CN102618517A - 不动杆菌的zen毒素降解酶及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了不动杆菌的ZEN毒素降解酶及其编码基因与应用。不动杆菌的ZEN毒素降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。不动杆菌的ZEN毒素降解酶的编码基因的序列如SEQ ID NO.5所示。本发明的不动杆菌ZEN毒素降解酶对真菌毒素玉米赤霉烯酮有较强的降解能力，可在12h内将90％以上的ZEN降解成低雌激素活性产物，不生成玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇等高雌激素活性类似物，具有真正的脱毒效果。本发明确定了Acinetobacter sp.SM04的玉米赤霉烯酮毒素降解酶编码序列，即Prx基因，为将来研究酶的活性位点和通过定点突变改变Prx酶活奠定了基础。

Description

不动杆菌的ZEN毒素降解酶及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及不动杆菌Acinetobacter sp.SM04的玉米赤霉烯酮毒素降解酶及其编码基因与应用。

背景技术

玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEA，ZEN)是一种具有二羟基苯甲酸内酯结构的雌激素类真菌毒素，由玉米赤霉菌、禾谷镰刀菌、三线镰刀菌等菌产生，主要污染小麦、大麦、燕麦、玉米等农作物。全世界每年约有25％的农作物被霉菌毒素污染，我国食品和饲料工业平均每年因霉变所致损失总产量10％以上。从全国仓库和饲料厂中抽样检测，发现玉米等农作物和饲料中ZEN的检出率高达100％，检出浓度超标严重。ZEN会引起种猪或家禽早熟，生殖周期紊乱，给种猪等养殖业带来巨大的损失。而且，人摄入被ZEN污染的农、畜产品可引发多种中毒症、中枢神经受损，甚至死亡。因此，防止农作物和饲料的霉变与霉变后脱毒处理是食品储藏和食品加工过程中不可或缺的环节。

目前对于霉变的处理，国内没有理想的脱毒剂。粮食厂、饲料厂等每年至少需购买2亿元进口霉菌吸附类解毒剂，但这类解毒剂并不能真正将毒素降解成无毒物，而且ZEN残留时间长、难处理，已引起国内外科研工作者的极大关注。FAO和世界卫生组织已将解决ZEN问题作为全世界的当务之急，各国对粮食中ZEN含量有严格限量标准，因此，研究具有自主知识产权、经济有效、不破坏农作物和饲料原有营养成分的ZEN脱毒技术具有重要深远的意义，符合国民经济和社会发展的趋势。

生物降解是利用自然界存在的微生物分解物质，对环境不会造成负面影响。目前报道的具有ZEN降解能力的菌株，包括有Fusarium oxysporum，Agrobactgerium tumefaciens，Clonostachys sp.，Gliocladium roseun，EubacteriumBBSH 797，Trichosporon mycotoxinivorans等，人们从中发现了各种对ZEN有降解能力的酶。因ZEN是二羟基苯甲酸内酯，人们筛选到一些内酯水解酶，认为内酯键的打开可将ZEN的球形结构打开变成直链形结构，使之不能与雌激素受体结合，从而消除其高雌激素症。

例如Michihiko等用外消旋的泛酰内酯作底物从农杆菌中筛选到新的内酯水解酶Agrobacterium tumefaciens AKU316，能高效、特异地水解泛酰内酯和镰刀菌属的内酯(Michihiko K，JunichiN，et al.Purification and characterization of a novellactono hydrolase from agrobacterium tumefaciens.Biosci.Biotechnol.Biochem.，2000，64(6)：1255-1262.)。

Jan等从Gliocladium roseum中发现针对ZEN的特异性内酯酶zes2，该酶可除去碳酸基，催化ZEA水解成无毒物(Jan U，Petr K.Role of zearalenone lactonaseinprotection of gliocladium roseum from fungitoxic effects of the mycotoxinzearalenone.Applied and Environmental Microbiology，2007，73(2)：637-642.)。

