CN102603483B - 一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，本发明通过离子液与固相载体键合，再以离子液络合金属盐中金属离子形成的固相萃取剂，对银杏叶粗提物进行分离，萃取聚戊烯醇，该方法操作方便、能耗小、分离时间短、分离效果好，从而，大大提高了聚戊烯醇的萃取率，另外，本方法萃取的聚戊烯醇纯度高且安全无污染。

Description

一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法

技术领域

本发明涉及一种分离提纯聚戊烯醇的方法，特别涉及一种分离纯化银杏叶中聚戊烯醇的方法，属于聚戊烯醇的提取分离技术领域。

背景介绍

银杏叶聚戊烯醇(polyprenols)是以C5异戊烯基为结构单元，由15-21个异戊烯基组成的醇，是具有高度不饱和结构的化合物，自1982年田中康之从银杏叶中分离聚戊烯醇以来，银杏叶聚戊烯醇因其重要的生物活性引起广泛的关注。外源性的聚戊烯醇具有抗病毒和免疫调节作用，在抗肝炎病毒和艾滋病毒以及辅助化疗白血病等方面具有显著作用。对慢性四氯化碳致肝损伤有明显的保护作用，其效果比阳性对照药Essential(易善力)更好。银杏聚戊烯醇还能促进肌体免疫功能的提高、诱导肿瘤细胞凋亡，对小鼠移植性肿瘤的抑制率可达49％-60％，联合化学药物治疗，具有增效和减毒作用。且聚戊烯醇对人体无毒(LD₅₀＞10g/kg)、无致突变、无致畸和无致癌作用。目前国外已有聚戊烯醇产品开发或进行临床研究，如：拉脱维亚医学科学院和Biolat公司研制了聚戊烯醇“ROPREN”制剂；拉脱维亚和澳大利亚Solagran公司将聚戊烯醇类化合物应用于慢性肝炎和其它免疫缺陷病治疗，已进入二期临床。俄罗斯用聚戊烯醇开发喷雾剂，用于预防病毒性流感。目前，对于聚戊烯醇的分离纯化，常用的硅胶柱分离和树脂分离或分子蒸馏分离等方法，都存在一定的缺陷。中国专利文献公开了银杏的萃取方法，如中国专利文献ZL01113696.0，通过浸泡、硅胶柱分离、制备聚戊烯醇，该方法由于银杏提取物的水解液中，除聚戊烯醇外，还存在着极性相近、分子量接近、同为链状的脂肪酸、胡萝卜素等分子，因此采用硅胶和树脂分离选择性差、需多次重复，得率低、工艺复杂；而分子蒸馏法分离聚戊烯醇的温度达到280℃，不利于具有高度不饱和结构聚戊烯醇的稳定，且能耗高，操作要求高，得率低。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，该方法操作温度低、能耗小、分离时间短、分离效果好，大大提高了聚戊烯醇的萃取率，另外，本方法萃取的聚戊烯醇纯度高，操作方便。

为了解决上述技术问题，发明的银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，包括如下步骤：

A、对银杏叶进行处理，制得银杏叶的粗提物；

B、对银杏叶的粗提物进行萃取，在反应器中加入银杏叶的粗提物及萃取剂进行搅拌，萃取剂：银杏叶的粗提物＝1-10∶1(g/mL)，在PH＝1-10，16-20℃的条件下，以120转/分的转速连续匀速搅拌0.5-10h后；静置分离出萃取剂相；

C、将步骤B得到的萃取剂相，以正己烷洗脱或反萃取；得到聚戊烯醇正己烷相，挥去正己烷得聚戊烯醇。

上述银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其中，步骤A对银杏叶进行处理如下：将银杏叶干燥粉碎，用石油醚索氏提取2-8h，料液比(银杏叶∶石油醚)1∶4-6(v/v)，减压浓缩，得到浸膏。取2.5g浸膏溶解在30mL石油醚中，加入20mL 5％NaOH甲醇-水溶液(90％甲醇，v/v)在120转/分转速下水解2.5h；以水洗涤石油醚相至中性，用无水NaSO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物；

上述银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其中，所述萃取剂由于以下成份组成：金属盐和离子液键合固相载体组成；金属盐∶离子液键合固相载体＝0.1-1.5mmol/mL∶0.5-1.5mmol/g；

离子液键合固相载体由离子液、硅烷偶联剂与固体载体组成，固相载体∶硅烷偶联剂∶离子液＝1∶0.8-1.2∶1.2(g/g/g)。

离子液阳离子为以下形式：

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6分别为含有不同或者相同碳原子个数的烷基、芳基或者烷氧基的取代基。本文首选阳离子取代基位置为1、3取代位。

