CN102517023B - 基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用。本发明通过将硼氢化钠和碲粉进行反应，碲粉和硼氢化钠按摩尔比1∶1.8～4配比，得到NaHTe水溶液；接着将氯化镉、巯基乙胺·盐酸盐和前述的NaHTe水溶液反应，得到橙红色澄清的CdTe/MA QDs溶液；再将EDC、EGTA和前述的CdTe/MA QDs溶液反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA，并用于监测拟南芥叶肉细胞中钙离子浓度水平变化。本发明基于量子点的发光特性，在量子点的表面引入EGTA，获得一种能特异性识别钙离子的探针。该探针具有抗光漂白性，能特异性识别钙离子，且灵敏度比传统荧光染料探针Fluo-3高。本发明提供的制备方法，反应条件简单，操作方便，得到的探针有利于实时监测细胞内游离钙离子浓度。

Description

基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用

技术领域

本发明属于纳米探针制备领域，特别涉及一种基于量子点的植物细胞钙离子探针及其制备方法与应用。

背景技术

钙离子作为植物细胞内的第二信使物质，介导细胞对外界刺激的反应应答，调控细胞内许多重要的生理和生化过程。大量研究表明，细胞对许多外界环境和激素等刺激作出的应答是通过胞质内游离钙离子浓度变化来传递的。因此，实时监测细胞内游离钙离子浓度的变化水平对于研究激素信号转导机制至关重要。

细胞内游离钙离子的测定常用的探针有放射性同位素探针、荧光染料探针等。放射性同位素存在放射性污染；荧光染料受光照射易分解即存在光漂白现象，如Fluo-3，用波长为488nm的光激发时，光照时间持续1min猝灭率已达80％，光照2min猝灭率为98％，同时荧光染料的激发波长范围很窄，实际工作中供选择的波长范围有限。目前，商业化应用于胞质游离钙离子测定的荧光探针数目有限且存在一定缺陷。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法。

本发明的另一目的在于提供通过上述方法得到的基于量子点的植物细胞钙离子探针。

本发明的再一目的在于提供所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，包含以下步骤：

(1)制备碲氢化钠(NaHTe)：将N₂饱和的二次蒸馏水和硼氢化钠(NaBH₄)混合后，再加入碲粉(Te)，于25～60℃水浴下恒温反应10～60min，待黑色Te粉完全消失，溶液呈无色透明后置于4～8℃反应10～60min，底部出现白色沉淀硼酸钠(Na₂B₄O₇)，得到的上清液即为无色透明的NaHTe水溶液；其中，Te和NaBH₄按摩尔比1∶1.8～4配比；

(2)制备CdTe/MA量子点：在通过氮气除氧得到的二次蒸馏水中依次加入氯化镉(CdCl₂·2.5H₂O)和巯基乙胺·盐酸盐(MA·HCl)，将pH值调为5.0～6.0后继续通氮后注入步骤(1)制备的NaHTe水溶液，于50～120℃恒温回流10～90min，得到橙红色澄清的CdTe/MA QDs溶液，于4～8℃保存；其中，氯化镉、NaHTe水溶液以及巯基乙胺·盐酸盐的用量按照如下方法计算：Cd²⁺、Te-和MA按摩尔1∶(0.1～0.5)∶(2～3)配比；

(3)制备基于量子点的植物细胞钙离子探针：将碳二亚胺(EDC)溶于乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)碱性水溶液中，置于25～60℃水浴中搅拌活化1～10min后，在均匀搅拌下加入步骤(2)制备的CdTe/MAQDs溶液，避光继续搅拌反应10～60min；反应结束后，于4～8℃放置过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA；其中，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MA QDs溶液的用量按照如下方法计算：CdTe/MA QDs以步骤(2)中加入的巯基乙胺计，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MAQDs按摩尔比1∶(0.5～2)∶(0.5～4)配比。

步骤(1)中所述的N₂饱和的二次蒸馏水用作反应介质，其用量优选为按硼氢化钠溶解后浓度为1mol/L计算；

步骤(1)中所述的Te和所述的NaBH₄优选按摩尔比1∶1.8～3配比；

步骤(2)中所述的二次蒸馏水用作反应介质，其用量优选为按氯化镉溶解后浓度为0.008mol/L计算；

步骤(2)中所述的pH值优选通过氢氧化钠进行调节；

步骤(2)中所述的CdTe/MA QDs溶液优选还通过如下步骤处理：于4～8℃用二次蒸馏水和截留分子量为14000Da的透析袋对所述的CdTe/MA QDs溶液进行透析，透析后的CdTe/MA QDs溶液于4～8℃避光保存；

