CN102579272A - Gx50在化妆品组合物中的应用以及含有gx50的化妆品组合物 - Google Patents
Gx50在化妆品组合物中的应用以及含有gx50的化妆品组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及来自花椒中的小分子化合物GX50作为主要活性成分在制备具有抑制和/或延缓皮肤衰老的化妆品组合物中的用途。GX50还可以作为具有延缓皮肤衰老功能的化妆品添加剂添加到化妆品组合物中。本发明还涉及含有占化妆品组合物的总重量的0.00001wt%-0.0001wt%的GX50的化妆品组合物,所述GX50为具有延缓皮肤衰老功能的主要活性成分。使用本品进行的体内、体外实验证明,化合物GX-50可以使老化的皮肤反转,或者延缓皮肤的老化,且对皮肤及其附属器官没有毒副作用和刺激作用。本发明的含有GX50分子的化妆品组合物可作为延缓皮肤衰老的皮肤美容保养品并包括单独制成美容化妆产品或活性成分添加到现有的化妆品中。
Description
技术领域
本发明属于化妆品及医药技术领域,具体涉及GX50((E)-N-[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-3-苯基丙烯酰胺)作为活性护肤成分或活性护肤添加剂在制备具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品组合物中的应用,以及含有GX50的化妆品组合物。
背景技术
皮肤是人体最外表也是最大的器官。也会像人体的其他器官一样逐渐老化,功能减弱或丧失。不仅影响美观,而且增加了多种皮肤疾病的发生。随着经济的发展、社会的进步,人们愈发重视外在形象,加上皮肤由于其浅表外露性所具有的较强的心理效应,延缓皮肤衰老逐渐成为人们关注的热点之一。
以中草药天然成分为主的美容化妆产品以其毒副作用小、安全性高而受到消费者的青睐。目前的科学研究已经证明,保护皮肤中的胶原蛋白、弹性蛋白可以有效减少皱纹的产生,保护皮肤毛囊可以改善皮肤光滑度,延缓皮肤衰老。
本发明人首次发现花椒中的天然成分GX50在动物组织水平对于修复胶原蛋白、弹性蛋白中具有显著的效果。目前并未有文献报道GX50具有护肤作用。
发明内容
本发明的一个目的在于提供GX50作为主要活性成分在制备具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品组合物中的用途。
为实现上述目的,本发明通过以下技术方案实现:
如下式(1)的GX50
式(1)
作为主要活性成分在制备具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品组合物中的用途。
本发明的另一目的在于提供上述式(1)的GX50以作为具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品添加剂的形式在制备护肤化妆品组合物中的用途。
在本发明的一实施方式中,所述抑制和/或延缓皮肤衰老功能包括抑制皮肤色素沉着,抑制老年斑的形成,淡化色斑,促进细胞新陈代谢,促进胶原蛋白合成,恢复皮肤弹性,抑制皱纹生产,改善皮肤松弛。
本发明的另一目的在于提供一种化妆品组合物,其具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能,所述化妆品组合物包含以化妆品组合物的总重量计为0.00001wt%-0.0001wt%的如权利要求1或2所述的GX50,以及化妆品上可接受的载体,所述GX50是主要活性成分。
在本发明的一实施方式中,所述化妆品组合物还包括以化妆品组合物的总重量计为0.01wt%-0.1wt%的用于溶解所述GX50的有机溶媒,所述有机溶媒包括二甲基亚砜、丙三醇、丁二醇、双丙甘醇中的一种。
在本发明的一实施方式中,所述化妆品上可接受的载体包括凡士林、硅油、橄榄油、棕榈蜡中的一种。
本发明的另一目的在于提供一种含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品添加剂的上述的GX50的化妆品组合物。
本发明的上述的化妆品组合物可有利地具有在化妆品领域局部施用所采用的形式,例如乳液、乳霜、凝胶、软膏、乳剂、洗剂、糊剂、泡沫、喷雾或固体形式。
本发明上述的化妆品组合物还可包括在应用中通常所采用的所有组分,特别的是水、溶剂、矿物油、动物和/或植物油、蜡、抗氧化剂、填料、表面活性剂、稳定剂、 防腐剂、香料。
组分的选择和/或用量是根据组合物待施用的皮肤的特定需要以及根据本发明组合物的性能和所需稠度加以确定的。
