CN102640927A

CN102640927A - 刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用

Info

Publication number: CN102640927A
Application number: CN2012101535635A
Authority: CN
Inventors: 谢静莉; 方明; 王波; 杜磊; 李鹏; 吴燕玲; 李莹; 束雯婷; 张旭晟; 邓高静
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2012-05-15
Filing date: 2012-05-15
Publication date: 2012-08-22

Abstract

本发明公开了一种刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。优选的，所述刀额新对虾为刀额新对虾的肉糜经模拟胃液、模拟胃肠液和蛋白酶水解后的产物。本发明为刀额新对虾的开发利用开辟了一条新途径，具有一定的应用前景。

Description

刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用

技术领域

本发明属于食品领域，具体地说，是关于刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶（Angiotensin Converting Enzyme，ACE）抑制剂的应用。

背景技术

刀额新对虾（英文：Metapenaeus ensis，拉丁文异名：Penaeusmonoceros、Penaeus mastersis、Penaeus incisipes、Metapenaeus monoceros），俗称基围虾、沙虾，是一种海水中型虾类，在我国福建、台湾、广东、海南省等海域均有分布。近年来，在上海、福建、广东等省份养殖发展较快，特别是利用该虾能耐受低盐度的特性，开展了淡水养殖试验并取得初步成功。

刀额新对虾的营养价值较高，主要营养成分如下表1所示：

表1、刀额新对虾的主要营养成分

血管紧张素系统转化酶（angiotensin converting enzyme，ACE EC 3.4.15.1）能将血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，这是肾素-血管紧张素系统中已知最强的血管收缩剂，能够升高血压。在激肽释放酶-激肽系统（简称KKS）中，血管紧张素转化酶水解舒缓激肽，分解成为非活性的多肽，舒缓激肽是降压成分，从而引起血压升高。

ACE是一种金属肽酶，含有2个结合Zn²⁺的位点，即所谓“必须结合位点（Obligatory Binding Site）”。Zn²⁺结合位点是ACE催化反应的活性基团所在部位。各种ACE抑制物的共同作用是与ACE活性部位的Zn²⁺结合，使之失活。

降血压肽是对血管紧张素转化酶活性区域亲和力较强的竞争性抑制剂，它们与血管紧张素转化酶的亲和力比血管紧张素或舒缓激肽更强，而且也较不容易从血管紧张素转化酶结合区释放，从而阻碍血管紧张素转化酶催化水解血管紧张素成为血管紧张素以及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起到降血压的作用。

到目前为止，未发现有关于利用刀额新对虾制备ACE抑制物或降血压药物的专利。

发明内容

本申请的发明人在海鱼和虾类食品的降血压效果的过程中发现，刀额新对虾的水解产物具有血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性。

因此，本发明的目的在于提供一种刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。

根据本发明，所述刀额新对虾为刀额新对虾的肉糜经模拟胃液、模拟胃肠液和蛋白酶水解后的产物。

根据本发明的优选实施例，所述模拟胃液包括胃蛋白酶。

根据本发明的优选实施例，所述模拟胃液水解的pH为1.8。

根据本发明的优选实施例，所述模拟胃肠液包括胃蛋白酶和胰蛋白酶。

根据本发明的优选实施例，所述模拟胃肠液水解的pH为7.5。

根据本发明的优选实施例，所述蛋白酶选自：胃蛋白酶、胰蛋白酶。

根据本发明的优选实施例，所述胃蛋白酶水解的pH为3~5。

根据本发明的优选实施例，所述胰蛋白酶水解的pH为7.5~10。

基于刀额新对虾具有抑制血管紧张素转化酶活性的作用，刀额新对虾可进一步用于开发具有降血压功能的食品或保健品。

本发明为刀额新对虾的开发利用开辟了一条新的途径，具有一定的应用前景。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明的降血压多肽的制备方法作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于实施本发明而非用于限定本发明的范围。

以下实施例中，ACE抑制活性的测定原理及方法步骤如下：

刀额新对虾蛋白水解物（多肽）的ACE抑制活性测定采用体外模拟测定，体外ACE抑制率测试原理为：底物马尿酰组氨酰亮氨酸（HHL）在酶ACE的催化作用下，可以生产马尿酸（Hip）和二肽，通过液相的方法测定马尿酸的含量，进而可以间接测定ACE酶的酶活；而ACE抑制剂的存在可以抑制ACE酶的活性，致使Hip的生成减少，从而间接反映了ACE抑制肽的活性。

测试方法步骤如下：选取EP管作为反应器，编号0、1、2、3等，0号管加入50μL去离子水为对照，1、2、3等管加入50μL的ACE抑制剂，同时各管内加入50μL的底物HHL，37℃温浴5min,然后加入10μL的ACE启动反应，在37℃水浴中反应40min，反应结束后，加入100μL 1M HCl终止反应。反应液进行高速离心，过4.5μm的滤头，然后进行高效液相色谱（HPLC）测定。HPLC条件是：15%乙腈：85%水（0.1%TFA），检测波长228nm，柱温30℃，上样量10μL；