离子液阴离子为：

BF₄ ^-、PF₆ ^-、CH3COO^-、SO₄ ^2-、CH₃SO₃ ^-、Al₂Cl₇ ^-、Fe₂Cl₇ ^-是F^-、Cl^-、Br^-、I^-、NO₃ ^-。

上述的银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其中，金属盐为包括CuCl、CuNO₃、AgNO₃、AgBF₄的溶液。

上述银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其中，固相载体为SBA-15、硅胶或MCM-41。

本发明将离子液键合在固相载体上，并且将金属盐中的金属离子(如CuCl、CuNO₃、AgNO₃、AgBF₄等金属离子)分散在键合离子液的固相载体表面来作为萃取剂对银杏叶中的聚戊烯醇进行分离，该方法缩短分离时间提高了分离效率、分离效果好、减少了离子液用量达到节约成本的目的，离子液挥发性低、稳定性强、具有可调节性而且具有独特的吸收性能、溶解性能，所以在液-液分离方面受到很大的重视，但是由于离子液体黏度较高，在以均相或者两相形式应用时不利于溶解、扩散、反应、分离等过程的进行，也不便于操作；均相体系反应面积小、过程速率慢，本发明将离子液体与无机多孔材料如硅胶键合，制得离子液固定相，离子液固定相同时具有离子液和载体材料的特性，不仅有利于减少离子液的用量降低成本，更有利于扩大界面积、缩短扩散路径、促进传质与反应的过程，促进聚戊烯醇的分离，，从而，提高了聚戊烯醇的萃取率和聚戊烯醇的纯度；另外，也利于离子液的回收利用，不仅提高了离子液的利用率，节约了成本；且不会带来后续环境的影响。

附图说明

图1是聚戊烯醇HPLC分析图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

为了解决上述技术问题，本发明一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，包括如下步骤：为了解决上述技术问题，本发明一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，包括如下步骤：

A、对银杏叶进行处理，制得银杏叶的粗提物；

将银杏叶干燥粉碎，用石油醚索氏提取2-8h，料液比(银杏叶∶石油醚索氏)1∶4-6(v/v)，减压浓缩，得到提取液；取2.5g浸膏溶解在30mL石油醚中，加入20mL 5％NaOH甲醇-水溶液(90％甲醇，v/v)在120转/分转速下水解2.5h；水洗石油醚相至中性后，用无水NaSO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物；

B、对银杏叶的粗提物进行萃取，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂进行搅拌，萃取剂∶萃取溶液＝1-10∶1(g/g)，在pH＝1-10，18℃的条件下，120转/分连续搅拌0.5-10h后，静置分离出萃取剂相；

C、将步骤B得到的萃取剂相以正己烷洗脱或反萃取，将得到洗脱液或萃取相；挥去溶剂得到聚戊烯醇。

萃取剂由于以下成份组成：金属盐和离子液键合固相载体组成；金属盐∶离子液键合固相载体＝0.1-1.5mmol/mL∶0.5-1.5mmol/g；离子液键合固相载体由离子液、硅烷偶联剂与固体载体组成，固相载体∶硅烷偶联剂∶离子液＝1∶0.8-1.2∶1.2(g/g/g)。

离子液阳离子为以下形式：

其中R1、R2、R3、R4、R5、R6分别为含有不同或者相同碳原子个数的烷基、芳基或者烷氧基的取代基。本文首选阳离子取代基位置为1、3取代位。

离子液阴离子为

BF₄ ^-、PF₆ ^-、CH3COO^-、SO₄ ^2-、CH₃SO₃ ^-、Al₂Cl₇ ^-、Fe₂Cl₇ ^-是F^-、Cl^-、Br^-、I^-、NO₃ ^-，本发明中首选为BF₄ ^-、PF₆ ^-。金属盐为包括CuCl、CuNO₃、AgNO₃、AgBF₄的溶液。固体相为SBA-15、硅胶或MCM-41。

萃取剂制备包括如下步骤：

1、将硅烷偶联剂与离子液以惰性气体(氮气或氩气)保护下，在50-200℃下，以120转/分转速连续搅拌10-48h，将硅烷偶联剂Y端先连接在离子液上。

2、硅烷偶联剂与离子液反应完成，得到的反应产物溶于1-5倍体积的有机溶剂中，加入固体相(如硅胶或其它载体)，继续回流(固体相与溶有反应产物的有机溶剂的固液比为1∶5～1∶20)，沸点回流，连续搅拌10-48小时，所用有机溶剂可以是苯、甲苯、二甲苯)使硅烷偶联剂X端与固体相如硅胶偶联，形成离子液键合固相载体；

