgtggaat ggactaataa cggaaagaca gagctcaatt acaagaacac tgagcctgtt    1320
ctggattctg atggcagcta ctttatgtac tccaaattga gggtcgagaa gaagaattgg    1380
gtcgagagaa acagttatag ttgctcagtg gtgcatgagg gcctccataa tcatcacacc    1440
acaaagtcct tcagccgaac gcccgggaaa                                     1470
(SEQ ID NO：96)、
atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgt ccattcagga    60
ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgc ggggaacatt    120
ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaa tggaatagta    180
attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaagga ggggaaagac    240
gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt    300
gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac    360
acatgctata tccggtcctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagta caaaacaggc    420
gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc    480
gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggt ggatcaaggc    540
gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaa tgtgacaatg    600
aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctg tatgatagaa    660
aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagt gaaaaggagg    720
agtcaactgc aactcttgaa tagcggcgag ccaagaggtc ctacgatcaa gccctgcccg    780
ccttgtaaat gcccagctcc aaatttgctg ggtggaccgt cagtctttat cttcccgcca    840
aagataaagg acgtcttgat gattagtctg agccccatcg tgacatgcgt tgtggtggat    900
gtttcagagg atgaccccga cgtgcaaatc agttggttcg ttaacaacgt ggaggtgcat    960
accgctcaaa cccagaccca cagagaggat tataacagca ccctgcgggt agtgtccgcc    1020
ctgccgatcc agcatcagga ttggatgagc gggaaagagt tcaagtgtaa ggtaaacaac    1080
aaagatctgc cagcgccgat tgaacgaacc attagcaagc cgaaagggag cgtgcgcgca    1140
cctcaggttt acgtccttcc tccaccagaa gaggagatga cgaaaaagca ggtgaccctg    1200
acatgcatgg taactgactt tatgccagaa gatatttacg tggaatggac taataacgga    1260
aagacagagc tcaattacaa gaacactgag cctgttctgg attctgatgg cagctacttt    1320
atgtactcca aattgagggt cgagaagaag aattgggtcg agagaaacag ttatagttgc    1380
tcagtggtgc atgagggcct ccataatcat cacaccacaa agtccttcag ccgaacgccc    1440
gggaaa                                                               1446
(SEQ ID NO：97)或
atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgt ccattcagga    60
ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgc ggggaacatt    120
ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaa tggaatagta    180
attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaagga ggggaaagac    240
gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt    300
gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac    360
acatgctata tccggacctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagta caaaacaggc    420
gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc    480
gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggt ggatcaaggc    540
gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaa tgtgacaatg    600
aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctg tatgatagaa    660
aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagt gaaaaggagg    720
agtcaactgc aactcttgaa tagcggcgag ccaagaggtc ctacgatcaa gccctgcccg    780
ccttgtaaat gcccagctcc aaatttgctg ggtggaccgt cagtctttat cttcccgcca    840
aagataaagg acgtcttgat gattagtctg agccccatcg tgacatgcgt tgtggtggat    900
gtttcagagg atgaccccga cgtgcaaatc agttggttcg ttaacaacgt ggaggtgcat    960
accgctcaaa cccagaccca cagagaggat tataacagca ccctgcgggt agtgtccgcc    1020
ctgccgatcc agcatcagga ttggatgagc gggaaagagt tcaagtgtaa ggtaaacaac    1080
aaagatctgc cagcgccgat tgaacgaacc attagcaagc cgaaagggag cgtgcgcgca    1140
cctcaggttt acgtccttcc tccaccagaa gaggagatga cgaaaaagca ggtgaccctg    1200
acatgcatgg taactgactt tatgccagaa gatatttacg tggaatggac taataacgga    1260
aagacagagc tcaattacaa gaacactgag cctgttctgg attctgatgg cagctacttt    1320
atgtactcca aattgagggt cgagaagaag aattgggtcg agagaaacag ttatagttgc    1380
tcagtggtgc atgagggcct ccataatcat cacaccacaa agtccttcag ccgaacgccc    1440
gggaaa                                                               1446
(SEQ ID NO：98)
在另一实施例中，代表性鼠类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSGEPR GPTIKPCPPC KCPAPNLLGG PSVFIFPPKI KDVLMISLSP    300
IVTCVVVDVS EDDPDVQISW FVNNVEVHTA QTQTHREDYN STLRVVSALP IQHQDWMSGK    360
EFKCKVNNKD LPAPIERTIS KPKGSVRAPQ VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MVTDFMPEDI    420
YVEWTNNGKT ELNYKNTEPV LDSDGSYFMY SKLRVEKKNW VERNSYSCSV VHEGLHNHHT    480
TKSFSRTPGK                                                           490
(SEQ ID NO：99)、
MASLGQIIFW SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP    60
DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQVVV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TDSEVKRRSQ LQLLNSGEPR GPTIKPCPPC KCPAPNLLGG PSVFIFPPKI KDVLMISLSP    300
IVTCVVVDVS EDDPDVQISW FVNNVEVHTA QTQTHREDYN STLRVVSALP IQHQDWMSGK    360
EFKCKVNNKD LPAPIERTIS KPKGSVRAPQ VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MVTDFMPEDI    420
YVEWTNNGKT ELNYKNTEPV LDSDGSYFMY SKLRVEKKNW VERNSYSCSV VHEGLHNHHT    480
TKSFSRTPGK                                                           490
(SEQ ID NO：100)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSGE PRGPTIKPCP PCKCPAPNLL GGPSVFIFPP KIKDVLMISL SPIVTCVVVD    300
VSEDDPDVQI SWFVNNVEVH TAQTQTHRED YNSTLRVVSA LPIQHQDWMS GKEFKCKVNN    360
KDLPAPIERT ISKPKGSVRA PQVYVLPPPE EEMTKKQVTL TCMVTDFMPE DIYVEWTNNG    420
KTELNYKNTE PVLDSDGSYF MYSKLRVEKK NWVERNSYSC SVVHEGLHNH HTTKSFSRTP    480
GK                                                                   482
(SEQ ID NO：101)或
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV    60
IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
TCYIRTSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR    240
SQLQLLNSGE PRGPTIKPCP PCKCPAPNLL GGPSVFIFPP KIKDVLMISL SPIVTCVVVD    300
VSEDDPDVQI SWFVNNVEVH TAQTQTHRED YNSTLRVVSA LPIQHQDWMS GKEFKCKVNN    360
KDLPAPIERT ISKPKGSVRA PQVYVLPPPE EEMTKKQVTL TCMVTDFMPE DIYVEWTNNG    420
KTELNYKNTE PVLDSDGSYF MYSKLRVEKK NWVERNSYSC SVVHEGLHNH HTTKSFSRTP    480
GK                                                                   482
(SEQ ID NO：102)。
不含信号序列的鼠类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：99和SEQ IDNO：101的氨基酸序列为：
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG EPRGPTIKPC    240
PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCVVV DVSEDDPDVQ ISWFVNNVEV    300
HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER TISKPKGSVR    360
APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEWTNN GKTELNYKNT EPVLDSDGSY    420
FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSVVHEGLHN HHTTKSFSRT PGK                      463
(SEQ ID NO：103)。
不含信号序列的鼠类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：100和SEQ IDNO：102的氨基酸序列为：
GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK    60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ VVVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG EPRGPTIKPC    240
PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCVVV DVSEDDPDVQ ISWFVNNVEV    300
HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER TISKPKGSVR    360
APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEWTNN GKTELNYKNT EPVLDSDGSY    420
FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSVVHEGLHN HHTTKSFSRT PGK                      463