ACE抑制率（X）按下式计算：

X=(A对照-A1)/A对照×100%

式中：X--ACE抑制率（%）

A对照--对照组生成Hip的峰面积

A1--实验组生成Hip的峰面积

实施例1-14、刀额新对虾多肽水解物的制备

取熟刀额新对虾，去壳，去头，取虾肉，用粉碎机打碎至粉末状，收集粉末。

按照以下方法制备模拟胃液和模拟肠液：

模拟胃液：取1.0g NaCl、1.6g胃蛋白酶、3.5ml浓盐酸，用双蒸水定容至500ml。

模拟肠液：取6.8gKH₂PO₄溶于250ml双蒸水中，混匀振荡，加入190ml0.2mol/L NaOH和400ml双蒸水，加入胰蛋白酶（0.2519g），混匀，用0.2mol/LNaOH调整pH值7.5±0.1，定容至1000ml。

按表2所示，对获得的刀额新对虾粉分别进行不同的蛋白酶水解、模拟胃液水解和模拟胃肠液水解，具体如下：

模拟胃液水解：称取10g粉末加入50ml模拟胃液，按照表2的水解条件，在相应的温度下水浴0.25~4hr，煮沸15min灭活酶，水解物离心（12000r/min，10min），收集水解液上清液。

模拟胃肠液水解：在模拟胃液水解之后，将水解液调节pH值至7.5，加入50ml模拟肠液在37℃下水浴，每隔半小时左右摇晃一次。5hr后将锥形瓶从水浴中取出，在沸水中加热10min灭活，水解物离心（12000r/min，10min），收集水解液上清液。

蛋白酶水解：称取10g粉末加100ml去离子水，按照表2的胃蛋白酶和胰蛋白酶水解条件，调pH值至相应的酶反应pH条件，加入相应的酶0.1%（w/v），在相应的反应温度下水浴酶解10min，搅拌，煮沸灭酶终止反应，水解物离心（12000r/min，10min），收集上清液。

表2、模拟胃液、模拟胃肠液和蛋白酶水解条件

实施例	酶或模拟体液	温度（℃）	pH	时间(hr)
					1	模拟胃液	37	1.8	0.25
2	模拟胃液	37	1.8	0.5
					3	模拟胃液	37	1.8	2
4	模拟胃液	37	1.8	4
					5	模拟胃肠液	37	7.5	0.25+5
6	模拟胃肠液	37	7.5	0.5+5

7	模拟胃肠液	37	7.5	2+5
					8	模拟胃肠液	37	7.5	4+5
9	胃蛋白酶	37	3	0.17
					10	胃蛋白酶	37	4	0.17
11	胃蛋白酶	37	5	0.17
					12	胰蛋白酶	37	7.5	0.17
13	胰蛋白酶	37	8	0.17
					14	胰蛋白酶	37	10	0.17

注：实施例5-8中，模拟肠液水解时间为5小时，分别依次对应实施例1-4的模拟胃液水解液进行进一步操作。

实施例15-28、ACE抑制活性的测定

分别取实施例1-14中的刀额新对虾肉糜水解液，稀释五倍后，采取体外模拟测定方法对ACE抑制活性进行测定，结果如以下表3所示：

表3、ACE抑制活性

实施例	ACE抑制率（%）
		1	96.3
2	94.9
		3	95.7
4	95.0
		5	95.4
6	90.5
		7	91.4
8	92.4
		9	86.9
10	77.9
		11	77.5
12	89.6
		13	90.6

14

76.6

由表3的结果可见：对于不同的反应时间，从0.17小时开始，刀额新对虾就能释放降血压肽，并且反应时间越长，ACE抑制活性越高；不同的水解方法（模拟胃液、模拟胃肠液、不同pH的胃蛋白酶和胰蛋白酶）得到的水解液，都具有较高的ACE抑制活性，各酶在其最适ph范围内水解底物得到的生物肽抑制活性高，另以酶与底物用量比例来看，胰蛋白酶要比胃蛋白酶更高效一些；一个值得注意的现象是，经过模拟胃液消化的酶解液，再经模拟肠液消化后，其ACE抑制活性有一定的减弱。但总的来说，各种方法所得到的酶解液均具有较高的ACE抑制活性，说明刀额新对虾的水解物具有ACE抑制活性。

综上所述，本发明提供的刀额新对虾仁的模拟胃液水解物，模拟胃肠液水解物，不同pH的胃蛋白酶和胰蛋白酶水解物对血管紧张素转化酶（ACE）均具有明显的抑制活性，因而可以用于制备ACE抑制剂，或者进一步用于制成具有降血压功能的食品或保健品，这对于本领域的技术人员来说是显而易见的。

Claims

1.刀额新对虾用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述刀额新对虾为刀额新对虾的肉糜经模拟胃液、模拟胃肠液和蛋白酶水解后的产物。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述模拟胃液包括胃蛋白酶。

4.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述模拟胃液水解的pH为1.8。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述模拟胃肠液包括胃蛋白酶和胰蛋白酶。

6.如权利要求2或5所述的应用，其特征在于，所述模拟胃肠液水解的pH为7.5。

7.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白酶选自：胃蛋白酶、胰蛋白酶。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胃蛋白酶水解的pH为3~5。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胰蛋白酶水解的pH为7.5~10。

10.刀额新对虾用于制备降血压食品或保健品的应用，其特征在于，所述降血压食品或保健品用于抑制血管紧张素转化酶的活性。