CN102579860B - 一种安儿宁提取物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种安儿宁提取物组合物，该组合物具有解热、镇咳、抗炎和镇痛的作用。本发明新制剂相对传统安儿宁颗粒，减少了比表面积，有更好的防潮避光性能，对药效成分稳定性有了很大提高。而且更加适合儿童服用，在水中很快泡腾溶解，携带方便，服用快捷。传统安儿宁颗粒是普通的颗粒剂，溶解性较差，处方中人工牛黄、挥发油直接加入，有一定刺激性气味，且不很稳定；本发明安儿宁泡腾片，在水中很快泡腾溶解，使用β-环糊精包合人工牛黄、挥发油后，避免了刺激性气味，提高了药物稳定性，产品的工艺和质量更可控、安全、有效。本发明安儿宁胶囊更加适合成人服用，加上胶囊壳防潮、避光，也使人工牛黄的稳定性大大的增加，同时也避免了刺激性气味。

Description

一种安儿宁提取物组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种药用组合物及其制备方法和应用，特别涉及安儿宁提取物组合物及其制备方法和应用。

背景技术

安儿宁颗粒记载于中成药地方标准上升国家药品标准部分，标准编号：WS-10640(ZD-0640)-2002。安儿宁颗粒具有清热祛风，化痰止咳的作用。用于小儿风热感冒，咳嗽有痰，发热咽痛，上呼吸道感染见上述证候者。

小儿上呼吸道感染、感冒、咳喘是临床上的常见病、多发病，治疗方法颇多，但效果不一。安儿宁颗粒是藏医传统古验方，经藏医长期临床应用，该药具有清热解毒祛风化痰的作用，用于小儿伤风感冒、肺炎、支气管炎及其引起的咳嗽和发热等症。

安儿宁颗粒剂由于效果良好，且综合考虑了小儿的生理、病理特点，经临床验证，疗效显著，无毒副作用，在临床上备受患者青睐。

目前颗粒剂存在服用量过大，有一定刺激性气味。为使安儿宁颗粒更好的适合儿童服用，本发明对该处方提取纯化、浓缩干燥、制剂成型等工艺进行了优化，采用了高速离心过滤、喷雾干燥、环糊精包合等新技术，对工艺中的参数条件进行了优化筛选，确定了最佳工艺。

发明内容

本发明的目的在于公开一种安儿宁提取物组合物，本发明的目的还在于公开该组合物的制备方法，本发明的目的还在于公开该组合物的应用，本发明的目的还在于公开安儿宁提取物的质量检测方法。

本发明安儿宁提取物组合物的原料药组成为：

安儿宁提取物15-30重量份    人工牛黄包合物3-20重量份

挥发油包合物1-4重量份。

本发明安儿宁提取物组合物的原料药组成还可以优选为：

安儿宁提取物19.4重量份    人工牛黄包合物15.9重量份

挥发油包合物1.5重量份。

本发明安儿宁提取物组合物的原料药组成还可以优选为：

安儿宁提取物19.4重量份    人工牛黄包合物4重量份

挥发油包合物1重量份。

本发明安儿宁提取物组合物的原料药组成还可以优选为：

安儿宁提取物28重量份    人工牛黄包合物4重量份

挥发油包合物3.5重量份。

本发明安儿宁提取物组合物的原料药组成还可以优选为：

安儿宁提取物22重量份    人工牛黄包合物11重量份

挥发油包合物2.5重量份。

其中，所述安儿宁提取物的原料药组成为：

红花30-70重量份          白檀香40-80重量份

甘草30-70重量份          高山辣根菜30-70重量份

岩白菜30-70重量份        天竺黄40-80重量份

短管兔儿草40-80重量份    唐古特乌头40-80重量份。

安儿宁提取物的原料药组成优选为：

红花53.3重量份           白檀香66.7重量份

甘草53.3重量份           高山辣根菜53.3重量份

岩白菜53.3重量份         天竺黄66.7重量份

短管兔儿草66.7重量份     唐古特乌头66.7重量份。

安儿宁提取物的原料药组成优选为：

红花35重量份             白檀香75重量份

甘草35重量份             高山辣根菜65重量份

岩白菜32重量份           天竺黄78重量份

短管兔儿草43重量份       唐古特乌头78重量份。

安儿宁提取物的原料药组成优选为：

红花68重量份             白檀香42重量份

甘草65重量份             高山辣根菜35重量份

岩白菜67重量份           天竺黄45重量份

短管兔儿草78重量份       唐古特乌头45重量份。

其中，所述安儿宁提取物的制备方法为：

取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量倍的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至ρ＝1.02～1.04(温度50℃测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至稠膏ρ＝1.07～1.09(温度50℃测定)，喷雾干燥，即得。