(SEQ ID NO：104)。
代表性人类B7-H4融合蛋白是由与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性的核酸编码：
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct    60
ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact    120
actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct    180
gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc    240
catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg    300
acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg    360
caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat    420
gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat    480
gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc    540
tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag    600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac    660
aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg    720
acagaatcgg agatcaaaag gcggagtgag cctaagtcat gtgacaagac ccatacgtgc    780
ccaccctgtc ccgctccaga actgctgggg ggacctagcg ttttcttgtt ccccccaaag    840
cccaaggaca ccctcatgat ctcacggact cccgaagtaa catgcgtagt agtcgacgtg    900
agccacgagg atcctgaagt gaagtttaat tggtacgtgg acggagtcga ggtgcataat    960
gccaaaacta aacctcggga ggagcagtat aacagtacct accgcgtggt atccgtcttg    1020
acagtgctcc accaggactg gctgaatggt aaggagtata aatgcaaggt cagcaacaaa    1080
gctcttcccg ccccaattga aaagactatc agcaaggcca agggacaacc ccgcgagccc    1140
caggtttaca cccttccacc ttcacgagac gagctgacca agaaccaggt gtctctgact    1200
tgtctggtca aaggtttcta tccttccgac atcgcagtgg agtgggagtc aaacgggcag    1260
cctgagaata actacaagac cacaccccca gtgcttgata gcgatgggag ctttttcctc    1320
tacagtaagc tgactgtgga caaatcccg ctggcagcagg gaaacgtttt ctcttgtagc    1380
gtcatgcatg aggccctcca caaccattat actcagaaaa gcctgagtct gagtcccggc    1440
aaa                                                                  1443
(SEQ ID NO：105)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctgagccta agtcatgtga caagacccat acgtgcccac cctgtcccgc tccagaactg    780
ctggggggac ctagcgtttt cttgttcccc ccaaagccca aggacaccct catgatctca    840
cggactcccg aagtaacatg cgtagtagtc gacgtgagcc acgaggatcc tgaagtgaag    900
tttaattggt acgtggacgg agtcgaggtg cataatgcca aaactaaacc tcgggaggag    960
cagtataaca gtacctaccg cgtggtatcc gtcttgacag tgctccacca ggactggctg    1020
aatggtaagg agtataaatg caaggtcagc aacaaagctc ttcccgcccc aattgaaaag    1080
actatcagca aggccaaggg acaaccccgc gagccccagg tttacaccct tccaccttca    1140
cgagacgagc tgaccaagaa ccaggtgtct ctgacttgtc tggtcaaagg tttctatcct    1200
tccgacatcg cagtggagtg ggagtcaaac gggcagcctg agaataacta caagaccaca    1260
cccccagtgc ttgatagcga tgggagcttt ttcctctaca gtaagctgac tgtggacaaa    1320
tcccgctggc agcagggaaa cgttttctct tgtagcgtca tgcatgaggc cctccacaac    1380
cattatactc agaaaagcct gagtctgagt cccggcaaa                           1419
(SEQ ID NO：106)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctgacaaga cccatacgtg cccaccctgt cccgctccag aactgctggg gggacctagc    780
gttttcttgt tccccccaaa gcccaaggac accctcatga tctcacggac tcccgaagta    840
acatgcgtag tagtcgacgt gagccacgag gatcctgaag tgaagtttaa ttggtacgtg    900
gacggagtcg aggtgcataa tgccaaaact aaacctcggg aggagcagta taacagtacc    960
taccgcgtgg tatccgtctt gacagtgctc caccaggact ggctgaatgg taaggagtat    1020
aaatgcaagg tcagcaacaa agctcttccc gccccaattg aaaagactat cagcaaggcc    1080
aagggacaac cccgcgagcc ccaggtttac acccttccac cttcacgaga cgagctgacc    1140
aagaaccagg tgtctctgac ttgtctggtc aaaggtttct atccttccga catcgcagtg    1200
gagtgggagt caaacgggca gcctgagaat aactacaaga ccacaccccc agtgcttgat    1260
agcgatggga gctttttcct ctacagtaag ctgactgtgg acaaatcccg ctggcagcag    1320
ggaaacgttt tctcttgtag cgtcatgcat gaggccctcc acaaccatta tactcagaaa    1380
agcctgagtc tgagtcccgg caaa                                           1404
(SEQ ID NO：107)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat cgacaagacc    720
catacgtgcc caccctgtcc cgctccagaa ctgctggggg gacctagcgt tttcttgttc    780
cccccaaagc ccaaggacac cctcatgatc tcacggactc ccgaagtaac atgcgtagta    840
gtcgacgtga gccacgagga tcctgaagtg aagtttaatt ggtacgtgga cggagtcgag    900
gtgcataatg ccaaaactaa acctcgggag gagcagtata acagtaccta ccgcgtggta    960
tccgtcttga cagtgctcca ccaggactgg ctgaatggta aggagtataa atgcaaggtc    1020
agcaacaaag ctcttcccgc cccaattgaa aagactatca gcaaggccaa gggacaaccc    1080
cgcgagcccc aggtttacac ccttccacct tcacgagacg agctgaccaa gaaccaggtg    1140
tctctgactt gtctggtcaa aggtttctat ccttccgaca tcgcagtgga gtgggagtca    1200
aacgggcagc ctgagaataa ctacaagacc acacccccag tgcttgatag cgatgggagc    1260
tttttcctct acagtaagct gactgtggac aaatcccgct ggcagcaggg aaacgttttc    1320
tcttgtagcg tcatgcatga ggccctccac aaccattata ctcagaaaag cctgagtctg    1380
agtcccggca aa                                                        1392
(SEQ ID NO：108)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctcacctgc agctgctgaa ctccaaggac aagacccata cgtgcccacc ctgtcccgct    780
ccagaactgc tggggggacc tagcgttttc ttgttccccc caaagcccaa ggacaccctc    840
atgatctcac ggactcccga agtaacatgc gtagtagtcg acgtgagcca cgaggatcct    900
gaagtgaagt ttaattggta cgtggacgga gtcgaggtgc ataatgccaa aactaaacct    960
cgggaggagc agtataacag tacctaccgc gtggtatccg tcttgacagt gctccaccag    1020
gactggctga atggtaagga gtataaatgc aaggtcagca acaaagctct tcccgcccca    1080
attgaaaaga ctatcagcaa ggccaaggga caaccccgcg agccccaggt ttacaccctt    1140
ccaccttcac gagacgagct gaccaagaac caggtgtctc tgacttgtct ggtcaaaggt    1200
ttctatcctt ccgacatcgc agtggagtgg gagtcaaacg ggcagcctga gaataactac    1260
aagaccacac ccccagtgct tgatagcgat gggagctttt tcctctacag taagctgact    1320
gtggacaaat cccgctggca gcagggaaac gttttctctt gtagcgtcat gcatgaggcc    1380
ctccacaacc attatactca gaaaagcctg agtctgagtc ccggcaaa                 1428
(SEQ ID NO：109)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctgagccta agtcatgtga caagacccat acgtgcccac cctgtcccgc tccagaactg    780
ctggggggac ctagcgtttt cttgttcccc ccaaagccca aggacaccct catgatctca    840
cggactcccg aagtaacatg cgtagtagtc gacgtgagcc acgaggatcc tgaagtgaag    900
tttaattggt acgtggacgg agtcgaggtg cataatgcca aaactaaacc tcgggaggag    960
cagtataaca gtacctaccg cgtggtatcc gtcttgacag tgctccacca ggactggctg    1020
aatggtaagg agtataaatg caaggtcagc aacaaagctc ttcccgcccc aattgaaaag    1080
actatcagca aggccaaggg acaaccccgc gagccccagg tttacaccct tccaccttca    1140
cgagacgagc tgaccaagaa ccaggtgtct ctgacttgtc tggtcaaagg tttctatcct    1200
tccgacatcg cagtggagtg ggagtcaaac gggcagcctg agaataacta caagaccaca    1260
cccccagtgc ttgatagcga tgggagcttt ttcctctaca gtaagctgac tgtggacaaa    1320
tcccgctggc agcagggaaa cgttttctct tgtagcgtca tgcatgaggc cctccacaac    1380
cattatactc agaaaagcct gagtctgagt cccggcaaa                           1419
(SEQ ID NO：110)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctgacaaga cccatacgtg cccaccctgt cccgctccag aactgctggg gggacctagc    780
gttttcttgt tccccccaaa gcccaaggac accctcatga tctcacggac tcccgaagta    840
acatgcgtag tagtcgacgt gagccacgag gatcctgaag tgaagtttaa ttggtacgtg    900
gacggagtcg aggtgcataa tgccaaaact aaacctcggg aggagcagta taacagtacc    960
taccgcgtgg tatccgtctt gacagtgctc caccaggact ggctgaatgg taaggagtat    1020
aaatgcaagg tcagcaacaa agctcttccc gccccaattg aaaagactat cagcaaggcc    1080
aagggacaac cccgcgagcc ccaggtttac acccttccac cttcacgaga cgagctgacc    1140