步骤(3)中所述的乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)碱性水溶液的pH值优选为7～9；

一种基于量子点的植物细胞钙离子探针，通过上述方法制备得到；

所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针在细胞内游离钙离子浓度监测中的应用。

原理：量子点(Quantum dots，QDs)是由II-VI族或III-V族元素组成的纳米颗粒。与传统的染料探针相比，量子点探针具有抗光漂白，激发波长宽的特点，同时量子点表面易功能化，有利于引入能特异性识别客体的活性官能团。本发明基于量子点的发光特性，在量子点的表面引入EGTA，获得一种能特异性识别钙离子的探针。这一探针不仅可用于实时监测细胞内游离钙离子浓度的变化水平，而且可检测其它样品中钙离子浓度，前者对于研究钙离子信号转导机制至关重要。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明提供的基于量子点的植物细胞钙离子探针在实际应用中具有抗光漂白性。

(2)本发明提供的基于量子点的植物细胞钙离子探针在实际应用中有特异选择性，因此获得的细胞钙离子探针能特异性识别钙离子，可以用于复杂的多组分体系进行机理研究。

(3)本发明提供的基于量子点的植物细胞钙离子探针在实际应用中灵敏度比传统荧光染料探针Fluo-3高。

(4)本发明制备基于量子点的植物细胞钙离子探针的反应条件温和，时间短，能耗低。

(5)本发明提供的制备方法，反应条件简单，操作方便，对设备要求不高，运行成本低。

附图说明

图1是本发明所制备的基于量子点的植物细胞钙离子探针的结构示意图；其中

代表巯基乙氨MA。

图2是实施例1制备的CdTe/MA QDs和CdTe/MA-EGTA的透射电镜图，其中：a为CdTe/MA QDs，b为CdTe/MA-EGTA。

图3是CdTe/MA-EGTA加外标前后的毛细管电泳图，其中：1为偶联液；2为偶联液+CdTe/MA；3为偶联液+EGTA；4为偶联液+EDC。

图4是CdTe/MA-EGTA荧光探针对Ca²⁺的特异性识别图。

图5是CdTe/MA-EGTA与Fluo-3的光稳定性比较图，其中：A为CdTe/MA-EGTA QDs；B为Fluo-3。

图6是CdTe/MA-EGTA荧光探针装载前后拟南芥叶细胞的激光共聚焦显微镜图，其中：a为未装载CdTe/MA-EGTA荧光探针；b为已装载CdTe/MA-EGTA荧光探针。

图7是CdTe/MA-EGTA荧光探针监测拟南芥叶细胞中钙离子浓度水平变化的激光共聚焦显微镜图，其中：a为未加茉莉酸(JA)处理的空白背景；b为100μmol·L^-1JA处理。

图8为图7的数字化表达图，横轴是激光照射的时间，纵轴为相对荧光强度，其中：a为未加茉莉酸(JA)处理的空白背景；b为100μmol·L^-1JA处理。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)制取NaHTe：向装有搅拌磁子的小玻璃瓶中依次加入1.0mL N₂饱和的二次蒸馏水，0.0378g(1.0×10^-3mol)NaBH₄(易吸潮，称量时动作要快)，并轻轻振荡小瓶，使之完全溶解，然后加入0.0638g(5.0×10^-4mol)Te粉。盖上带导气管的胶塞，并把导气管插到液面下液封，然后置于恒温磁力搅拌器上，在40℃水浴下恒温反应30min，待黑色Te粉完全消失，溶液呈无色透明后置于4℃冰箱下恒温反应30min，底部出现白色沉淀Na₂B₄O₇，得到无色透明的上清液，即0.5mol·L^-1的NaHTe水溶液(Te和NaBH₄按摩尔1∶2配比)。

(2)制取CdTe/MA：在100mL的三颈圆底烧瓶中注入50mL二次蒸馏水，通氮气30min后，依次加入0.0913g(4.0×10^-4mol)CdCl₂·2.5H₂O和0.109g(9.6×10^-4mol)MA·HCl(巯基乙胺·盐酸盐)，用1mol·L^-1的NaOH调节溶液pH值至5.5，继续通氮气30min后，注入步骤(1)新鲜制备的NaHTe 200μL(1.0×10^-4mol)，在100℃水浴中恒温回流40min，得橙红色澄清的CdTe/MA量子点(QDs)溶液，于4℃冰箱保存(溶液最终浓度以Te^-计为2×10^-3mol·L^-1，Cd²⁺、Te^-和MA按摩尔1∶0.25∶2.4配比)。把CdTe/MA QDs装于处理后的截留分子量为14000Da的透析袋中，于4℃冰箱中用二次蒸馏水透析4天(每隔2～4h换水)，避光置于冰箱中4℃条件下保存。