其中，所述安儿宁提取物的制备方法优选为：

取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至ρ＝1.02～1.04(温度50℃测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏24小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至稠膏ρ＝1.07～1.09(温度50℃测定)，喷雾干燥，即得。

其中，所述人工牛黄包合物的制备方法为：

取β-环糊精5-20重量份，搅拌溶解于100体积份40℃水中，缓慢加入1-3体积份的人工牛黄的乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.3-0.8重量份的人工牛黄，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，所述人工牛黄包合物的制备方法优选为：

取β-环糊精10重量份，搅拌溶解于100体积份40℃水中，缓慢加入2体积份的人工牛黄的乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.5重量份的人工牛黄，强力搅拌3小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，所述挥发油包合物的制备方法为：

取β-环糊精5-20重量份，溶于100体积份的40℃水中，超声1-3小时，在强力磁力搅拌下加入1-3体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.3-0.8体积份的挥发油，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

其中，所述挥发油包合物的制备方法优选为：

取β-环糊精10重量份，溶于100体积份的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.5体积份的挥发油，强力搅拌3小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

取本发明安儿宁提取物、人工牛黄包合物和挥发油包合物加入常规辅料，按照常规工艺制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。

本发明安儿宁提取物的质量检测方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：安儿宁提取物研细后，取粉末0.2-0.4重量份，加甲醇10-30体积份，超声提取20-40min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水10-30体积份全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取2-4次，每次10-30体积份，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(4-6∶3-5∶1-4)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。

含量测定：

A、岩白菜素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水＝10-30∶70-90为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.1-0.3重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40-60体积份，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明安儿宁提取物含岩白菜素(C₁₄H₁₆O₉)，不得少于0.75％；

B、甘草酸(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸溶液＝20-40∶50-70为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.5-1重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％乙醇40-60体积份，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明安儿宁提取物含甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)，不得少于0.55％；

C、山柰素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸＝40-60∶30-60为流动相；检测波长为367nm；理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.5-1重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇15-35体积份，密塞，称定重量，加热回流20-40分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10-30体积份，置平底烧瓶中，加盐酸溶液2-7体积份，摇匀置水浴中加热水解20-40分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本发明安儿宁提取物中含山柰素(C₁₅H₁₀O₆)计，不得少于0.03％。

本发明安儿宁提取物的质量检测方法优选如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：

安儿宁提取物研细后，取粉末0.3重量份，加甲醇20体积份，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20体积份全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3次，每次20体积份，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶2.5)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

A、岩白菜素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水＝20∶80为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.2重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50体积份，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含岩白菜素(C₁₄H₁₆O₉)，不得少于0.75％；

B、甘草酸(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸溶液＝37∶63为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.8重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％乙醇50体积份，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)，不得少于0.55％；

C、山柰素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸＝52∶48为流动相；检测波长为367nm；理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.7重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15体积份，置平底烧瓶中，加盐酸溶液5体积份，摇匀置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含山柰素(C₁₅H₁₀O₆)计，不得少于0.03％。

本发明所述重量份与体积份的关系为g/ml的关系。

本发明所述的安儿宁提取物组合物具有解热、镇咳、抗炎或镇痛的作用。本发明新制剂相对传统安儿宁颗粒，减少了比表面积，有更好的防潮避光性能，对药效成分稳定性有了很大提高。而且更加适合儿童服用，在水中很快泡腾溶解，携带方便，服用快捷。传统安儿宁颗粒是普通的颗粒剂，普通颗粒溶解性较差，处方中人工牛黄、挥发油直接加入，有一定刺激性气味，且不很稳定；新制剂安儿宁泡腾片，在水中很快泡腾溶解，使用β-环糊精包合人工牛黄、挥发油后，避免了刺激性气味，提高了药物稳定性，产品的工艺和质量更可控、安全有效。新制剂安儿宁胶囊更加适合成人服用，加上胶囊壳防潮、避光，也使人工牛黄的稳定性大大地增加，同时也避免了刺激性气味。

