CN102586049A - 粮食与甘蔗汁发酵的非蒸馏酒及其工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备非蒸馏酒的方法，其包括：取大米加入α淀粉酶进行液化，加入糖化酶进行糖化，加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂进行初步发酵，加入甘蔗汁，密封发酵，得到非蒸馏酒。另外本发明还提供了制备得到的非蒸馏酒和酵母以及絮凝蛋白变体和基因。
Description
技术领域
本发明属于发酵技术和酿酒技术领域，具体而言，本发明涉及用粮食和甘蔗汁为原料发酵的非蒸馏酒及其工艺。
背景技术
以果品为原料发酵酿酒，会带来浓郁的果香等各种私人有好感的香气。例如，本发明人的中国专利200910114150公开了以桂圆和甘蔗汁为原料生产白酒的方法，该酒可以带有桂圆和甘蔗的清香。又如，本发明人的中国专利200910114151公开了以桂圆和甘蔗汁为原料生产白兰地酒的方法，该酒也可以带有桂圆和甘蔗的清香。
然而，这些酒使用的原料较粮食昂贵，造成成本较高。尽管有些酿酒酵母本身能够给酒带来一些独特的风味，但是这类酵母往往却失酿酒产业中所需的一些优良工艺特性，如絮凝性。以这些酵母出发进行诱变筛选，尽管可以改善工艺特性，但是风味特性往往会在诱变中失去。
为此，本发明人经过长期而艰苦的研究，开发了新的用粮食和甘蔗汁为原料发酵非蒸馏酒的工艺。该工艺制备的酒不但能够保持酿酒酵母所带来的独特风味，从而减少甚至无需较为昂贵的原料的使用，而且具有优良的工艺特性，方便酿造过程，进一步节约了成本。更为令人意外的是，该工艺中所使用的酵母的絮凝性随着发酵酒液中含糖量的变化而变化，而且在含糖量高的时候絮凝率低，有益于充分发酵，而在含糖量低的时候絮凝率高，便于发酵结束后酒液的分离。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供新的用粮食和甘蔗汁为原料发酵非蒸馏酒的工艺。另外，本发明还提供了用该工艺生产的非蒸馏酒以及该工艺中所使用的酵母和基因。
具体而言，在第一方面，本发明提供了用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备非蒸馏酒的方法，其包括：
(1)取大米粉碎后，加水浸泡并煮熟，然后加入α淀粉酶进行液化，得到液化料；
(2)将步骤(1)获得的液化料调节成酸性，加入糖化酶进行糖化，得到糖化液；
(3)向步骤(2)获得的糖化液加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂，于23～35℃密封发酵12～60小时，得到初步发酵液；
(4)向步骤(3)获得的初步发酵液加入甘蔗汁，密封发酵至残糖含量＜4克/L时，得到酒液；和
(5)过滤步骤(4)获得的酒液的上清液，任选进一步对所述上清液进行灭菌和/或勾兑所述上清液，得到非蒸馏酒。
在本文中，絮凝优化特性指的是酵母在含糖环境下絮凝率低，而在无糖环境下絮凝率高。这种特性对于酿酒过程是尤其有益的。因为，在发酵初期，发酵液中含糖量高，此时不具有絮凝性质或絮凝率低的酵母，将尽量使其在发酵液中保持悬浮状态，从而使得发酵更为充分，提高发酵效率；在发酵结束时，发酵液中含糖量低，此时具有絮凝性质或絮凝率高的酵母，将容易沉淀到发酵罐底部，便于发酵终止后收集酒体。
优选在本发明第一方面的方法中，大米和甘蔗汁的重量体积比(kg/L)为1～10∶1～10，优选为3～8∶3∶8，更优选为1∶1。
在本发明中，大米和甘蔗汁分别在不同的步骤加入。优选在本发明第一方面的方法中，甘蔗汁的糖度为5～20°Bx，优选为10～18°Bx，更优选为15°Bx。甘蔗汁的糖度可以通过新鲜榨出的甘蔗汁加水稀释调节。
在本发明中，液化和糖化可以按照本领域常规的粮食液化和糖化过程进行。其中所用的试剂，如淀粉酶和糖化酶都已经是很成熟的商品了。优选在本发明第一方面的方法中，液化的条件是：α淀粉酶用量为5～15U/克大米原料，于50～60℃搅拌15～60分钟，然后升温至85～97℃继续搅拌20～60分钟。也优选在本发明第一方面的方法中，糖化的条件是：于50～65℃加入糖化酶100～300U/克大米原料，保温45～120分钟。
优选在本发明第一方面的方法中，调节成酸性是乳酸调节pH至4.0～4.8，优选调节pH至4.1～4.5，更优选调节pH至4.2。
优选在本发明第一方面的方法中，具有絮凝优化特性的酵母是包含絮凝蛋白变体基因的酵母，所述絮凝蛋白变体基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。野生型絮凝蛋白的氨基酸序列如GenBank登录号CAA55024.1所示，其能赋予不具有絮凝性质的酵母以絮凝性质。尽管野生型絮凝蛋白给酵母赋予的絮凝性质较强，但是这种性质在含糖环境下也很强，这样造成了发酵过程中酵母也容易沉淀在发酵罐底部，造成发酵效率低下，因此实践中并没有得到推广。本发明人经过长期研究，偶然在我们的发酵中发现了一株具有絮凝优化特性的酵母，经过委托研究，发现其是絮凝蛋白相对于野生型絮凝蛋白发生了至少三处氨基酸位点的突变。将该絮凝蛋白变体基因导入其他现有酵母，如不具有絮凝性质的酵母，能够赋予该酵母絮凝优化特性，而且不改变该酵母原有发酵风味。因此，使得具有发酵风味但不具有絮凝优化特性的现有酵母能够得以重新利用。
优选在本发明第一方面的方法中，发酵助剂是Fermaid K。这是对酵母发酵很有益的发酵助剂，目前已经商品化。
在本发明第一方面的方法中，密封发酵至残糖含量＜4克/L，通常需要在18～22℃，密封发酵9～12天。
在第二方面，本发明提供了本发明第一方面的方法制备的非蒸馏酒。这种酒能够保留原有酵母的发酵风味，而且便于酒液的后期纯化，由于酵母主要沉积在发酵罐底部，只需要取酒液的上清，经过简单的过滤即可获得澄清的酒体。