(3)基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备：准确称取0.0184g(9.6×10^-5mol)碳二亚胺(EDC)溶于1.0mL 2.4×10^-2mol/L乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)(9.6×10^-5mol)碱性水溶液(pH为8)中，置于37℃水浴中搅拌活化5min后，在均匀搅拌下滴加5.0mL纯化的CdTe/MA QDs溶液(以MA的量计为9.6×10^-5mol)，控制摩尔比QDs∶EDC∶EGTA＝1∶1∶1，避光继续搅拌反应30min。反应结束后，放入冰箱4℃过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA。该基于量子点的细胞钙离子探针的示意图如图1所示，核心为CdTe量子点，

代表巯基乙氨MA，最外层为EGTA。

(4)效果检测：。

①透射电镜结论

透射电镜图如图2(图2a为CdTe/MA QDs，图2b为CdTe/MA-EGTA)所示，可见所制备的基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA为球形，分散性好，颗粒大小较为均一，粒径约为3～4nm，说明所制备的量子点荧光探针保持了CdTe/MA量子点的特性。

②毛细管电泳结论

用毛细管电泳法证明步骤(3)偶联反应确实得到细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA。进样前按顺序洗柱：0.2mol·L^-1NaOH洗2min，超纯水洗1min，pH5.2、50mmol·L^-1NaAc-HAc缓冲液洗3min，采用20psi压力洗涤，电压为25KV；设置缓冲体系的条件后以0.5psi压力进样5s；以分离条件为25KV电压、214nm紫外检测器检测。

采用外标法分别把8.3μL浓度为1.92×10^-2mol·L^-1(以MA计)的CdTe/MAQDs溶液；10μL浓度为1.6×10^-2mol·L^-1的EDC溶液与及1.7μL浓度为2.4×10^-2mol·L^-1的EGTA溶液分别加入到10μL浓度为1.6×10^-2mol·L^-1的CdTe/MA-EGTA溶液(即偶联液)中，定容至50μL后直接进行毛细管电泳表征，结果如图3所示，其中，曲线1为偶联液，曲线2为偶联液+CdTe/MA，曲线3为偶联液+EGTA，曲线4为偶联液+EDC。通过对加标后各峰的峰面积数据分析，从曲线2～4可推断峰a为CdTe/MA QDs；峰c为EGTA以及峰d为EDC，由此可以推出峰b为CdTe/MA-EGTA。因此，证明已成功通过偶联方法制备基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA。

③CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针对Ca²⁺的特异性识别

在10.0mL比色管中依次加入1.0mL pH值为7.4、10mmol·L^-1的磷酸盐缓冲溶液，1.0mL CdTe/MA-EGTA偶联溶液，100μmol·L^-1的离子储备液100μL，室温下用二次蒸馏水定容到10.0mL，室温下充分摇匀后，以400nm波长的光激发，在450～700nm波长范围内对上述混合液体系进行光谱扫描测定其荧光光谱。

结果如图4所示，在各种金属离子浓度相同的情况下，Ca²⁺对CdTe/MA-EGTA QDs的荧光猝灭作用最大，当CC_a ²⁺＝100μmol·L^-1，C_{CdTe/MA-EGTA QDs}＝200μmol·L^-1时，荧光猝灭率(Effq＝(F₀-F)/F₀，其中F₀和F分别为加Ca²⁺前后体系的荧光强度)达84.2％，其它离子对量子点荧光猝灭率大大低于Ca²⁺。由此可知CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针能特异性识别Ca²⁺，选择性高。

④CdTe/MA-EGTA与Fluo-3光稳定性比较

按以下相同实验条件进行实验。在10.0mL比色管中依次加入1.0mL pH值为7.4的PBS缓冲溶液(10mmol·L^-1)，荧光探针溶液(终浓度为200μmol·L^-1)，0.01mol/LCa²⁺离子储备液5μL(终浓度为10μmol·L^-1)，室温下用二次蒸馏水定容至5.0mL，充分摇匀后，设置一定的激发和检测波长范围(400～700nm)对体系进行光谱扫描测定其荧光光谱。其中CdTe/MA-EGTA的激发波长为λex＝400nm，Fluo-3(购自Aldrich公司)的激发波长λex＝488nm。