aagaaccagg tgtctctgac ttgtctggtc aaaggtttct atccttccga catcgcagtg    1200
gagtgggagt caaacgggca gcctgagaat aactacaaga ccacaccccc agtgcttgat    1260
agcgatggga gctttttcct ctacagtaag ctgactgtgg acaaatcccg ctggcagcag    1320
ggaaacgttt tctcttgtag cgtcatgcat gaggccctcc acaaccatta tactcagaaa    1380
agcctgagtc tgagtcccgg caaa                                           1404
(SEQ ID NO：111)、
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat cgacaagacc    720
catacgtgcc caccctgtcc cgctccagaa ctgctggggg gacctagcgt tttcttgttc    780
cccccaaagc ccaaggacac cctcatgatc tcacggactc ccgaagtaac atgcgtagta    840
gtcgacgtga gccacgagga tcctgaagtg aagtttaatt ggtacgtgga cggagtcgag    900
gtgcataatg ccaaaactaa acctcgggag gagcagtata acagtaccta ccgcgtggta    960
tccgtcttga cagtgctcca ccaggactgg ctgaatggta aggagtataa atgcaaggtc    1020
agcaacaaag ctcttcccgc cccaattgaa aagactatca gcaaggccaa gggacaaccc    1080
cgcgagcccc aggtttacac ccttccacct tcacgagacg agctgaccaa gaaccaggtg    1140
tctctgactt gtctggtcaa aggtttctat ccttccgaca tcgcagtgga gtgggagtca    1200
aacgggcagc ctgagaataa ctacaagacc acacccccag tgcttgatag cgatgggagc    1260
tttttcctct acagtaagct gactgtggac aaatcccgct ggcagcaggg aaacgttttc    1320
tcttgtagcg tcatgcatga ggccctccac aaccattata ctcagaaaag cctgagtctg    1380
agtcccggca aa                                                        1392
(SEQ ID NO：112)或
atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc    60
ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata    120
ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg    180
atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat    240
gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta    300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat    360
aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc    420
gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt    480
gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg    540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg    600
aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa    660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg    720
tctcacctgc agctgctgaa ctccaaggac aagacccata cgtgcccacc ctgtcccgct    780
ccagaactgc tggggggacc tagcgttttc ttgttccccc caaagcccaa ggacaccctc    840
atgatctcac ggactcccga agtaacatgc gtagtagtcg acgtgagcca cgaggatcct    900
gaagtgaagt ttaattggta cgtggacgga gtcgaggtgc ataatgccaa aactaaacct    960
cgggaggagc agtataacag tacctaccgc gtggtatccg tcttgacagt gctccaccag    1020
gactggctga atggtaagga gtataaatgc aaggtcagca acaaagctct tcccgcccca    1080
attgaaaaga ctatcagcaa ggccaaggga caaccccgcg agccccaggt ttacaccctt    1140
ccaccttcac gagacgagct gaccaagaac caggtgtctc tgacttgtct ggtcaaaggt    1200
ttctatcctt ccgacatcgc agtggagtgg gagtcaaacg ggcagcctga gaataactac    1260
aagaccacac ccccagtgct tgatagcgat gggagctttt tcctctacag taagctgact    1320
gtggacaaat cccgctggca gcagggaaac gttttctctt gtagcgtcat gcatgaggcc    1380
ctccacaacc attatactca gaaaagcctg agtctgagtc ccggcaaa                 1428
(SEQ ID NO：113)。
在另一实施例中，代表性人类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSE PKSCDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV    300
SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK    360
ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRD ELTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ    420
PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG    480
K                                                                    481
(SEQ ID NO：114)。
在另一实施例中，代表性人类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％序列一致性：
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP    300
EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP    360
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY    420
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK        476
(SEQ ID NO：115)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF    300
NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT    360
ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP    420
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK            472
(SEQ ID NO：116)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV    300
VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV    360
SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES    420
NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL    480
SPGK                                                                 484
(SEQ ID NO：117)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSE PKSCDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV    300
SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK    360
ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRD ELTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ    420
PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG    480
K                                                                    481
(SEQ ID NO：118)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP    300
EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP    360
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY    420
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK        476
(SEQ ID NO：119)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF    300
NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT    360
ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP    420
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK            472
(SEQ ID NO：120)、
MASLGQILFW SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP    60
DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV    120
QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTVV    180
WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV    240
TESEIKRRSH LQLLNSKDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV    300
VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV    360
SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES    420
NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL    480
SPGK                                                                 484
(SEQ ID NO：121)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK    300
FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK    360
TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT    420
PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK           473
(SEQ ID NO：122)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV    300
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA    360
KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD    420
SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK                 468
(SEQ ID NO：123)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIDKT    240
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKFKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE    300
VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP    360
REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS    420
FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK                     464
(SEQ ID NO：124)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SHLQLLNSKD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP    300
EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP    360
