CN101085794B

CN101085794B - 去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法

Info

Publication number: CN101085794B
Application number: CN2006100275315A
Authority: CN
Inventors: 斯建勇; 沈连钢; 韦飞燕; 张艳华
Original assignee: GUANGXI HUAHONG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Huahong Pharmaceutical Group Co.,Ltd. of Guangxi Zhuang Autonomous Region
Priority date: 2006-06-10
Filing date: 2006-06-10
Publication date: 2011-09-07
Anticipated expiration: 2026-06-10
Also published as: CN101085794A

Abstract

本发明涉及去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法。包括如下步骤：1.采用有机溶剂对含有去乙酰车叶草酸甲酯的植物药材提取分离；2.分离液经硅胶柱色谱及凝胶柱色谱；3. 相应流份进行结晶与重结晶，获得去乙酰车叶草酸甲酯。本发明制备过程简单，重现性好，纯度高，可达98％以上，采用的提取溶剂为常用溶剂，简便易得，硅胶柱色谱及凝胶柱色谱提取的方法简便，为现在通用的技术方法，易于推广。

Description

去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法

技术领域

本发明涉及去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法，尤其是从茜草科植物中的提取制备方法。

背景技术

去乙酰车叶草酸甲酯为一种环烯醚萜类化合物，环烯醚萜及其苷类在植物界分布较广，以双子叶植物，尤其是唇形科、茜草科、龙胆科等植物中分布相当广泛。目前已从植物中分离并鉴定结构的环烯醚萜类化合物已超过800种，其中大都为苷类成分，并且有显著的药理作用，如栀子苷、京尼平苷和京尼平苷酸是清热泻火中药山栀子的主成分，京尼平苷显示有显著的泻下作用和利胆作用。

去乙酰车叶草酸甲酯作为栀子中的一种环烯醚萜苷类成分，有报道其具有导泻的作用。由于环烯醚萜苷易水解，所以给制备造成了相当的难度。在众多环烯醚萜类化合物中，关于去乙酰车叶草酸甲酯的研究的非常少，

在中国中药杂志1999年第24卷第一期“大黄栀子果实化学成分的研究”中曾记载了它的制备方法。采用的是将栀子药材(4kg)醇提，石油醚脱脂，反复过聚酰胺柱和葡聚糖凝胶柱层析的方法制备，并将洗脱液用氯仿、正丁醇萃取，经大孔树脂纯化，再经硅胶柱或制备层析，可得去乙酰车叶草酸甲酯(3mg)。其结构式如下：

栀子甙 R＝葡萄糖， R1＝H

京尼平-1-β-D-龙胆双糖甙 R＝龙胆双糖，R1＝H

鸡矢藤次甙甲酯 R＝葡萄糖， R1＝β-OH

去乙酰基车前草酸甲酯 R＝葡萄糖， R1＝α-OH

该方法采用了易燃的石油醚做溶剂，并使用了价格较高的聚酰胺柱层析，工艺比较复杂，提取收率不高。

在ZL 91101254.0“用环烯醚萜甙或其甙元作为制造染发化妆品的应用”中去乙酰车叶草酸甲酯可以作为制造染发化妆品的成份之一，可使染发获得较好的效果。其制备由车叶草甙(1.0g)溶于蒸馏水中，通过加入BaO在甲醇中的饱和溶液将pH值调至10，将溶液放置使之形成白色浑浊，将其中和浓缩后，通过硅胶柱色谱法处理，可得去乙酰车叶草酸甲酯(1.80mg)。其车叶草甙由垫子草提取纯化制得，32.8kg的垫子草可得68.0g车叶草甙，需萃取，浓缩，上色谱柱，等程序。这个专利的两步制备较为复杂。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是公开一种去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法，以克服现有技术所存在的方法比较复杂，收率低的缺陷。

本发明的方法包括如下步骤：

①、采用有机溶剂对含有去乙酰车叶草酸甲酯的植物药材提取分离；②、分离液反复经硅胶柱色谱及凝胶柱色谱分离；③、相应流份进行结晶与重结晶，获得去乙酰车叶草酸甲酯；

本发明优选包括如下步骤：

将含有去乙酰车叶草酸甲酯的植物药材用6～10重量倍的体积浓度为30～95％的乙醇回流提取，提取时间为1～4小时，提取液在60～90℃的温度下真空浓缩至比重为1.05～1.40(80℃)，将有机溶剂加入浓缩液，依次进行三步萃取：