结果如图5所示，相同实验条件下，Fluo-3-Ca²⁺体系荧光强度迅速猝灭，1min时猝灭率已达80％，2min时基本已经猝灭完毕，猝灭率为98％。而CdTe/MA-EGTA QDs-Ca²⁺体系荧光强度随时间变化不大，经10min照射猝灭率仅为18.4％，由此可见，CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针的抗光漂白性能较传统有机染料探针Fluo-3相比要好得多。因此，实验所制备的CdTe/MA-EGTA克服了传统染料试剂的缺陷，秉承了量子点稳定的光学性能，可适用于长时间监测。

⑤CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针监测拟南芥叶肉细胞中钙离子浓度水平变化

取按常规方法培养10d的拟南芥叶片，切成约2～3mm宽的细条，依次加入pH为7.4、浓度10mmol·L^-1的PBS缓冲溶液200μL，1.6×10^-3mol·L^-1CdTe/MA-EGTA荧光探针50μL，0.125μL转化表面活性剂Silwet L-77(0.05％v/v)。混匀后于37℃避光放置在培养箱中30min，取出后除去溶液，再加PBS缓冲溶液洗涤，置于1000转/min离心1min，重复3次，用激光共聚焦显微镜进行观察。

装载探针前拟南芥叶肉细胞没有荧光信号(如图6a所示)与及装载探针后出现明亮的绿色荧光(如图6b所示)，可推断已成功实现CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针导入拟南芥叶肉细胞。图6中的每图第一列为荧光图像，第二列为明场观察的图像，第三列为第一、二列的Merge(整合)图像。

接着，再用100μmol·L^-1茉莉酸(JA)处理装载CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针后的拟南芥叶片。结果显示，经100μmol·L^-1茉莉酸(JA)处理后的拟南芥叶肉细胞(CdTe/MA-EGTA QDs荧光探针导入的细胞)荧光强度在50.0s前变化不大，处理达1min细胞内的荧光基本已经猝灭完毕(如图7b所示)，以不作任何处理的作空白背景(如图7a所示)。这一实验说明拟南芥叶肉细胞在茉莉酸的刺激下钙离子浓度升高，升高的钙离子浓度猝灭了CdTe/MA-EGTA探针的荧光，证明本实验所制备的新型CdTe/MA-EGTAQDs荧光探针可应用于细胞内游离钙离子的浓度变化水平的实时监测。图8为图7的数字化表达图，横轴是激光照射的时间，纵轴为相对荧光强度。其中：a为空白背景；b为JA处理。

实施例2

(1)制取NaHTe：向装有搅拌磁子的小玻璃瓶中依次加入1.0mL N₂饱和的二次蒸馏水，0.0340g(9.0×10^-4mol)NaBH₄(易吸潮，称量时动作要快)，并轻轻振荡小瓶，使之完全溶解，然后加入0.0638g(5.0×10^-4mol)Te粉。盖上带导气管的胶塞，并把导气管插到液面下液封，然后置于恒温磁力搅拌器上，在25℃水浴下恒温反应60min，待黑色Te粉完全消失，溶液呈透明后置于8℃冰箱下恒温反应60min，底部出现白色沉淀Na₂B₄O₇，得到浅粉色透明的上清液，即0.5mol·L^-1的NaHTe水溶液(Te和NaBH₄按摩尔1∶1.8配比)。

(2)制取CdTe/MA：在100mL的三颈圆底烧瓶中注入50mL二次蒸馏水，通氮气30min后，依次加入0.0913g(4.0×10^-4mol)CdCl₂·2.5H₂O和0.0909g(8.0×10^-4mol)MA·HCl(巯基乙胺·盐酸盐)，用1mol·L^-1的NaOH调节溶液pH值至5.00，继续通氮气30min后，注入步骤(1)新鲜制备的NaHTe 80μL(4.0×10^-5mol)，在50℃水浴中恒温回流90min，得橙红色澄清的CdTe/MA量子点(QDs)溶液，于8℃冰箱保存(溶液最终浓度以Te^-计为8×10^-4mol·L^-1，Cd²⁺、Te^-和MA按摩尔1∶0.1∶2配比)。把CdTe/MA QDs装于处理后的截留分子量为14000Da的透析袋中，于8℃冰箱中用二次蒸馏水透析4天(每隔2～4h换水)，避光置于冰箱中8℃条件下保存。