在第三方面，本发明提供了絮凝蛋白变体，其氨基酸序列如SEQ ID No：2所示。本领域技术人员可以根据絮凝蛋白变体的氨基酸序列推导出其编码核苷酸序列，优选是密码子优化的核苷酸序列，如针对发酵所用的菌密码子使用情况优化的。
在第四方面，本发明提供了编码本发明第三方面的絮凝蛋白变体的基因。该基因通 过常规的DNA重组技术，可以导入质粒和菌体(如，酵母)，表达本发明第三方面的絮凝蛋白变体。优选本发明第四方面的基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。该优选的基因核苷酸序列的密码子针对酿酒酵母宿主优化，而且密码子优化表不是根据现有公开的优化表进行的，而是根据我们长期研究发现的，在除了对单个密码子优化之外，还兼顾了CG含量的优化。
在第五方面，本发明提供了本发明第四方面的基因在发酵制备非蒸馏酒的方法中的应用。该基因可以赋予酵母以絮凝优化特性，因而对发酵制备非蒸馏酒而言是非常有益的。优选在本发明第五方面的应用中，所述方法是本发明第一方面的方法。
本发明具有下列优点和效果：在发酵初期发酵液中含糖量高时，酵母将尽量使其在发酵液中保持悬浮状态，从而使得发酵更为充分，提高发酵效率；在发酵结束发酵液中含糖量低时，酵母将容易沉淀到发酵罐底部，便于发酵终止后收集酒体；能够赋予酵母以絮凝优化特性，从而可以利用原有发酵特性优良而絮凝性质不佳的酵母，充分利用目前发酵厂和酒厂的酵母资源；本发明的酒带有甘蔗清香并能继承原有发酵特性优良的酵母的特性，香味吸引人，能够达到与加入唱本昂贵的原料相似的效果；本发明的酒使用了粮食作为发酵原料，降低了生产成本。
为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外，本发明引用了公开文献，这些文献也是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本发明进行参考，就好像它们的全文已经在本发明说明书中重复叙述过一样。
具体实施方式
以下本文将通过具体的实施例来描述发明。如未特别指明之处，可根据本领域技术 人员所熟悉的酿酒技术和基因重组技术手册以及本文所引用的参考文献中所列的方法来实施。另外，实施例中所使用的材料和设备均可从市场上购买。
实施例1絮凝性质优化的酵母的获得
根据我们设计的基因序列(SEQ ID No：1，其编码的蛋白变体的氨基酸序列为SEQ IDNo：2)，通过商业途径委托广东暨大基因药物工程研究中心有限公司合成我们发现的絮凝蛋白变体基因并构建入酿酒酵母中。克隆过程参照《分子克隆实验指南》以及所用商品化试剂的操作指南进行，简要过程如下：
通过DNA自动合成仪，合成絮凝蛋白变体基因的核酸片段，用T4多核苷酸激酶(购自TaKaRa公司)将这些核酸片段的5’端进行磷酸化，然后等摩尔比混合这些核酸片段后于75℃变性5分钟，然后退火降温至12℃，加入T4DNA连接酶(购自TaKaRa公司)连接12小时。然后，取1μL上述连接产物在50μL反应体积中进行PCR扩增，其中正向引物如序列表的SEQID No：3所示(引入了EcoR I内切酶位点)、反向引物如序列表的SEQ ID No：4所示(引入了Xba I内切酶位点)，反应条件为：以94℃变性2分钟，然后以94℃变性30秒、63℃退火60秒并72℃延伸90秒进行30个循环，最后以72℃延伸12分钟并降温至4℃。
琼脂糖凝胶电泳上述PCR产物，回收约4.5kb大小的片段，用EcoR I和Xba I双酶切该片段，并与经这两个内切酶酶切的pYESS2/CT质粒(可购自Invitrogen公司)用T4DNA连接酶进行连接，电转化法将pYESS-fln质粒转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)QN732株(购自广西易多收生物科技有限公司，其为非凝絮性酵母，但是发酵产生的酒中有淡淡巧克力香味)中，涂布在选择性培养基上培养，取生长出的酵母提取总DNA后，用上述正向引物和反向引物PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳发现有约4.5kb大小的片段，表明已经将如序列表的SEQ ID No：1所示的基因导入了酿酒酵母中了。同时，将pYESS2/CT空质粒和克隆有野生型絮凝蛋白基因的pYESS2/CT质粒电转化入该非凝絮性酵母，分别作为阴性对照和阳性对照。
我们将20mL絮凝检测液(50mmol/L柠檬酸钠，5mmol/LEDTA，20mmol/L CaCl2，pH 4.5；并分别加入以下终浓度的物质：不加入(无糖)，1M葡萄糖)置于50mL摇瓶中，分别加入上述各酵母细胞1克(湿重)，以30℃、100r/min振荡培养2小时。然后，取5mL细胞悬浮液至10mL试管中，立刻在液面取样200μL，垂直静置5分钟，然后在液面取样200μL，分别测定垂直静置前后的OD600值，计算絮凝率(絮凝率＝(1-垂直静置后的OD600值/垂直静置前的OD600值)*100％)。结果如表1所示，酿酒酵母QN732基本不具有絮凝性质；克隆了野生型絮凝蛋白基因后，无论在无糖还是在含糖环境下，酵母都将具有絮凝性质；本发明的絮凝蛋白变体基因转入的酵母在含糖环境下不具有絮凝性质，将保持悬浮状态发酵，而在无糖环境下将具有絮凝性质，容易沉淀到发酵罐底部，便于发酵终止后收集。
表1各酵母在含糖或不含糖条件下的絮凝率
实施例2非蒸馏酒的制备
将500克大米磨碎，加700克水浸泡1小时，然后煮熟，加2公斤水和α淀粉酶(可购自南宁赛华发酵制品有限公司)10U/克大米原料，于55℃搅拌30分钟，然后升温至95℃继续搅拌30分钟，使大米液化。然后加入乳酸调节pH至4.2，于58℃加入糖化酶(可购自南宁赛华发酵制品有限公司)150U/克大米原料，保温90分钟，去除糟渣后得到糖化液。