下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

下述实验中所述安儿宁颗粒均是按照标准编号为WS-10640(ZD-0640)-2002的安儿宁颗粒标准中记载的内容制备而成。

实验例1挥发油提取工艺研究

安儿宁颗粒原工艺只体现出提取挥发油，具体的提取方式、提取温度、提取时间以及挥发油的提取率均未写明，为此，在本发明的工艺优化过程中对上述因素进行了考察。

结果表明：实验结果显示，加3重量倍的水，挥发油提取量比较低，加入7重量倍的的水提取挥发油的量与加入5重量倍的的水没有多少差异，挥发油的量随着时间的增加，挥发油量逐渐增加，但当提取时间达3小时时，挥发油量已基本提取完毕，从节约能源和节约成本考虑，优选加5重量倍的水，连续提取3小时，加水蒸馏收集挥发油。

实验例2提取工艺研究

安儿宁颗粒原工艺写明药材加水煎煮2次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，为保证药物有效成分尽量的被提取出来，同时兼顾生产成本，本发明对原有的生产条件进行进一步的优化。

采用正交试验法，选定不同提取时间、不同加水量和提取温度作为考察的三个因素，各取三个水平，由试验结果可以看出，各因素作用主次为加水量＞提取时间＞提取温度，各水平的P值均大于0.05，说明每个因素的水平之间没有明显的差异，从节约生产成本同时也为保证药材的有效成分被提取出来，本实验结果选择90℃下加水提取2次，第一次加10重量倍的水，煎煮2小时，第二次加8重量倍的水，煎煮2小时。

进行了三批正交试验验证，结果表明三次提取的含量没有明显差异，说明正交试验所选定的工艺是稳定的是可行的。

实验例3浓缩工艺研究

安儿宁颗粒原工艺中只提到浓缩，但未提及浓缩方式以及浓缩温度，鉴于目前生产上多采取减压的浓缩方式进行浓缩，故本发明实验考察不同的浓缩温度对甘草酸含量的影响，实验结果表明，60℃、80℃浓缩对含量的影响不大，100℃含量稍低，为保证甘草酸含量在浓缩时不被破坏，故选定浓缩温度不超过80℃。

实验例4离心过滤工艺的考察

目前市场上所销售的很多中药颗粒融化后澄清度很差，有些会产生不溶性灰屑，取3批50ml浓缩液，分别采用直接取浓缩液测定甘草酸含量；高速离心10000转/分，离心4分钟，离心液测定甘草酸含量；高速离心16000转/分，离心4分钟，离心液测定甘草酸含量。

实验结果表明，离心前后甘草酸含量没有明显变化，这说明离心转速的高低对甘草酸的含量没有影响，为保证液体的澄清度，所以选择高速离心。

实验例5干燥工艺不同干燥方式的考察

准确量取1个处方量的浓缩液，继续浓缩至稠膏，分别采用常压干燥、减压干燥和喷雾干燥的方式干燥，粉碎，测定甘草酸含量。

实验结果表明，常压干燥，甘草酸含量稍低，减压干燥和喷雾干燥甘草酸含量没有明显差异，但是喷雾干燥比常压干燥和减压干燥所用时间短，从节约生产成本考虑优选喷雾干燥。

实验例6本发明安儿宁提取物组合物制剂

本发明安儿宁提取物颗粒由如下实施例6方法制备而成，与传统安儿宁颗粒各项指标比较如下：

表1本发明安儿宁提取物颗粒与传统安儿宁颗粒主要指标比较

实验例7安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒解热作用的研究

1、实验药物：

(1)对照组：皮下注射生理盐水1mL/100g，生理盐水1mL/100g。

(2)模型组：皮下注射20％干酵母悬液(1mL/100g)。

(3)小儿感冒颗粒组(市售)：20％干酵母悬液(1mL/100g)，6g/kg。

(4)安儿宁颗粒组【青海金诃藏药药业股份有限公司】：20％干酵母悬液(1mL/100g)，3g/kg。

(5)本发明安儿宁提取物颗粒组【实施例6制成】：20％干酵母悬液(1mL/100g)，3g/kg。

2、实验方法：

取120-160g SD雄性大鼠50只，随机分为5组，每组10只。以上各组大鼠均灌胃给药，给药容量1ml/100g。测量基础体温后对照组大鼠背部皮下注射生理盐水，其余各组大鼠背部皮下注射20％干酵母悬液(1mL/100g)。5h后测量各组大鼠体温(此时间点记为0)，剔除体温升高低于0.6℃大鼠，剩余大鼠继续实验，在给药后0.5、1、2、3、4、6、8和12h各时间点测量各组大鼠体温，减去0时间点体温为大鼠体温变化值。实验结果以

