CN102552931A

CN102552931A - 键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物及制备

Info

Publication number: CN102552931A
Application number: CN2011104369952A
Authority: CN
Inventors: 董岸杰; 蔺晓娜; 邓联东
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2011-12-23
Filing date: 2011-12-23
Publication date: 2012-07-11

Abstract

本发明公开了一种键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物及制备。该共聚物是由聚乙二醇嵌段A，与含环醚侧基的疏水性聚酯嵌段B，及与药物C构成C/B-A-B/C、A-B/C、C/A-B或C/A-B/C共聚物。其制备包括：在辛酸亚锡催化下，聚乙二醇引发反应进行开环聚合得到聚乙二醇-含环醚侧基的聚酯嵌段共聚物；对聚乙二醇-含环醚侧基的聚酯嵌段共聚物进行端基改性；将药物C通过化学键键和到A或B嵌段的端基上，得到键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物。本发明的优点是，通过环醚侧基聚酯的加入，能调解聚合物的结晶性能，制备简单，键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物具有多种前药的应用前景。

Description

键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物及制备

技术领域

本发明涉及一种键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物及制备，属于含有药物的高分子技术领域。

背景技术

近几年，基于聚乙二醇(PEG)-聚酯-药物共聚物引起越来越多的关注。这些前药具有很多优势：(1)每个聚合物链上可以连接几个药物分子，从而提高载药量。(2)两亲性聚合物能自组装形成纳米粒，通常以吞噬的方式被细胞摄取。(3)药物与聚合物通过共价键连接，从而减少血液循环过程中药物的释放。(4)药物可以通过pH敏感键与聚合物连接，在特定的pH才能释放从而提高药物的利用度。(Zhang，X.F.；Li，Y.X.；Chen，X.S.；Wang，X.H.；Xu，X.Y.；Liang，Q.Z.；Hu，J.L.；Jing，X.B.Biomaterials 2005，26，2121-2128.Xu，X.Y.；Zhang，X.F.；Wang，X.H.；Li，Y.X.；Jing，X.B.Polym.Adv.Technol.2009，20，843-848.Mikhail，A.；Allen，C.BiomacromolecμLes2010，11，1273-1280.Tong，R.；Yala，L.；Fan c，T.M.；Cheng，J.J.Biomaterials 2010，31，3043-3053.Shahin，M.；Lavasanifar，A.Int.J.Pharm.2010，389，213-222.Lee，Y.H.；Lee，K.；Park，T.G.Bioconjugate.Chem.2008，19，1319-1325.)。

此外，由聚乙二醇(PEG)/聚酯纳米粒形成的原位凝胶(in situ gel)也呈现特有的应用性能。原位凝胶是指以溶液状态给药后立即在用药部位发生相转变，形成的非化学交联的半固体制剂。原位凝胶具有凝胶制剂的亲水性三维网络结构及良好的组织相容性，同时，独特的溶胶-凝胶转变性质使其兼有制备简单、使用方便、与用药部位特别是黏膜组织亲和力强、滞留时间长等优点，加之广泛的用途和良好的控制释药性能，原位凝胶给药系统已成为药剂学和组织工程领域的一个研究热点。

常用的聚酯材料有聚乳酸(PLA)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)和聚己内酯(PCL)等。但含有PLA，PLGA两亲嵌段共聚物，非常粘软，制备或转移过程中损失很大，而且在体内很容易降解，达不到长期缓释的目的。聚己内酯类两亲性共聚物，由于其结晶性强，其自组装形成的纳米粒稳定性较差，而且纳米粒冻干粉再分散能力也不佳。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物及制备，该键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物具有多种前药的应用前景。其制备方法过程简单。

本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，该共聚物是由数均相对分子质量为600至10000的亲水性聚乙二醇嵌段A，与数均相对分子质量为250至20000的含环醚侧基的疏水性聚酯嵌段B，及与具有羟基、羧基、氨基、羰基官能团的药物C并通过酯键、酰胺键、腙键与嵌段A或嵌段B的端基连接，构成C/B-A-B/C、A-B/C、C/A-B或C/A-B/C共聚物，其中，包括含疏水性药物质量在内的嵌段B质量与包括含亲水性药物质量在内的嵌段A质量比为(0.5～5)∶1，药物C与嵌段A或与嵌段B的端基摩尔比为(0.1～2.0)∶1，