Naoko等克隆了ZEN内酯水解酶zhd101，并在大肠杆菌成功表达(Naoko T A，Shuichi O，Takehiko S，et al.Metabolism of zearalenone by genetically modifiedorganisms expressing the detoxification gene from clonostachys rosea.Applied andEnvironmental Microbiology，2004，70(6)：3239-3249.)。

但酯键的水解并不能完全降解ZEN，该反应仍然可逆。János从根霉属菌和毛霉菌等丝状真菌中鉴定了与ZEN降解有关的酶和基因，并转入其它微生物用于饲料的脱毒(JánosVarga，ZsanettPéteri，KatalinTábori，et al.Degradation ofochratoxin A and other mycotoxins by Rhizopusisolates.Food Microbiology，2005，99(3)：321-328.)。

以上ZEN降解酶作用速率较低，功能不强。而且，对已发现微生物代谢物进行分析后，发现大部分菌都是将ZEN转化成α或β型的ZEN或玉米赤霉烯醇，这些产物的雌激素毒性与ZEN相似或更甚，这种降解不能称为真正的脱毒。因此，发掘可以高效、安全降解玉米赤霉烯酮的功能菌株具有重要意义。

上述文献报道为不动杆菌ZEN降解酶基因克隆的引物设计及基因测序的同源性比较提供了依据，但不动杆菌ZEN降解酶基因序列至今未见报道和申请专利。

中国专利申请201210016172.9要求保护一株不动杆菌菌株Acinetobacter sp.SM04及其在降解玉米赤霉烯酮中的应用，该菌对真菌毒素玉米赤霉烯酮有较强的降解能力，可在12h内将90％以上的ZEN降解成低雌激素活性产物，不生成玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇等高雌激素活性类似物，具有真正的脱毒效果。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供不动杆菌的ZEN毒素降解酶。

本发明的另一目的在于提供上述不动杆菌的ZEN毒素降解酶的编码基因。

本发明的再一目的在于提供上述不动杆菌的ZEN毒素降解酶的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

不动杆菌的ZEN毒素降解酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

不动杆菌的ZEN毒素降解酶的编码基因，其序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明通过培养不动杆菌Acinetobacter sp.SM04，从其培养上清液中分离、纯化得到ZEN降解酶，经过SDS-PAGE和MALDI-TOF-TOF/MS分析和鉴定得到该ZEN降解酶的两段特异性氨基酸序列。

基于MALDI-TOF-TOF/MS酶蛋白分析鉴定的蛋白序列，设计引物扩增Acinetobacter sp.SM04ZEN降解酶基因的部分序列，采用High-efficiencyTail-PCR技术多次扩增、拼接后，得到该酶的全基因核苷酸序列和氨基酸序列，并对该基因进行表达和蛋白功能的验证。

实验结果表明：本发明的不动杆菌的ZEN毒素降解酶能将ZEN降解为低雌激素代谢产物；本发明不动杆菌的ZEN毒素降解酶的编码基因其重组表达产物亦能有效降解ZEN。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、本发明的不动杆菌ZEN毒素降解酶对真菌毒素玉米赤霉烯酮有较强的降解能力，可在12h内将90％以上的ZEN降解成低雌激素活性产物，不生成玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇等高雌激素活性类似物，具有真正的脱毒效果。

2、本发明确定了Acinetobacter sp.SM04的玉米赤霉烯酮毒素降解酶编码序列，即Prx基因，为将来研究酶的活性位点和通过定点突变改变Prx酶活奠定了基础。

附图说明

图1是Acinetobacter sp.SM04的M1培养物上清液的Sephadex G-50柱洗脱液各组分的蛋白质吸收峰图谱；组分17为ZEN降解酶峰。

图2是处理液中ZEN的含量变化图。

图3是Prx基因在E.coli中诱导表达的实验结果图；泳道M：蛋白标准分子量marker(14.4kDa～98kDa)；泳道A：未诱导的BL21(DE3)+Prx菌体粗酶蛋白；泳道B：IPTG诱导的BL21(DE3)+Prx菌体粗酶蛋白；泳道C：纯化后的重组Prx。