将上述糖化液装入灭菌的发酵罐，加入实施例1的克隆有絮凝蛋白变体基因的酵母2克(干重)和发酵助剂Fermaid K(可购自上海杰兔工贸有限公司)5克，于28℃发酵48小时，然后加入0.5L 15°Bx的甘蔗汁(新榨甘蔗汁用水稀释到15°Bx，然后高温灭菌，即成)，温度控制在18～22℃，密封发酵9～12天。当残糖＜4克/L时，发酵结束，由于此时酵母基本沉积在罐底，因此将上清液部分简单过滤即可取得澄清的酒体，经巴氏灭菌，加水稀释至含酒精12％(体积比)即可装瓶。多批次酿造后，经检测，各批次酒理化指标稳定(见 表2)，符合国家酒类的标准；该酒香味中带有甘蔗汁的清香和巧克力的清香，口感丰满。
表2理化指标
| 项目 | 酒精含量％(vol) | 甲醇含量/(g/L) | 铜含量(mg/L) |
| 指标 | 12 | ≤1.5 | ≤5.0 |
序列表
<110>长东，叶
<120>粮食与甘蔗汁发酵的非蒸馏酒及其工艺
<130>CN
<160>4
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>4614
<212>DNA
<213>酿酒酵母
<400>1
atgaccatgc cgcatcgcta tatgtttctg gcggtgttta ccctgctggc gctgaccagc 60
gtggcgagcg gcgcgaccga agcgtgcctg ccggcgggcc agcgcaaaag cggcatgaac 120
attaactttt atcagtatag cctgaaagat agcagcacct atagcaacgc ggcgtatatg 180
gcgtatggct atgcgagcaa aaccaaactg ggcaacgtgg gcggccagac cgatattagc 240
attgattata acattccgtg cgtgagcagc agcggcacct ttccgtgccc gcaggaagat 300
agctatggca actggggctg caaaggcatg ggcgcgtgca gcaacagcca gggcattgcg 360
tattggagca ccgatctgtt tggcttttat accaccccga ccaacgtgac cctggaaatg 420
accggctatt ttctgccgcc gcagaccggc agctatacct ttaaatttgc gaccgtggat 480
gatagcgcga ttctgagtgt gggcggcgcg accgcgttta actgctgcgc gcagcagcag 540
ccgccgatta ccagcaccaa ctttaccatt gatggcatta aaccgtgggg cggcagcctg 600
ccgccgaaca ttgaaggcac cgtgtatatg tatgcgggct attattatcc gatgaaagtg 660
gtgtatagca acgcggtgag ctggggcacc ctgccgatta gcgtgaccct gccggatggc 720
accaccgtga gcgatgattt tgaaggctat gtgtatagct ttgatgatga tctgagccag 780
agcaactgca ccgtgccgga tccgagcaac catgcggtga gcaccaccac caccaccacc 840
gaaccgtgga ccggcacctt taccagcacc agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc 900
aacggcgtgc cgaccgatga aaccgtgatt gtgattcgca ccccgaccac cgcgagcacc 960
attattacca ccaccgaacc gtggaacagc accttgacca gcaccagcac cgaactgacc 1020
accgtgaccg gcaccaacgg cgtgcgcacc gatgaaacca ttattgtgat tcgcaccccg 1080
accaccgcga ccaccgcgat taccaccacc gaaccgtgga acagcacctt taccagcacc 1140
agcaccgaac tgaccaccgt gaccggcacc aacggcctgc cgaccgatga aaccattatt 1200
gtgattcgca ccccgaccac cgcgaccacc gcgatgacca ccacccagcc gtggaacgat 1260
acctttacca gcaccagcac cgaaatgacc accgtgaccg gcaccaacgg cctgccgacc 1320
gatgaaacca ttattgtgat tcgcaccccg accaccgcga ccaccgcgat gaccaccacc 1380
cagccgtggg atgatacctt taccagcacc agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc 1440
aacggcctgc cgaccgatga aaccattatt gtgattcgca ccccgaccac cgcgaccacc 1500
gcgatgacca ccacccagcc gtggaacgat acctttacca gcaccagcac cgaaatgacc 1560
accgtgaccg gcaccaacgg cctgccgacc gatgaaacca ttattgtgat tcgcaccccg 1620
accaccgcga ccaccgcgat gaccaccacc cagccgtgga acgatacctt taccagcacc 1680
agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc aacggcctgc cgaccgatga aaccattatt 1740