上述的聚乙二醇选自于双羟基聚乙二醇、单羟基聚乙二醇、聚氧乙烯与聚氧丙烯嵌段共聚物以及含有聚乙二醇嵌段的聚合物二元醇或单元醇的其中一种。

上述的含环醚侧基聚酯是1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮的均聚物或是1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮与己内酯、丙交酯、羟基乙酸、乙交酯、羟基丁酸或它们混合物的共聚物，其中，1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮在聚酯嵌段中的质量百分含量为1％至100％。

上述的药物C选自紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、地塞米松、羟基喜树碱、胰岛素、顺铂、5-氟尿嘧啶、利血平或姜黄素。

上述的共聚物为C/B-A-B/C型时，嵌段B的数均相对分子质量为250～10000，药物C与嵌段B的摩尔比为(0.1～1)∶1。

上述的共聚物为C/A-B型、C/A-B型或C/A-B/C型嵌段共聚物时，嵌段B的数均相对分子质量为500～20000，药物C与嵌段B的摩尔比为(0.1～2)∶1。

制备上述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物的方法，其特征在于包括以下过程：1)以TOSUO与己内酯、乳酸或丙交酯、羟基乙酸或乙交酯、羟基丁酸的均聚物或它们的共聚物为单体，单体摩尔量1％的辛酸亚锡为催化剂，数均分子量为600～10000的聚乙二醇为引发剂，130℃下反应10h聚合得到聚乙二醇-含环醚侧基的聚酯嵌段共聚物；2)聚乙二醇-聚酯与1.1倍聚乙二醇-聚酯端羟基的琥珀酸酐在140℃下反应5小时进行端羧基化，或聚乙二醇-聚酯与1.1倍聚乙二醇-聚酯端羟基的N，N-羰基二咪唑和水合肼反应进行端氨基化；3)将药物C与嵌段A或与嵌段B的端基摩尔比为(0.1～2.0)∶1混合，通过二环己基碳二亚胺，4-二甲氨基吡啶催化室温反应24小时得到酯键连接的聚合物，或通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺催化室温反应24小时得到酰胺键键连接的聚合物，或直接反应24小时得腙键连接的聚合物。

本发明的优点是通过环醚侧基聚酯的加入，可以灵活调解聚合物的结晶性能；药物通过化学键与共聚物连接，既可提高载药量，防止物理包封造成的药物泄露或突释，降低毒副作用，又可长期控制药物释放。本发明的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物可以以纳米粒或可注射温敏凝胶形式具有药应用前景。

附图说明：

图1是含环醚侧基聚酯-聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物PET-PEG-PET(A)、紫杉醇(PTX)(B)和键合紫杉醇的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)(C)核磁谱图，可以证明PTX成功键接到PET-PEG-PET上。

图2是PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)纳米粒粒径形态(A)及粒径分布图(B)，可见粒子呈球形，具有“核壳”结构，粒径在300nm左右。

图3是PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)聚合物水分散液23℃状态下呈流动态照片和PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)的水分散液37℃下呈凝胶状态照片。可见PTX/PET-PEG-PET/PTX具有温敏性。

图4是PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)纳米粒分散液相图。

图5是PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)纳米粒在pH7.4、37℃下的PTX体外释放曲线，可见，PTX释放受pH影响。

图6是PTX，PTX/PET-PEG-PET-PTX(I-1)及PET-PEG-PET对肝癌细胞HepG-2的细胞毒性(PET-PEG-PET的浓度为100ug/mL)，可见PTX能从PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)中释放出来，并且保持了PTX的抗肿瘤效果。