表示，多组比较采用方差分析及LSD多组均数两两比较，见表2、3。

表2安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒对酵母致热大鼠体温变化的影响

与对照组比较：^##P＜0.01；与模型组比较：^**P＜0.01。

表3安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒对酵母致热大鼠体温变化的影响

与对照组比较：^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01。

实验结果显示：与对照组比较，模型组、小儿感冒颗粒组、安儿宁颗粒组和本发明安儿宁提取物颗粒组皮下注射20％干酵母悬液5h后体温明显升高(P＜0.01)，模型组在给药0.5、1、2、3、4及6h后体温显著升高(P＜0.01)，给药8h后模型组体温无显著差异。与模型组相比，给予小儿感冒颗粒3h后明显抑制干酵母导致的体温升高(P＜0.01)；给予本发明安儿宁提取物颗粒2h后显著抑制干酵母导致的体温升高(P＜0.01)，其药理作用可持续至给药后4h。安儿宁颗粒组显示出抑制干酵母导致体温升高的趋势，但与模型组相比未见统计学差异(表2、3)。

本发明安儿宁提取物颗粒具有明显解热作用，且其解热作用起效早于小儿感冒颗粒，持续时间亦长于小儿感冒颗粒。

实验例8安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒镇咳作用的研究

1、实验药物：

(1)模型组：生理盐水2mL/100g。

(2)小儿感冒颗粒组(市售)：12g/kg。

(3)安儿宁颗粒组【青海金诃藏药药业股份有限公司】：6g/kg。

(4)本发明安儿宁提取物颗粒组【实施例6制备而来的】：6g/kg。

2、实验方法：

取昆明种小鼠50只，雄性，体重17～22g。随机分为5组：对照组20只，小儿感冒颗粒组、安儿宁颗粒组和本发明安儿宁提取物颗粒组每组10只。

各组小鼠灌胃给予相应药物，2h后，将1只小鼠置于500mL的磨砂广口瓶中，广口瓶中预先置入棉球(100±5mg)，棉球含有25％氨水0.2mL。记录小鼠咳嗽潜伏期(自放入小鼠至小鼠第一次咳嗽的时间)及2min内咳嗽次数。实验结果以表示，多组比较采用方差分析及LSD多组均数两两比较。实验结果见表4。

表4安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒对小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数的影响

与对照组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01。

实验结果所示：与对照组比较，小儿感冒颗粒、安儿宁颗粒和本发明安儿宁提取物颗粒可显著延长小鼠咳嗽潜伏期(P＜0.01)；小儿感冒颗粒、安儿宁颗粒和本发明安儿宁提取物颗粒明显减少小鼠咳嗽次数(P＜0.05)。

安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒均具有镇咳作用，两者间镇咳作用无显著性差异。

实验例9安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒抗炎作用的研究

1、实验药物：

(1)对照组：生理盐水2mL/100g。

(2)模型组：生理盐水2mL/100g。

(3)小儿感冒颗粒组(市售)：12g/kg。

(4)安儿宁颗粒组【青海金诃藏药药业股份有限公司】：6g/kg。

(5)本发明安儿宁提取物颗粒组【实验例6制备】：6g/kg。

2、实验方法：

昆明种小白鼠50只，雄性，体重14～18g。随机分为5组，每组10只。

各组小鼠灌胃给予相应药物，2h后尾静脉注射1.0％伊文氏兰(0.1mL/10g)，同时腹腔注射0.6％醋酸(0.1mL/10g)，20min后颈部脱臼处死小鼠，腹腔注射生理盐水3.0mL，取腹腔液1.5mL，4000r/min离心10min，取300μL于590nm波长检测吸光度。配制伊文氏兰标准液(62.5μg/mL，31.25μg/mL，15.625μg/mL，7.8μg/mL，3.9μg/mL 1.9μg/mL)于590nm检测OD值并绘制标准曲线。根据标准曲线求得各组小鼠腹腔液伊文氏兰含量。如附图1所示。