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY    420
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK        476
(SEQ ID NO：125)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCVVV DVSHEDPEVK    300
FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK    360
TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT    420
PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK           473
(SEQ ID NO：126)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SDKTHTCPPC PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV    300
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA    360
KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD    420
SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQK SLSLSPGK                  468
(SEQ ID NO：127)、
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIDKT    240
HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE    300
VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP    360
REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS    420
FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK                     464
(SEQ ID NO：128)或
MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV    60
IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY    120
KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT VVWASQVDQG    180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR    240
SHLQLLNSKD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP    300
EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP    360
IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY    420
KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK        476
(SEQ ID NO：129)。
不含信号序列的人类
B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：114和SEQ ID NO：122的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSEPKSCDKT HTCPPCPAPE    240
LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE    300
EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP    360
SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD    420
KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK                                454
(SEQ ID NO：130)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：115和SEQ IDNO：123的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSDKTHTCPP CPAPELLGGP    240
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS    300
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL    360
TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ    420
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLS PGK                                     449
(SEQ ID NO：131)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：116和SEQ IDNO：124的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL    240
FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV    300
VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ    360
VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV    420
FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LS PGK                                         445
(SEQ ID NO：132)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：117和SEQ IDNO：125的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK DKTHTCPPCP    240
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK    300
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT    360
LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL    420
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK                             457
(SEQ ID NO：133)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：118和SEQ IDNO：126的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSEPKSCDKT HTCPPCPAPE    240
LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE    300
EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP    360
SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD    420
KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK                                454
(SEQ ID NO：134)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：119和SEQ IDNO：127的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSDKTHTCPP CPAPELLGGP    240
SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS    300
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL    360
TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ    420
QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK                                      449
(SEQ ID NO：135)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：120和SEQ IDNO：128的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL    240
FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV    300
VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ    360
VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV    420
FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK                                          445
(SEQ ID NO：136)。
不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO：121和SEQ IDNO：129的氨基酸序列为：
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK    60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT    120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT    180
MKVVSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK DKTHTCPPCP    240
APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK    300
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT    360
LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL    420
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK                             457
(SEQ ID NO：137)。
上述示范性融合蛋白可并入本文所述变异体的任何组合。在另一实施例中，上述示范性融合蛋白的末端赖氨酸缺失。
所揭示的融合蛋白可使用标准分子生物学技术分离。举例来说，将含有编码B7-H4-Ig融合蛋白的DNA序列的表达载体通过磷酸钙沉淀转染到293细胞中并在无血清DMEM中培养。72小时时收集上清液并通过蛋白质G或优选蛋白质A
Figure BDA0000158178250000671
柱(法玛西亚公司(Pharmacia)，位于瑞典乌普萨拉(Uppsala，Sweden))纯化融合蛋白。
F.融合蛋白二聚体和多聚体
B7-H4融合多肽可发生二聚或多聚。二聚或多聚反应可通过二聚或多聚结构域(包括上文所述者)在两种或两种以上融合蛋白之间发生。或者，融合蛋白的二聚或多聚反应可通过化学交联发生。融合蛋白二聚体可为均二聚体或杂二聚体。融合蛋白多聚体可为均多聚体或杂多聚体。
本文揭示的融合蛋白二聚体具有式II：
N-R1-R2-R3-C
N-R4-R5-R6-C
或者具有式III：
N-R1-R2-R3-C
C-R4-R5-R6-N
其中由式II提供的二聚体的融合蛋白是以平行定向定义，且由式III提供的二聚体的融合蛋白是以反平行定向定义。平行和反平行二聚体又分别称为顺式和反式二聚体。“N”和“C”分别表示融合蛋白的N末端和C末端。融合蛋白成分“RI”、“R2”和“R3”如上文关于式I所定义。对于式II和式III，“R4”是B7-H4多肽或第二多肽，“R5”是任选存在的肽/多肽连接子结构域，且“R6”是B7-H4多肽或第二多肽，其中当“R4”是第二多肽时，“R6”是B7-H4多肽，且当“R4”是B7-H4多肽时，“R6”是第二多肽。在一个实施例中，“R1”是B7-H4多肽，“R4”也是B7-H4多肽，且“R3”和“R6”都是第二多肽。
当“R1”＝“R4”、“R2”＝“R5”且“R3”＝“R6”时，式II的融合蛋白二聚体定义为均二聚体。类似地，当“R1”＝“R6”、“R2”＝“R5”且“R3”＝“R4”时，式III的融合蛋白二聚体定义为均二聚体。当这些条件出于任何原因而未得到满足时，融合蛋白二聚体定义为杂二聚体。举例来说，杂二聚体可含有满足这些条件(即，对于根据式II的二聚体，“R1”和“R4”都为B7-H4多肽，“R2”和“R5”都为肽/多肽连接子结构域，且“R3”和“R6”都为第二多肽)的结构域定向，但这些结构域中一者或一者以上的种类不同。举例来说，尽管“R3”和“R6”可都为B7-H4多肽，但一个多肽可含有野生型B7-H4氨基酸序列，而另一多肽可为变异的B7-H4多肽。示范性变异B7-H4多肽是经过修饰而与目标细胞的结合增加或减少、对免疫细胞的活性增加、半衰期或稳定性增加或降低的B7-H4多肽。含有免疫球蛋白CH1或CL区作为多肽连接子结构域一部分的融合蛋白二聚体优选形成杂二聚体，其中二聚体的一个融合蛋白含有CH1区且二聚体的另一融合蛋白含有CL区。
融合蛋白也可用于形成多聚体。与二聚体一样，多聚体可为平行多聚体，其中多聚体的所有融合蛋白都关于其N末端和C末端呈相同定向排列。多聚体可为反平行多聚体，其中多聚体的融合蛋白另外关于其N末端和C末端呈相反定向排列。多聚体(平行或反平行)可为均多聚体或杂多聚体。
G.肽和多肽修饰
融合蛋白可利用可存在于处于正常细胞环境中的多肽中的化学部分来修饰，例如磷酸化、甲基化、酰胺化、硫酸化、酰化、糖基化、小泛素样因子修饰(sumoylation)和泛素化。融合蛋白也可用能够直接或间接提供可检测信号的标记修饰，所述标记包括(但不限于)放射性同位素和荧光化合物。
融合蛋白也可用通常未添加到处于细胞环境的多肽中的化学部分来修饰。举例来说，所揭示的融合蛋白也可通过共价附接聚合物链，包括(但不限于)聚乙二醇聚合物(PEG)链(即聚乙二醇化)来修饰。近来，将大分子连结到PEG已经成为改变多种药物的药物动力学(PK)曲线并由此改进其治疗潜力的有效策略。PEG连结通过防止酶促降解，减慢肾过滤以及减少中和抗体的产生来增加药物在循环中的滞留时间。此外，PEG连结物还可用于使融合蛋白发生多聚作用。
可通过使多肽的靶向氨基酸残基与能够与所选侧链或末端残基反应的有机衍生化剂反应来将修饰引入分子中。另一修饰是蛋白质的环化。