具体实施方式

下面再以实施例对本发明进一步加以说明。

实施例1(I-1)：

聚合物与药物酯键连接：

将相对分子质量1500的聚乙二醇(1.50g)加入反应器，加热使聚乙二醇熔融，抽真空除水后自然冷却；依次加入己内酯(3.23g)、TOSUO(0.98g)和辛酸亚锡(14mg)，每加入一种反应物后抽真空、充氮气，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；反应结束后，用二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物倒入冷正己烷中沉淀，放入冰箱中，冷冻，抽滤，干燥，得到含环醚侧基聚酯(PCT)-聚乙二醇-PCT嵌段共聚物(PET-PEG-PET)。将2.9g PET-PEG-PET和0.11g(过量)丁二酸酐放入干燥烧瓶中，抽真空通氮气。反应物在130℃下反应10h，然后冷却至室温，二氯甲烷溶解，冰乙醚中沉淀，真空抽滤得到COOH-PET-PEG-PET-COOH。然后在干燥反应管中依次加入0.6gCOOH-PET-PEG-PET-COOH，0.17g PTX和82mg二环己基碳二亚胺(DCC)，10mL精制二氯甲烷溶解，最后加入48mg 4-二甲氨基吡啶(DMAP)。抽真空，充氮气重复3次。在室温下反应24h。反应液在乙醇中透析4h，然后在蒸馏水中透析24h，将产品冷冻干燥24h，获得目标产物PTX/PET-PEG-PET/PTX(简称I-1)。

PET-PEG-PET、PTX和PTX/PET-PEG-PET/PTX(I-1)的核磁谱图如图1所示。

实施例2～实施例13：

按实施例1方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的种类和组成，可以得到得到多种C/B-A-B/C型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(I-2～I-16)，具体参数如表1所示。

表1C/B-A-B/C型(酯键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

M_PEG：PEG的数均相对分子质量；M_PE：聚酯的数均相对分子质量；N：药物与聚酯嵌段摩尔比；W_ABC：疏水嵌段/亲水嵌段的质量比(疏水性药物计入到疏水嵌段质量中，亲水性药物计入到亲水嵌段质量中)；NP：纳米粒；PTX：紫杉醇；多烯紫杉醇F_T：TOSUO单元占聚酯嵌段的质量百分含量；CL：己内酯；LA：丙交酯；GA：乙交酯；DOX：阿霉素，DEX：地塞米松

实施例17(II-1)：

将分子量为2000的单羟基聚乙二醇(2g)加入反应器，加热使其熔融，抽真空除水后自然冷却；依次加入己内酯(5.2g)、TOSUO(0.85g)和辛酸亚锡(204mg)，抽真空、充氮气出去残留的水，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；待反应结束后，打开反应器，加入10ml二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物滴加到冷乙醚中沉淀，抽滤，真空干燥，得到含环醚侧基的嵌段共聚物mPEG-PET，将4.3g mPEG-PET和0.22g(过量)丁二酸酐放入干燥烧瓶中，抽真空通氮气。反应物在140℃下反应5h，然后冷却至室温，二氯甲烷溶解，冰乙醚中沉淀，真空抽滤得到mPEG-PET-COOH。向干燥的反应管中依次加入0.45gmPEG-PET-COOH，0.17g紫杉醇(PTX)，117mg二环己基碳二亚胺(DCC)，70mg 4-二甲氨基吡啶(DMAP)用5mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解。抽真空通氮气，于室温下反应24h。双蒸水透析24h，冷冻干燥得mPEG-PET/PTX(简称II-1)。

实施例18～实施例29：

按实施例17方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可以得到多种A-B/C型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(II-2～II-13)，如表2所示。

表2A-B/C型(酯键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

实施例30(III-1)：

聚合物与药物酰胺键连接：

将相对分子质量4000的聚乙二醇4.0g加入反应器，加热使聚乙二醇熔融，抽真空除水后自然冷却；依次加入己内酯5.2g、TOSUO 0.85g和辛酸亚锡204μL，每加入反应物后抽真空、充氮气，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；反应结束后，用二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物倒入冷正己烷中沉淀，放入冰箱中，冷冻，抽滤，干燥，得到含环醚侧基的PET-PEG-PET。将0.8gPET-PEG-PET和0.022g(过量)丁二酸酐放入干燥烧瓶中，抽真空通氮气。反应物在130℃下反应10h，然后冷却至室温，二氯甲烷溶解，冰乙醚中沉淀，真空抽滤得到COOH-PET-PEG-PET-COOH。在干燥反应管中依次加入0.8gCOOH-PET-PEG-PET-COOH，0.116g DOX·HCl，20μL三乙胺，82mg DCC，用10mL DMF溶解，最后加入30mg NHS。抽真空，充氮气重复3次。在室温下反应24h。双蒸水透析24h，冷冻干燥得酰胺键键接的DOX/PET-PEG-PET/DOX(简称III-1)。