与对照组比较，安儿宁颗粒和本发明安儿宁提取物颗粒组小鼠腹腔液伊文氏兰含量明显减少(表5)。

表5安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒对小鼠小鼠腹腔液伊文氏兰含量影响

与对照组比较：^##P＜0.01；^*P＜0.05；^**P＜0.01。

实验结果显示：安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒具有抗炎作用，本发明安儿宁提取物颗粒抗炎作用优于安儿宁颗粒。

实验例10安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物组合物制剂镇痛作用的研究

1、实验药物：

(1)模型组：生理盐水2mL/100g。

(2)小儿感冒颗粒组：(市售)12g/kg。

(3)安儿宁颗粒组【青海金诃藏药药业股份有限公司】：6g/kg。

(4)本发明安儿宁提取物颗粒组【实施例6制备】：6g/kg。

2、实验方法：

取昆明种小白鼠40只，雄性，体重13～17g。随机分为4组，每组10只。各组小鼠灌胃给予相应药物，2h后腹腔注射1.0％醋酸(0.1ml/10g)，观察各组小鼠注射醋酸15min后小鼠扭体次数。见表6。

表6安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒对小鼠扭体次数的影响

与对照组比较：^*P＜0.05；^**P＜0.01。

实验结果显示：与对照组比较，安儿宁颗粒和本发明安儿宁提取物颗粒显著减少小鼠扭体次数，小儿感冒颗粒组小鼠扭体次数有减少趋势，但未见统计学差异。

结论：安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒具有镇痛作用，本发明安儿宁提取物颗粒镇痛作用优于安儿宁颗粒。

综上所述：安儿宁颗粒及本发明安儿宁提取物颗粒均具有一定的解热、镇咳、抗炎及镇痛作用，且本发明安儿宁提取物颗粒效果要优于安儿宁颗粒。

附图说明

图1：伊文氏兰标准曲线。

下述实施例均能实现上述实验例的效果。

具体实施方式

实施例1：本发明安儿宁提取物

红花53.3g        白檀香66.7g

甘草53.3g        高山辣根菜53.3g

岩白菜53.3g      天竺黄66.7g

短管兔耳草66.7g  唐古特乌头66.7g

取红花、白檀香加5重量倍的水提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至ρ＝1.02～1.04(温度50℃测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏24小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至稠膏ρ＝1.07～1.09(温度50℃测定)，喷雾干燥，即得。

实施例2：本发明安儿宁提取物

红花35g        白檀香75g

甘草35g        高山辣根菜65g

岩白菜32g      天竺黄78g

短管兔儿草43g  唐古特乌头78g。

取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮3小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至ρ＝1.02～1.04(温度50℃测定)的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏24小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至稠膏ρ＝1.07～1.09(温度50℃测定)，喷雾干燥，即得。

实施例3：安儿宁提取物组合物的泡腾颗粒

安儿宁提取物19.4g人工牛黄的β-环糊精包合物15.9g

挥发油的β-环糊精包合物1.5g

其中，安儿宁提取物由实施例2方法制备而成。

其中，人工牛黄的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，搅拌溶解于100ml40℃水中，缓慢加入2ml的人工牛黄的乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5g的人工牛黄，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，挥发油的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，溶于100ml的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2ml的挥发油乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5ml的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

取安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物15.9g、挥发油的β-环糊精包合物1.5g，加入10g碳酸氢钠、7g无水柠檬酸、1.2g甜菊糖和25g蔗糖，过筛，混合均匀，用5％PVP-K30乙醇溶液作粘合剂，14目制粒，50℃干燥，14目整粒，即得。

实施例4：安儿宁提取物组合物的泡腾片

安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物4g、挥发油的β-环糊精包合物1g

安儿宁提取物由实施例1方法制备而成。

其中，人工牛黄的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，搅拌溶解于100ml40℃水中，缓慢加入2ml的人工牛黄的乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5g的人工牛黄，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，挥发油的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，溶于100ml的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2ml的挥发油乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5ml的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

取安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物15.9g、挥发油的β-环糊精包合物1g，加入22.5g碳酸氢钠、22.5g碳酸钠、45g无水柠檬酸、2.5g甜菊糖、20g蔗糖和3g甜橙香精，过筛，混合均匀，用无水乙醇作为润湿剂，18目制粒，45℃干燥，18目筛整粒，加入1g的硬脂酸镁，混匀，压片，即得。

