CN101863882B - 一种分离提纯草胡椒素b的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种分离提纯草胡椒素B的方法，其步骤包括：将草胡椒素B粗品干法上样至正相硅胶柱，以二氯甲烷和丙酮的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为从含体积百分比1％-30％丙酮的二氯甲烷溶液，逐渐增大丙酮的含量，洗脱至含体积百分比10％-60％丙酮的二氯甲烷溶液，收集草胡椒素B部分的洗脱液，即可。该方法分离制得草胡椒素B，分离速度快，收率高，制备量大，产品纯度高，生产成本低，适合于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物化学领域，具体涉及一种分离提纯草胡椒素B的方法。
背景技术
草胡椒属(Peperomia Ruiz et Pavon)植物系胡椒科(Piperaceae)，具有清热解毒、化瘀散结、利水消肿的功效，中医上常用于风湿痹痛、跌打损伤、痈肿疮毒等。草胡椒素B(Peperomin B，式1)具有较好的抑制肿瘤的活性，可从草胡椒属多种植物如石蝉草中分离得到。
式1
提取草胡椒素B的工艺中，现有文献《Bioactive Secolignans fromPeperomia dindygulensis》(Jian-lin Wu，ect.，J.Nat.Prod.2006，69：790-794)报道，可从1.75公斤石蝉草中分离得到草胡椒素B79.7mg。其方法为，将药材粉碎，用甲醇提取3次，之后再用乙酸乙酯萃取，再将乙酸乙酯的部分通过正相硅胶柱被分为12个部位，第7个部位的3.25g通过正相制备液相色谱分离，得到草胡椒素B79.7mg，其收率为2.45％(79.7mg/3.25g×100％)。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服了现有的提纯草胡椒素B方法的制得量小，收率低等缺陷，提供了一种分离提纯草胡椒素B的方法。该方法制备草胡椒素B，分离速度快，收率高，制备量大，产品纯度高，生产成本低，适合于工业化生产。
本发明提供了一种分离提纯草胡椒素B(Peperomin B，式1)的方法，其步骤包括：将草胡椒素B粗品干法上样至正相硅胶柱，以二氯甲烷和丙酮的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为从含体积百分比1％-30％丙酮的二氯甲烷溶液，逐渐增大丙酮的含量，洗脱至含体积百分比10％-60％丙酮的二氯甲烷溶液，收集草胡椒素B部分的洗脱液，即可。
其中，所述的草胡椒素B粗品为从含有草胡椒素B的植物原料中提取所得，较佳的为从石蝉草中提取所得。较佳的，所述的草胡椒素B粗品由下述方法制得：将含有草胡椒素B的植物原料用甲醇、乙醇、或体积百分比50％以上的甲醇和/或乙醇的水溶液提取，得提取物，再用氯仿萃取，之后，将氯仿萃取物用硅胶柱分离一次，即可。其中，所述的用硅胶柱分离，较佳的按下述操作：收集以体积比为3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为0.2-0.3的洗脱部分，即得草胡椒素B粗品。所述的用硅胶柱分离较佳的用石油醚和乙酸乙酯混合物，按照二者体积比为100∶0至5∶1梯度洗脱。所述的草胡椒素B粗品的纯度一般为30％左右。
其中，所述的干法上样，较佳的按下述操作：将草胡椒素B粗品溶于常规可溶解草胡椒素B的溶剂中，硅胶拌样，上样，即可。
其中，所述的可溶解草胡椒素B的溶剂较佳的选自二氯甲烷、三氯甲烷和丙酮。所述的干法上样，上样量为草胡椒素B粗品与硅胶柱中硅胶的质量比较佳的为1∶80～1∶120，更佳的为1∶100。较佳的在上样时，将样品填装于相应的上样筒中上样。
其中，所述的正相硅胶柱为本领域常规使用的正相硅胶柱，所选择的柱较佳的为预装柱，其规格为本领域常规使用的规格，通常为市售统一规格。所述的正相硅胶柱的径长比较佳的为1∶5～1∶7，更佳的为1∶6。
其中，所述的梯度洗脱的洗脱梯度较佳的为线性洗脱梯度，可采用机器设备达到线性梯度洗脱。其中，所述的梯度洗脱中，洗脱时间较佳的为从1-45min，洗脱速度较佳的为25-70mL/min，更佳的为40-60mL/min，最佳的为50mL/min；检测波长较佳的为254nm，此波长为固定单波长检测。
其中，所述的收集的草胡椒素B部分的洗脱液还可以按照本领域常规方法，将其浓缩并干燥，制得所述的草胡椒素B纯品。
本发明中，上述的各技术特征的优选条件可以任意组合，得到较佳的技术方案用于制备草胡椒素B。
本发明一较佳实例为：将草胡椒素B粗品溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，上样至正相硅胶柱上，洗脱剂为二氯甲烷和丙酮的混合液，设定从1％丙酮的二氯甲烷溶液到10％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，或从10％丙酮的二氯甲烷溶液到20％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，或从20％丙酮的二氯甲烷溶液到30％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，时间为30-40分钟，流速为25-50ml/min，收集草胡椒素B部分的洗脱液，即可。
其中，较佳的，将收集的草胡椒素B部分的洗脱液浓缩，得到草胡椒素B纯品。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供了一种柱层析法制备草胡椒素B的方法。该方法制备草胡椒素B，分离速度快，收率高，制备量大，根据所选用硅胶柱的大小略有不同，产品纯度高，可达质量百分比87％以上，且原料易得，生产成本低，适合于工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