实施例31～实施例43：

按实施例30方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可以得到多种C/B-A-B/C型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(III-2～III13)，如表3所示。

表3C/B-A-B/C型(酰胺键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

HA：羟基丁酸

实施例44(IV-1)：

将分子量为750的单羟基聚乙二醇0.75g加入反应器，加热使其熔融，抽真空除水后自然冷却；依次加入己内酯2g、TOSUO 0.36g和辛酸亚锡100μL，抽真空、充氮气出去残留的水，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；待反应结束后，打开反应器，加入10mL二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物滴加到冷乙醚中沉淀，抽滤，真空干燥，得到含环醚侧基的嵌段共聚物mPEG-PET。将3.1g mPEG-PET和0.22g(过量)丁二酸酐放入干燥烧瓶中，抽真空通氮气。反应物在140℃下反应5h，然后冷却至室温，二氯甲烷溶解，冰乙醚中沉淀，真空抽滤得到mPEG-PET-COOH。向干燥的反应管中依次加入0.33gmPEG-PET-COOH，50mg DOX，100μL三乙胺，117mg NHS，70mg DCC用5mL DMF溶解。抽真空通氮气，于室温下反应24h。双蒸水透析24h，冷冻干燥得mPEG-PET/DOX(简称IV-1)。

实施例45～实施例55：

按实施例44方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可以得到多种A-B/C型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(IV-2～IV-12)，如表4所示。

表4A-B/C型(酰胺键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

实施例56(V-1)：

聚合物与药物腙键连接：

在反应器中，依次加入相对分子质量4000的聚乙二醇4.0g、己内酯3.23g、TOSUO 0.98g和辛酸亚锡114μL，抽真空、充氮气，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；反应结束后，用二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物倒入冷正己烷中沉淀，放入冰箱中，冷冻，抽滤，干燥，得到含环醚侧基的PET-PEG-PET。将0.6g PET-PEG-PET，0.35g N，N-羰基二咪唑(CDI)溶于10mL精制二氯甲烷中。抽真空通N₂，室温下反应24h，乙醚沉淀得CDI活化的PET-PEG-PET。1g CDI活化的PET-PEG-PET，244μL水合肼溶于10mL甲醇，70℃回流12h，冰乙醚沉淀，得端胺基PET-PEG-PET。0.1g端氨基PET-PEG-PET，33mg盐酸阿霉素(DOX)，20μL三乙胺，溶于5mL DMF，室温反应24h，将反应液导入透析袋置于双蒸水中透析24h，冷冻干燥得腙键连接的DOX/PET-PEG-PET/DOX(简称V-1)。

实施例56～实施例62：

按实施例56方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可得到多种药物腙键连接的C/B-A-B/C型键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(V-2～V-12)，如表5所示。

表5 C/B-A-B/C型的(腙键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

实施例63(VI-1)：

将分子量为750的单羟基聚乙二醇0.75g加入反应器，依次加入己内酯2g、TOSUO 0.34g和辛酸亚锡100μL，抽真空、充氮气出去残留的水，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h；待反应结束后，打开反应器，加入10ml二氯甲烷溶解聚合物，将聚合物滴加到冷乙醚中沉淀，抽滤，真空干燥，得到含环醚侧基的嵌段共聚物mPEG-PET。将0.33g mPEG-PET，0.35g N，N-羰基二咪唑(CDI)溶于10mL精制二氯甲烷中。抽真空通N₂，室温下反应24h，乙醚沉淀得CDI活化的mPEG-PET。1g CDI活化的mPEG-PET，244μL水合肼溶于10mL甲醇，70℃回流12h，冰乙醚沉淀，得端胺基mPEG-PET。0.3g端氨基mPEG-PET，50mg盐酸阿霉素(DOX)，50μL三乙胺，溶于5mL DMF，室温反应24h，将反应液导入透析袋置于双蒸水中透析24h，冷冻干燥得腙键连接的mPEG-PET/DOX(简称V-1)。

实施例64～实施例74：

按实施例63方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可得到A-B/C型键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物(VI-2～VI-12)，如表6所示。

表6 A-B/C型的(腙键)键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

实施例75(VII-1)