实施例5：安儿宁提取物组合物的胶囊剂

安儿宁提取物28g、牛黄的β-环糊精包合物4g、挥发油的β-环糊精包合物3.5g；

安儿宁提取物由实施例2方法制备而成。

其中，人工牛黄的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，搅拌溶解于100ml40℃水中，缓慢加入2ml的人工牛黄的乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5g的人工牛黄，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，挥发油的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，溶于100ml的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2ml的挥发油乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5ml的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

安儿宁提取物28g、牛黄的β-环糊精包合物4g、挥发油的β-环糊精包合物3.5g；混匀，粉成细粉，用乙醇制粒，16目制粒，50℃鼓风干燥1小时，16目整粒，加入0.3g的硬脂酸镁，混匀，装填，抛光，即得。

实施例6：安儿宁提取物组合物的颗粒剂

安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物15.9g、挥发油的β-环糊精包合物1.5g；

安儿宁提取物由实施例1方法制备而成。

其中，人工牛黄的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，搅拌溶解于100ml40℃水中，缓慢加入2ml的人工牛黄的乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5g的人工牛黄，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物。

其中，挥发油的β-环糊精包合物由如下方法制备而成：取β-环糊精10g，溶于100ml的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2ml的挥发油乙醇溶液，其中每毫升溶液中含0.5ml的挥发油，强力搅拌2小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物。

取安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物15.9g、挥发油的β-环糊精包合物1.5g，加入263g蔗糖，过筛，混合均匀，用50％乙醇溶液做润湿剂，14目制粒，50℃干燥，14目整粒，即得。

实施例7：安儿宁提取物组合物的片剂

取安儿宁提取物22g、人工牛黄的β-环糊精包合物11g、挥发油的β-环糊精包合物1.5g，加入微晶纤维素5.5g，混匀，用50％乙醇溶液做润湿剂，制粒，干燥，加入0.2g的硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，即得。

其中，安儿宁提取物、牛黄的β-环糊精包合物和挥发油的β-环糊精包合物均按实施例3方法制备而成。

实施例8：安儿宁提取物组合物的口服液

安儿宁提取物19.4g、牛黄的β-环糊精包合物15.9g、挥发油的β-环糊精包合物1.5g，加水500ml水溶解，取200g蔗糖溶解，将上述两种溶液混合，冷藏24小时，取上清液加水定容到1000ml，即得。

其中，安儿宁提取物、牛黄的β-环糊精包合物和挥发油的β-环糊精包合物均按实施例5方法制备而成。

实施例9：实施例1所述安儿宁提取物的质量检测方法

鉴别：安儿宁提取物研细后，取粉末0.3g，加甲醇20ml，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶2.5)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：

A、岩白菜素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水＝20∶80为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含岩白菜素(C₁₄H₁₆O₉)，不得少于0.75％；

B、甘草酸(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸溶液＝37∶63为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)，不得少于0.55％；

C、山柰素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸＝52∶48为流动相；检测波长为367nm；理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.7g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，置平底烧瓶中，加盐酸溶液5ml，摇匀置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含山柰素(C₁₅H₁₀O₆)计，不得少于0.03％。

实施例10：实施例2所述安儿宁提取物的质量检测方法

鉴别：安儿宁提取物研细后，取粉末0.3g，加甲醇20ml，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20ml全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶6F254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5∶4∶2.5)为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点；

含量测定：A、岩白菜素(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水＝20∶80为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.2g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含岩白菜素(C₁₄H₁₆0₉)，不得少于0.75％；

B、甘草酸(照高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷其硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5％磷酸溶液＝37∶63为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品，加70％乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备安儿宁提取物研细后，取粉末0.8g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含甘草酸(C₄₂H₆₂O₁₆)，不得少于0.55％。

Claims (11)

1.一种安儿宁提取物组合物，其特征在于该组合物的原料药组成为：

安儿宁提取物15-30重量份  人工牛黄包合物 3-20重量份

挥发油包合物 1-4 重量份；

其中所述安儿宁提取物的原料药组成为：

红花30-70重量份         白檀香40-80重量份

甘草30-70重量份         高山辣根菜30-70重量份

岩白菜30-70重量份       天竺黄40-80重量份

短管兔儿草40-80重量份   唐古特乌头40-80重量份；

所述安儿宁提取物由如下方法制备而成：

取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量倍的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至在50℃下测定ρ=1.02～1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50℃下测定ρ=1.07～1.09的稠膏，喷雾干燥，即得；