下述实施例中，所使用的正相硅胶柱为正相硅胶预装柱40g×2安装于快速柱层析系统(上海利穗电子科技有限公司，型号：DR Flash II)，正相硅胶柱的径长比为1∶6。下述实施例中，所述的收率是指产品草胡椒素B占草胡椒素B粗品的质量百分比。
实施例1
粗品制备：石蝉草10公斤用95％乙醇水溶液提取，乙醇提取物用氯仿萃取，氯仿萃取部位用硅胶柱粗分，以石油醚-乙酸乙酯比例分别为100∶0、20∶1、10∶1、5∶1进行梯度洗脱，收集以体积比为3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为0.2-0.3的洗脱部分，为草胡椒素B粗品，称重25克。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中，设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含1％的丙酮，洗脱至含10％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为50ml/min。检测波长为254nm。运行后约20分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.1g，经检测，其纯度大于91％，收率为52.5％。
实施例2
粗品制备：石蝉草10公斤用100％甲醇提取，甲醇提取物用氯仿萃取，氯仿萃取部位用硅胶柱粗分，以石油醚-乙酸乙酯比例分别为100∶0、20∶1、10∶1、5∶1进行梯度洗脱，收集以体积比为3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为0.2-0.3的洗脱部分，为草胡椒素B粗品，称重22克。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含10％的丙酮，洗脱至含20％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为50ml/min。检测波长为254nm。运行后约7分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B2.4g，经检测，其纯度大于95％，收率为62.5％。
实施例3
粗品制备：石蝉草10公斤用80％甲醇水溶液提取，甲醇提取物用氯仿萃取，氯仿萃取部位用硅胶柱粗分，以石油醚-乙酸乙酯比例分别为100∶0、20∶1、10∶1、5∶1进行梯度洗脱，收集以体积比为3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为0.2-0.3的洗脱部分，为草胡椒素B粗品，称重22克。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含20％的丙酮，洗脱至含30％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为50ml/min。检测波长为254nm。运行后约4分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B2.3g，经检测，其纯度大于87％，收率为57.5％。
实施例4
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含1％的丙酮，洗脱至含10％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为40分钟，流速为25ml/min。检测波长为254nm。运行后约25分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B2.0g，经检测，其纯度大于90％，收率为50％。
实施例5
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含10％的丙酮，洗脱至含20％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为25ml/min。检测波长为254nm。运行后约10分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.5g，经检测，其纯度大于90％，收率为62.5％。
实施例6
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含20％的丙酮，洗脱至含30％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为25ml/min。检测波长为254nm。运行后约5分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.2g，经检测，其纯度大于88％，收率为55.5％。
实施例7
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含1％的丙酮，洗脱至含10％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为70ml/min。检测波长为254nm。运行后约12分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.2g，经检测，其纯度大于90％，收率为55.5％。
实施例8