多肽的化学衍生物的实例包括用琥珀酸酐或其它羧酸酐衍生化的赖氨酰基和氨基末端残基。用环状羧酸酐衍生化具有逆转赖氨酰基残基的电荷的作用。其它适用于衍生化含氨基残基的试剂包括酰亚胺基酯，例如甲基吡啶亚胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯氢硼化物；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2，4戊二酮；和转氨酶催化的与乙醛酸的反应。羧基侧基、天冬氨酰基或谷氨酰基可通过与碳化二亚胺(R-N＝C＝N-R′)，例如1-环己基-3-(2-吗啉基-(4-乙基)碳化二亚胺或1-乙基-3-(4-氮阳离子-4，4-二甲基戊基)碳化二亚胺反应来选择性修饰。此外，天冬氨酰基和谷氨酰基残基可通过与氨反应而转化成天冬酰胺酰基和谷氨酰胺酰基残基。融合蛋白也可包括一个或一个以上可取代一个或一个以上L-氨基酸的D-氨基酸。
H.改变的结合性质
B7-H4多肽、其片段和融合物(统称为B7-H4多肽)的结合性质与待投予的剂量和剂量方案有关。在一个实施例中，所揭示的B7-H4多肽具有结合T细胞上至少一种受体的结合性质，对免疫细胞上的受体分子展现出比受体分子的其它配体更高级或更高百分比的占有率。在其它实施例中，所揭示的B7-H4多肽与T细胞上受体的结合亲和力低于野生型B7-H4，使蛋白质在投药后不到3个月、2个月、1个月、3周、2周、1周或数天的时间里解离。
在一些实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物对其受体具有相对较高的亲和力，并且因此可具有相对较慢的解离速率。在其它实施例中，B7-H4多肽经数天、数周或数月时间间歇性投予以阻止免疫应答，此举允许在下一次投药前恢复免疫应答，可用于减少免疫应答，而不是完全切断免疫应答，并且可避免长期副作用。
III.分离的核酸分子
本文中揭示编码B7-H4多肽、其片段和融合物的分离的核酸序列。本文中使用的“分离的核酸”是指与哺乳动物基因组中存在的其它核酸分子分离的核酸，所述其它核酸分子包括通常在哺乳动物基因组中侧接所述核酸的一侧或两侧的核酸(例如编码非B7-H4蛋白的核酸)。本文中使用的关于核酸的术语“分离的”也包括与任何非天然存在的核酸序列的组合，因为这些非天然存在的序列未在自然界中发现，并且在天然存在的基因组中不具有直接邻近的序列。
分离的核酸可为例如DNA分子，条件是在天然存在的基因组中通常发现的直接侧接所述DNA分子的一个核酸序列被去除或不存在。因此，分离的核酸包括(不限于)以单独分子形式存在且无其它序列的DNA分子(例如化学合成的核酸，或者由PCR或限制性内切核酸酶处理产生的cDNA或基因组DNA片段)，以及并入载体、自主复制的质粒、病毒(例如逆转录病毒、慢病毒、腺病毒或疱疹病毒)或并入原核生物或真核生物的基因组DNA中的重组DNA。此外，分离的核酸可包括经过工程改造的核酸，例如作为杂交或融合核酸的一部分的重组DNA分子。存在于例如cDNA文库或基因组文库或者含有基因组DNA限制性消化物的凝胶切片内的数百到数百万其它核酸间的核酸不能视为分离的核酸。
编码B7-H4融合多肽的核酸可经过优化以在所选表达宿主中表达。密码子可用编码同一氨基酸的替代性密码子取代，以说明获得B7-H4核酸序列的哺乳动物与表达宿主之间密码子用法的差异。按这种方式，可使用表达宿主优选的密码子合成核酸。
核酸可呈有义(sense)或反义定向，或者可与编码B7-H4多肽的参考序列互补。核酸可为DNA、RNA或核酸类似物。核酸类似物的碱基部分、糖部分或磷酸酯主链可经修饰。此种修饰可改进例如核酸的稳定性、杂交性或溶解性。碱基部分的修饰可包括脱氧尿苷(对于脱氧胸苷)和5-甲基-2′-脱氧胞苷或5-溴-2′-脱氧胞苷(对于脱氧胞苷)。糖部分的修饰可包括核糖的2′羟基修饰，由此形成2′-O-甲基或2′-O-烯丙基糖。脱氧核糖磷酸酯主链可经过修饰以产生吗啉基核酸，其中每一碱基部分连接到一个6元吗啉环；或产生肽核酸，其中脱氧磷酸酯主链经假肽(pseudopeptide)主链置换并保留4个碱基。参看例如萨姆顿(Summerton)和维勒(Weller)(1997)反义核酸药物开发(AntisenseNucleic Acid Drug Dev.)7：187-195；和海鲁普(Hyrup)等人(1996)生物有机与药物化学(Bioorgan.Med Chem.)4：5-23。此外，脱氧磷酸酯主链可用例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主链、氨基磷酸酯或烷基磷酸三酯主链置换。
编码多肽的核酸可投予有需要的受试者。核酸传递涉及将“外来”核酸引入细胞中并最终引入活动物中。用于将核酸传递到受试者的组合物和方法是此项技术中已知的(参看基因疗法知识(UnderstandingGene Therapy)，乐莫宁N.R.(Lemoine，N.R.)编辑，BIOS科技出版社(BIOS Scientific Publishers)，牛津(Oxford)，2008)。
IV.载体和宿主细胞
也提供编码B7-H4多肽、其片段和融合物的载体。核酸，例如上文所述者，可插入载体中以在细胞中表达。本文中使用的“载体”是一种复制子，例如质粒、噬菌体、病毒或柯斯质粒(cosmid)，其中可插入另一DNA区段以引起插入的区段的复制。载体可为表达载体。“表达载体”是包括一个或一个以上表达控制序列的载体，且“表达控制序列”是控制并调控另一DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。
载体中的核酸可按可操作方式连接到一个或一个以上表达控制序列。本文中使用的“按可操作方式连接”意指并入遗传构建体中以使表达控制序列能有效地控制相关编码序列的表达。表达控制序列的实例包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是由通常在转录开始点(一般接近RNA聚合酶II的起始位点)上游100个核苷酸内的DNA分子区构成的表达控制序列。为了使编码序列处于启动子控制下，需要将多肽翻译阅读框的翻译起始位点定位在启动子下游1与约50个核苷酸之间。增强子在时间、位置和水平方面提供表达特异性。与启动子不同，增强子当位于距转录位点各种距离处时可起作用。增强子也可位于转录起始位点下游。当RNA聚合酶能够将编码序列转录到mRNA中，所述mRNA随后可翻译成所述编码序列所编码的蛋白质时，编码序列在细胞中“按可操作方式连接”并且处于表达控制序列的“控制下”。
适合的表达载体包括(不限于)来源于例如噬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus)、疱疹病毒、巨细胞病毒(cytomegalo virus)、逆转录病毒、牛痘病毒(vaccinia virus)、腺病毒和腺相关病毒的质粒和病毒载体。多种载体和表达系统可从例如以下公司购得：诺瓦杰公司(Novagen)(位于威斯康星州麦迪逊(Madison，WI))、克隆泰克公司(Clontech)(位于加利福尼亚州帕洛阿尔托(PaloAlto，CA))、斯塔杰公司(Stratagene)(位于加利福尼亚州拉荷亚(LaJolla，CA))和英杰生命技术公司(Invitrogen Life Technologies)(位于加利福尼亚州卡尔斯巴德(Carlsbad，CA))。
表达载体可包括标签序列(tag sequence)。标签序列通常表达成与编码的多肽的融合物的形式。所述标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。适用的标签的实例包括(但不限于)绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase，GST)、聚组氨酸、c-myc、血凝素、FlagTM标签(柯达公司(Kodak)，位于康乃狄克州纽黑文(New Haven，CT))、麦芽糖E结合蛋白和蛋白质A。在一个实施例中，编码B7-H4融合多肽的核酸分子存在于含有编码Ig重链恒定区的一个或一个以上结构域的核酸的载体中，所述结构域优选具有对应于人类免疫球蛋白Cγ1链铰链区、CH2区和CH3区的氨基酸序列。
含有待表达的核酸的载体可转移到宿主细胞中。术语“宿主细胞”拟包括可引入重组表达载体的原核和真核细胞。本文中使用的“转化”和“转染”涵盖通过多种技术中的一种将核酸分子(例如载体)引入细胞中。尽管不局限于特定技术，但多种所述技术是此项技术中充分确立的。原核细胞可利用核酸通过例如电穿孔法或氯化钙介导的转化法来转化。可通过包括例如磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂转染、电穿孔或显微注射在内的技术将核酸转染到哺乳动物细胞中。宿主细胞(例如原核细胞或真核细胞，例如CHO细胞)可用于例如产生本文所述的B7-H4融合多肽。
所述载体可用于在细胞(例如移植细胞，例如胰岛细胞)中表达B7-H4。示范性载体包括(但不限于)腺病毒载体。一种方法包括将核酸转移到培养的原代细胞中，随后将离体转化的细胞经全身自体移植到宿主中或自体移植到特定器官或组织中。离体方法可包括例如从受试者采集细胞、培养细胞、用表达载体转导细胞以及在适于表达编码的多肽的条件下维持细胞的步骤。这些方法是分子生物学技术中已知的。转导步骤可通过用于离体基因疗法的任何标准方式，包括例如磷酸钙法、脂转染法、电穿孔法、病毒感染法和生物射弹基因转移法(biolistic gene transfer)实现。或者，可使用脂质体或聚合物微粒。接下来，可例如针对编码序列或药物抗性基因的表达来选择成功转导的细胞。接着，可对细胞进行致死性照射(必要时)并注入或植入受试者中。在一个实施例中，将含有编码融合蛋白的核酸的表达载体转染到投予有需要的受试者的细胞中。
体内核酸疗法可通过在体内将功能活性DNA直接转移到哺乳动物体细胞组织或器官中来实现。举例来说，编码本文揭示的多肽的核酸可直接投予淋巴组织或肿瘤。或者，可以使用淋巴组织特异性转录调控元件(transcriptional regulatory element，TRE)，例如B淋巴细胞特异性TRE、T淋巴细胞特异性TRE或树突状细胞特异性TRE，实现淋巴组织特异性靶向。淋巴组织特异性TRE是此项技术中已知的。
核酸也可通过病毒方式在体内投予。此项技术中众所周知，编码融合蛋白的核酸分子可使用产生复制缺陷型逆转录病毒的包装细胞系包装到逆转录病毒载体中。也可使用其它非复制性病毒载体，包括重组腺病毒和牛痘病毒。除裸DNA或RNA或者病毒载体外，经过工程改造的细菌也可用作载体。核酸也可通过其它载体，包括脂质体、聚合物微粒和纳米粒子以及例如脱唾液酸糖蛋白/聚赖氨酸等聚阳离子来传递。
除病毒和载体介导的体内基因转移外，也可使用此项技术中众所周知的物理方式直接转移DNA，包括投予质粒DNA和粒子轰击介导的基因转移。
V.药物组合物
提供包括本文揭示的融合多肽的药物组合物。含有肽或多肽的药物组合物可通过肠胃外(肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、透皮(被动或使用离子电渗疗法或电穿孔实现)或透粘膜(鼻、阴道、直肠或舌下)投药途径或使用生物腐蚀性插入物投予，并且可配制成适于每一投药途径的剂型。
在一些体内方法中，本文揭示的组合物是以治疗有效量投予受试者。本文中使用的术语“有效量”或“治疗有效量”意指足以治疗、抑制或减轻所治疗病症的一种或一种以上症状或以其它方式提供所需药理和/或生理作用的剂量。确切剂量将根据例如受试者相关性变量(例如年龄、免疫系统健康等)、疾病和实现的治疗等多种因素而变化。
对于本文揭示的多肽组合物以及编码所述多肽组合物的核酸，随着进一步研究的进行，将得出关于适于治疗各种患者的各种病况的剂量的信息，并且所属领域技术人员考虑受体的治疗情况、年龄和一般健康状况将能够确定适宜的给药方案。所选剂量取决于所需治疗效果、投药途径和所需治疗持续时间。一般以每日每公斤体重0.001到10mg的剂量投予哺乳动物。一般说来，对于静脉内注射或输注，剂量可较低。
在某些实施例中，通过例如直接注射到待治疗部位来局部投予多肽组合物。通常，注射使多肽组合物的局部浓度增加，高于通过全身投药所达到的程度。在器官移植物情况下，可将蛋白质局部投予靠近移植的器官的部位。多肽组合物可与上述基质组合以通过减少多肽被动扩散到待治疗部位外来帮助产生增加的局部多肽组合物浓度。
1.供肠胃外投药的制剂
在一个优选实施例中，本文揭示的组合物，包括含有肽和多肽者，是以水溶液形式通过肠胃外注射投予。所述制剂也可为悬浮液或乳液的形式。一般说来，提供的药物组合物包括有效量的肽或多肽，并且任选包括药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载剂。所述组合物包括稀释剂，无菌水、具有各种缓冲剂含量(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲生理盐水；且任选包括添加剂，例如清洁剂和增溶剂(例如TWEEN 20、TWEEN 80，又称作聚山梨醇酯20或80)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠)和防腐剂(例如硫柳汞、苯甲醇)和增积物质(例如乳糖、甘露糖醇)。非水性溶剂或媒剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射有机酯(例如油酸乙酯)。制剂可冻干并且在即将使用前再溶解/再悬浮。制剂可通过例如滤过细菌截留过滤器、通过将灭菌剂并入组合物中、通过照射组合物或通过加热组合物来进行灭菌。
2.供表面投药的制剂
本文揭示的融合蛋白可施用于表面。表面投药对于大多数肽制剂来说作用并不理想，但其在施用于肺、鼻、口(舌下、口腔)、阴道或直肠粘膜时特别有效。
组合物可在吸入的同时传递到肺部，并且当传递时以空气动力学直径小于约5微米的气雾剂或喷雾干燥粒子形式横过肺上皮内层进入血流。
可以使用设计用于肺传递治疗产品的多种机械装置，包括(但不限于)雾化器、定剂量吸入器和粉末吸入器，所有这些装置都是所属领域技术人员熟知的。市售装置的一些具体实例是Ultravent雾化器(马林斯科特有限公司(Mallinckrodt Inc.)，位于密苏里州圣路易斯(St.Louis，Mo.))；Acorn II雾化器(马奎斯特医疗产品公司(MarquestMedical Products)，位于科罗拉多州恩格尔伍德(Englewood，Colo.))；Ventolin定剂量吸入器(葛兰素有限公司(Glaxo Inc.)，位于北卡罗来纳州三角研究园(Research Triangle Park，N.C.))；和Spinhaler粉末吸入器(费森斯公司(Fisons Corp.)，位于马萨诸塞州贝德福德(Bedford，Mass.))。纳克塔(Nektar)、艾克姆斯(Alkermes)和曼恩凯德(Mannkind)都具有获批准或处于临床试验中的可吸入胰岛素粉末制剂，其中所述技术可适用于本文所述的制剂。
投予粘膜的制剂通常将为喷雾干燥的药物粒子，其可并入片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳液中。标准药物赋形剂可从任何配方设计师获得。口服制剂可为咀嚼胶、凝胶带、片剂或锭剂的形式。
也可制备透皮制剂。这些制剂通常将为油膏、洗液、喷雾剂或贴片，都可使用标准技术制备。透皮制剂将需要包括渗透增强剂。
3.控制传递聚合物基质
本文揭示的融合蛋白也可以控制释放制剂形式投予。控制释放聚合物装置可制备用于在植入聚合物装置(杆、圆筒、膜、圆盘)或注射(微粒)后长期全身释放。基质可为微粒形式，例如微球，其中肽分散于固体聚合物基质内；或微胶囊，其中核心具有不同于聚合物壳的材料，且肽分散或悬浮于核心(其本质上可为液体或固体)中。除非本文中具体定义，否则微粒、微球和微胶囊可互换使用。或者，聚合物可浇铸为在数纳米到4厘米范围内的薄板或薄膜形式、通过研磨或其它标准技术产生的粉末形式，或甚至是凝胶形式，例如水凝胶。
非生物可降解或生物可降解基质可用于传递融合多肽或编码融合多肽的核酸，但优选生物可降解基质。这些基质可为天然或合成聚合物，但合成聚合物因为降解和释放曲线得到良好表征而成为优选的。聚合物是根据需要释放的时间段来选择。在一些情况下，线性释放可能最有用，但在其它情况下，脉冲释放或“大量释放(bulk release)”可提供更有效的结果。聚合物可为水凝胶形式(通常吸收高达约90重量％水)并且可任选与多价离子或聚合物交联。