上述化合物延缓皮肤衰老的发现过程如下:
延缓皮肤衰老作用的发现:花椒中的一种成分--GX50(N-(2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基)-3-苯基丙烯酰胺),为一种天然存在的小分子化合物,或亦可称为中草药成分。在老龄小鼠背部涂抹GX50可以起到显著的护肤效果,可有效增加老龄小鼠皮肤胶原蛋白的合成和毛囊的修复,同时运用人体皮肤成纤维细胞进行的实验表明,该化合物可以有效地抑制衰老和老年斑的形成,抑制皮肤色素沉着,淡化色斑,促进细胞新陈代谢,促进胶原蛋白合成,恢复皮肤弹性,抑制皱纹生产,改善皮肤松弛。
与现有技术相比,本发明具有如下有益的效果:本发明涉及GX50分子作为延缓皮肤衰老的皮肤美容保养品,包括单独制成化妆品组合物及作为一种化妆品添加剂添加到现有的化妆品中,以及用于抗皮肤衰老的药用。其抑制老年斑的作用体现在对于老年斑的前体物质丙二醛(MDA)的抑制上:加入GX50后,MDA含量明显下降。过氧化氢的氧化作用会促进老年斑的产生,GX50对于这种氧化损伤产生老年斑也有很好的防护作用。
附图说明
图1为小鼠涂药实验示意图。
图2为皮肤组织冰冻切片HE染色图(左侧为涂有GX50的实验组,右侧为对照组,10×)。
图3为皮肤组织冰冻切片胶原蛋白免疫组化图(左侧为涂有GX50的实验组,右侧为对照组,10×)
图4为GX50对皮肤组织中NF-κB活性的影响的EMSA图。
图5为对皮肤组织检测NF-κB活性的EMSA图中滞后带的灰度比较。
图6为Western Blot分析GX50对皮肤组织中NF-κB通路的影响。
图7为原代培养人皮肤成纤维细胞。
图8为β-半乳糖苷酶染色法鉴定细胞衰老程度(10×)。
图9为GX50处理后细胞分泌丙二醛(MDA)含量测定的图表。
图10为GX50对细胞分泌转化生长因子(TGF-β)的调控。
具体实施方式:
下面的实施例可以使本专业技术人员更全面的理解本发明,但并不以任何方式限制本发明。本发明的“wt%”为重量百分比,本发明的原材料以及试剂均可通过商业途径购买得到。
实施例1:
含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的、作为主要活性成分的式(1)的GX50的化妆品组合物
式(1),
其中,所述化妆品组合物包括具有以下重量百分含量的组分:
GX50 0.00001wt%
二甲基亚砜 0.01000wt%
凡士林 99.98999wt%。
所述化妆品组合物的制备方法为:
先将GX50按照1∶1000的比例溶于有机溶媒(即二甲基亚砜)中(wt/wt),然后再以1∶10000的比例(wt/wt)稀释于化妆品基质(即凡士林)中。在化妆品基质中的最终浓度为10-7g,每日GX50的最高用量不超过1mg。
实施例2:
本实施例的化妆品组合物也是含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的、作为主要活性成分的式(1)的GX50的化妆品组合物,其含有0.0001wt%的GX50、0.1wt%的有机溶媒(即二甲基亚砜)、99.8999wt%的化妆品基质(即凡士林)。其制备方法同实施例1。
实施例3:
本实施例的化妆品组合物也是含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的、作为具有活性护肤作用的主要活性成分的式(1)的GX50的化妆品组合物,其含有0.00005wt%的GX50、0.05wt%的有机溶媒(即二甲基亚砜)、99.94995wt%的化妆品基质(即凡士林)。其制备方法同实施例1。
实施例4:
本实施例的化妆品组合物也是含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的、作为具有活性护肤作用的主要活性成分的式(1)的GX50的化妆品组合物,其含有0.00005wt%的GX50、0.05wt%的有机溶媒(即丙三醇)、99.94995wt%的化妆品基质(即硅油)。其制备方法同实施例1。
实施例4:
GX50延缓皮肤衰老作用的发现
作为花椒中的一种成分--GX50,是一种天然存在的小分子化合物,或亦可称为中草药成分。预实验中,在老龄小鼠背部涂抹天然活性物质GX50,结果显示可以起到显著的护肤效果,有效修复老龄小鼠皮肤的胶原蛋白、弹性蛋白和毛囊。
实施例5:
天然活性物质GX50对兔眼无刺激性实验