C/A-B型

分别将2g单端氨基PEG(NH₂-PEG数均分子量2000Da)，0.2g布洛芬(IBU)，0.2g DCC，0.15g NHS溶解于水中，抽真空通氮气重复三次，于室温下反应24h，然后于DMSO中透析24h，双蒸水中透析48小时得布洛芬修饰的PEG(IBU-PEG)。反应管中依次加入2g IBU-PEG，己内酯(5.2g)、TOSUO(0.85g)和辛酸亚锡(204mg)，抽真空、充氮气，最后真空密封，在磁力搅拌下于130℃下反应10h，停止反应。加入4mL二氯甲烷溶解，冰乙醚中沉淀，得IBU/PEG-PET(简称VII-1)。实施例76～实施例82；按实施例75方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，调可以得到(VII-2～VII-8)C/A-B型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，如表7所示。

表7 C/A-B型键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

IBU：布洛芬

实施例83(VIII-1)：

C/A-B/C型

在实施例75～实施例82的基础上可以继续对聚合物链进行修饰形成C/A-B/C型控制药物释放的PEG-含环醚侧基的聚酯共聚物。将0.66g VII-1，0.2g布洛芬(IBU)，0.3g DCC，0.2g DMAP溶解到10mLDMSO溶液中，抽真空通氮气，室温下反应24h。将反应液在DMSO中透析24h，双蒸水中透析48h，冷冻干燥得IBU/PEG-PET/IBU(VIII-1)。

实施例84～实施例90：

按实施例83方法，改变聚乙二醇、聚酯、药物的组成和种类，可以得到(VIII-2～VIII-12)C/A-B/C型键合药物的PEG-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，如表8所示。

表8 C/A-B/C型键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物

实施例91：

称取I-1共聚物0.2g，用5mL四氢呋喃溶解，磁力搅拌下于室温加入20mL双蒸水，继续搅拌，蒸发除去四氢呋喃后得到嵌段共聚物纳米粒分散液，纳米粒的平均粒径为300nm；粒径分布如图2所示。将嵌段共聚物纳米粒分散液冷冻干燥得到嵌段共聚物纳米粒冻干粉，该冻干粉可在水中再分散。

实施例92：

在小瓶中用水配制浓度在10％～50％范围的系列I-1纳米粒分散液；将小瓶置于恒温水浴中缓慢升温，升温步长1℃，每一温度点恒温2min，翻转小瓶，观察小瓶中I-1纳米粒分散液的流动性；小瓶中I-1纳米粒分散液由可流动状态转变为凝胶状态的温度即为该样品的Sol-Gel相转变温度；继续升温，小瓶中聚合物由凝胶状态转变为可流动状态的温度即为该样品的Gel-Sol相转变温度，不同温度条件下I-1纳米粒分散液的形态如图3所示，连接不同浓度I-1纳米粒分散液的相转变温度得到如图4所示的相图，凝胶窗口温度范围为28℃～48℃。

研究控制药物释放的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯纳米粒分散液的原位凝胶行为，结果发现该温敏原位凝胶系统的凝胶窗口温度范围为25℃～60℃，包含了体温，结果如表9所示。

表9键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物的温敏原位凝胶

实施例93：

精确称取1mL I-1纳米粒冻干粉分散液(浓度为5mg/mL)，置于透析袋内。将密封好的透析袋分别置于19mL(pH5.0，pH6.0，pH7.4)缓冲液中，于37℃恒温振荡器(70r/min)下进行体外释放实验。在设定的时间点取10mL释放液，并补充10mL新鲜的PBS。

用HPLC检测释放液，利用标准曲线按式1计算接收液中的药物浓度，按式(2)计算累积释放量。结果如图5，可见紫杉醇能从I-1中释放出来，并且释放速度跟释放液的pH有关。

Y＝B*X (1)

线性拟合得出：B＝3.54432E-8(R＝0.99976)。

E_{r} = \frac{V_{e} Σ_{1}^{n - 1} C_{i} + V_{0} C_{n}}{m_{drug}} - - - (2)

式中E_r：药物累积释放量，％；V_e：PBS的置换体积，10mL；V₀：释放液PBS的体积，20mL；C_i：第i次置换取样时释放液中药的浓度，μg/mL；m_drug：用于释放的载药胶束中紫杉醇的质量，μg；n：置换PBS的次数。