基质可通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和所属领域技术人员已知的其它方法形成。生物腐蚀性微球可使用开发用于制备供药物传递的微球的任何方法制备，例如，如麦索维兹(Mathiowitz)和朗阁(Langer)，控制释放杂志(J.Controlled Release)，5：13-22(1987)；麦索维兹等人，反应性聚合物(Reactive Polymers)，6：275-283(1987)；和麦索维兹等人，应用聚合物科学杂志(J.Appl.Polymer Sci)，35：755-774(1988)中所述。
这些装置可配制用于局部释放以治疗植入或注射区域-其通常传递的剂量将比用于全身治疗或系统性传递的剂量少得多。这些装置可皮下植入或注射到肌肉、脂肪中或加以吞咽。
在另一实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物与封装在基质内的移植细胞一起投予以使B7-H4多肽或者其片段或融合物经一段时间释放到移植区域中。基质可为使用适于细胞封装的任何聚合物制成的聚合物基质。适于封装细胞的示范性聚合物材料包括(但不限于)海藻酸盐、琼脂糖、透明质酸、胶原蛋白、合成单体、白蛋白、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、玻连蛋白(vitronectin)、层粘连蛋白、葡聚糖、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、几丁质、壳聚糖、乙酰肝素、硫酸乙酰肝素或其组合。举例来说，对于治疗糖尿病，可将B7-H4多肽或者其片段或融合物与胰岛细胞一起封装在聚合物基质内。胰岛细胞的封装描述于例如巴内特(Barnett)等人，自然-医学(Nature Medicine)，13(8)：986-91(2007))中。
VI.制造方法
A.用于产生融合蛋白的方法
分离的融合蛋白可通过例如化学合成或通过在宿主细胞中重组产生来获得。为了重组产生融合蛋白，可以使用含有编码融合蛋白的核苷酸序列的核酸来转化、转导或转染细菌或真核宿主细胞(例如昆虫、酵母或哺乳动物细胞)。一般说来，核酸构建体包括按可操作方式连接到编码融合蛋白的核苷酸序列的调控序列。调控序列(本文中又称作表达控制序列)通常不编码基因产物，而是影响其按可操作方式连接的核酸序列的表达。
适用于表达和产生多肽的原核和真核系统是此项技术中众所周知的，包括例如大肠杆菌菌株，例如BL-21，以及培养的哺乳动物细胞，例如CHO细胞。
在真核宿主细胞中，可利用多种基于病毒的表达系统来表达融合蛋白。基于病毒的表达系统是此项技术中众所周知的，并且包括(但不限于)基于杆状病毒、SV40、逆转录病毒或牛痘的病毒载体。
稳定表达变异融合蛋白的哺乳动物细胞系可使用具有适宜控制元件和可选择标记物的表达载体产生。举例来说，真核表达载体pCR3.1(英杰生命技术公司)和p91023(B)(参看王(Wong)等人(1985)科学(Science)228：810-815)适于表达例如中国仓鼠卵巢(Chinese hamsterovary，CHO)细胞、COS-1细胞、人胚肾293细胞、NIH3T3细胞、BHK21细胞、MDCK细胞和人血管内皮细胞(human vascular endothelialcell，HUVEC)中的变异共刺激多肽。其它适合的表达系统包括由龙沙集团有限公司(Lonza Group Ltd.)获得的GS Gene Expression SystemTM。
在通过电穿孔法、脂转染法、磷酸钙法或氯化钙共沉淀法、DEAE葡聚糖法或其它适合的转染方法引入表达载体后，可选择稳定细胞系(例如通过代谢选择，或对G418、卡那霉素(kanamycin)或潮霉素(hygromycin)的抗生素抗性，或通过使用谷氨酰胺合成酶-NSO系统进行代谢选择)。可培养转染的细胞以表达相关多肽，并且可从例如细胞培养物上清液或从溶解的细胞回收多肽。或者，可通过(a)将扩增的序列连接到例如pcDNA3(英杰生命技术公司)等哺乳动物表达载体中，和(b)在体外使用麦芽提取物或兔网织红细胞溶解产物进行转录和翻译，来产生融合蛋白。
融合蛋白可使用例如色谱法(例如亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法、DEAE离子交换法、凝胶过滤法和羟磷灰石色谱法)分离。在一些实施例中，融合蛋白可工程改造成含有含使得多肽能够被捕获到亲和基质上的氨基酸序列的额外结构域。举例来说，细胞培养物上清液或细胞质提取物中的Fc-融合多肽可使用蛋白质A柱分离。此外，还可使用例如c-myc、血凝素、聚组氨酸或FlagTM(柯达公司)等标签来帮助多肽纯化。所述标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。可适用的其它融合物包括有助于检测多肽的酶，例如碱性磷酸酶。也可使用免疫亲和色谱法来纯化共刺激多肽。融合蛋白可另外工程改造成含有使产生所述融合蛋白的细胞分泌所述融合蛋白的分泌信号(如果还未存在分泌信号的话)。随后宜从细胞培养基分离出分泌的融合蛋白。
B.用于产生分离的核酸分子的方法
分离的核酸分子可通过标准技术，包括(不限于)常用分子克隆和化学核酸合成技术来产生。举例来说，可以使用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术获得编码变异共刺激多肽的分离的核酸。PCR是一种酶促扩增目标核酸的技术。通常，可采用来自相关区域末端或之外的序列信息来设计序列与待扩增模板的相对链一致的寡核苷酸引物。可使用PCR扩增来自DNA以及RNA的特定序列，包括来自总基因组DNA或总细胞RNA的序列。引物通常为14到40个核苷酸长，但长度可在10个核苷酸到数百个核苷酸的范围内。常用PCR技术描述于例如PCR引物：实验指南(PCR Primer：A Laboratory Manual)，达芬贝奇(Dieffenbach)和德维斯勒(Dveksler)编辑，冷泉港实验出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，1995中。当使用RNA作为模板来源时，可使用逆转录酶来合成互补DNA(cDNA)链。也可使用连接酶链反应、链置换扩增、自身持续序列复制(self-sustained sequence replication)或基于核酸序列的扩增来获得分离的核酸。参看例如莱维斯(Lewis)(1992)遗传工程新闻(GeneticEngineering News)12：1；盖特里(Guatelli)等人(1990)美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)87：1874-1878；和维斯(Weiss)(1991)科学(Science)254：1292-1293。
分离的核酸可借助化学方式以单一核酸分子形式或以一系列寡核苷酸形式合成(例如使用在3’到5’方向上进行自动DNA合成的氨基磷酸酯技术)。举例来说，可合成含有所需序列的一个或一个以上长寡核苷酸对(例如＞100个核苷酸)，其中每一对含有短互补区段(例如约15个核苷酸)，由此当寡核苷酸对退火时形成双链体。可使用DNA聚合酶来延伸寡核苷酸，使每一寡核苷酸对产生单一双链核酸分子，随后可将其连接到载体中。分离的核酸也可通过诱变法获得。可使用标准技术，包括寡核苷酸引导的诱变法和/或定点诱变法经由PCR使编码融合蛋白的核酸发生突变。参看精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology).第8章，格林出版协会与约翰威立父子出版公司(Green Publishing Associates and John Wiley&Sons)，奥苏贝尔(Ausubel)等人编辑，1992。可修饰的氨基酸位置的实例包括本文所述的位置。
VII.使用方法
本文揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物可用作治疗剂。一个实施例提供一种通过投予宿主有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物来抑制或减少移植物排斥的方法。可使免疫细胞，优选T细胞在体外或离体与B7-H4多肽接触以减少或抑制免疫应答，包括(但不限于)移植物排斥。与B7-H4融合多肽接触的T细胞可为表达T细胞受体的任何细胞，包括α/β和γ/8T细胞受体。T细胞包括表达CD3的所有细胞，包括也表达CD4和CD8的T细胞子集。T细胞包括原生和记忆细胞以及效应细胞(例如CTL)。T细胞也包括调控细胞，例如Th1、Tc1、Th2、Tc2、Th3、Th17、Th22、Treg和Tr1细胞。举例来说，可使用组合物来调节Th1、Th17、Th22，或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞。T细胞也包括NKT细胞和类似的独特T细胞谱系类别。组合物也可用于增加或促进Treg活性；增加Treg的细胞因子(例如IL-10)产生；增加Treg的分化；增加Treg的数量；或增加Treg的存活率。
可用所揭示的B7-H4多肽、其融合蛋白或片段处理的其它免疫细胞包括T细胞前体、抗原提呈细胞、B细胞或其组合。可使用B7-H4组合物，通过使B细胞与有效量的B7-H4组合物接触来相对于对照物抑制或减少B细胞的抗体产量，由此调节B细胞的抗体产量。B7-H4组合物也可调节B细胞的细胞因子产量。
A.治疗移植物排斥的方法
优选实施例提供用于减少或抑制受试者，优选人类受试者的移植物排斥的方法。可以通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以抑制或降低免疫细胞的生物活性或减少与移植物部位炎症有关或促进移植物部位炎症的促炎性细胞因子或其它分子的量来抑制或减少受试者的移植物排斥。示范性促炎性分子包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP。
Th1和Th17是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。B7-H4融合蛋白可用于通过以下任一或所有方式来治疗炎症：抑制或减少Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的分化；抑制或降低Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的活性；抑制或减少Th1和/或Th17路径；抑制或减少Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的细胞因子产生和/或分泌；抑制或减少Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的增殖。
此外，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可使Treg对Th1、Th17、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞具有较强的抑制作用，以降低产生的IFN-γ和/或IL-17的水平。B7-H4多肽、其融合蛋白或片段也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10的产生，从而抑制Th1和/或Th17路径，或增加Treg的数量。
B7-H4多肽、其融合蛋白或片段作用于多种路径中的多个点。举例来说，其可抑制原生T细胞发育成Th1或Th17细胞。或者，其可与Th1细胞或Th17细胞或二者相互作用，以抑制或减少促炎性分子的产生。另外，其还可靶向Treg以增强对Th1和/或Th17路径的抑制作用，由此降低产生的INF-γ和/或IL-17的水平。B7-H4组合物也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10的产生，由此抑制Th1和/或Th17路径。此外，其也可通过增进移入组织区域中或周围部位处Treg细胞的募集或扩增(或二者)来起作用。
1.抑制Th1路径
a.抑制Th1发育
一种用于抑制或减少移植物排斥的方法包括对有需要的受试者投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物，以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制或阻止原生T细胞发育成Th1细胞。已经发现，通过投予B7-H4多肽或者其片段或融合物或其变异体，来阻止原生T细胞分化成Th1细胞，从而可抑制或减少移植物排斥。在一个实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物增加Treg对原生T细胞的抑制能力，由此抑制或减少原生T细胞分化成Th1细胞，并借此减少受试者体内Th1细胞的数量。或者，B7-H4多肽或者其片段或融合物抑制或减少Th1细胞增殖。通过限制受试者体内可发育的Th1细胞的数量，可减少或遏制产生的促炎性分子(例如INF-γ)的量。INF-γ刺激包括IL-1β、TNF-α和MMP在内的其它促炎性分子的产生或释放。因此，通过控制受试者体内Th1细胞的数量，可控制这些其它促炎性分子的水平，由此减少移植物排斥。
b.抑制促炎性分子
另一实施例提供一种通过投予受试者有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以借助有效抑制或减少受试者的移植物排斥的量抑制或减少Th1细胞产生促炎性分子来抑制或减少受试者的移植物排斥的方法。Th1细胞产生的促炎性分子的实例包括IFN-γ。在此实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物可与Th1细胞直接相互作用，并抑制或减少Th1细胞产生IFN-γ。在此实施例中，促炎性分子的量而不是Th1细胞群受到调控。
2.抑制Th17路径
a.抑制Th17发育
也可通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物，以借助相对于对照物有效抑制或减少受试者的移植物排斥的量抑制或阻止原生T细胞发育成Th17细胞来抑制或减少受试者的移植物排斥。在一个实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物以足以减少受试者体内Th17细胞数量的量增加Treg对原生T细胞分化成Th17细胞的抑制活性。或者，B7-H4多肽或者其片段或融合物抑制或减少Th17细胞增殖。通过减少受试者体内Th17细胞群，可减少产生的IL-17以及IL-22和IL-21的量。IL-17是使例如IL-1β、TNF-α和MMP等其它促炎性分子增加的促炎性分子。因此，通过减少IL-17的量，可减少这些其它促炎性分子，由此减少或抑制移植物排斥。
b.抑制IL-17产生
另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制Th17细胞产生IL-17以及IL-22和IL-21来抑制或减少受试者的移植物排斥的方法。在此实施例中，B7-H4多肽或融合蛋白可例如通过结合于Th17细胞来直接作用于Th17细胞，由此抑制这些Th17细胞产生IL-17(或IL-22和IL-21)。如上文所述，抑制或减少IL-17(和IL-22或IL-21)导致其它促炎性分子的减少，由此减少或抑制移植物排斥。
3.抑制Th1和Th17路径
所揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物可用于同时抑制Th1和Th17路径。使用一种消炎剂抑制两种独立路径将更稳固地抑制或减少免疫应答，由此减少或抑制移植物排斥。抑制Th1和Th17路径会抑制或减少嗜中性粒细胞的募集，并且可由此减少炎症的一种或一种以上症状。在一个实施例中，抑制Th1和Th17路径会减少或抑制嗜中性粒细胞和或巨噬细胞的增殖。
4.Treg
也可通过对受试者投予有效靶向产生IL-10的Treg的量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以增强对Th1和/或Th17路径的抑制活性来治疗炎症。在此实施例中，所揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物使得对IL-17产生的抑制作用相对于单独Treg有所增加，由此相对于对照物抑制或减少移植物排斥。
另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以增加Treg产生的IL-10来抑制或减少移植物排斥的方法。IL-10的产量增加使Th17细胞产生的IL-17减少，并使Th1细胞产生的IFN-α减少。在此实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物可与Treg直接相互作用以增加Treg产生的IL-10，并由此相对于对照物抑制或减少受试者的移植物排斥。