根据Draize兔眼刺激试验(Draize eye test):取2.0kg家兔3只,给药前先观察每只 家兔眼角膜、虹膜、结膜均正常。分别将浓度为10-6mol/L的GX50溶液(GX50溶液组分为:0.0001wt%的GX50,0.1wt%的二甲基亚砜,99.8999wt%的pH值为7.4的PBS)0.1mL滴入家兔左眼结膜囊内,右眼滴入同样pH值磷酸缓冲液0.1mL作为对照。给药后使家兔眼睛被动闭合8-10s,每天给药4次,连续7天,观察每次给药前眼部情况,及最后一次给药后4、12、24、48、72h时角膜、虹膜、结膜的反应情况。给药期间,每天观察2次,取两次最高分即为当日分值,停药后继续观察3d的眼部反应情况。实验结果评价标准完全严格依照Draize eye test评价标准要求进行。
实验结果显示,GX50对家兔眼角膜、虹膜、结膜均无刺激作用。
实施例6:
实验证明在动物组织水平天然活性物质GX50可以延缓皮肤衰老
随机抽取七只16月龄小鼠,按每千克体重的小鼠每次涂抹0.1mg的GX50用药液。所述用药液:4000μl甘油+5000μl水+1000μl原药液;对照液:4500μl甘油+5000μl水+500μlDMSO。所述原药液是实施例3的组合物。每天取100μl用药液涂于小鼠背部左侧,100μl对照液涂于小鼠背部右侧,涂抹部位如示意图1所示。
连续涂抹两周后,取左右两侧涂药部位的皮肤,制作切片。结果如图2、3所示:
皮肤组织冰冻切片HE染色结果显示实验组都有致密和规整的真皮层,基底细胞较多且有序;皮肤组织冰冻切片胶原蛋白免疫组化结果显示,实验组表皮层、真皮层及毛囊均有明显修复。
使用Image J软件分析切片中真皮层胶原蛋白的阳性信号的分布密度,结果如下表1所示:
表1皮肤真皮层胶原蛋白密度图像分析结果(10×)
由表1可以观察到,涂抹过GX50之后,真皮层中胶原蛋白密度为140.31±4.542颗/mm2,而右侧对照组为120.25±5.539颗/mm2,左侧皮肤胶原蛋白含量明显增加,与右侧对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。
以上实验结果证明在动物组织水平,天然活性物质GX50可以延缓皮肤衰老。
实施例7:
GX50通过调控NF-κB信号通路延缓和逆转皮肤衰老
在分子基因水平,衰老的发生由多基因调控。很多研究已证实,衰老相关基因中的大部分都受到一种重要的转录因子NF-κB的调节。NF-κB信号通路在生物体中起着关键的调控作用。文献报道表明:哺乳动物老化普遍与NF-κB有关,在人类和小鼠的许多组织中转录因子NF-κB是衰老发生的转录活化剂。在针对皮肤衰老的研究中,已有文献报道证实当皮肤组织中NF-κB途径被阻断后,可在表型水平和基因水平同时发生许多衰老特征的逆转。
EMSA-凝胶迟滞实验结果(空白道只加入探针)如图4、5所示。由图4可知,对照组中的NF-κB与探针的复合物多于实验组,通过Image J软件对NF-κB与探针的复合物滞后带的灰度值分析(图5),得知实验组采用GX50处理后,NF-κB信号通路的活化被抑制(P<0.05),继而使得入核后调节下游基因表达的NF-κB减少。对照组皮肤组织NF-κB有明显的与寡核苷酸探针结合的滞后带,而GX50作用后皮肤组织NF-κB结合的滞后性显著变浅,提示GX50使皮肤组织NF-κB结合活性减弱(P<0.05)。
使用试剂盒提取涂药实验小鼠左右两侧皮肤组织中的浆蛋白,然后进行Western Blot分析,检测IκB-α的磷酸化状态,以看家基因(house-keeping gene)GADPH作为内参。得到结果如图6所示。
由图6可知:对照组隐约可见p-IκB-α条带,实验组中未见条带。通过管家基因GADPH校正后提示,GX50可以抑制IκB-α的磷酸化,从而使NF-κB不能活化。
实施例8:
实验显示在细胞水平天然活性物质GX50可以延缓皮肤衰老
原代培养人皮肤成纤维细胞,图7所示为纯度高而长势良好的人皮肤成纤维细胞。
皮肤成纤维细胞是真皮的主要组成细胞,胶原蛋白、弹性蛋白和多种细胞因子的分泌均由皮肤成纤维细胞进行,故皮肤衰老的发生与之息息相关。
β-半乳糖苷酶是一种细胞衰老的标志性指标。基于衰老时SA-β-Gal活性水平上调 而对衰老细胞或组织进行染色检测,在普通光学显微镜下就可以观测到细胞的衰老情况。随着细胞衰老程度加深,细胞被染成蓝色的程度越深。过氧化氢作为一种氧化剂,可以导致细胞衰老。分别以空白组、GX50单独处理组、过氧化氢单独处理组、过氧化氢处理后加入GX50组、GX50处理后加入过氧化氢为处理条件进行实验,(GX50溶液组分为:0.01wt%的GX50,10wt%的二甲基亚砜,89.99wt%的pH值为7.4的PBS;每1ml的细胞培养液中加入上述组分的药液10μl)结果如图8所示。