实施例94：

以含10％胎牛血清(FBS；Biochrom Ag，Germany)的DMEM(Sigma-Aldrich，USA)为基础培养液，将肝癌细胞(HepG-2，天津市医药科学研究所)以1×10⁵个/mL细胞浓度接种于96孔板中，置于37℃、5％CO₂、饱和湿度条件下培养。PET-PEG-PET(control)、PTX和I-1的DMSO溶液经紫外辐射1h后，用DMEM稀释，得到浓度在10～100ng/ml的溶液。取100μL各浓度的上述溶液分别加到接种过细胞的孔板中替代原培养液。培养在DMEM中的细胞作为对照组。分别培养48小时后，取出培养板，每孔加入20μL的MTT液，4h后，倒出原液后加入DMSO(100μL/孔)，室温15～20min，振荡培养板均匀染色，用酶联检测仪在492nm波长检测光吸收值(OD)，按式3计算细胞相对增殖百分率RGR(Relative Growth Rate)。

结果如图6所示，可见紫杉醇能从I-1中释放出来并且保持了原本的毒性。

Claims

1.一种键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，该共聚物是由数均相对分子质量为600至10000的亲水性聚乙二醇嵌段A，与数均相对分子质量为250至20000的含环醚侧基的疏水性聚酯嵌段B，及与具有羟基、羧基、氨基、羰基官能团的药物C并通过酯键、酰胺键、腙键与嵌段A或嵌段B的端基连接，构成C/B-A-B/C、A-B/C、C/A-B或C/A-B/C嵌段共聚物，其中，包括含疏水性药物质量在内的嵌段B质量与包括含亲水性药物质量在内的嵌段A质量比为(0.5～5)∶1，药物C与嵌段A或与嵌段B的端基摩尔比为(0.1～2.0)∶1，

2.按权利要求1所述的述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，聚乙二醇选自于双羟基聚乙二醇、单羟基聚乙二醇、聚氧乙烯与聚氧丙烯嵌段共聚物以及含有聚乙二醇嵌段的聚合物二元醇或单元醇的其中一种。

3.按权利要求1所述的述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，含环醚侧基的疏水性聚酯嵌段B是1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮的均聚物或是1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮与己内酯、丙交酯、羟基乙酸、乙交酯、羟基丁酸或它们混合物的共聚物，其中，1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮在聚酯嵌段中的质量百分含量为1％至100％。

4.按权利要求1所述的述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，药物C选自紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、地塞米松、羟基喜树碱、胰岛素、顺铂、5-氟尿嘧啶、利血平或姜黄素。

5.按权利要求1所述的述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物为C/B-A-B/C型时，嵌段B的数均相对分子质量为250～10000，药物C与嵌段B的摩尔比为(0.1～1)∶1。

6.按权利要求1所述的述的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物，其特征在于，键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物为C/A-B型、C/A-B型或C/A-B/C型嵌段共聚物时，嵌段B的数均相对分子质量为500～20000，药物C与嵌段B的摩尔比为(0.1～2)∶1。

7.一种制备权利要求1所述的的键合药物的聚乙二醇-含环醚侧基聚酯嵌段共聚物的方法，其特征在于包括以下过程：1)以1，4，8-三氧杂螺[4.6]-9-十一烷酮与己内酯、乳酸或丙交酯、羟基乙酸或乙交酯、羟基丁酸的均聚物或它们的共聚物为单体，单体摩尔量1％的辛酸亚锡为催化剂，数均分子量为600～10000的聚乙二醇为引发剂，130℃下反应10h聚合得到聚乙二醇-含环醚侧基的聚酯嵌段共聚物；2)聚乙二醇-聚酯与1.1倍聚乙二醇-聚酯端羟基的琥珀酸酐在140℃下反应5小时进行端羧基化，或聚乙二醇-聚酯与1.1倍聚乙二醇-聚酯端羟基的N，N-羰基二咪唑和水合肼反应进行端氨基化；3)将药物C与嵌段A或与嵌段B的端基摩尔比为(0.1～2.0)∶1混合，通过二环己基碳二亚胺，4-二甲氨基吡啶催化室温反应24小时得到酯键连接的聚合物，或通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺催化室温反应24小时得到酰胺键键连接的聚合物，或直接反应24小时得腙键连接的聚合物。