gtgattcgca ccccgaccac cgcgaccacc gcgattacca ccaccgaacc gtggaacagc 1800
acctttacca gcaccagcac cgaactgacc accgtgaccg gcaccaacgg cctgccgacc 1860
gatgaaacca ttattgtgat tcgcaccccg accaccgcga ccaccgcgat gaccaccacc 1920
cagccgtgga acgatacctt taccagcacc agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc 1980
aacggcctgc cgaccgatga aaccattatt gtgattcgca ccccgaccac cgcgaccacc 2040
gcgatgacca ccacccagcc gtggaacgat acctttacca gcaccagcac cgaaatgacc 2100
accgtgaccg gcaccaacgg cctgccgacc gatgaaacca ttattgtgat tcgcaccccg 2160
accaccgcga ccaccgcgat gaccaccacc cagccgtgga acgatacctt taccagcacc 2220
agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc aacggcgtgc cgaccgatga aaccgtgatt 2280
gtgattcgca ccccgaccag cgaaggcctg attagcacca ccaccgaacc gtggaccggc 2340
acctttacca gcaccagcac cgaaatgacc accgtgaccg gcaccaacgg ccagccgacc 2400
gatgaaaccg tgattgtgat tcgcaccccg accagcgaag gcctggtgac caccaccacc 2460
gaaccgtgga ccggcacctt taccagcacc agcaccgaaa tgaccaccat taccggcacc 2520
aacggcgtgc cgaccgatga aaccgtgatt gtgattcgca ccccgaccag cgaaggcctg 2580
attagcacca ccaccgaacc gtggaccggc acctttacca gcaccagcac cgaaatgacc 2640
accattaccg gcaccaacgg ccagccgacc gatgaaaccg tgattgtgat tcgcaccccg 2700
accagcgaag gcctgattag caccaccacc gaaccgtgga ccggcacctt taccagcacc 2760
agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc aacggcgtgc cgaccgatga aaccgtgatt 2820
gtgattcgca ccccgaccag cgaaggcctg attagcacca ccaccgaacc gtggaccggc 2880
acctttacca gcaccagcac cgaagtgacc accattaccg gcaccaacgg ccagccgacc 2940
gatgaaaccg tgattgtgat tcgcaccccg accagcgaag gcctgattag caccaccacc 3000
gaaccgtgga ccggcacctt taccagcacc agcaccgaaa tgaccaccgt gaccggcacc 3060
aacggccagc cgaccgatga aaccgtgatt gtgattcgca ccccgaccag cgaaggcctg 3120
gtgaccacca ccaccgaacc gtggaccggc acctttacca gcaccagcac cgaaatgagc 3180
accgtgaccg gcaccaacgg cctgccgacc gatgaaaccg tgattgtggt gaaaaccccg 3240
accaccgcga ttagcagcag cctgagcagc agcagcagcg gccagattac cagcagcatt 3300
accagcagcc gcccgattat taccccgttt tatccgagca acggcaccag cgtgattagc 3360
agcagcgtga ttagcagcag cgtgaccagc agcctgttta ccagcagccc ggtgattagc 3420
agcagcgtga ttagcagcag caccaccacc agcaccagca tttttagcga aagcagcaaa 3480
agcagcgtga ttccgaccag cagcagcacc agcggcagca gcgaaagcga aaccagcagc 3540
gcgggcagcg tgagcagcag cagctttatt agcagcgaaa gcagcaaaag cccgacctat 3600
agcagcagca gcctgccgct ggtgaccagc gcgaccacca gccaggaaac cgcgagcagc 3660
ctgccgccgg cgaccaccac caaaaccagc gaacagacca ccctggtgac cgtgaccagc 3720
tgcgaaagcc atgtgtgcac cgaaagcatt agcccggcga ttgtgagcac cgcgaccgtg 3780
accgtgagcg gcgtgaccac cgaatatacc acctggtgcc cgattagcac caccgaaacc 3840