实验结果显示:GX50单独处理不会引发细胞衰老,对于过氧化氢处理组可见明显蓝色,即β-半乳糖苷酶,细胞被氧化而衰老。加入GX50后β-半乳糖苷酶明显减少,即细胞衰老明显被缓解。先加入GX50再过氧化氢处理,细胞中β-半乳糖苷酶明显少于过氧化氢处理组,也少于过氧化氢处理后加GX50组,说明GX50对于细胞被氧化损伤而发生衰老有良好的预防和保护作用。
综上所述,在细胞水平天然活性物质GX50可以延缓皮肤衰老。
实施例9:
天然活性物质GX50在细胞水平可抑制老年斑的产生实验。
由于年龄增长所致的细胞代谢率降低致使生物机体代谢产生的自由基堆积是衰老的重要启动因素,其极强的氧化能力可使生物膜中不饱和脂类发生过氧化形成过氧化脂质,经分解后产生强力交联剂丙二醛(MDA),它与蛋白质、肽类或脂类聚合交联可形成老年色素或脂褐质的积累。故细胞分泌MDA含量即可反映老年斑生产的量。
分别为GX50(10-6mol/L)处理12小时组、空白组、GX50(10-6mol/L)处理12小时后加如过氧化氢处理组和过氧化氢单独处理组,(GX50溶液组分为:0.01wt%的GX50,10wt%的二甲基亚砜,89.99wt%的pH值为7.4的PBS;每1ml的细胞培养液中加入上述组分的药液10μl),结果如图9所示。
实验结果证明:天然活性物质GX50在细胞水平可抑制丙二醛(MDA)的产生,即可以减少老年斑的产生。
实施例10:
天然活性物质GX50有效调节胶原相关细胞因子分泌实验
转化生长因子(TGF-β)对多种细胞的分裂、繁殖和迁移起作用。在皮肤成纤维细胞中,TGF-β还可抑制胶原酶的产生而抑制胶原的分解,起到保护皮肤组织胶原蛋白的作用。图10为GX50处理组和空白组在三天中的TGF-β含量测定结果。(GX50溶液组分为:0.01wt%的GX50,10wt%的二甲基亚砜,89.99wt%的pH值为7.4的PBS;每1ml的细胞培养液中加入上述组分的药液10μl)
实验结果显示,在用GX50处理后的第二天,细胞分泌转化生长因子(TGF-β)能力大大增强,到第三天后又恢复到接近空白水平。说明GX50可以一定时间内增强转化生长因子(TGF-β)的分泌增加,但又不会促使其长时间过量表达,可以有效调控转化生长因子(TGF-β)的分泌,从而促进皮肤细胞中的胶原蛋白的表达。
Claims (9)
1.如下式(1)的GX50
式(1)
作为主要活性成分在制备具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品组合物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于,所述抑制和/或延缓皮肤衰老功能包括抑制皮肤色素沉着,抑制老年斑的形成,淡化色斑,促进细胞新陈代谢,促进胶原蛋白合成,恢复皮肤弹性,抑制皱纹生产,改善皮肤松弛。
3.如权利要求1所述的式(1)的GX50以作为具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品添加剂的形式在制备护肤化妆品组合物中的用途。
4.如权利要求3所述的用途,其特征在于,所述抑制和/或延缓皮肤衰老功能包括抑制皮肤色素沉着,抑制老年斑的形成,淡化色斑,促进细胞新陈代谢,促进胶原蛋白合成,恢复皮肤弹性,抑制皱纹生产,改善皮肤松弛。
5.化妆品组合物,其特征在于,其具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能,所述化妆品组合物包含以化妆品组合物的总重量计为0.00001wt%-0.0001wt%的如权利要求1或2所述的GX50,以及化妆品上可接受的载体,所述GX50是主要活性成分。
6.如权利要求5所述的化妆品组合物,其特征在于,所述抑制和/或延缓皮肤衰老功能包括抑制皮肤色素沉着,抑制老年斑的形成,淡化色斑,促进细胞新陈代谢,促进胶原蛋白合成,恢复皮肤弹性,抑制皱纹生产,改善皮肤松弛。
7.如权利要求5或6所述的化妆品组合物,其特征在于,所述化妆品组合物还包括以化妆品组合物的总重量计为0.01wt%-0.1wt%的用于溶解所述GX50的有机溶媒,所述有机溶媒包括二甲基亚砜、丙三醇、丁二醇、双丙甘醇中的一种。
8.如权利要求7所述的化妆品组合物,其特征在于,所述化妆品上可接受的载体包括凡士林、硅油、橄榄油、棕榈蜡中的一种。
9.含有具有抑制和/或延缓皮肤衰老功能的化妆品添加剂的如权利要求3或4所述的GX50的化妆品组合物。
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