CN102590297B - 一种ZnO/酶生物传感器的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种ZnO/酶生物传感器及制备方法,现有装置方法工艺复杂,对试验环境要求苛刻,重复性差。本发明包括包括衬底、导电薄膜层、绝缘包裹层、ZnO纳米材料层、生物酶分子,首先衬底上蒸镀导电薄膜层形成基片,基片一端面积为a×b的矩形Ⅰ上生长ZnO纳米材料层,生物酶分子固定在ZnO纳米材料层内,基片另一端面积为c×d的矩形Ⅱ保留,绝缘包裹层将基片中间段包裹。本发明制备工艺简单、无污染,原材料丰富、廉价,特别适合制备大批量低成本的ZnO/酶生物传感器。
Description
技术领域
本发明属于酶生物传感器制备技术领域,特别涉及一种ZnO/酶生物传感器及制备方法。
背景技术
ZnO属于宽带隙第三代半导体材料,对于生物传感应用方面,ZnO纳米材料具有很多优势:高的比表面、良好的电传导能力、良好的生物兼容性、无毒、化学稳定性、环境友好等,特别是它的等电点高达9.5,这使得ZnO结构表面的生物分子自组装和修饰更容易操作且可靠。ZnO纳米材料异常丰富的形貌也为其在传感器领域的应用提供了更灵活的设计思路。这些优点完全符合构建生物传感器对载体材料的特殊要求,使其在生物化学传感器领域的应用上具有很强的吸引力。
目前制备ZnO纳米材料的方法有水热、电化学、热蒸、溶胶凝胶等,这些方法工艺复杂,对试验环境要求苛刻,重复性差,并且产量小不适合批量生产,难以满足ZnO纳米材料和器件的迅速实用化的需要,另外敏感性能差也是制约实用化的另一障碍。多孔的一维纳米材料相对于无孔的一维纳米材料具有更大的比表面,因此更有利于生物传感性能的提高,目前,还没有多孔一维ZnO纳米材料用于生物传感器的制作。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现存技术的不足,提供一种ZnO/酶生物传感器及制备方法。
一种ZnO/酶生物传感器,包括衬底、导电薄膜层、绝缘包裹层、ZnO纳米材料层、生物酶分子;
所述的中间段的一端与ZnO纳米材料层相接,即矩形Ⅰ相接;另一端与矩形Ⅱ相接。
一种ZnO/酶生物传感器制备方法,包括如下步骤:
所述的e、f为衬底相邻的两条边,e为 1 mm 3 mm ,f为10mm;
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为ab的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为10~15 wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为0.8~1.2;并将该混合溶液于40℃~60℃加热搅拌10~30min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:8~1:12;纺丝距离10~20cm;直流电压6~10KV;纺丝时间为4~8小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度为5~10℃每分钟,保温温度为500~700℃,保温时间为1~2小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层的基片,然后将该基片放入烘干箱备用。
步骤(5).用浓度为0.067 mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067 mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为6.8~7.2的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成5.0 ~15mg ml-1的酶溶液,将5~15ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层上,等晾干后,将5~15ml 浓度为0.5 wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米材料层上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层包裹;
所述的绝缘包裹层材料为WAX或者PMMA。
本发明有益效果如下:
本发明中ZnO一维纳米纤维具有广泛分布的微孔,相对于其它方法制备的ZnO一维纳米材料具有更大的比表面,能为酶分子固定提供更大的表面和更好的保持起活性的微环境。本发明制备的ZnO/酶生物传感器对所测物质表现出很高的灵敏度,很快的反应速度,较低的探测限度和较宽的线性范围,并且实现了ZnO/酶生物传感器的快速、低成本、无污染、大批量生产。
总之,本发明制备工艺简单、无污染,原材料丰富、廉价,特别适合制备大批量低成本的ZnO/酶生物传感器。
附图说明
图1为本发明结构示意图;
图2(a)单根ZnO纳米纤维的高倍扫描电子显微镜照片;
图2(b)ZnO纳米纤维之间的连接点的扫描电子显微镜照片;
图2(c)ZnO纳米纤维的低倍扫描电子显微镜照片;
图3 ZnO纳米纤维的X射线衍射图谱;
图4 加入过氧化氢前后ZnO/过氧化物酶生物传感器的CV循环曲线;
图5(a)电流随过氧化氢密度变化曲线;
图5(b)电流随过氧化氢密度变化曲线的线性拟合;
图中,衬底1、导电薄膜层2、绝缘包裹层3、ZnO纳米材料层4、生物酶分子5。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步说明。
如图1所示,一种ZnO/酶生物传感器,包括衬底1、导电薄膜层2、绝缘包裹层3、ZnO纳米材料层4、生物酶分子5;
所述的中间段的一端与ZnO纳米材料层相接,即矩形Ⅰ相接;另一端与矩形Ⅱ相接。
一种ZnO/酶生物传感器制备方法,包括如下步骤:
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为ab的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为10~15 wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为0.8~1.2;并将该混合溶液于40℃~60℃加热搅拌10~30min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:8~1:12;纺丝距离10~20cm;直流电压6~10KV;纺丝时间为4~8小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度为5~10℃每分钟,保温温度为500~700℃,保温时间为1~2小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层4的基片,然后将该基片放入烘干箱备用。ZnO纳米纤维的扫描电镜图片如图2(a)、图2(b)、图2(c)所示,图3所示为ZnO纳米纤维的X射线衍射图谱。
步骤(5).用浓度为0.067 mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067 mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为6.8~7.2的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成5.0 ~15mg ml-1的酶溶液,将5~15ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层4上,等晾干后,将5~15ml 浓度为0.5 wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米材料层4上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层3包裹;
所述的绝缘包裹层3材料为WAX或者PMMA;
所述的生物酶为过氧化氢酶、葡萄糖氧化物酶或其他酶。
ZnO /酶生物传感器的生物传感性能测试如下:
针对其中一种ZnO/过氧化物酶生物传感器,在室温下测试,采用WPG100e电化学工作站的三电极测试系统,将ZnO /过氧化物酶生物传感器作为工作电极,Pt电极为对电极,Ag/AgCl电极为参比电极,测试在磷酸盐缓冲溶液中进行。
测试结果为:ZnO /过氧化物酶生物传感器对过氧化氢表现出的灵敏度较高、响应速度较快、探测限度低、线性范围宽。ZnO/过氧化物酶生物传感器的电化学测试结果如图4、图5(a)、图5(b)所示。
实施例1
步骤(1).将二氧化硅片或者玻璃片切成3mm×10 mm的衬底1,并将衬底1先用无水酒精超声清洗50分钟,再用蒸馏水超声清洗50分钟,然后放入烘干箱备用;
步骤(2).将干燥的衬底1用电子束蒸发或者磁控溅射镀一层导电薄膜层2形成基片,导电薄膜层2厚度为200nm。
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为3 mm 3mm的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为12 wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为1;并将该混合溶液于40℃加热搅拌30min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:8;纺丝距离20cm;直流电压8KV;纺丝时间为8小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度10℃每分钟,保温温度为600℃,保温时间为1.5小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层4的基片,然后将该基片放入烘干箱备用。
步骤(5).用浓度为0.067 mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067 mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为7的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成10mg ml-1的酶溶液,将15ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层4上,等晾干后,将15ml 浓度为0.5 wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米材料层4上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层3包裹;
所述的绝缘包裹层3材料为WAX;
实施例2
步骤(1).将二氧化硅片或者玻璃片切成2mm×10 mm的衬底1,并将衬底1先用无水酒精超声清洗40分钟,再用蒸馏水超声清洗40分钟,然后放入烘干箱备用;
步骤(2).将干燥的衬底1用电子束蒸发或者磁控溅射镀一层导电薄膜层2形成基片,导电薄膜层2厚度为100nm。
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为2 mm 2mm的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为10 wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为0.8;并将该混合溶液于50℃加热搅拌20min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:10;纺丝距离15cm;直流电压10KV;纺丝时间为6小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度为7℃每分钟,保温温度为700℃,保温时间为1小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层4的基片,然后将该基片放入烘干箱备用。