图4是重组E.coli表达的Prx在不同H₂O₂浓度下降解ZEN的效率。

图5是重组质粒pYα-Prx的双酶切检测电泳图；泳道M：DNA标准分子量marker(100bp～1500bp)；泳道1：重组质粒pYα；泳道2：重组质粒pYα-Prx。

图6是Prx基因在S.cerevisiae中诱导表达的实验结果图；泳道M：蛋白标准分子量marker(14.4～98kDa)；泳道1：INVSc1菌株诱导表达上清液；泳道2：重组菌株INVSc1-Prx，诱导24h，上清；泳道3：重组菌株INVSc1-Prx，诱导48h，上清；泳道4：重组菌株INVSc1-Prx，诱导72h，上清。

图7是重组酿酒酵母表达的Prx酶蛋白降解ZEN的色谱图；A：ZEN标准品；B：重组Prx酶蛋白+ZEN，反应时间0h；C：重组Prx酶蛋白+ZEN，反应时间12h。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造商所建议的条件。

实施例1

不动杆菌ZEN降解酶的制备，包括以下步骤：

(1)从不动杆菌Acinetobacter sp.SM04培养上清液中纯化ZEN降解酶

1、将接种有1％(v/v)Acinetobacter sp.SM04菌悬液(OD600＝0.8)的培养物(M1培养基)在30℃的气浴摇床中培养(200r/min)36h至对数生长末期，将液体培养物离心5min(12000×g，4℃)，离心后的上清液用0.22μm滤膜过滤，滤过液在50℃使用真空旋转蒸发仪浓缩5倍；

所用培养基的配方如下：

基本无机盐培养基：3g NH₄NO₃、1.5g K₂HPO₄·3H₂O、1g KCl、0.5gMgSO4·7H₂O、0.1g CaCl₂和10mL微量元素储备液混合后，加去离子水定容到1000mL，pH7.3。

微量元素储备液：2g/L FeSO₄·7H₂O，0.4g/L MnSO₄·4H₂O，0.4g/LCuSO₄·5H₂O，0.4g/L CoCl₆·6H₂O和0.5g/L ZnCl₂。

M1培养基：15g乙酸钠和1000mL基本无机盐培养基混合，调节pH为7.3。

2、将浓缩液加入Sephadex G-50柱(2.0cm×25cm)中，用去离子水洗脱(流速为0.5mL/min)，分段收集，测定各管组分的A260nm值和ZEN降解酶活力。合并ZEN降解酶活力高的各管。

3、用DEAE Sephadex A-50柱(2.0cm×20cm)进一步纯化步骤(1)-2获得的ZEN降解酶组分，用磷酸钠盐缓冲液进行pH梯度洗脱，分段收集，分别测定各管组分的ZEN降解酶活力。合并ZEN降解酶活力高的管。

各管组分的ZEN降解酶活力测定方法如下：

将0.40mL各管收集液、0.10mL 0.25mol/L的Tris-HCl(pH8.5)缓冲液和20μL 0.5mol/L H₂O₂溶液混合均匀，添加10μL ZEN甲醇储备液(ZEN浓度为1mg/mL)，置于40℃恒温水浴温育12h，添加0.5mL甲醇中止反应，在12000×g下离心5min，取30μL上清液用HPLC检测其ZEN残量。以去离子水作为空白对照。结果以相对降解活力表示，相对降解活力(％)＝(ZEN的添加量-处理后ZEN的残留量)/ZEN的添加量×100。

高效液相色谱(HPLC)检测ZEN的条件：色谱柱采用Waters XTerra^R MS C18柱(4.6×150mm，5μm)。流动相为乙腈∶水∶甲醇＝46∶46∶8。柱温30℃，流量为1ml/min。结果采用荧光检测器，激发波长274nm，发射波长450nm。采用外标法定量ZEN的浓度，计算各组分的降解效率。

4、将步骤(1)-3获得的ZEA降解酶组分再次用Sephadex G-50柱纯化，纯化条件与步骤(1)-2相同。测定各管组分的A260nm值，其吸收峰见图1。然后收集各吸收峰测定其ZEN降解活力确定ZEN降解酶组分。

