CN102645415A - 一种快速检测食品中苋菜红和日落黄含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种快速测定食品中苋菜红和日落黄含量的方法，该方法利用有机溶剂-盐的双水相体系萃取食品中色素，使苋菜红和日落黄萃取到有机相中，进行相分离，用紫外-可见光分光光度法测定有机相中苋菜红和日落黄的含量，本方法检测限为0.05μg/mL，本方法在富集色素的同时，有效分离了基体干扰，且萃取条件温和、操作简单、测定快速、有效，准确等特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，属于食品安全添加剂检测技术。
背景技术
19世纪中叶以前，人们都使用食用天然色素着色，自从1856年英国W.H.PERKINS发明了第一个合成有机色素问世以来，相继合成了许多有机色素。由于这类色素色泽鲜艳，性质稳定，成本低廉，很快就取代了天然色素。随着科学的发展，人们渐渐的发现合成色素对人体的危害。日落黄和苋菜红均为偶氮类色素，是我国允许使用的食用合成色素，由于其能够保持和改善食品的色、香、味，一般有色泽鲜艳、着色力强、坚牢度大、性质稳定、价格低廉等优点，受到商家和消费者的青睐。常用于饮料等食品和药物的着色。但它对人体存在一定的不安全性，有慢性毒性和致癌性，所以对其含量的测定显得尤为重要。根据中国《食品添加剂使用卫生标准》规定在饮料中的最大用量为0.1g/kg。
目前检测色素的方法主要有高效液相色谱法、薄层层析法和分光光度法。高效液相色谱法准确性和灵敏性高，但由于色素对色谱柱的影响大，会降低其寿命，不宜长期使用；薄层层析法简便、快速，但灵敏度低，准确性差。紫外-可见光分光度法是一种常见的分析检测方法，对色素的测定已多见报道。双水相萃取术已广泛应用于生物化学、细胞生物学、生物化学和食品化工等领域，并取得了许多成功的范例，有广阔的工业应用前景。但是利用双水相体系对食用色素进行萃取分离的报道较少见，少见报道的也是以聚合物-盐体系。本发明采用了普通与水互溶的有机溶剂-盐体系萃取食品中色素，结合光度法定量检测，有较温和的操作条件和较高检测灵敏度、快速、准确等特点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速检测食品中色素苋菜红和日落黄含量的方法，为质检部门或生产厂家提供一种快速、准确、直观的定性和定量的测定方法。
本发明方法通过如下方案实现本发明目的：
（1）工作曲线的制作：分别取1.0-5.0ml浓度为1-30μg/ml的苋菜红和1.0-5.0ml浓度为1-9μg/ml日落黄色素标准溶液，放入10ml比色管中，用蒸馏水稀释至刻度，用紫外可见分光光度计测定色素标准溶液的吸光度，制作工作曲线，得到线性回归方程；
（2）样品处理
I、液体样品：取1.0-5.0ml液体食品于10ml具塞离心管中，加入萃取剂和盐，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心，移除下层溶液，取上层有机相，测定吸光度；
II、固体样品：取0.500-2.000g固体食品，用3-5ml蒸馏水、无水乙醇、无水乙醇与氨水溶液中的一种，分两次提取色素，合并提取液并转移至10mL具塞离心管中，加入萃取剂和盐，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心，移除下层溶液，取上层有机相，测定吸光度；
（3）根据步骤（1）的线性回归方程，计算得到食品中色素的含量。
本发明中步骤（1）中苋菜红和日落黄的检测波长分别520nm和440nm。
本发明中萃取剂为乙腈、异丙醇、乙醇中的一种，添加量为1.5-2.5ml。
本发明中盐为NaCl、（NH4）2SO4、NH4Cl、MgSO4、Na2SO4中的一种，添加量为0.8-2.0g。
本发明中无水乙醇与氨水溶液是无水乙醇与氨水按1:1-1:3的比例混合后的溶液。
本发明中离心速率2000-5000r／min，离心时间5-15min。
本发明的优点在于：
1、使用盐析萃取作为样品富集的前处理方法，使得检出限大大的降低，能更精确的检测食品中的色素日落黄和苋菜红。
2、由于物质对于光的吸收具有选择性，所以对不同的食用色素有不同的吸收波谱。利用这个原理，应用紫外-可见光分光光度计对日落黄和苋菜红色素进行吸收光谱扫描，并与标准谱图对照，就能直观、快速的定性。由于色素日落黄和苋菜红的最大吸收峰波长相差较大，测定基本无干扰，灵敏度和准确性均较高。
3、本发明的操作方法简单、计算简便、结果明显，所用仪器价格便宜，检测成本低廉，适合生产一线使用，是一种针对色素日落黄和苋菜红的检测方法，为质检部门和生产企业提供快速、简便、直观、经济的定性和定量测定。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1：利用本发明方法检测醒目葡萄味饮料中日落黄和苋菜红的含量，具体步骤如下：