步骤(5).用浓度为0.067 mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067 mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为6.8的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成15mg ml-1的酶溶液,将10ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层4上,等晾干后,将10ml 浓度为0.5 wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米材料层4上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层3包裹;
所述的绝缘包裹层3材料为PMMA;
实施例3
步骤(1).将二氧化硅片或者玻璃片切成1mm×10 mm的衬底1,并将衬底1先用无水酒精超声清洗30分钟,再用蒸馏水超声清洗30分钟,然后放入烘干箱备用;
步骤(2).将干燥的衬底1用电子束蒸发或者磁控溅射镀一层导电薄膜层2形成基片,导电薄膜层2厚度为50nm。
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为1 mm 1mm的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为15 wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为1.2;并将该混合溶液于60℃加热搅拌10min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:12;纺丝距离10cm;直流电压6KV;纺丝时间为4小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度为5℃每分钟,保温温度为500℃,保温时间为2小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层4的基片,然后将该基片放入烘干箱备用。
步骤(5).用浓度为0.067 mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067 mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为7.2的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成5.0 mg ml-1的酶溶液,将5ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层4上,等晾干后,将5ml 浓度为0.5 wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米材料层4上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层3包裹;
所述的绝缘包裹层3材料为WAX。
Claims (1)
1.一种ZnO/酶生物传感器制备方法,包括如下步骤:
步骤(1).将二氧化硅片或者玻璃片切成e×f的衬底(1),并将衬底(1)先用无水酒精超声清洗30~50分钟,再用蒸馏水超声清洗30~50分钟,然后放入烘干箱备用;
所述的e、f为衬底(1)相邻的两条边,e为1mm~3mm,f为10mm;
步骤(2).将干燥的衬底(1)用电子束蒸发或者磁控溅射镀一层导电薄膜层(2)形成基片,导电薄膜层(2)厚度为50~200nm;
步骤(3).将基片用于高压静电纺丝,基片一端暴露面积为a×b的矩形Ⅰ,其余部分暂时遮住,高压静电纺丝参数:将乙酸锌溶于浓度为10~15wt%聚乙烯醇水溶液形成混合溶液,其中聚乙烯醇与乙酸锌质量比为0.8~1.2;并将该混合溶液于40℃~60℃加热搅拌10~30min,加热搅拌期间逐滴滴加无水酒精,酒精与混合溶液体积比为1:8~1:12;纺丝距离10~20cm;直流电压6~10KV;纺丝时间为4~8小时;
步骤(4).将电纺沉积复合材料后的基片,在含有空气的石英管中直接加热退火,升温速度为5~10℃每分钟,保温温度为500~700℃,保温时间为1~2小时,最后自然降至室温,即得到生长有ZnO纳米材料层(4)的基片,然后将该基片放入烘干箱备用;
步骤(5).用浓度为0.067mol/L的磷酸二氢钠和浓度为0.067mol/L的磷酸氢二钠配制成 pH值为6.8~7.2的磷酸盐缓冲溶液,然后在该磷酸盐缓冲溶液中加入生物酶,室温搅拌配制成5.0~15mg ml-1的酶溶液,将5~15ml酶溶液滴到ZnO纳米材料层(4)上,等晾干后,将5~15ml浓度为0.5wt%的壳聚糖溶液滴加到ZnO纳米纤维层上,然后放入温度为4℃的冰箱过夜干燥,最后将干燥的基片中间段用绝缘包裹层(3)包裹,制得ZnO/酶生物传感器;
所述的绝缘包裹层(3)材料为WAX或者PMMA;
所述的ZnO/酶生物传感器,包括衬底(1)、导电薄膜层(2)、绝缘包裹层(3)、ZnO纳米材料层(4)、生物酶分子(5);
衬底(1)上蒸镀导电薄膜层(2)形成基片,基片一端面积为a×b的矩形Ⅰ上生长ZnO纳米材料层(4),生物酶分子(5)固定在ZnO纳米材料层(4) 内,基片另一端面积为c×d的矩形Ⅱ保留,绝缘包裹层(3)将基片中间段包裹;
所述的a、b为矩形Ⅰ相邻的两条边,a为1mm~3mm,b为1mm~3mm;
所述的c、d为矩形Ⅱ相邻的两条边,c为2mm~3mm,d为2mm~3mm;
所述的中间段的一端与ZnO纳米材料层(4)相接,即与矩形Ⅰ相接;另一端与矩形Ⅱ相接。
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