第一步萃取用的有机溶剂选自环己烷、正己烷、乙醚或氯仿中的一种或其中的两种依次进行，第一步萃取用的有机溶剂与浓缩液的体积比为：

第一步萃取用的有机溶剂∶浓缩液＝2～10∶1；

第二步萃取用的有机溶剂选自乙酸乙酯，第二步萃取用的有机溶剂与第一步的萃余液的体积比为：

第二步萃取用的有机溶剂∶第一步的萃余液＝1.5～10∶1；

第三步萃取用的有机溶剂选自正丁醇，

第三步萃取用的有机溶剂与第二步的萃余液的体积比为：

第三步萃取用的有机溶剂∶第二步的萃余液＝2～20∶1；

或将浓缩液拌入吸附剂，用有机溶剂对吸附剂进行回流洗脱，回流洗脱分三步进行，所用的有机溶剂前两步与萃取用有机溶剂相同，第三步采用的有机溶剂选自正丁醇、丙酮、乙醇或甲醇中的一种或其中的两种依次进行。

按照本发明优选的方法，先将浓缩液拌入硅藻土，干燥，然后依次用浓缩液6～18倍体积的有机溶剂进行回流提取0.5～5小时，浓缩液与硅藻土的重量比例为：1∶0.5～8。

取含去乙酰车叶草酸甲酯的第三步萃取液或回流洗脱液，浓缩，上硅胶柱色谱及凝胶柱色谱分离，色谱过程可多次进行，两种色谱可以依次交替反复；

硅胶柱色谱采用硅胶进行装柱，用氯仿、甲醇和水的混合物梯度洗脱，体积份数为：氯仿95～60份，甲醇5～40份，水0～10份；

凝胶柱色谱采用的是葡聚糖凝胶sephadex LH20装柱，用甲醇进行洗脱，收集去乙酰车叶草酸甲酯流份，可得去乙酰车叶草酸甲酯粗品，结晶，得去乙酰车叶草酸甲酯纯品。

所说的含有去乙酰车叶草酸甲酯的植物为茜草科植物，优选白花蛇舌草；

术语“梯度洗脱”指的是：使流动相中含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在洗脱过程中连续或间断改变流动相的组成，以调节它的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子，并使样品中的所有组分可在最短的分析时间内，以适用的分离度获得完满的选择性分离。

按照本发明优选的方法，梯度洗脱时，先采用氯仿和甲醇的混合物洗脱3～5次，氯仿与甲醇的体积份数比例由氯仿∶甲醇＝90∶10份起，氯仿依次递减2～3份，甲醇依次递增2～3份，最后采用氯仿、甲醇和水的混合物洗脱，体积份数比例为：

氯仿∶甲醇∶水＝75～88∶12～25∶0～5。

本发明的特点：

1.制备过程简单，重现性好，纯度高，可达98％以上。

2.采用的提取溶剂为常用溶剂，简便易得。

3.硅胶柱色谱及凝胶柱色谱提取的方法简便，为现在通用的技术方法，易于推广。

附图说明

图1为去乙酰车叶草酸甲酯质谱。

图2为去乙酰车叶草酸甲酯IR谱

图3为去乙酰车叶草酸甲酯UV谱

具体实施方式

实施例1

取白花蛇舌草药材750g，粗碎，用6倍重量的体积浓度为70％的乙醇回流提取三次，每次1小时，获得提取液，将提取液在80℃下真空浓缩至比重为1.30(80℃)，将浓缩液依次用800ml的正己烷、500ml的乙酸乙酯和1200ml的正丁醇萃取，取正丁醇萃取液浓缩，经硅胶柱色谱，采用氯仿、甲醇和水的混合物进行梯度洗脱，体积份数依次为：氯仿∶甲醇∶水＝90∶10∶0，88∶12∶0，85∶15∶0，80∶20∶10，收集含去乙酰车叶草酸甲酯流份，结晶得去乙酰车叶草酸甲酯粗品，然后将粗品溶解于适量有机溶剂中，过葡聚糖凝胶sephadex LH20柱色谱，用甲醇洗脱，收集去乙酰车叶草酸甲酯流份，进行结晶，重结晶，得去乙酰车叶草酸甲酯纯品120mg，纯度为98％。质谱见图1，红外光谱见图2，紫外光谱见图3。

白色结晶，mp.131～135℃，茴香醛-硫酸试剂显兰色；IR ν_maxcm^-1：3369(OH)，2908，1689，1635，1440，1375，1311；UV λ_max(MeOH)nm：236；FABMS 427(M⁺+Na)；¹H NMR(500MHz)δppm：7.63(1H，brsH₃)，5.96(1H，brs H₇)，4.91(1H，d，J＝9Hz，H₁)，4.78(1H，m，H₆)，4.18，4.38(各1H，d，J＝16，H₁₀)，3.3～3.7(6H，糖中含氧碳的偕氢)，3.67(3H，s，OCH₃)，3.06(1H，t，J＝6Hz，H₅)，2.58(1H，t，J＝7Hz，H₉)；¹³CNMR(125MHz)(D₂O)：172.5(C₁₁)，157.7(C₃)，151.8(C₈)，131.4(C₇)，109.4(C₄)，103.3(C₁)，78.8(C₃)，78.3(C₅)，76.7(C₆)，75.4(C₂)，72.1(C₄)，63.2(C₆)，62.7(C₁₀)，54.5(OCH₃)，47.0(C₉)，43.0(C₅)。

