CN102523912A - 以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法。所述的培育方法具体步骤为：将蛹虫草子实体消毒、清洗后，切成段后接种于固体培养基中培养得到菌块；将所得的菌块接种至一级液体菌种培养基中培养得到一级液体菌种；将所得的一级液体菌种用无菌水稀释得到一级液体菌种稀释液；将珍珠岩和轾石混合，灭菌后与上述的一级液体菌种稀释液混合，得到虫草混合培养土；将4～5龄家蚕幼虫用酒精擦虫体后，用一次性针筒吸入所得的一级液体菌种，注射到家蚕体内；将接种后的家蚕幼虫插进所得的虫草混合培养土中，幼虫头部朝上，培养后采收，得到以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体。本发明头部子实体长度2cm以上，有效成分含量高。
Description
技术领域
本发明涉及一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法。
背景技术
1、蛹虫草Cordyceps militaris(La.:Fr)，又名北冬虫夏草，为麦角菌目，麦角菌科，真菌，是我国医药学宝库中的冬虫夏草一类珍稀药用真菌，经医药科学工作者多年研究证明，蛹虫草所含虫草素、虫草多糖、虫草酸、SOD酶等生理活性物质和营养成份的含量都高于或接近冬虫夏草，现已被卫生部批准为新资源食品。人工培育蛹草大都以大米或虫蛹为培养基，由于家蚕虫草的人工培养尚无真正形成虫体内僵化和形成子实体长度2cm以上的相关报导。对我国养蚕业的开发具有广阔的应用前景。
2、中国发明专利申请200510101348.0公开了一种以黄粉虫蛹为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法，采用蛹虫草菌向黄粉虫蛹前胸注入0.05-0.2ml后，将受侵感染的黄粉虫蛹置于无菌的培养基当中进行保湿培养50-60天，其在黄粉虫上长出子实体。
3、中国发明专利94112056.2公开了一种快速高产人工培育蚕蛹虫草的方法。其实蛹草菌的分生孢子悬浊液，用昆虫针等提取菌液刺入蚕蛹，待营养菌在体内充分生长，蚕蛹僵硬后，在适当温度、光线下培养即可获得大量蛹虫草。
以上2、3都是以昆虫蛹为寄主培育蛹虫草子实体而本专利用蚕幼虫为寄主，所用的昆虫材料不同，家蚕虫草难度更大。
4、中国发明专利申请200910049298.4公开了以幼虫为寄主人工培育的活体虫草及其培育方法。采用大麦虫幼为寄主的蛹虫草子实体培育方法，通过蛹虫草菌的分离，培养大麦虫的养殖，喂养虫草菌液，在一定温度下，使其虫体僵化，并在其头部长出虫草子实体。
以上4专利是用大麦虫、幼虫与本专利用家蚕幼虫是不同科目，所以有本质的不同。
5、食用菌2007（1）《活虫体人工培养泰山蛹虫草技术试验》文章，“蛹虫菌采用泰安农科院在泰山采得野生虫草，分离纯化，人工复壮，对不同桑蚕幼虫3-5龄幼虫、蛹，采用活虫体喷菌液，桑叶喷菌液，菌液注射、活体扎孔等6种接种方法，不同虫龄幼虫接种感染效果，由表2可知，4龄幼虫利用喷菌液和带桑叶喂食都能感菌且感染率较5龄虫高，但虫体感菌后迅速缩小，无利用价值，注射活体扎孔接种后，4龄5龄蚕都能感菌，但感染率都低于50%，无开发价值，活虫体灭菌接种能达到100%的感染率，但形成的子实体短，“全草”利用，外观商品性差。”
上述5文章中家蚕幼虫体内都没有形成僵化，所以感染后迅速缩小，无开发利用价值。灭菌的幼虫也没有形成体内僵化，形成子实体短，以上文章所述实验不能算家蚕幼虫虫草感染虫草菌稼接成功，本发明的家蚕幼虫被虫草菌感染后，形成体内僵化，虫体整齐饱满。头部子实体2cm以上，是真正的家蚕幼虫虫草。
6、中国发明专利200810013831.7用原产于青藏高原的野生天然“冬虫夏草菌株”孢子接种到有机活体蚕蛹上人工培育而成蚕蛹虫草。
上诉6培育蚕蛹虫草是用的青藏高原“冬虫夏草菌株”与本专利所用“蛹虫草菌株”产于东北，两种菌珠不同，菌株产地不同，所以有本质区别。
发明内容
本发明的目的是提供一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体及其培育方法。
为了达到上述目的，本发明提供了一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将蛹虫草子实体消毒、清洗后，切成段后接种于固体培养基中于18℃～25℃培养10～20天得到菌块；将所得的菌块接种至一级液体菌种培养基中培养于18℃～25℃培养4～7天得到一级液体菌种；
第二步：将第一步所得的一级液体菌种按体积比1：5～20用无菌水稀释得到一级液体菌种稀释液；将珍珠岩和轾石按重量比1：0.5～1.5混合，灭菌后与上述的一级液体菌种稀释液混合，得到虫草混合培养土；
第三步：将4～5龄家蚕幼虫用酒精擦虫体后，用一次性针筒吸入第二步所得的一级液体菌种，注射到家蚕体内；将接种后的家蚕幼虫插进第二步所得的虫草混合培养土中，幼虫头部朝上，露出0.5～1.5厘米，在温度为18℃～24℃、湿度为70%～90%、每天光照不少于10小时的条件下培养50～60天后采收，得到以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体。
优选地，所述第一步中的固体培养基由马铃薯过滤液、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、VB1和无菌水按比例200ml：20g：20g：10g：3g：2g：0.1g：1000ml混合，121℃灭菌20～50分钟得到。
优选地，所述第一步中的一级液体菌种培养基由马铃薯过滤液、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、VB1和无菌水按比例200ml：0.1g：20g：10g：3g：2g：0.1g：1000ml混合，121℃灭菌20～50分钟得到。
本发明还提供了采用上述培育方法培育得到的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体，其特征在于，其长度大于2cm以上。
优选地，所述的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体中包含腺苷0.07～0.09wt%，多糖8～9.8wt%。
