CN102600276B - 一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方，它包括如下重量份数的组分：金银花8～10份，板蓝根8～10份，黄芩8～10份，栀子8～10份，菊花8～10份，水牛角8～10份，牛羊胆酸8～10份，桑叶8～10份。本发明还公开了上述中药复方的制备方法和应用。本发明的中药复方在具有消除或减弱细菌耐药性的作用，具有在临床上进一步推广的价值。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方及其制备方法和应用。
背景技术
大肠杆菌是一种常见且在畜牧生产中危害较大的一种细菌。为了防治由于大肠杆菌引起的疾病，而大量使用抗生素添加剂，致使动物携带的耐药菌株越来越多，它不但使抗生素的治疗效果降低，用药量加大、疗程延长，而且会通过食物等途径将耐药菌感染人类。特别是近些年来，具有高耐药性的超级细菌越来越引起国际社会的关注。
近30年来，国内外许多研究者都在积极寻找消除耐药质粒的有效方法，以逆转细菌耐药性。我国中医药历史悠久，可作用于细菌的多个不同部位、靶位及繁殖的不同阶段，并对细菌多个代谢环节起作用。有报道称某些中草药具有消除细菌耐药性的作用，且对机体的正常生理生化功能的副作用甚小，与其他耐药性消除剂相比具有明显的优势。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能消除大肠杆菌耐药性且对大肠杆菌具有抗菌性能的中药复方。
本发明还要解决的技术问题是提供上述中药复方的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述中药复方的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方，它包括如下重量份数的组分：金银花8～10份，板蓝根8～10份，黄芩8～10份，防风8～10份，栀子8～10份，菊花8～10份，水牛角8～10份，牛羊胆酸8～10份，桑叶8～10份。
上述中药复方的制备方法，将配方量的金银花、板蓝根、黄芩、防风、栀子、菊花、水牛角、牛羊胆酸和桑叶粉碎，混合，加入1～5倍重量的水，煎煮2～3次，每次10～40分钟，收集滤液，真空抽滤，在100～105℃下恒温蒸干制成粉剂。
上述中药复方在制备抑制大肠杆菌药物中的应用。
有益效果：本发明的中药复方在具有消除或减弱细菌耐药性的作用，具有在临床上进一步推广的价值。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：
一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方，它包括如下重量份数的组分：金银花10份，板蓝根10份，黄芩10份，防风8～10份，栀子10份，菊花10份，水牛角10份，牛羊胆酸10份，桑叶10份。
制备方法：将配方量的金银花、板蓝根、黄芩、防风、栀子、菊花、水牛角、牛羊胆酸和桑叶粉碎，混合，加入4倍重量的水，煎煮40分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将上述滤渣中加入3倍重量的水，再次煎煮30分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将所得滤渣中加入2倍重量的水，再次煎煮20分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将之前所得所有滤液进行合并，真空抽滤，在102℃下恒温蒸干制成粉剂，密封保存备用。
实施例2：
一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方，它包括如下重量份数的组分：金银花8份，板蓝根8份，黄芩8份，防风8份，栀子8份，菊花10份，水牛角10份，牛羊胆酸10份，桑叶10份。