结构通式如下：

R₁＝H R₂＝CH₃

实施例2

取白花蛇舌草药材750g，粗碎，用9倍重量的体积浓度为90％的乙醇回流提取三次，每次2.5小时，获得提取液，将提取液在80℃下真空浓缩至比重为1.05(80℃)，将浓缩液依次用1000ml的正己烷、500ml的氯仿、1000ml的乙酸乙酯和1500ml的正丁醇萃取，取正丁醇萃取液经硅胶柱色谱，采用氯仿、甲醇和水的混合物进行梯度洗脱，体积份数顺序依次为：氯仿∶甲醇∶水＝95∶5∶0.5，90∶10∶5，85∶15∶5，收集含去乙酰车叶草酸甲酯流份，过葡聚糖凝胶sephadex LH20柱色谱，用甲醇洗脱，收集去乙酰车叶草酸甲酯流份，进行结晶，重结晶，得去乙酰车叶草酸甲酯纯品121mg，纯度为98.2％。

实施例3

取白花蛇舌草药材750g，粗碎，用8倍重量的体积浓度为90％的乙醇回流提取三次，每次2小时，获得提取液，将提取液在70℃下真空浓缩至比重为1.35(80℃)，获得浓缩液；

将浓缩液拌入250克硅藻土，依次用2300ml的氯仿、2500ml的乙酸乙酯、2100ml的乙醇进行回流洗脱4小时，取乙醇洗脱液浓缩，上硅胶柱色谱，采用氯仿，甲醇，水的混合溶液进行梯度洗脱，体积份数顺序依次为：氯仿∶甲醇∶水＝90∶10∶0，88∶12∶0；

洗脱液上葡聚糖凝胶sephadex LH20柱，用甲醇洗脱，再反复经硅胶柱和葡聚糖凝胶柱色谱，收集去乙酰车叶草酸甲酯流份，得去乙酰车叶草酸甲酯粗品，进行结晶，重结晶，得去乙酰车叶草酸甲酯纯品130mg，纯度为98.5％。

Claims

1.一种去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将含有去乙酰车叶草酸甲酯的茜草科植物药材用乙醇回流提取，提取液浓缩；

(2)、对药材浓缩液通过有机溶剂萃取法进行分离，萃取分为三个步骤：

第一步萃取用的有机溶剂为环己烷、正己烷、乙醚或氯仿中的一种或其中的两种依次进行；

第二步萃取用的有机溶剂为乙酸乙酯；

第三步萃取用的有机溶剂为正丁醇；

(3)、取含有去乙酰车叶草酸甲酯的第三步获得的萃取物浓缩，运用硅胶柱及凝胶柱进行分离，硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的混合物或氯仿、甲醇和水的混合物进行梯度洗脱，凝胶柱色谱用甲醇进行洗脱；

(4)、收集去乙酰车叶草酸甲酯流份，结晶，得去乙酰车叶草酸甲酯纯品。

2.一种去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(2)、将药材浓缩液拌入吸附剂，用有机溶剂回流洗脱吸附剂，依次进行三步回流洗脱；第一步回流洗脱使用的有机溶剂为环己烷、正己烷、乙醚或氯仿中的一种或其中的两种依次进行，第二步回流洗脱使用的有机溶剂为乙酸乙酯，第三步回流洗脱使用的有机溶剂选自正丁醇、丙酮、乙醇或甲醇中的一种或其中的两种依次进行；

(3)、取含有去乙酰车叶草酸甲酯的第三步获得的回流洗脱液，浓缩，运用硅胶柱及凝胶柱进行分离，硅胶柱色谱用氯仿和甲醇的混合物或氯仿、甲醇和水的混合物梯度洗脱，凝胶柱色谱用甲醇进行洗脱；

3.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)的茜草科植物药材提取方法为：

使用相当于药材重量6～10倍的体积百分比为30～95％的乙醇回流提取，提取时间为1～4小时，提取液在60～90℃的温度下真空浓缩至在80℃下的比重为1.05～1.40的浓缩液。

4.根据权利要求1所述的去乙酰车叶草酸甲酯的制备方法，其特征在于，步骤(2)萃取用的有机溶剂的相应体积比为：

第一步萃取用的有机溶剂与浓缩液的体积比为2～10∶1；

第二步萃取用的有机溶剂与第一步的萃取后剩余液体的体积比1.5～10∶1；

第三步萃取用的有机溶剂与第二步的萃取后剩余液体的体积比为2～20∶1。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，吸附剂为硅藻土。

6.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，硅胶柱梯度洗脱使用的氯仿和甲醇的混合物体积比为：氯仿95～60份，甲醇5～40份。

7.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，硅胶柱梯度洗脱使用的氯仿、甲醇和水混合物体积比为：氯仿95～60份，甲醇5～40份，水不大于10份。

8.根据权利要求1～2任一项所述的方法，其特征在于，凝胶柱色谱采用的是葡聚糖凝胶sephadex LH20装柱。