(2)ZEN降解酶的分析及鉴定

1、步骤(1)最终得到的ZEN降解酶组分用12.5％SDS-PAGE凝胶电泳分析，考马斯亮蓝染色后，取出凝胶中蛋白条带进行酶解(50％乙腈，25mmol/LNH₄HCO₃，0.02μg/μL胰蛋白酶，25mmol/L NH₄HCO₃，10％乙腈的水溶液，37℃，16h)，将酶解上清液萃取冻干。

2、完全冻干的样品重新用0.1％三氟乙酸水溶液溶解，然后使用MALDI-TOF-TOF质谱仪进行分析，结果见表1。

表1 Acinetobacter sp.SM04中ZEN降解酶的鉴定结果

实施例2

ZEN降解酶降解ZEN的效率检测

以实施例1步骤(1)中的ZEN降解酶活力测定方法为基础，取实施例1步骤(1)最后得到的ZEN降解酶，测定在不同处理时间下处理液中ZEN的含量变化，结果见图2。

从图2可以看出，纯化的ZEN降解酶利用H₂O₂氧化降解ZEN的降解速率相对较慢，可在12h内降解90％以上的ZEN，根据斜率推算出其氧化降解ZEN的速率约为1.6μgmL^-1h^-1。

实施例3

ZEN被ZEN降解酶降解后产物的雌激素活性检测

将0.40mL实施例1步骤(1)最后得到的ZEN降解酶、0.10mL0.25mol/L的Tris-HCl(pH8.5)缓冲液和20μL 0.5mol/L H₂O₂溶液混合均匀，添加10μL ZEN甲醇储备液(1mg/mL)，置于40℃恒温水浴温育12h，添加0.5mL甲醇中止反应。

上述的反应产物(即实验组)用来进行MCF-7细胞增殖率测试。用不添加ZEN的处理组和ZEN溶液(10μL 1mg/mL的ZEN甲醇储备液与0.14mL 0.25mol/LTris-HCl(pH8.5)缓冲液和20μL 0.5mol/L H₂O₂溶液混合均匀)作对照组。

MCF-7人乳腺癌细胞购买自中国科学院细胞库。MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验方法见文献Cetin Y.，Bullerman L.B.Cytotoxicity of Fusariummycotoxins tomammalian cell cultures as determined by the MTT bioassay[J].Food andChemical Toxicology，2005，43：755-764。

实验结果：12h后，实验组MCF-7细胞的增殖百分比为3.2±1.4％，处理组MCF-7细胞的增殖百分比为1.2±0.7％，均未表现出对MCF-7细胞有增殖作用，而对照组MCF-7细胞的增殖百分比高达86±0.8％。

上述结果证明：Acinetobacter sp.SM04的ZEN降解酶可将ZEN降解为低雌激素代谢产物。

实施例4

ZEN降解酶基因的克隆

(1)提取不动杆菌Acinetobacter sp.SM04的DNA

取培养至对数期的不动杆菌Acinetobacter sp.SM04细胞，先加入567μL的TE缓冲液，再加入30μL 10％SDS和15μL的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h。加入100μL 5mol/L NaCl，充分混匀，再加入80μL CTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。

加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min，将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合沉淀DNA。用1mL的70％乙醇洗涤后，离心，弃乙醇，风干。将DNA悬于无菌水或50μL TE缓冲液中溶解，-20℃保存备用。

(2)ZEN降解酶编码基因的获得

1.引物设计

基于MALDI-TOF-TOF/MS酶蛋白分析鉴定的蛋白序列，利用PrimerPremier5.0引物设计软件设计了以下简并引物来扩增Acinetobacter sp.SM04 ZEN降解酶基因的部分序列，引物交由上海生工生物工程公司合成。

简并引物1：5’-GTWGCTTCGCCTTCTTTCCATTT-3’

简并引物2：5’-AATCCAAATCGTWGARHTNAAYGC-3’

2、酶基因的获得

(1)PCR参数设置：以Acinetobacter sp.SM04的DNA为反应模板，98℃预变性1min，94℃30s，52℃30s，72℃1.0min，保持30个循环，72℃保温10min。