此外，B7-H4多肽或者其片段或融合物可通过增进移入组织区域中Treg细胞的募集或扩增(或二者)来起作用。因此，另一实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4-Ig融合蛋白以增进移入组织区域中Treg细胞的募集来抑制或减少受试者移植物排斥的方法。浸润到移入组织中的Treg细胞的增加可增加局部IL-10的水平，并导致移植部位处Th17细胞产生的IL-17减少以及Th1细胞产生的IFN-α减少。此结果可延长移植物存活期并减少移植物排斥。
另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以借助相对于对照物有效抑制或减少受试者的移植物排斥的量抑制或干扰Th1路径、Th17路径并增强对Treg对Th17路径的抑制作用来抑制或减少受试者的移植物排斥的方法。
B7-H4多肽、其融合蛋白和其片段也可以有效增加Treg细胞群或数量的量投予受试者。
通过使Treg与有效量的B7-H4多肽或者其具有B7-H4活性的片段或融合物接触，可相对于对照物增加Treg的IL-10和TGF-β产量。所述增加可在体外或体内发生。
5.可溶性B7-H4
可溶性B7-H4(sH4)充当诱饵分子(decoy molecule)，其结合于B7-H4受体，并且可阻止内源性B7-H4结合于其受体。sH4不会像细胞表面B7-H4一样传递抑制信号。B7-H4在抗原刺激存在下抑制T细胞的细胞周期进程。B7-H4可通过抑制嗜中性粒细胞祖细胞增殖来抑制固有的免疫性。相信升高sH4水平将阻止内源性B7-H4的抑制作用。
因此，可例如通过对有需要的个体投予有效量的抑制或降低sH4结合于B7-H4受体的能力或增大内源抑制性B7-H4分子的活性的试剂在体内干扰sH4的生物活性，来抑制或减少移植物排斥。干扰sH4生物活性可通过投予本文揭示的B7-H4融合多肽来实现。
投药不局限于治疗现有的病况、疾病或病症(即，现有的发炎性或自体免疫疾病或病症)，而且还可用于预防个体发生这些疾病或降低个体发生这些疾病的风险，即用于预防用途。因此，所揭示的组合物可在移植前、移植期间和移植后投予。
6.移植物
移植材料可以是细胞、组织、器官、肢体、手指或脚趾或身体(优选人体)的一部分。移植物通常为同种异体的或异种的。所揭示的B7-H4多肽、其融合蛋白或片段是以有效量投予受试者以减少或抑制移植物排斥。B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可通过任何可接受的投药途径全身或局部投予。在一些实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物是在移植之前、同时或之后投予移植部位。在一个实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物是经肠胃外(例如通过皮下注射)投予移植部位。
在其它实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段是离体直接投予待移植的细胞、组织或器官。在一个实施例中，在移植前、移植后或二者，移植材料与B7-H4多肽、其融合蛋白和其片段接触。
在其它实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物是投予免疫组织或器官，例如淋巴结或脾。
移植材料在移植前可经修饰。举例来说，移植材料可经遗传修饰成表达有助于抑制或减少移植物排斥的蛋白质。在一个优选实施例中，移植材料经遗传修饰成表达有效抑制或减少移植物受体的移植物排斥的量的B7-H4多肽或者其片段或融合物。
移植材料可用去除已知或怀疑牵涉到免疫应答(例如移植物排斥)的细胞表面蛋白、碳水化合物或脂质的酶或其它材料处理。
B7-H4以较高水平作用于发炎路径中的多个点，由此其充当主要调控子以控制从而影响例如TNF-α等效应细胞因子的表达和/或活性。因此，本文所述的B7-H4组合物特别适用于治疗对TNF-α阻断剂(例如Enbrel、Remicade、Cimzia和Humira)无应答的患者。此外，由于所揭示的B7-H4组合物具有作为发炎路径中的主要调控子的活性，故其特别适用于治疗慢性移植物排斥。
a.细胞
任何类型的细胞群都可移植到受试者中。细胞可为同源或异源的。异源意指细胞群含有一种以上类型的细胞。示范性细胞包括祖细胞，例如干细胞和多能细胞，其可从供体采集并移植到受试者中。这些细胞在如上文所述进行移植前任选经处理。所述处理包括离体用使细胞能在体外和体内表达B7-H4多肽或者其片段或融合物的核酸构建体转染细胞。此项技术中众所周知用于转染细胞的方法。
核酸传递的离体方法可包括例如从受试者采集细胞、培养细胞、用表达载体转导细胞以及在适于表达编码的多肽的条件下维持细胞的步骤。这些方法是分子生物学技术中已知的。示范性核酸载体包括(但不限于)腺病毒载体。转导步骤可通过用于离体基因疗法的任何标准方式，包括例如磷酸钙法、脂转染法、电穿孔法、病毒感染法和生物射弹基因转移法实现。或者，可使用脂质体或聚合物微粒。接下来，可例如针对编码序列或药物抗性基因的表达来选择成功转导的细胞。接着，可对细胞进行致死性照射(必要时)并注入或植入受试者中。可移植的其它示范性细胞包括(但不限于)胰岛细胞、造血细胞、肌细胞、心脏细胞、神经细胞、胚胎干细胞、成体干细胞、T细胞、淋巴细胞、真皮细胞、中胚层细胞、内胚层细胞和外胚层细胞。
b.组织
任何组织都可用作移植物。示范性组织包括皮肤、脂肪组织、心血管组织(例如静脉、动脉、毛细管、瓣膜)、神经组织、骨髓、肺组织、眼组织(例如角膜和晶状体)、软骨、骨骼和粘膜组织。如上文所论述，组织可经修饰。
c.器官
可用于移植的示范性器官包括(但不限于)肾、肝、心脏、脾、膀胱、肺、胃、眼睛、舌、胰腺、肠等。如上文所论述，待移植的器官在移植前也可经修饰。
一个实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以相对于对照物抑制或减少慢性移植物排斥来抑制或减少受试者的慢性移植物排斥的方法。B7-H4多肽、其融合蛋白和其片段对Treg细胞的作用在此情形中特别重要。
B.移植物抗宿主疾病(GVHD)
也可使用所揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物，通过投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段来减轻与移植物抗宿主疾病(GVHD)相关的一种或一种以上症状，来治疗GVHD。GVHD是与同种异体造血干细胞移植有关的严重并发症，其中移植的骨髓中的功能性免疫细胞将受体识别为“外来的”并实施免疫攻击。在某些情况下，其也可在输血过程中发生。GVD的症状包括皮疹或者皮肤颜色或肌理的改变、腹泻、恶心、异常肝功能、皮肤发黄、对感染的易感性增加、干燥、眼睛刺激和敏感或口干。
D.糖尿病
B7-H4多肽和其融合蛋白也可用于治疗糖尿病。所述方法包括在受试者中移植产胰岛素细胞，和投予受试者有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以减少或抑制移植物排斥。优选产胰岛素细胞是β细胞或胰岛细胞。在某些实施例中，产胰岛素细胞是工程改造成产生胰岛素的重组细胞。产胰岛素细胞也可经过遗传修饰以产生B7-H4多肽或者其片段或融合物，如本文所述。
产胰岛素细胞可使用适合的聚合物，包括(但不限于)海藻酸盐、琼脂糖、透明质酸、胶原蛋白、合成单体、白蛋白、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白、葡聚糖、硫酸葡聚糖、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、几丁质、壳聚糖、乙酰肝素、硫酸乙酰肝素或其组合封装于基质，例如聚合物基质中。
E.组合疗法
B7-H4多肽或者其片段或融合物可单独使用或与其它治疗剂组合使用。所述其它治疗剂包括(但不限于)免疫抑制剂(例如针对其它淋巴细胞表面标记物(例如CD40、α-4整合素)或针对细胞因子的抗体)、其它融合蛋白(例如CTLA-4-Ig
Figure BDA0000158178250000901
TNFR-Ig
Figure BDA0000158178250000902
TNF-α阻断剂(例如Enbrel、Remicade、Cimzia和Humira)、环磷酰胺(CTX)(即
Figure BDA0000158178250000903
RevimmuneTM)、甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)(即
Figure BDA0000158178250000904
)、贝利单抗(belimumab)(即)或其它免疫抑制药物(例如环孢霉素A(cyclosporinA)、类FK506化合物、雷帕霉素化合物或类固醇)、抗增生药、细胞毒性剂或可能有助于免疫抑制的其它化合物。
在一个优选实施例中，所述其它治疗剂用于抑制或减少通过单独路径的T细胞活化以及细胞因子产生。在一个此类实施例中，所述其它治疗剂是CTLA-4融合蛋白，例如CTLA-4Ig(阿巴西普)。CTLA-4Ig融合蛋白与T细胞上的共刺激受体CD28竞争结合于抗原提呈细胞上的CD80/CD86(B7-1/B7-2)并由此用于抑制T细胞活化。在一个优选实施例中，所述其它治疗剂是称为贝拉西普(belatacept)的CTLA-4-Ig融合蛋白。贝拉西普含有在体内明显增加其对CD86的亲合力的两个氨基酸取代(L104E和A29Y)。在另一实施例中，所述其它治疗剂是Maxy-4。
在另一实施例中，第二治疗剂优先治疗慢性移植物排斥或GvHD，由此所述治疗方案有效地靶向急性和慢性移植物排斥或GvHD。在一个优选实施例中，第二治疗剂是TNF-α阻断剂。
在另一实施例中，第二治疗剂使血清中腺苷的量增加，参看例如WO 08/147482。在一个优选实施例中，第二治疗剂是CD73-Ig、重组CD73或另一增加CD73表达的试剂(例如细胞因子或单克隆抗体或小分子)，参看例如WO 04/084933。在另一实施例中，第二治疗剂是干扰素-β。
在一个优选实施例中，所述组合物与增加Treg活性或产生的化合物组合或相继使用。示范性Treg增强剂包括(但不限于)糖皮质激素氟替卡松；沙美特罗；针对IL-12、IFN-γ和IL-4的抗体；维生素D3；和地塞米松，和其组合。针对其它促炎性分子的抗体也可与所揭示的B7-H4多肽、其融合蛋白或片段组合或间隔使用。优选抗体结合于IL-6、IL-23、IL-22或IL-21。
如本文所用，术语“雷帕霉素化合物”包括中性三环化合物雷帕霉素、雷帕霉素衍生物、雷帕霉素类似物，和其它大环内酯类化合物，这些化合物被认为具有与雷帕霉素相同的作用机制(例如抑制细胞因子功能)。“雷帕霉素化合物”的表述包括结构类似于雷帕霉素的化合物，例如具有类似的大环结构的化合物，其经过修饰以增强其治疗功效。示范性雷帕霉素化合物是此项技术中已知的(参看例如WO95122972、WO 95116691、WO 95104738；美国专利第6,015,809号；第5,989,591号；美国专利第5,567,709号；第5,559,112号；第5,530,006号；第5,484,790号；第5,385,908号；第5,202,332号；第5,162,333号；第5,780,462号；第5,120,727号)。
“类FK506化合物”的表述包括FK506以及FK506衍生物和类似物，例如结构类似于FK506的化合物，例如具有类似的大环结构的化合物，其经过修饰以增强其治疗功效。类FK506化合物的实例包括例如WO 00101385中所述的化合物。优选本文中使用的“雷帕霉素化合物”的表述不包括类FK506化合物。
其它适合的治疗剂包括(但不限于)消炎剂。消炎剂可为非类固醇、类固醇或其组合。一个实施例提供含有约1％(w/w)到约5％(w/w)，通常约2.5％(w/w)或消炎剂的口服组合物。非类固醇消炎剂的代表性实例包括(不限于)昔康类(oxicams)，例如吡罗昔康(piroxicam)、伊索昔康(isoxicam)、替诺昔康(tenoxicam)、舒多昔康(sudoxicam)；水杨酸类(salicylates)，例如阿司匹林(aspirin)、双水杨酯(disalcid)、贝诺酯(benorylate)、曲利塞特(trilisate)、萨法比恩(safapryn)、索尔比林(solprin)、二氟尼柳(diflunisal)和芬度柳(fendosal)；乙酸衍生物，例如双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、伊索克酸(isoxepac)、呋罗芬酸(furofenac)、硫平酸(tiopinac)、齐多美辛(zidometacin)、阿西美辛(acematacin)、芬替酸(fentiazac)、佐美酸(zomepirac)、克林达酸(clindanac)、奥昔平酸(oxepinac)、联苯乙酸(felbinac)和酮洛酸(ketorolac)；芬那酸类(fenamates)，例如甲芬那酸(mefenamic)、甲氯芬那酸(meclofenamic)、氟芬那酸(flufenamic)、尼氟酸(niflumic)和托芬那酸(tolfenamic acid)；丙酸衍生物，例如布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、氟洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬布芬(fenbufen)、吲哚洛芬(indopropfen)、吡洛芬(pirprofen)、卡洛芬(carprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、普拉洛芬(pranoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、硫噁洛芬(tioxaprofen)、舒洛芬(suprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)和噻洛芬酸(tiaprofenic)；吡唑类，例如保泰松(phenylbutazone)、羟基保泰松(oxyphenbutazone)、非普拉宗(feprazone)、阿扎丙宗(azapropazone)和三甲保泰松(trimethazone)。也可采用这些非类固醇消炎剂的混合物。
类固醇消炎药的代表性实例包括(不限于)皮质类固醇，例如氢化可的松(hydrocortisone)、羟基-曲安西龙(hydroxyl-triamcinolone)、α-甲基地塞米松(alpha-methyl dexamethasone)、磷酸地塞米松、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、戊酸氯倍他索(clobetasolvalerate)、地奈德(desonide)、去氧米松(desoxymethasone)、乙酸去氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate)、地塞米松、二氯松(dichlorisone)、二乙酸二氟拉松(diflorasone diacetate)、戊酸二氟可龙(diflucortolone valerate)、氟氢缩松(fluadrenolone)、氟氯奈德(fluclorolone acetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、特戊酸二氟美松(flumethasone pivalate)、氟西奈德(fluosinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟吡汀丁基酯(flucortine butylester)、氟可龙(fluocortolone)、乙酸氟泼尼定(fluprednidene(氟甲叉龙(fluprednylidene))acetate)、氟氢缩松(flurandrenolone)、哈西奈德(halcinonide)、乙酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、丁酸氢化可的松、甲泼尼龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinoloneacetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、氟轻松(flucetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二乙酸二氟拉松(difluorosone diacetate)、氟拉诺龙(fluradrenolone)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二乙酸二氟拉松、氟拉奈德(fluradrenoloneacetonide)、甲羟松(medrysone)、安西那非(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松(betamethasone)和其其它酯、氯泼尼松(chloroprednisone)、乙酸氯泼尼松(chlorprednisone acetate)、氯可托龙(clocortelone)、克辛诺龙(clescinolone)、二氯松(dichlorisone)、二氟泼尼酯(diflurprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼缩松(flunisolide)、氟米龙(fluoromethalone)、氟培龙(fluperolone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、戊酸氢化可的松(hydrocortisone valerate)、环戊基丙酸氢化可的松(hydrocortisone cyclopentylpropionate)、氢可他酯(hydrocortamate)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、曲安西龙(triamcinolone)和其混合物。