其中，所述人工牛黄包合物由如下方法制备而成：

取β-环糊精5-20重量份，搅拌溶解于100体积份40℃水中，缓慢加入1-3体积份的人工牛黄的乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.3-0.8重量份的人工牛黄，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

其中所述挥发油包合物由如下方法制备而成：

取β-环糊精5-20重量份，溶于100体积份的40℃水中，超声1-3小时，在强力磁力搅拌下加入1-3体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.3-0.8体积份的挥发油，强力搅拌1-6小时，冷藏12-36小时，滤过，30-50℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml。

2.如权利要求1所述的安儿宁提取物组合物，其特征在于该组合物的原料药组成为：

安儿宁提取物19.4重量份  人工牛黄包合物 15.9重量份

挥发油包合物  1.5重量份；

或

安儿宁提取物19.4重量份 人工牛黄包合物4重量份

挥发油包合物1重量份；

或

安儿宁提取物28重量份  人工牛黄包合物 4重量份

挥发油包合物 3.5重量份；

或

安儿宁提取物22重量份  人工牛黄包合物 11重量份

挥发油包合物 2.5重量份。

3.如权利要求1或2所述的安儿宁提取物组合物，其特征在于其中所述安儿宁提取物的原料药组成为：

红花53.3重量份         白檀香66.7重量份

甘草53.3重量份         高山辣根菜53.3重量份

岩白菜53.3重量份       天竺黄66.7重量份

短管兔儿草66.7重量份   唐古特乌头66.7重量份；

或

红花35重量份         白檀香75重量份

甘草35重量份         高山辣根菜65重量份

岩白菜32重量份       天竺黄78重量份

短管兔儿草43重量份   唐古特乌头78重量份；

或

红花68重量份         白檀香42重量份

甘草65重量份         高山辣根菜35重量份

岩白菜67重量份       天竺黄45重量份

短管兔儿草78重量份   唐古特乌头45重量份。

4.如权利要求1或2所述的安儿宁提取物组合物，其特征在于其中所述安儿宁提取物由如下方法制备而成：

取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至50℃下测定ρ=1.02～1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏24小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50℃下测定ρ=1.07～1.09的稠膏，喷雾干燥，即得。

5.如权利要求1或2所述的安儿宁提取物组合物，其特征在于其中所述人工牛黄包合物的制备方法为：

取β-环糊精10重量份，搅拌溶解于100体积份40℃水中，缓慢加入2体积份的人工牛黄的乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.5重量份的人工牛黄，强力搅拌3小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得牛黄的β-环糊精包合物，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml。

6.如权利要求1或2所述的安儿宁提取物组合物，其特征在于其中所述挥发油包合物的制备方法为：

取β-环糊精10重量份，溶于100体积份的40℃水中，超声2小时，在强力磁力搅拌下加入2体积份的挥发油乙醇溶液，其中每体积份溶液中含0.5体积份的挥发油，强力搅拌3小时，冷藏24小时，滤过，40℃真空干燥沉淀，粉碎，即得挥发油的β-环糊精包合物，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml。

7.如权利要求1-6任一所述的安儿宁提取物组合物的制备方法，其特征在于：取安儿宁提取物、人工牛黄包合物和挥发油包合物加入常规辅料，按照常规工艺制成临床可接受的剂型,所述剂型为片剂、胶囊、口服液、滴丸或颗粒剂；所述辅料选自溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂和/或基质。

8.一种安儿宁提取物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：安儿宁提取物研细后，取粉末0.2-0.4重量份，加甲醇10-30体积份，超声提取20-40min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水10-30体积份全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取2-4次，每次10-30体积份，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以4-6：3-5：1-4的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

含量测定：

A、照高效液相色谱法测定岩白菜素

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水=10-30:70-90为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备  精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.1-0.3重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇40-60体积份，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含岩白菜素C₁₄H₁₆O₉，不得少于0.75%；

B、照高效液相色谱法测定甘草酸

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈- 0.5%磷酸溶液=20-40：50-70为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备  精密称取甘草酸铵对照品，加70%乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.5-1重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70%乙醇40-60体积份，密塞，称定重量，超声20-40min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆，不得少于0.55%；