accaaacaga ccaaaggcac caccgaacag accaccgaaa ccaccaaaca gaccaccgtg 3900
gtgaccatta gcagctgcga aagcgatgtg tgcagcaaaa ccgcgagccc ggcgattgtg 3960
agcaccagca ccgcgaccat taacggcgtg accaccgaat ataccacctg gtgcccgatt 4020
agcaccaccg aaagccgcca gcagaccacc ctggtgaccg tgaccagctg cgaaagcggc 4080
gtgtgcagcg aaaccgcgag cccggcgatt gtgagcaccg cgaccgcgac cgtgaacgat 4140
gtggtgaccg tgtatccgac ctggcgcccg cagaccgcga acgaagaaag cgtgagcagc 4200
aaaatgaaca gcgcgaccgg cgaaaccacc accaacaccc tggcggcgga aaccaccacc 4260
aacaccgtgg cggcggaaac cattaccaac accggcgcgg cggaaaccaa aaccgtggtg 4320
accagcagcc tgagccgcag caaccatgcg gaaacccaga ccgcgagcgc gaccgatgtg 4380
attggccata gcagcagcgt ggtgagcgtg agcgaaaccg gcaacaccaa aagcctgacc 4440
agcagcggcc tgagcaccat gagccagcag ccgcgcagca ccccggcgag cagcatggtg 4500
ggctatagca ccgcgagcct ggaaattagc acctatgcgg gcagcgcgaa cagcctgctg 4560
gcgggcagcg gcctgagcgt gtttattgcg agcctgctgc tggcgattat ttaa 4614
<210>2
<211>1537
<212>PRT
<213>酿酒酵母
<400>2
Met Thr Met Pro His Arg Tyr Met Phe Leu Ala Val Phe Thr Leu Leu
1 5 10 15
Ala Leu Thr Ser Val Ala Ser Gly Ala Thr Glu Ala Cys Leu Pro Ala
20 25 30
Gly Gln Arg Lys Ser Gly Met Asn Ile Asn Phe Tyr Gln Tyr Ser Leu
35 40 45
Lys Asp Ser Ser Thr Tyr Ser Asn Ala Ala Tyr Met Ala Tyr Gly Tyr
50 55 60
Ala Ser Lys Thr Lys Leu Gly Asn Val Gly Gly Gln Thr Asp Ile Ser
65 70 75 80
Ile Asp Tyr Asn Ile Pro Cys Val Ser Ser Ser Gly Thr Phe Pro Cys
85 90 95
Pro Gln Glu Asp Ser Tyr Gly Asn Trp Gly Cys Lys Gly Met Gly Ala
100 105 110
Cys Ser Asn Ser Gln Gly Ile Ala Tyr Trp Ser Thr Asp Leu Phe Gly
115 120 125
Phe Tyr Thr Thr Pro Thr Asn Val Thr Leu Glu Met Thr Gly Tyr Phe
130 135 140
Leu Pro Pro Gln Thr Gly Ser Tyr Thr Phe Lys Phe Ala Thr Val Asp
145 150 155 160
Asp Ser Ala Ile Leu Ser Val Gly Gly Ala Thr Ala Phe Asn Cys Cys
165 170 175
Ala Gln Gln Gln Pro Pro Ile Thr Ser Thr Asn Phe Thr Ile Asp Gly
180 185 190
Ile Lys Pro Trp Gly Gly Ser Leu Pro Pro Asn Ile Glu Gly Thr Val
195 200 205
Tyr Met Tyr Ala Gly Tyr Tyr Tyr Pro Met Lys Val Val Tyr Ser Asn
210 215 220
Ala Val Ser Trp Gly Thr Leu Pro Ile Ser Val Thr Leu Pro Asp Gly
225 230 235 240
Thr Thr Val Ser Asp Asp Phe Glu Gly Tyr Val Tyr Ser Phe Asp Asp
245 250 255
Asp Leu Ser Gln Ser Asn Cys Thr Val Pro Asp Pro Ser Asn His Ala
260 265 270
Val Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr
275 280 285
Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Val Pro
290 295 300
Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Ser Thr
305 310 315 320
Ile Ile Thr Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Leu Thr Ser Thr Ser