在另一实施例中，所述其它治疗剂包括抑制或干扰sH4活性以治疗受试者的发炎性病症的组合物。在一个实施例中，投予受试者B7-H4融合多肽以治疗发炎性疾病，其中所述受试者具有极少或不可检测量的sH4。在另一实施例中，投予B7-H4融合多肽以治疗sH4水平升高的受试者的发炎性疾病的一种或一种以上症状。sH4水平升高可通过将已知患有发炎性病症的受试者的sH4水平与未患发炎性病症的受试者的sH4水平相比较来确定。
F.移植候选者的选择
可使用sH4和B7-H4的检测来评价移植候选者。sH4水平升高可阻止内源性B7-H4的抑制作用，因此相信血清中的sH4水平可预示患者排斥移植材料的可能性。由于B7-H4是T细胞应答的负调控子，故在细胞表面表达的B7-H4的水平也可预示患者排斥移植材料的可能性。来自个体的生物样品中存在的sH4的水平可在移植之前确定。可通过定量进行成功移植的患者和未进行成功移植的患者中的sH4，预先确定与移植排斥(包括不同严重程度)有关的sH4的量。可将来自移植候选者的生物样品中存在的sH4的水平与预先确定的来自其它个体的生物样品中存在的sH4的参照水平相比较，并用于预测候选者进行成功移植的可能性。举例来说，如果75％具有约“x”的sH4水平的患者已经经历移植物排斥，那么具有约“x”的sH4水平的患者可具有75％的几率排斥移植。可能影响患者排斥移植物的可能性的其它因素是此项技术中已知的，并且可在确定患者排斥移植的几率时予以考虑。举例来说，也可考虑供体的年龄、受体的糖尿病、受体的性别、慢性GVHD和T细胞水平。
候选者进行成功移植的可能性可用于选择移植患者。举例来说，sH4水平符合0％、10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％排斥可能性的患者可为良好的移植候选者，而sH4水平符合80％、90％或100％排斥可能性的患者可能不是良好的移植候选者。来自移植候选者的生物样品中sH4的水平可另外或或者与指示发炎性应答或自体免疫疾病不同阶段的sH4的量相比较。
或者，sH4的量可与嗜中性粒细胞的水平相关。嗜中性粒细胞被认为引起早期同种异体排斥(哈利(Healy)等人，欧洲胸心外科杂志(Eur J Cardiothorac Surg)，29：760-766(2006))。因此，对于某些个体，嗜中性粒细胞水平升高可预示移植排斥，尤其急性排斥。因此，个体的sH4水平可与嗜中性粒细胞水平相关。可通过分析受试者的sH4水平并分析受试者的嗜中性粒细胞水平，预先确定对应于特定嗜中性粒细胞水平的sH4的水平。一旦确定参照水平，就可分析来自受试者的生物样品中的sH4水平。随后将得到的sH4水平与预先确定的与特定嗜中性粒细胞水平相关的sH4水平相比较。将得到的sH4水平与预先确定的水平相匹配，以确定受试者的嗜中性粒细胞水平。健康个体的嗜中性粒细胞的数量在约15,000到20,000个细胞/微升范围内。
样品中sH4的量可使用例如酶联免疫吸附分析法、质谱法、分光光度法或其组合等常规技术确定。
检测生物样品中sH4的存在和/或测量其水平的方法可包括使用sH4特异性抗体或抗B7-H4抗体。优选所述抗体识别由SEQ ID NO：2-7、9-20、24-33、42-80编码的任一多肽上的表位。所述方法一般包括：
a)使样品与sH4特异性抗体接触；和
b)检测抗体与样品分子之间的结合。
当与适合的对照物相比较时，检测sH4特异性抗体的特异性结合将指示sH4存在于样品中。适合的对照物包括已知不含sH4的样品，以及与对sH4不具特异性的抗体接触的样品，例如抗独特型抗体。
检测特定抗体-抗原相互作用的多种方法是此项技术中已知的，并且可用于包括(但不限于)标准免疫组织学方法、免疫沉淀法、酶免疫分析法和放射免疫分析法在内的方法中。一般说来，sH4特异性抗体将直接或间接进行可检测标记。直接标记包括放射性同位素；产物可检测的酶(例如荧光素酶、β-半乳糖苷酶等)；荧光标记(例如荧光素异硫氰酸酯、罗丹明(rhodamine)、藻红蛋白等)；通过金属螯合基团(例如EDTA)附接到抗体的发荧光金属，例如152Eu，或其它镧系金属；化学发光化合物，例如鲁米诺(luminol)、异鲁米诺、吖啶盐等；生物发光化合物，例如荧光素(luciferin)、水母发光蛋白(aequorin)(绿色荧光蛋白)等。抗体可附接(偶合)到不溶性支撑物，例如聚苯乙烯板或珠粒。间接标记包括对sH4特异性抗体具有特异性的第二抗体，其中所述第二抗体如上文所述经过标记，并且任选含有特定结合对(例如生物素-抗生物素蛋白)的成员。可使生物样品与能够固定细胞、细胞粒子或可溶性蛋白质的固体支撑物或载体(例如硝基纤维素)接触并固定在所述固体支撑物或载体上。接着可用适合的缓冲液洗涤支撑物，随后使其与经过可检测标记的sH4特异性抗体接触。
其它实施例提供用于检测生物样品中sH4的存在和/或测量生物样品中sH4的水平的方法。所述方法一般包括：
a)使样品与结合sH4的sH4配体(例如B7-H4受体或其片段)接触；和
b)检测B7-H4受体与样品分子之间的结合。
B7-H4受体特异性结合的检测将指示sH4多肽存在于样品中。
用于检测B7-H4受体与sH4之间的结合的方法是此项技术中已知的，并且包括使用对B7-H4受体具特异性的抗体免疫沉淀B7-H4受体-配体复合物，只要所述抗体不破坏B7-H4受体sH4结合即可。或者，所用B7-H4受体可为提供融合搭配物的特异性免疫沉淀、酶检测、荧光信号(例如绿色荧光蛋白)的融合蛋白。如上文所述，B7-H4受体可用任何可检测的标记来标记。B7-H4受体可直接或经由连接子附接到不可溶支撑物(例如聚苯乙烯珠粒、磁性珠粒等)，由此提供一种从生物样品中分离出sH4/受体复合物且随后检测sH4的存在和/或测量sH4的量(水平)的方式。
实例
实例1：B7-H4-Ig在同种异体胰岛移植物移植中的作用：
使用C57BL/6(B6)小鼠作为受体且BALB/c小鼠作为胰岛供体的同种异体移植物模型在体内研究B7-H4-Ig在延长移植物受体的胰岛移植物存活率方面的作用。通过对雌性B6小鼠受体(n＝4)腹膜内(i.p)投予链脲霉素(streptozotocin，STZ；200mg/kg；广泛使用的对胰岛细胞具有特异性毒性并导致持久血糖过高状态的药物)来使其患糖尿病。注射STZ后，借助易你测血糖仪(Glucometer Elite)和糖尿病病征来测试小鼠的血糖水平(blood glucose level，BGL)。投予STZ后两天到三天，将呈现糖尿病病征的B6小鼠用作移植受体。通过胶原蛋白酶消化(在胆管原位(in bile situ)通过共同管道(common duct)向供体胰腺灌注胶原蛋白酶)，随后在不连续菲克尔(Ficoll)梯度上分离，从8到10周龄的BALB/c供体小鼠的胰腺分离出供同种异体移植用的胰岛细胞，且通过在立体显微镜下用手拣选进行纯化。随后，在每个受体的左肾被膜下移植数组500个胰岛。接着，通过在第0天腹膜内注射B7-H4.Ig(250μg)来治疗移植物受体。之后分别在第2天、第4天、第6天和第8天注射等量的试剂。每2天测量BGL。糖尿病的临床复发定义为连续3天随机BGL读数＞250mg/dl，且胰岛细胞存活率是由小鼠维持BGL读数小于250mg/dl的能力决定。为确定注射B7-H4.Ig对患有糖尿病的B6小鼠中胰岛移植的影响，利用卡普兰-迈耶分析法(Kaplan-Meier analysis)比较B7-H4-Ig治疗组和未治疗组的移植物存活曲线。图1说明了在受体B6小鼠中糖尿病的诱发以及同种异体胰岛移植物与B7-H4-Ig投药情况。图2显示本实验的结果：在同种异体胰岛移植物-受体B6小鼠中注射B7-H4-Ig减慢了移植物排斥并延长移植物存活期。
实例2：B7-H4-Ig增加GvHD同种异体移植物小鼠模型的存活能力。
移植和治疗方案
用8.4Gy剂量对受体Balb/C小鼠进行致死性照射，并在4小时内通过单次静脉内接种5×106个来自C57B/6的同种异体骨髓(bonemarrow，BM)细胞+脾细胞(1.5×107)或5×106个同种同基因骨髓细胞使其复原。为了避免由笼相关作用造成的偏差，将不同组中的动物随机分到各笼中。包括四组小鼠。第I组是同种同基因BM移植物，将来自Balb/C小鼠的BM细胞转移到Balb/C小鼠中并用作负对照。第II组是同种异体骨髓移植物，其中在第0天、第1天、第7天和第14天投予对照IgG(0.5mg)。第III组是同种异体骨髓移植物，其中在第0天、第1天、第7天和第14天投予B7-H4-Ig(0.5mg)。第IV组是同种异体骨髓移植物，在第0天、第1天、第7天和第14天用磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)治疗。同种同基因BM移植负对照组具有4只小鼠，并且其它3组各具有8只小鼠。图3是移植物抗宿主疾病分析法的实验设计的示意图。
结果
图4A显示在移植后第7天，与用对照IgG治疗的移植同种异体BM的小鼠相比较，用B7-H4-Ig治疗的移植同种异体BM的小鼠的腹泻临床评分显著减小。图4B显示与用对照IgG治疗的移植同种异体BM的小鼠相比较，用B7-H4-Ig治疗的移植同种异体BM的小鼠显示降低的体重减轻。图5显示与对照组相比较，用B7-H4-Ig治疗的移植同种异体BM的小鼠的存活期短暂延长。总的说来，这些结果显示，利用优化的剂量方案，B7-H4-Ig有可能用于同种异体BM移植。
除非另作定义，否则本文中使用的所有科技术语都具有与本发明所属领域技术人员通常所了解相同的含义。
所属领域技术人员仅使用常规实验就能认识到或能够确定本文所述的本发明各具体实施例的许多等效物。所述等效物也打算涵盖在以上权利要求书中。
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Claims (22)

1.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制或减少选自由以下组成的群组的免疫细胞的分化、增殖、活性或者细胞因子产生或分泌：Th1、Th17、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述B7-H4蛋白抑制原生T细胞发育成Th17、Th1或Th22细胞。
3.根据权利要求4所述的方法，其中所述B7-H4蛋白抑制所述受试者中的免疫细胞产生INFγ。
4.根据权利要求6所述的方法，其中所述B7-H4蛋白抑制所述受试者中的免疫细胞产生IL-17或IL-22。
5.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少移植物排斥的量抑制或减少选自由以下组成的群组的两种或两种以上类型的免疫细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌：Th1、Th17、Th22或者分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。
6.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白，以有效抑制或减少移植物排斥的量增强Treg对Th17路径的抑制作用。
7.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量促进或增进Treg产生IL-10。
8.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量增加Treg的数量，或增进移入组织区域中Treg细胞的募集或扩增。
9.一种用于抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4蛋白以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量抑制Th1和Th17路径，并对Treg起作用以增强其对所述Th17路径的抑制作用，或者促进或增进Treg对IL-10的分泌。
10.一种用于减少受试者中细胞因子产生的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、B7-H4融合蛋白、B7-H4激动剂抗体或其片段以抑制所述受试者中一种或一种以上细胞因子的产生。
11.根据权利要求1到10中任一权利要求所述的方法，其进一步包含投予第二治疗剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第二治疗剂选自由以下各物组成的群组：糖皮质激素氟替卡松(fluticasone)；沙美特罗(salmeteroal)；针对IL-12、IL-6、IFN-γ、IL-23、IL-22、IL-21和IL-4的抗体；维生素D3；CTLA-4-Ig；贝拉西普(belatacept)；地塞米松(dexamethasone)，和其组合。
13.一种抑制或减少受试者的移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、B7-H4融合蛋白、B7-H4激动剂抗体或其片段以借助相对于对照物有效抑制或减少所述受试者的移植物排斥的量抑制Th0细胞分化成Th1细胞、Th17细胞或Th22细胞中的一者或一者以上。
14.根据权利要求1到13中任一权利要求所述的方法，其中所述移植物是同种异体移植物。
15.根据权利要求1到14中任一权利要求所述的方法，其中所述移植物是皮肤移植物、组织移植物、器官移植物或骨髓移植物。
16.根据权利要求1到15中任一权利要求所述的方法，其中所述B7-H4融合蛋白是在移植之前、移植之后或二者直接投予待移植的细胞、组织或器官。
17.根据权利要求1到15中任一权利要求所述的方法，其中所述B7-H4融合蛋白直接投予免疫器官。
18.一种用于治疗受试者的移植物抗宿主疾病(GVHD)的一种或一种以上症状的方法，其包含对已经接受或将要接受移植物的受试者投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以减轻GVHD的一种或一种以上症状。
19.一种用于治疗糖尿病的方法，其包含将产胰岛素细胞移植到有需要的受试者中，和对所述受试者投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以减轻与糖尿病相关的一种或一种以上症状。
20.一种用于抑制或减少受试者的慢性移植物排斥的方法，其包含对所述受试者投予有效量的B7-H4融合蛋白以相对于对照物抑制或减少慢性移植物排斥。
21.一种用于预测患者排斥移植的可能性的方法，其包含
(a)确定所述患者体内的sH4水平；
(b)将所述患者体内的sH4水平与已进行移植的一个或一个以上其它患者体内的sH4水平相比较以确定在具有(a)中确定的所述sH4水平的其它患者中移植排斥的频率。
22.一种选择移植患者的方法，其包含
(a)根据权利要求21所述的方法；
(b)选择具有30％或更低排斥移植物可能性的患者。
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