(2)将PCR扩增到的产物用T₄连接酶连接到pMD^TM18-T载体上并测序，测序结果用NCBI BLAST search program分析。分析结果表明，PCR获得的400bp的核苷酸序列与Acinetobacter属的Peroxiredoxin有很高的同源性，因此可以确定本发明的ZEN降解酶为过氧化物酶。

(3)采用Lie et al.的High-efficiency Tail-PCR技术扩增上述目标核酸序列的两端侧翼序列，获得的侧翼序列经测序和拼接后，使用NCBI BLAST Search和Expasy Search程序来分析核酸序列和理论氨基酸序列。Acinetobacter sp.SM04过氧化物酶基因Prx的序列见SEQ ID NO.5，Acinetobacter sp.SM04过氧化物酶的氨基酸序列见SEQ ID NO.6。

实施例5

ZEN毒素降解酶Prx基因在大肠杆菌中的表达和鉴定

(1)构建表达载体

根据实施例4得到的ZEN降解酶编码基因设计引物，引物包含酶切位点(NdeI、XhoI)，引物如下：

引物1：5-CTGTATACATATGAGCTTGATTAATACTGAAGT-3  ----NdeI

引物2：5-TAGGCTGCTCGAGTTAGATTTTACCAACTAAGTCG-3  ----XhoI

PCR模板和条件同实施例4；

得到扩增产物后，用NdeI和XhoI分别双酶切PCR产物和pET-31b(+)载体，将酶切后的PCR产物(包含Prx的开放阅读框)纯化，并用T₄DNA连接酶连接到pET-31b(+)载体中，转入感受态E.coLi DH5α。挑取单菌落，接种于LB液体培养基(含50μg/mL氨苄青霉素)中，使用菌落PCR和测序的方法来检测转化结果。成功转入pET-31b(+)的细胞即为E.coLi BL21(DE3)+Prx转化子。

(2)诱导表达

将E.coLi BL21(DE3)+Prx转化子培养于LB氨苄抗性培养基中(37℃，250r/min)，OD₆₀₀值达到0.5后，添加0.5mmol/L IPTG，继续培养4h。将培养液纯化(纯化步骤同实施例1步骤(1))后得到ZEN毒素降解酶。

(3)表达产物SDS-PAGE分析

取步骤(2)得到的ZEN毒素降解酶1mL，SDS-PAGE电泳(2×SDS上样缓冲液，100℃，5min，12000r/min)。电泳结束后，采用考马斯亮蓝法对凝胶进行染色，脱色分析。

SDS-PAGE蛋白电泳液：10％(W/V)SDS溶液；1％TEMED(V/V)四甲基乙二胺；10％AP(W/V)；

样品溶解液：2％SDS，5％巯基乙醇，10％甘油，0.02％溴酚蓝，0.01mol/LpH8.0Tris-HCl缓冲液；

凝胶贮液：30％分离胶贮液，10％浓缩胶贮液；

凝胶缓冲液：分离胶缓冲液(3.0mol/L pH8.9Tris-HCI缓冲液)，浓缩胶缓冲液(0.5mol/L pH6.7Tris-HCI缓冲液)；

电极缓冲液：0.1％SDS，0.05mol/L Tris-HCl

染色液：考马斯亮蓝R2500.125g，加入50mL甲醇，10mL冰乙酸，定容至100mL。

脱色液：冰乙酸75mL，甲醇50mL，加入蒸馏水定容至1000mL.。

电泳结果如图3所示，ZEN降解酶能在E.coli BL21(DE3)+Prx菌株中大量的诱导表达(泳道B和C)；与未诱导的对照组(泳道A)相比，诱导组中出现一个明显的蛋白条带(41kDa位置)。从SDS-PAGE电泳染色图片的条带的浓度上可以推算，重组表达蛋白站细胞总蛋白的50％左右。

(4)表达产物降解ZEN的测试

用步骤(2)得到的ZEN毒素降解酶做降解ZEN的测试。

以实施例1步骤(1)中的ZEN降解酶活力测定方法为基础，检测不同H₂O₂浓度下重组大肠杆菌表达的Prx酶蛋白降解ZEN的效率(□)，以H₂O₂(40mmol/L)作对照组(Δ)。