325 330 335
Thr Glu Leu Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Val Arg Thr Asp Glu
340 345 350
Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ile Thr
355 360 365
Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Leu
370 375 380
Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile
385 390 395 400
Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln
405 410 415
Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val
420 425 430
Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg
435 440 445
Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asp
450 455 460
Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr
465 470 475 480
Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr
485 490 495
Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe
500 505 510
Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu
515 520 525
Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr
530 535 540
Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr
545 550 555 560
Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp
565 570 575
Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Ile
580 585 590
Thr Thr Thr Glu Pro Trp Asn Ser Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu
595 600 605
Leu Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile
610 615 620
Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr
625 630 635 640
Gln Pro Trp Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr
645 650 655
Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile
660 665 670
Arg Thr Pro Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp
675 680 685
Asn Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly
690 695 700
Thr Asn Gly Leu Pro Thr Asp Glu Thr Ile Ile Val Ile Arg Thr Pro
705 710 715 720
Thr Thr Ala Thr Thr Ala Met Thr Thr Thr Gln Pro Trp Asn Asp Thr
725 730 735
Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly
740 745 750
Val Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu
755 760 765
Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser
770 775 780
Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Gln Pro Thr
785 790 795 800
Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Val
805 810 815
Thr Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr
820 825 830
Glu Met Thr Thr Ile Thr Gly Thr Asn Gly Val Pro Thr Asp Glu Thr
835 840 845
Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr
850 855 860
Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr
865 870 875 880