制备方法：将配方量的金银花、板蓝根、黄芩、防风、栀子、菊花、水牛角、牛羊胆酸和桑叶粉碎，混合，加入5倍重量的水，煎煮30分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将上述滤渣中加入4倍重量的水，再次煎煮40分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将所得滤渣中加入3倍重量的水，再次煎煮20分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将之前所得所有滤液进行合并，真空抽滤，在105℃下恒温蒸干制成粉剂，密封保存备用。
实施例3：
一种能消除大肠杆菌耐药性的中药复方，它包括如下重量份数的组分：金银花10份，板蓝根10份，黄芩10份，防风10份，栀子10份，菊花8份，水牛角8份，牛羊胆酸8份，桑叶8份。
制备方法：将配方量的金银花、板蓝根、黄芩、防风、栀子、菊花、水牛角、牛羊胆酸和桑叶粉碎，混合，加入3倍重量的水，煎煮20分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将上述滤渣中加入2倍重量的水，再次煎煮20分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将所得滤渣中加入1倍重量的水，再次煎煮10分钟，之后将滤渣和滤液进行分离；将之前所得所有滤液进行合并，真空抽滤，在100℃下恒温蒸干制成粉剂，密封保存备用。
实施例4：药理实验。
1材料与仪器试剂用品：
1.1材料：
1.1.1菌种：
对分离自病料中的几种大肠杆菌进行筛选，挑选出其中耐药性较强的三种菌株，最终选定nj-131、22VI和IM55为试验参考菌株。
1.1.2药物及中药复合剂
1.1.2.1自配中药复合剂：
实施例1 的配方及方法制得的中药复方。认定粉剂状态下的中药浓度为100％，取用时将其稀释到0.125g/mL。
1.1.2.2药敏纸片：
杭州天和微生物试剂有限公司生产的10种药敏纸片。抑菌环直径判断标准参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)2004年药敏试验判断标准执行(见表1)。
表1：纸片法药敏试验抑菌环直径判断标准(mm)
*注：S-敏感、I-中敏、R-耐药(下同)。
1.2仪器试剂用品：
麦康凯琼脂，LB琼脂液由杭州天和微生物试剂有限公司生产
普通肉汤培养基和营养琼脂由国药集团化学试剂有限公司生产
微量移液枪，各种型号试管，培养皿，EP管若干。
JN303-4恒温培养箱由南京江宁电器仪器厂生产
SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台及其配套设备由苏州净化设备有限公司生产
2方法步骤与结果数据
2.1大肠杆菌天然广谱耐药株的筛选
对已分离18株大肠杆菌做药敏实验，筛选天然广谱耐药菌株。用10种药敏纸片做药敏试验，对每种药敏纸片所产生的抑菌圈由小到大进行排名，此名次即为一种细菌对一种抗生素的耐药指数，从而每种细菌得到针对10种药敏纸片的10个排名耐药指数，将此10个耐药指数取算数平均数，算术平均数最小的即认为是耐药性最强的菌种(见表2)。
表2：筛选天然耐药菌株时药敏试验所得抑菌圈原始数据。
抑菌圈直径(mm)
由表2实验数据，并结合实际情况最终选定nj-131、22VI和IM55为以下实验中采用的天然强耐药菌株。
2.2中药复合剂处理消除耐药性
2.2.1菌种选用
nj-131、22VI、IM55。
2.2.2具体操作
由于加入本发明中药复合剂粉剂后培养液浑浊，为了便于检查试管内细菌生长情况故传代处理时改用酚红LB培养液，若试管内液体由红色变为橙色或黄色则说明试管内细菌生长良好。
在每根试管中加入配好的含0.002％酚红的LB培养液5mL，每管加入0.625g本发明中药复合剂，获得中药浓度为0.125g/mL的酚红LB培养液试管若干支备用。
将2.3.1中选取的三种细菌在配制好的酚红LB培养液试管中传至第4代。
2.2.3药敏试验
本步实验为了更广泛地反应中药对各种类型抗生素耐药性的消除情况故选用如下10种常用抗生素的药敏纸片进行操作：
β-内酰胺类：第二代头孢菌素：头孢西丁
第三代头孢菌素：头孢他定
氨基糖苷类：阿米卡星，妥布霉素
氯霉素类：氯霉素
大环内脂类：红霉素
多肽类：多粘菌素B
磺胺类：复方新诺明
喹诺酮类：环丙沙星，诺氟沙星