1、工作曲线制作：取1.00、2.50、5.00、20.00、30.00μg/ml苋菜红标准溶液3.0ml，放入10ml比色管中，用蒸馏水稀释至刻度，在520nm波长处测定吸光度；取1.00、3.00、5.00、7.00、9.00μg/mL日落黄3.0ml， 放入10ml比色管中，用蒸馏水稀释至刻度，在440nm波长处测定吸光度；制作工作曲线，得到的回归方程、摩尔吸光系数、相关标准偏差、回收率等见表1。
表1：色素的线性回归方程和相关结果
2、样品处理
取1.00ml醒目葡萄味饮料于10ml具塞离心管中，在水浴中加热5min除去C02，加入1.8ml乙腈和0.8g NaCl，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，4000r/min离心8 min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相分别在520nm和440nm波长下测定吸光度，根据表1得到的工作曲线，计算得到醒目葡萄味饮料中日落黄和苋菜红的含量分别为0.0049mg/ml和0.0201mg/ml。
实施例2：利用本发明方法检测碳酸饮料中日落黄的含量，具体步骤如下：
1、工作曲线制作：取1.00、3.00、5.00、7.00、9.00μg/mL日落黄1.0ml，放入10ml比色管中，用蒸馏水稀释至刻度，在440nm波长处测定吸光度；得到线性回归方程为A=0.00326C(mg/ml)-0.027（其中C为吸光度），摩尔吸光系数3.0×104 L/mol·cm。
2、将碳酸饮料超声20min，充分去除二氧化碳，取1.00ml饮料于10ml具塞离心管中，加入1.5ml异丙醇和1.0g（NH4）2SO4，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，3500r/min离心10 min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相在440nm波长下测定吸光度，根据步骤1得到的线性回归方程，计算得到碳酸饮料中日落黄的含量为0.0021mg/ml。
实施例3：利用本发明方法检测蛋卷中日落黄和苋菜红的含量，具体步骤如下：
1、工作曲线制作：方法同实施例1步骤1中方法。
2、取1.000g蛋卷，用无水乙醇与氨水（体积比1：1）混合液6ml分两次提取其中色素，合并提取液，置于10ml具塞离心管中，加入2.0mL乙醇和1.2g Na2SO4，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，2000r/min离心15min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相分别在520nm和440nm波长下测定吸光度，根据步骤1中得到的工作曲线，计算得到蛋卷中日落黄和苋菜红的含量分别为0.00052mg/ml和0.0048mg/ml。
实施例4：利用本发明方法检测饮料中苋菜红的含量，具体步骤如下：
1、工作曲线制作：取1.00、2.50、5.00、20.00、30.00μg/ml苋菜红5.0ml，放入10ml比色管中，用蒸馏水稀释至10ml刻度，标准溶液在520nm波长处测定吸光度；得到线性回归方程为A=0.0578C(mg/ml)-0.0035（其中C为吸光度），摩尔吸光系数3.0×104 L/mol·cm。
2、取1.00ml饮料于10ml具塞离心管中，在水浴中加热5min除去C02，加入2.5ml乙腈和2.0g NH4Cl，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，5000r/min离心5 min，用吸管移除下层溶液，取上层有机相在520nm波长下测定吸光度，根据表步骤1得到的线性回归方程，计算得到饮料中苋菜红的含量0.0450mg/ml。
Claims (6)
1.一种快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）工作曲线的制作：分别取1.0-5.0mL浓度为1-30μg/mL的苋菜红和1.0-5.0mL浓度为1-9μg/mL日落黄色素标准溶液，放入10mL比色管中，用蒸馏水稀释至刻度，用紫外可见分光光度计测定色素标准溶液的吸光度，制作工作曲线，得到线性回归方程；
（2）样品处理
I、液体样品：取1.0-5.0ml液体食品于10ml具塞离心管中，加入萃取剂和盐，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心，移除下层溶液，取上层有机相，测定吸光度；
II、固体样品：取0.500-2.000g固体食品，用3-6ml蒸馏水、无水乙醇、无水乙醇与氨水溶液中的一种，分两次提取色素，合并提取液并转移至10ml具塞离心管中，加入萃取剂和盐，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，离心，移除下层溶液，取上层有机相，测定吸光度；
（3）根据步骤（1）的线性回归方程，计算得到食品中色素的含量。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于：苋菜红和日落黄的检测波长分别520nm和440nm。