Thr Ile Thr Gly Thr Asn Gly Gln Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val
885 890 895
Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro
900 905 910
Trp Thr Gly Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr
915 920 925
Gly Thr Asn Gly Val Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr
930 935 940
Pro Thr Ser Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly
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Thr Phe Thr Ser Thr Ser Thr Glu Val Thr Thr Ile Thr Gly Thr Asn
965 970 975
Gly Gln Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser
980 985 990
Glu Gly Leu Ile Ser Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr
995 1000 1005
Ser Thr Ser Thr Glu Met Thr Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Gln
1010 1015 1020
Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Ile Arg Thr Pro Thr Ser Glu
1025 1030 1035
Gly Leu Val Thr Thr Thr Thr Glu Pro Trp Thr Gly Thr Phe Thr
1040 1045 1050
Ser Thr Ser Thr Glu Met Ser Thr Val Thr Gly Thr Asn Gly Leu
1055 1060 1065
Pro Thr Asp Glu Thr Val Ile Val Val Lys Thr Pro Thr Thr Ala
1070 1075 1080
Ile Ser Ser Ser Leu Ser Ser Ser Ser Ser GlyGln Ile Thr Ser
1085 1090 1095
Ser Ile Thr Ser Ser Arg Pro Ile Ile Thr Pro Phe Tyr Pro Ser
1100 1105 1110
Asn Gly Thr SerVal Ile Ser Ser SerVal Ile Ser Ser SerVal
1115 1120 1125
Thr Ser Ser Leu Phe Thr Ser Ser Pro Val Ile Ser Ser Ser Val
1130 1135 1140
Ile Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ser Thr Ser Ile Phe Ser Glu Ser
1145 1150 1155
Ser Lys Ser Ser Val Ile Pro Thr Ser Ser Ser Thr Ser Gly Ser
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Ser Leu Pro Leu Val Thr Ser Ala Thr Thr Ser Gln Glu Thr Ala
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ThrThr Lys Gln Thr Thr Val Val Thr Ile Ser Ser Cys Glu Ser
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Pro Ile Ser Thr Thr Glu Ser Arg Gln Gln Thr Thr Leu Val Thr
1340 1345 1350
Val Thr Ser Cys Glu Ser Gly Val Cys Ser Glu Thr Ala Ser Pro
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Ala Ile Val Ser Thr Ala Thr Ala Thr Val Asn Asp Val Val Thr
1370 1375 1380
Val Tyr Pro Thr Trp Arg Pro Gln Thr Ala Asn Glu Glu Ser Val
1385 1390 1395
Ser Ser Lys Met Asn Ser Ala Thr Gly Glu Thr Thr Thr Asn Thr
1400 1405 1410
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Leu Ala Ile Ile
1535
<210>3
<211>25
<212>DNA
<213>Artificial
<220>
<223>正向引物
<400>3
cgaattcgat gaccatgccg catcg 25
<210>4
<211>29
<212>DNA
<213>Artificial
<220>
<223>反向引物
<400>4
ctctagagtt aaataatcgc cagcagcag 29
Claims (10)
1.用粮食和甘蔗汁为原料发酵制备非蒸馏酒的方法，其包括：