在含0.125g/mL浓度中药复合剂环境下传至第四代后取原代细菌与末代细菌做药敏试验，测得抑菌圈数据如下：
表3：中药复合剂消除耐药性处理后测得抑菌圈直径
单位：mm
3实验结果的讨论与分析：
病原性大肠杆菌是医学和兽医临床感染中最常见的病原菌之一，每年都会造成严重的人畜感染和流行。大肠杆菌耐药性的产生和扩散，已成为医学界的世界性难题之一，特别是近些年来，具有高耐药性的超级细菌(携带NDM-1基因的大肠杆菌)越来越引起国际社会的关注。各国除继续致力于筛选对耐药菌有效的新作用机制的抗生素外，并根据细菌产生耐药性机制，开始寻找能提高抗生素效能、消除细菌耐药性的物质。
我国中医药历史悠久，许多中草药对细菌都有一定的抗菌活性。有报道提示了某些中草药成分可能具有与一般抗生素迥然不同的抑菌机制。中草药活性成分多而复杂，可作用于细菌的多个不同部位、靶位及繁殖的不同阶段，并对细菌多个代谢环节起作用。而且研究结果表明，中草药的长期应用不仅没有筛选出对自身产生耐药性的菌株，也未发现多重耐药菌的产生。因此中草药与抗感染药物合并应用，不但能够恢复这些药物对细菌的抑杀作用，而且可以使细菌在药物环境中不能被诱导耐药，在抗感染的治疗药物研究中显示了极具吸引力的应用潜力，特别是保证动物性食品的安全，防止食源性动物耐药菌将耐药基因或质粒传递给人类致病菌，以及控制细菌耐药性的蔓延等方面都具有重要意义。
4关于耐药性消除的结果与讨论：
如上表3所示，经过中药处理，nj-131肺对头孢他定的抑菌圈直径由处理前的6mm(R)变为处理后的21mm(S)；对阿米卡星由处理前的6mm(R)变为21(S)；多粘菌素B由9mm(I)变为22mm(S)；头孢西丁由6mm(R)变为20(I)。该菌株对妥布霉素，氯霉素，红霉素，环丙沙星，诺氟沙星，复方新诺明的耐药性在处理前后没有明显变化。
IM55对头孢他定的抑菌圈直径由中药处理前的6mm(R)变为20(I)；氯霉素由9mm(R)变为18mm(S)；诺氟沙星由12mm(R)变为25mm(S)；多粘菌素B由7mm(R)变为16mm(S)，头孢西丁由6mm(R)变为25mm(S)。虽然前后都判定为耐药，但阿米卡星的抑菌圈由处理前的6mm变为了处理后的14mm；同样，虽然环丙沙星在处理前后都被判定为敏感，但其抑菌圈直径由21mm变为了28mm。IM55经中药处理，对妥布霉素，红霉素，复方新诺明的耐药性消除不明显。
22VI对头孢他定的抑菌圈直径由12mm(R)变为20mm(I)；阿米卡星由14mm(R)变为16mm(I)；氯霉素由6mm(R)变为14mm(I)；诺氟沙星由14mm(I)变为18mm(S)。红霉素在处理前后都被判为耐药(R)但是其抑菌圈由处理前的6mm变为处理后的10mm；复方新诺明在处理前后都被判为敏感(S)，但可见其抑菌圈在处理前后由16mm变为20mm。而该菌在中药处理前后对妥布霉素，环丙沙星，复方新诺明以及头孢西丁的耐药性变化不明显。
由上述实验数据可以看出，实验所用的三种菌株经过中药复合剂处理后，不仅对头孢类抗生素的耐药性消除有效，还对部分其他种类抗生素的耐药性具有较强的消除能力。
认为复方金银花对细菌耐药性的消除试验成功，证明该中药复合剂对大肠杆菌耐药性具有较强的消除作用。
5综述：
本实验证明中药复合剂复方金银花对在表形上对细菌耐药性具有较强的消除能力。
综上所述，本实验所用中药复合剂复方金银花具有消除或减弱细菌耐药性的作用，具有在临床上进一步推广的价值。
Claims (3)
1.一种能消除大肠杆菌耐药性的中药组合物，其特征在于，原料由如下重量份数的组分组成：金银花8～10份，板蓝根8～10份，黄芩8～10份，防风8～10份，栀子8～10份，菊花8～10份，水牛角8～10份，牛羊胆酸8～10份，桑叶8～10份。
2.权利要求1所述的能消除大肠杆菌耐药性的中药组合物的制备方法，其特征在于，将配方量的金银花、板蓝根、黄芩、防风，栀子、菊花、水牛角、牛羊胆酸和桑叶粉碎，混合，加入1～5倍重量的水，煎煮2～3次，每次10～40分钟，收集滤液，真空抽滤，在100～105℃下恒温蒸干制成粉剂。
3.权利要求1所述的能消除大肠杆菌耐药性的中药组合物在制备抑制大肠杆菌药物中的应用。
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