3.根据权利要求1所述的快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于：萃取剂为乙腈、异丙醇、乙醇中的一种，添加量为1.5-2.5ml。
4.根据权利要求1所述的快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于：盐为NaCl、（NH4）2SO4、NH4Cl、MgSO4、Na2SO4中的一种，添加量为0.8-2.0g。
5.根据权利要求1所述的快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于：无水乙醇与氨水溶液是无水乙醇与氨水按体积比1：1-1：3的比例混合后的溶液。
6.根据权利要求1所述的快速检测食品中的苋菜红和日落黄含量的方法，其特征在于：离心速率为2000-5000r／min，离心时间5-15min。
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|---|---|
| CN (1) | CN102645415A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103063596A (zh) * | 2012-12-31 | 2013-04-24 | 攀钢集团西昌钢钒有限公司 | 一种检测低焦油焦炉煤气中的焦油含量的方法 |
| CN103293119A (zh) * | 2013-05-24 | 2013-09-11 | 淮海工学院 | 一种快速检测食品中的苋菜红和亮蓝含量的方法 |
| CN103499544A (zh) * | 2013-10-14 | 2014-01-08 | 无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司 | 一种食品中日落黄含量超标的快速检测方法 |
| CN106404702A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-02-15 | 福建紫金矿冶测试技术有限公司 | 一种快速测定氰化液中金量的检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001172143A (ja) * | 1999-12-17 | 2001-06-26 | Fancl Corp | 染毛組成物 |
| CN101531652A (zh) * | 2009-04-17 | 2009-09-16 | 大连理工大学 | 一种新型双水相萃取越桔中花青素的方法 |
| CN102133298A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-07-27 | 沈阳药科大学 | 一种双水相萃取白英中总皂苷的方法 |
-
2012
- 2012-04-13 CN CN2012101070464A patent/CN102645415A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001172143A (ja) * | 1999-12-17 | 2001-06-26 | Fancl Corp | 染毛組成物 |
| CN101531652A (zh) * | 2009-04-17 | 2009-09-16 | 大连理工大学 | 一种新型双水相萃取越桔中花青素的方法 |
| CN102133298A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-07-27 | 沈阳药科大学 | 一种双水相萃取白英中总皂苷的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 夏立娅 等: "食品中碱性橙、皂黄、丽春红2M等色素的同时薄层色谱定性分析", 《食品工业科技》 * |
| 李紫薇 等: "分光光度法同时测定饮料中的苋菜红和柠檬黄", 《伊犁师范学院学报（自然科学版）》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103063596A (zh) * | 2012-12-31 | 2013-04-24 | 攀钢集团西昌钢钒有限公司 | 一种检测低焦油焦炉煤气中的焦油含量的方法 |
| CN103293119A (zh) * | 2013-05-24 | 2013-09-11 | 淮海工学院 | 一种快速检测食品中的苋菜红和亮蓝含量的方法 |
| CN103499544A (zh) * | 2013-10-14 | 2014-01-08 | 无锡艾科瑞思产品设计与研究有限公司 | 一种食品中日落黄含量超标的快速检测方法 |
| CN106404702A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-02-15 | 福建紫金矿冶测试技术有限公司 | 一种快速测定氰化液中金量的检测方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120822 |