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含10％的丙酮，洗脱至含20％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为70ml/min。检测波长为254nm。运行后约5分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.1g，经检测，其纯度大于92％，收率为52.5％。
实施例9
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含20％的丙酮，洗脱至含30％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为70ml/min。检测波长为254nm。运行后约2分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.4g，经检测，其纯度大于85％，收率为60％。
实施例10
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的二氯甲烷溶液中丙酮的含量，从含30％的丙酮，洗脱至含60％的丙酮，线性梯度洗脱，时间为30分钟，流速为70ml/min。检测波长为254nm。运行后约2分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B。
对比例1
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定丙酮的正己烷溶液中丙酮的含量，从含20％的丙酮，洗脱至含40％的丙酮，梯度洗脱，时间为30分钟，流速为50ml/min。检测波长为254nm。运行后约9分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.8g，经检测，其纯度大于60％，收率为70％。
对比例2
草胡椒素B的粗品制备同实施例1。
精确称取草胡椒素B粗品4.0g，溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，置于上样筒中。设定乙酸乙酯的正己烷溶液中乙酸乙酯的含量，从含20％的乙酸乙酯，洗脱至含50％的乙酸乙酯，梯度洗脱，时间为30分钟，流速为50ml/min。检测波长为254nm。运行后约11分钟后出现草胡椒素B峰，收集该洗脱液部分，浓缩后得到草胡椒素B 2.6g，经检测，其纯度大于60％，收率为65％。
Claims (9)
1.一种分离提纯草胡椒素B的方法，其步骤包括：将草胡椒素B粗品干法上样至正相硅胶柱，以二氯甲烷和丙酮的混合液为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度为从含体积百分比1％-30％丙酮的二氯甲烷溶液，逐渐增大丙酮的含量，洗脱至含体积百分比10％-60％丙酮的二氯甲烷溶液，收集草胡椒素B部分的洗脱液，即可；所述的草胡椒素B粗品，由下述方法制得：将含有草胡椒素B的植物原料用甲醇、乙醇、或体积百分比50％以上的甲醇和/或乙醇的水溶液提取，得提取物，再用氯仿萃取，之后，将氯仿萃取物用硅胶柱分离一次，即可。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的用硅胶柱分离，按下述操作：收集以体积比为3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂为展开剂，硅胶薄层层析板上Rf值为0.2-0.3的洗脱部分，即得草胡椒素B粗品。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的干法上样，按下述操作进行：将草胡椒素B粗品溶于可溶解草胡椒素B的溶剂中，硅胶拌样，上样，即可。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的可溶解草胡椒素B的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷和丙酮中的一种或多种。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的干法上样，其上样量为草胡椒素B粗品与硅胶柱中硅胶的质量比为1∶80～1∶120。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的正相硅胶柱的径长比为1∶5～1∶7。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的梯度洗脱为线性洗脱梯度，洗脱时间为从10-30min；洗脱速度为25-70mL/min。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的收集草胡椒素B部分的洗脱液，所采用的检测波长为254nm。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的分离提纯草胡椒素B的方法，步骤包括：将草胡椒素B粗品溶于二氯甲烷中，硅胶拌样，上样至正相硅胶柱上，洗脱剂为二氯甲烷和丙酮的混合液，设定从1％丙酮的二氯甲烷溶液到10％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，或从10％丙酮的二氯甲烷溶液到20％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，或从20％丙酮的二氯甲烷溶液到30％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脱，时间为1-45分钟，流速为25-50ml/min，收集草胡椒素B部分的洗脱液，即可。
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