与现有技术相比，本发明的优点是：
1、本发明采用了珍珠岩和轾石构成虫草混合培养土基质，其具有透气、松软、保湿等优点，能够模拟大自然外部环境，利于虫草生长，所述的混合培养土中添加有菌种稀释液，有利于虫草的培养；
2、本发明采用了家蚕幼虫，其无毒，可入药，营养成分高；
3、本发明的家蚕幼虫被虫草菌感染后，形成体内僵化，虫体整齐饱满,头部子实体长度2cm以上，有效成分含量高。
附图说明
图1为以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体示意图。
具体实施方式
下面结合实施例来具体说明本发明。
实施例
一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，具体步骤为：
（1）将上海农科院自主培养的蛹虫草（Cordyceps militaris(La.:Fr)Link）子实体用75vol%的酒精消毒、用灭菌水冲洗后，切成小段后，接种于固体培养基中于20℃培养15天得到菌块；所述固体培养基由马铃薯过滤液200ml、琼脂20g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、KH2PO43g、MgSO4·7H2O 2g、VB10.1g和1000ml无菌水混合，121℃灭菌30分钟得到,所述的马铃薯过滤液的制备方法为：将200g马铃薯切成小块，加入无菌水1000mL，烧开30分，用纱布过滤后备用；将长势好、转势快的菌块接种至一级液体菌种培养基中培养于20℃培养5天得到一级液体菌种；所述的一级液体菌种培养基由马铃薯过滤液200ml、琼脂0.1g、葡萄糖20g、蛋白胨10g、KH2PO43g、MgSO4·7H2O 2g、VB10.1g和1000ml无菌水混合，121℃灭菌30分钟得到，所述的马铃薯过滤液的制备方法为将200g马铃薯切成小块，加入无菌水1000mL，烧开30分，用纱布过滤后备用；
（2）将第一步所得的一级液体菌种按体积比1：10用无菌水稀释得到一级液体菌种稀释液；将珍珠岩和轾石按重量比1：1混合，灭菌后与上述的一级液体菌种稀释液混合，得到虫草混合培养土，装在一次性塑料杯内备用；
（3）将4～5龄家蚕幼虫用75vol%酒精擦虫体后，用25ml一次性针筒吸入一级液体菌种，注射到家蚕（鳞翅目，蚕蛾科，Bombyxmori Linaeus）体内；将接种后的家蚕幼虫插进第二步所得的虫草混合培养土中，幼虫头部朝上，露出1厘米，在温度为20℃、湿度为85%、每天光照不少于10小时的条件下培养55天后采收，得到以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体，感染成功率70%以上。如图1所示，为以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体示意图，从上到下分别为1号虫草、2号虫草、3号虫草、4号虫草，其中，1号虫草的家蚕幼虫1长5.5cm，子实体2长4.5cm，2号虫草的家蚕幼虫1长5.5cm，子实体2长3.5cm，3号虫草的家蚕幼虫1长7cm，子实体2长2.5cm，4号虫草的家蚕幼虫1长6.5cm，子实体2长4.5cm。
本发明方法培养的家蚕虫草的质量对比如下：
以上测试分析由上海农科院检测，通过测定，说明家蚕幼虫虫草多糖成份和野生冬虫夏虫基本接近，而腺苷都高于天然冬虫夏草。家蚕幼虫由桐乡河山开发区提供，轾石、珍珠岩由上海园林研究所提供。
Claims (5)
1.一种以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将蛹虫草子实体消毒、清洗后，切成段后接种于固体培养基中于18℃～25℃培养10～20天得到菌块；将所得的菌块接种至一级液体菌种培养基中培养于18℃～25℃培养4～7天得到一级液体菌种；
第二步：将第一步所得的一级液体菌种按体积比1：5～20用无菌水稀释得到一级液体菌种稀释液；将珍珠岩和轾石按重量比1：0.5～1.5混合，灭菌后与上述的一级液体菌种稀释液混合，得到虫草混合培养土；
第三步：将4～5龄家蚕幼虫用酒精擦虫体后，用一次性针筒吸入第二步所得的一级液体菌种，注射到家蚕体内；将接种后的家蚕幼虫插进第二步所得的虫草混合培养土中，幼虫头部朝上，露出0.5～1.5厘米，在温度为18℃～24℃、湿度为70%～90%、每天光照不少于10小时的条件下培养50～60天后采收，得到以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体。
2.如权利要求1所述的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于，所述第一步中的固体培养基由马铃薯过滤液、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、VB1和无菌水按比例200ml：20g：20g：10g：3g：2g：0.1g：1000ml混合，121℃灭菌20～50分钟得到。
3.如权利要求1所述的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体的培育方法，其特征在于，所述第一步中的一级液体菌种培养基由马铃薯过滤液、琼脂、葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、VB1和无菌水按比例200ml：0.1g：20g：10g：3g：2g：0.1g：1000ml混合，121℃灭菌20～50分钟得到。
4.采用权利要求1所述的培育方法培育得到的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体，其特征在于，其长度大于2cm以上。
5.如权利要求4所述的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体，其特征在于，所述的以家蚕幼虫为寄主的蛹虫草子实体中包含腺苷0.07～0.09wt%，多糖8～9.8wt%。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120704 |