结果见图4，随着H₂O₂浓度的增加，重组Prx酶氧化降解ZEN的速率明显提高，经过30℃处理12h后，ZEN降解率高达95％以上。说明重组Prx酶具有较强的ZEN降解能力。

实施例6

ZEN毒素降解酶Prx基因在酵母菌中的表达鉴定

(1)构建表达载体

根据酵母表达载体pPIC9K上信号肽基因α序列(SEQ ID NO.9)设计引物，引物包含酶切位点(KpnI和BamHI)，引物对如下：

信号肽基因α引物1：5-AGAGGTACCATGAGATTTCCTTCAATTTTT-3  ----KpnI

信号肽基因α引物2：5-ATATGGATCCATTCGCGGCCGCCCTAGG-3  ----BamHI

以质粒pPIC9K为模板扩增信号肽基因α。用KpnI和BamHI双酶切信号肽基因α的PCR产物和载体pYES2，并用T4DNA连接酶将双酶切产物连接过夜，连接产物转入感受态E.coli DH5α。转化子质粒pYα用PCR和测序的方法检测结果。筛选成功转入信号肽基因α的转化子进入下一步操作。

根据实施例4得到的ZEN降解酶编码基因设计引物，引物包含酶切位点(XhoI和BamHI)，引物对如下：

ZEN降解酶基因引物1：

5-AATAGGATCCATGAGCTTGATTAATACTGA-3  ----BamHI

ZEN降解酶基因引物2：

5-ATTCTCGAGTTAGATTTTACCAACTAAGTC-3  ----XhoI

以Acinetobacter sp.SM04的DNA为模板，PCR扩增ZEN降解酶编码基因。用BamHI和XhoI双酶切ZEN毒素降解酶基因的PCR产物和pYα。连接和转化方法与信号肽基因方法一致。

转化子质粒pYα-Prx用双酶切检测，结果如图5。从图5可以看出，重组质粒pYα-Prx已成功转化入Prx基因和信号肽基因α。

(2)ZEN毒素降解酶在酿酒酵母中表达及酶活性的测定

1、感受态细胞的制备

于YPD培养基中培养S.cerevisiae INVSc1细胞(30℃，200r/min，24h)；收获细胞(1500×g，10min)；重悬细胞(1mL 100mmol/L LiAc，12,000×g，15s)；再次重悬细胞(400ul 100mmol/L LiAc)；按50uL每管分装。

2、酵母转化

对于每一个转化，按以下顺序加入：50％PEG3350240uL；1mol/L LiAc36uL；单链Salmon sperm(鲑鱼精)DNA 2mg/mL 25uL；质粒pYα-Prx DNA5～10ug。转化条件如下：30℃，30min；42℃，20min；6000r/min；取100ul菌液铺SC-U培养基平板，30℃培养2～3天。转化子以菌落PCR方法进行鉴定。

3、诱导表达及SDS-PAGE分析

培养经鉴定的酵母转化子至OD₆₀₀＝3，取6.67mL培养物去上清，并将细胞转移至50mL以半乳糖为碳源的SC-U诱导培养基中诱导表达。

取24h、48h和72h上清液各1mL，经处理后(处理方法同实施例5步骤(3)一致)，进行SDS-PAGE电泳。电泳结束，用考马斯亮蓝对凝胶进行染色，脱色分析，电泳结果见图6。

由图6可见，诱导72h重组蛋白的表达量最大。

(3)表达产物降解ZEN的测试方法

以实施例1步骤(1)中的ZEN降解酶活力测定方法为基础，测定不同处理时间下重组酿酒酵母表达的Prx酶蛋白降解ZEN的效率，结果见图7。

结果表明，重组酿酒酵母表达的Prx酶具有明显的ZEN降解能力。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.不动杆菌的ZEN毒素降解酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述的不动杆菌的ZEN毒素降解酶的编码基因，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.5所示。

3.权利要求1所述的不动杆菌的ZEN毒素降解酶在降解玉米赤霉烯酮中的应用。

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