3、将与固体相如硅胶，键合形成的离子液键合固相载体与金属盐，如AgBF₄或AgNO₃溶液在室温回流，得到离子液固定的萃取剂，回流时间10-48h。

硅烷偶联剂为Y(CH₂)_nSiX₃，其中n＝0-3，X-为可水解基团，Y-有机官能团，能与硅胶反应。X常为氯基、甲氧基、乙氧基、乙酰氧基等，水解即生成硅醇而与无机物质结合形成硅氧键。Y是乙烯基氨基、环氧基、甲基丙烯酰氧基、巯基或脲基。这些反应基可与有机物质反应而结合。因此通过硅烷偶联剂，可在无机物质与有机物质的界面之间架起分子桥，把两种物质悬殊的材料连接在一起。

银杏叶的粗提物中聚戊烯醇的测定：取0.05g浸膏用少量石油醚溶解过硅胶柱，用石油醚∶乙酸乙酯(90∶10，v/v)洗脱，定容到100ml，用HPLC分析，如图1。用聚戊烯醇标准品做标准曲线，根据标准曲线计算聚戊烯醇的含量。

实施例1

将银杏叶干燥粉碎，称取5.0g用石油醚索氏提取8h，料液比1∶4～1∶6(v/v)，减压浓缩得到提取液；用5％的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5h，石油醚相水洗后用无水NaSO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液∶萃取剂为1∶2，萃取剂([bmim]PF₆含5mg/ml的AgBF₄)意思是将银盐溶在离子液中，避光条件下，在磁力搅拌器上搅拌1h，然后离心分离，静置分离，静置后取上层正己烷相，用HPLC分析聚戊烯醇的浓度，差减法计算有机相中聚戊烯醇的含量，萃取率为21.86％。

实施例2

将银杏叶干燥粉碎，称取5.0g用石油醚索氏提取8h，料液比1∶4-1∶6(v/v)，减压浓缩得到提取液；用5％的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5h，石油醚相水洗后用无水NaSO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液∶萃取剂为1∶1，萃取剂(AgBF₄/Si0₂.[bmim]PF₄)意思是将银盐分散在离子液键合的硅胶表面，避光条件下在磁力搅拌器上搅拌40min，然后离心分离，静置后取上层正己烷相，用HPLC分析聚戊烯醇的浓度，差减法计算有机相中聚戊烯醇的含量，萃取率为65％。

实施例3

将银杏叶干燥粉碎，称取5.0g用石油醚索氏提取8h，料液比1∶4～1∶6(v/v)，减压浓缩得到提取液；用5％的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5h，石油醚相水洗后用无水NaSO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液∶萃取剂为1∶1，萃取剂(AgBF₄/SBA-15.[bmim]PF₆)意思是将银盐分散在离子液键合的介孔材料表面，，避光条件下在磁力搅拌器上搅拌40min，然后离心分离，静置后取上层正己烷相，用HPLC分析聚戊烯醇的浓度，差减法计算有机相中聚戊烯醇的含量，萃取率为72％。

Claims (3)

1.一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其特征在于，包括如下步骤：将银杏叶干燥粉碎，称取5.0 g用石油醚索氏提取8 h，料液比1:4~1:6，v/v；减压浓缩得到提取液；用5%的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5 h，石油醚相水洗后用无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10 mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液：萃取剂为1：2，g/g，萃取剂即[bmim]PF₆含5mg/ml的AgBF₄，意思是将银盐溶在离子液中，避光条件下，在磁力搅拌器上搅拌1h，然后离心分离，静置分离，静置后取上层正己烷相。

2.一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其特征在于，包括如下步骤：将银杏叶干燥粉碎，称取5.0 g用石油醚索氏提取8 h，料液比1:4-1:6 ，v/v，减压浓缩得到提取液；用5%的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5 h，石油醚相水洗后用无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10 mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液：萃取剂为1：1，g/g，萃取剂即AgBF₄/Si0₂.[bmim]PF₄，意思是将银盐分散在离子液键合的硅胶表面，避光条件下在磁力搅拌器上搅拌40min，然后离心分离，静置后取上层正己烷相。

3.一种银杏叶中聚戊烯醇的萃取方法，其特征在于，包括如下步骤：将银杏叶干燥粉碎，称取5.0 g用石油醚索氏提取8 h，料液比1:4~1:6 ，v/v，减压浓缩得到提取液；用5%的NaOH甲醇溶液在搅拌条件下，对提取液水解2.5 h，石油醚相水洗后用无水Na₂SO₄干燥，减压浓缩得浸膏，即为银杏叶的粗提物，将银杏叶的粗提物溶解在正己烷中，形成聚戊烯醇浓度为1-10 mg/mL的萃取溶液，在萃取溶液中加入萃取剂，萃取溶液：萃取剂为1：1，g/g，萃取剂即AgBF₄/SBA-15.[bmim]PF_6，意思是将银盐分散在离子液键合的介孔材料表面，避光条件下在磁力搅拌器上搅拌40min，然后离心分离，静置后取上层正己烷相。