CN102603859A

CN102603859A - 一种提取禾叶山麦冬皂苷a的方法

Info

Publication number: CN102603859A
Application number: CN2011100261972A
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2011-01-25
Filing date: 2011-01-25
Publication date: 2012-07-25

Abstract

本发明涉及一种提取禾叶山麦冬皂苷A方法。方法是取禾叶山麦冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，酶解原料加5-10倍量30-50％甲醇常温浸泡提取2-3次，提取液调酸滤过加氯仿溶液沉淀，收集氯仿层回收氯仿，浓缩物依次丙酮、乙酸乙酯洗涤，再用无水甲醇溶解加氧化铝拌样烘干，装柱，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，调节中性，浓缩成浸膏，无水乙醇溶解结晶2-3次，真空干燥即得禾叶山麦冬皂苷A产品。采用该方法制备禾叶山皂苷A，工艺方法简单，所得产品纯度高，易于放大生产。

Description

一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法

技术领域：

本发明属于天然产物分离领域，特别是涉及一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法。

背景技术：

禾叶山麦冬皂苷A属甾体皂苷类，mp.255-256℃，分子式为C₄₉H₇₈O₂₁，分子量1002，溶于正丁醇、吡啶等，微溶于甲醇、乙醇和氯仿，不溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醚等。

禾叶山麦冬皂苷A有强心抗肿瘤作用，尤其是抑制宫颈癌细胞和肝癌细胞作用较强。

禾叶山麦冬百合科，也叫禾叶土麦冬，主产于河北、山西、陕西、甘肃等地。其块根也作土麦冬药用，主要治疗阴虚肺燥、咳嗽痰粘、口燥咽干、肠燥便秘等。

现有提取禾叶山麦冬皂苷A方法较少，药理研究较少。如专利(申请号201010212790)“从禾叶山麦冬中分离制备禾叶山麦冬皂苷A的方法”，该专利采用的方法是将禾叶山麦冬块状根粉碎后作为原料，采用乙醇回流浸提，正丁醇萃取，然后正丁醇相萃取物采用D101型大孔树脂分离，分别用水以及不同质量浓度的乙醇溶液洗脱不同极性的组分，所得的皂苷洗脱液真空浓缩、冷冻干燥，逆流色谱方法分离纯化皂苷粗提物，皂苷组分进行真空浓缩，再冷冻干燥，得禾叶山麦冬皂苷A。该专利实验证明禾叶山麦冬皂苷A对人宫颈癌细胞及人肝癌细胞均具有较好的体外增殖抑制作用。该方法采用了逆流色谱分离，设备投资较大，制备量较小。

现有甾体皂苷提取分离方法较多，有萃取法、酶解法、酸水解法、柱层析法，以及多种方法联用。如文献“麦冬总皂苷不同提取方法的研究”，该文献实验结果表明酶解法比常规提取方法效率高。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，为禾叶山麦冬皂苷A制备提供一种简便易行的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案来实现的：

一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取禾叶山麦冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，得酶解原料；

2)把上述酶解原料，加5-10倍量30-50％甲醇常温浸泡提取2-3次，提取液调酸滤过加氯仿溶液沉淀，收集氯仿层；

3)把上述氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤，再用无水甲醇溶解加氧化铝拌样烘干，装柱，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，薄层监测，收集高浓度流分，调节中性，浓缩成浸膏，无水乙醇溶解结晶2-3次，真空干燥即得禾叶山麦冬皂苷A产品。

所述步骤1)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶或淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.1-1％。

所述步骤2)和步骤3)所用的水为纯水。

所述步骤3)中的氧化铝为中性氧化铝，粒度120-300目。

所述步骤3)中正丁醇-磷酸水溶剂比例为65∶35(磷酸调节pH3-4)。

本工艺采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间：其次采用常温提取提取杂质少，能耗低；再次采用甲醇中氯仿萃取，是利用液液分配色谱，其操作比高速逆流色谱操作简单；还有采用氧化铝柱分离，正丁醇-磷酸水溶剂洗脱，操作简单易于放大生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1

取禾叶山麦冬原料粉碎，称量3kg，加3g的果胶酶混合均匀，酶解7天，酶解原料加24L50％甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，合并提取液盐酸调至pH3，滤过，滤液加液体量的5L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加300g中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比1∶6)，正丁醇-磷酸水(比例65∶35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶2次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量93.3％，收率62.5％。

实施例2

取禾叶山麦冬原料粉碎，称量3kg，加30g的淀粉酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加30L40％甲醇常温浸泡提取6小时，滤过提取液再加15L40％甲醇浸泡12小时，合并提取液硫酸调至pH2，滤过，滤液加液体量的7L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加400g中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比1∶5)，正丁醇-磷酸水(比例65∶35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.6％，收率55.2％。

实施例3：

取禾叶山麦冬原料粉碎，称量3kg，加10g的纤维素酶混合均匀，酶解5天，酶解原料加30L30％甲醇常温浸泡提取12小时，滤过提取液再加15L30％甲醇浸泡5小时，合并提取液硫酸调至pH1，滤过，滤液加液体量的6L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加300g中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比1∶6)，正丁醇-磷酸水(比例65∶35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量96.1％，收率58.2％。

实施例4：

取禾叶山麦冬原料粉碎，称量10kg，加30g的果胶酶混合均匀，酶解6天，酶解原料加60L50％甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，合并提取液盐酸调至pH3，滤过，滤液加液体量的12L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加1.5kg中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比1∶6)，正丁醇-磷酸水(比例65∶35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.4％，收率52.5％。

实施例5：

取禾叶山麦冬原料粉碎，称量20kg，加70g的果胶酶混合均匀，酶解5天，酶解原料加140L40％甲醇常温浸泡提取2次，每次8小时，合并提取液硫酸调至pH2，滤过，滤液加液体量的25L氯仿溶液充分混合搅拌，放置沉淀，收集氯仿层回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗涤后，粗提物再用无水甲醇溶解，加3kg中性氧化铝(120-300目)拌样烘干，粉碎装柱(径高比1∶6)，正丁醇-磷酸水(比例65∶35，磷酸调节pH3)洗脱，薄层检测，收集高浓度流分，氢氧化钠溶液调节中性，减压浓缩成浸膏，加无水乙醇回流溶解饱和溶解，放置结晶，结晶3次，真空干燥结晶物，得白色禾叶山麦冬皂苷A产品，含量95.8％，收率53.4％。

Claims

1.一种提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤1)中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.1-1％。

3.根据权利要求1所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤2)和步骤3)所用的水为纯水。

4.根据权利要求1所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤3)中的氧化铝为中性氧化铝，粒度120-300目。

5.根据权利要求1所述提取禾叶山麦冬皂苷A的方法，其特征在于所述步骤3)中正丁醇-磷酸水溶剂比例为65∶35(磷酸调节pH3-4)。