（1）取大米粉碎后，加水浸泡并煮熟，然后加入α淀粉酶进行液化，得到液化料；
（2）将步骤（1）获得的液化料调节成酸性，加入糖化酶进行糖化，得到糖化液；
（3）向步骤（2）获得的糖化液加入具有絮凝优化特性的酵母和发酵助剂，于23～35℃密封发酵12～60小时，得到初步发酵液；
（4）向步骤（3）获得的初步发酵液加入甘蔗汁，密封发酵至残糖含量＜4克/L时，得到酒液；和
（5）过滤步骤（4）获得的酒液的上清液，任选进一步对所述上清液进行灭菌和/或勾兑所述上清液，得到非蒸馏酒。
2.权利要求1所述的方法，其中大米和甘蔗汁的重量体积比（kg/L）为1～10：1～10，优选为3～8：3：8，更优选为1：1。
3.权利要求1或2所述的方法，其中甘蔗汁的糖度为5～20°Bx，优选为10～18°Bx，更优选为15°Bx。
4.权利要求1所述的方法，其中调节成酸性是乳酸调节pH至4.0～4.8，优选调节pH至4.1～4.5，更优选调节pH至4.2。
5.权利要求1所述的方法，其中具有絮凝优化特性的酵母是包含絮凝蛋白变体基因的酵母，所述絮凝蛋白变体基因的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
6.权利要求1所述的方法，其中发酵助剂是Fermaid K。
7.权利要求1～6之任一所述的方法制备的非蒸馏酒。
8.絮凝蛋白变体，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。
9.编码权利要求8所述的絮凝蛋白变体的基因，优选其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
10.权利要求9所述的基因在发酵制备非蒸馏酒的方法中的应用，优选所述方法是权利要求1～6之任一所述的方法。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102807940A (zh) * | 2012-08-31 | 2012-12-05 | 叶长东 | 桂圆与牛甘果、橄榄、山楂、百香果的养生非蒸馏酒及其工艺 |
| CN102978063A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-20 | 李恩东 | 桂圆与百香果、香蕉、火龙果的养生酒及其工艺 |
| CN103981293A (zh) * | 2014-05-19 | 2014-08-13 | 山东省鲁洲食品集团有限公司 | 一种防止麦芽糖浆生产及存放过程中pH 值下降的方法 |
| CN111718818A (zh) * | 2020-06-02 | 2020-09-29 | 云南柒捌玖商贸有限公司 | 一种甘蔗养生酒及其生产方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1706928A (zh) * | 2005-05-24 | 2005-12-14 | 孙辉 | 甘蔗酒及生产方法 |
| CN101649269A (zh) * | 2009-06-16 | 2010-02-17 | 叶长东 | 一种桂圆蔗汁酒的酿造方法 |
-
2012
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1706928A (zh) * | 2005-05-24 | 2005-12-14 | 孙辉 | 甘蔗酒及生产方法 |
| CN101649269A (zh) * | 2009-06-16 | 2010-02-17 | 叶长东 | 一种桂圆蔗汁酒的酿造方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| WATARI,J.: "Molecular cloning and analysis of the yeast flocculation gene FLO1", 《YEAST》, vol. 10, no. 2, 31 December 1994 (1994-12-31), pages 211 - 225 * |
| 周世水等: "甘蔗麦芽蒸馏酒酿酒工艺的研究", 《现代食品科技》, vol. 24, no. 11, 31 December 2009 (2009-12-31), pages 1128 - 1129 * |
| 李凡等: "自絮凝酵母高浓度重复批次乙醇发酵", 《生物工程学报》, vol. 25, no. 9, 25 September 2009 (2009-09-25), pages 1329 - 1337 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102807940A (zh) * | 2012-08-31 | 2012-12-05 | 叶长东 | 桂圆与牛甘果、橄榄、山楂、百香果的养生非蒸馏酒及其工艺 |
| CN102978063A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-20 | 李恩东 | 桂圆与百香果、香蕉、火龙果的养生酒及其工艺 |
| CN103981293A (zh) * | 2014-05-19 | 2014-08-13 | 山东省鲁洲食品集团有限公司 | 一种防止麦芽糖浆生产及存放过程中pH 值下降的方法 |
| CN103981293B (zh) * | 2014-05-19 | 2016-01-13 | 山东省鲁洲食品集团有限公司 | 一种防止麦芽糖浆生产及存放过程中pH值下降的方法 |
| CN111718818A (zh) * | 2020-06-02 | 2020-09-29 | 云南柒捌玖商贸有限公司 | 一种甘蔗养生酒及其生产方法 |
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