C、照高效液相色谱法测定山柰素

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸=40-60:30-60为流动相；检测波长为367nm；理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.5-1重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇15-35体积份，密塞，称定重量，加热回流20-40分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10-30体积份，置平底烧瓶中，加盐酸溶液2-7体积份，摇匀置水浴中加热水解20-40分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物中含山柰素C₁₅H₁₀O₆计，不得少于0.03%；

其中，安儿宁提取物由如下方法制备而成：

原料药组成为：

红花30-70重量份         白檀香40-80重量份

甘草30-70重量份         高山辣根菜30-70重量份

岩白菜30-70重量份       天竺黄40-80重量份

短管兔儿草40-80重量份   唐古特乌头40-80重量份；

制备方法为：

取红花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取2-4小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加6-12重量倍的水，煎煮1-4次，时间为1-4小时，滤过，合并滤液，浓缩至50℃下测定ρ=1.02～1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏12-36小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50℃下测定ρ=1.07～1.09的稠膏，喷雾干燥，即得。

9.如权利要求8所述的安儿宁提取物的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和/或含量测定中的一种或几种：

鉴别：安儿宁提取物研细后，取粉末0.3重量份，加甲醇20体积份，超声提取30min，取出，放冷，过滤，取续滤液蒸干后，残留物用水20体积份全部转移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3次，每次20体积份，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作供试品溶液；另取岩白菜素对照品，加甲醇溶解并稀释成每1ml甲醇溶液含0.2mg对照品溶液，摇匀，作对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5：4：2.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出晾干，置紫外光灯254nm下检视；供试品色谱中在于对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

含量测定：

A、照高效液相色谱法测定岩白菜素

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水=20:80为流动相；检测波长为275nm；理论板数按岩白菜素峰计算应不低于2000；

对照品溶液的制备  精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.2重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50体积份，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含岩白菜素C₁₄H₁₆O₉，不得少于0.75%；

B、照高效液相色谱法测定甘草酸

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈- 0.5%磷酸溶液=37：63为流动相；检测波长为250nm；理论板数按甘草酸胺峰计算应不低于5000；

对照品溶液的制备  精密称取甘草酸铵对照品，加70%乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得；其中甘草酸重量为甘草酸铵重量的1/1.0207；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.8重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入70%乙醇50体积份，密塞，称定重量，超声30min，放冷，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含甘草酸C₄₂H₆₂O₁₆，不得少于0.55%；

C、照高效液相色谱法测定山柰素

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸=52:48为流动相；检测波长为367nm；理论板数按山柰素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备  精密称取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1ml含9μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  安儿宁提取物研细后，取粉末0.7重量份，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15体积份，置平底烧瓶中，加盐酸溶液5体积份，摇匀置水浴中加热水解30分钟，立即冷却，转移至25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，其中重量份与体积份的对应单位为g:ml；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

安儿宁提取物含山柰素C₁₅H₁₀O₆计，不得少于0.03%。

10.如权利要求8或9所述的安儿宁提取物的质量检测方法，其特征在于其中安儿宁提取物的原料药组成为：

红花53.3重量份         白檀香66.7重量份

甘草53.3重量份         高山辣根菜53.3重量份

岩白菜53.3重量份       天竺黄66.7重量份

短管兔儿草66.7重量份   唐古特乌头66.7重量份；

或

红花35重量份         白檀香75重量份

甘草35重量份         高山辣根菜65重量份

岩白菜32重量份       天竺黄78重量份

短管兔儿草43重量份   唐古特乌头78重量份；

或

红花68重量份         白檀香42重量份

甘草65重量份         高山辣根菜35重量份

岩白菜67重量份       天竺黄45重量份

短管兔儿草78重量份   唐古特乌头45重量份。

11.如权利要求8或9所述的安儿宁提取物的质量检测方法，其特征在于其中安儿宁提取物的制备方法为：

取红花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸馏法提取3小时，收集挥发油，滤过，药渣与甘草、高山辣根菜、岩白菜、天竺黄、短管兔儿草和唐古特乌头合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小时，第二次加8重量倍的水煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至50℃下测定ρ=1.02～1.04的清膏，清膏至冷藏罐中进行冷藏24小时，取上清液用高速管式离心机离心，离心液继续浓缩至50℃下测定ρ=1.07～1.09的稠膏，喷雾干燥，即得。

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