(3)基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备：准确称取0.0092g(4.8×10^-5mol)碳二亚胺(EDC)溶于0.5mL 2.4×10^-2mol/L乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)(4.8×10^-5mol)碱性水溶液(pH为7.5)中，置于25℃水浴中搅拌活化10min后，在均匀搅拌下滴加5.0mL纯化的CdTe/MA QDs溶液(以MA的量计为9.6×10^-5mol)，控制摩尔比QDs∶EDC∶EGTA＝1∶0.5∶0.5，避光继续搅拌反应60min。反应结束后，放入冰箱8℃过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA。

实施例3

(1)制取NaHTe：向装有搅拌磁子的小玻璃瓶中依次加入1.0mL N₂饱和的二次蒸馏水，0.0567g(1.5×10^-3mol)NaBH₄(易吸潮，称量时动作要快)，并轻轻振荡小瓶，使之完全溶解，然后加入0.0638g(5.0×10^-4mol)Te粉。盖上带导气管的胶塞，并把导气管插到液面下液封，然后置于恒温磁力搅拌器上，在60℃水浴下恒温反应10min，待黑色Te粉完全消失，溶液呈透明后置于6℃冰箱下恒温反应10min，底部出现白色沉淀Na₂B₄O₇，得到浅紫色透明的上清液，即0.5mol·L^-1的NaHTe水溶液(Te和NaBH₄按摩尔1∶3配比)。

(2)制取CdTe/MA：在100mL的三颈圆底烧瓶中注入50mL二次蒸馏水，通氮气30min后，依次加入0.0913g(4.0×10^-4mol)CdCl₂·2.5H₂O和0.1363g(1.2×10^-3mol)MA·HCl(巯基乙胺·盐酸盐)，用1mol·L^-1的NaOH调节溶液pH值至6.0，继续通氮气30min后，注入步骤(1)新鲜制备的NaHTe 400μL(2.0×10^-4mol)，在120℃水浴中恒温回流10min，得橙红色澄清的CdTe/MA量子点(QDs)溶液，于6℃冰箱保存(溶液最终浓度以Te^-计为4×10^-3mol·L^-1，Cd²⁺、Te^-和MA按摩尔1∶0.5∶3配比)。把CdTe/MA QDs装于处理后的截留分子量为14000Da的透析袋中，于6℃冰箱中用二次蒸馏水透析4天(每隔2～4h换水)，避光置于冰箱中6℃条件下保存。

(3)基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备：准确称取0.0368g(1.92×10^-4mol)碳二亚胺(EDC)溶于4.0mL 2.4×10^-2mol/L乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)(3.84×10^-4mol)碱性水溶液(pH为9.0)中，置于60℃水浴中搅拌活化1min后，在均匀搅拌下滴加5.0mL纯化的CdTe/MA QDs溶液(以MA的量计为9.6×10^-5mol)，控制摩尔比QDs∶EDC∶EGTA＝1∶2∶4，避光继续搅拌反应10min。反应结束后，放入冰箱6℃过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA。

对比实施例1

(1)制取NaHTe：同实施例3步骤(1)。

(2)制取CdTe/MA：同实施例3步骤(2)。

(3)基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备：准确称取0.0368g(1.92×10^-4mol)碳二亚胺(EDC)溶于4.0mL 2.4×10^-2mol/L乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸(EGTA)(3.84×10^-4mol)碱性水溶液(pH为13.0)中，置于60℃水浴中搅拌活化1min后，在均匀搅拌下滴加5.0mL纯化的CdTe/MA QDs溶液(以MA的量计为9.6×10^-5mol)即出现沉淀，未能成功制备CdTe/MA-EGTA探针。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）制备碲氢化钠：将N₂饱和的二次蒸馏水和硼氢化钠混合后，再加入碲粉，于25～60℃水浴下恒温反应10～60min，待黑色碲粉完全消失，溶液呈无色透明后置于4～8℃反应10～60min，底部出现白色沉淀硼酸钠，得到的上清液即为无色透明的NaHTe水溶液；其中，碲粉和硼氢化钠按摩尔比1:1.8～4配比；

（2）制备CdTe/MA量子点：在通过氮气除氧得到的二次蒸馏水中依次加入氯化镉和巯基乙胺·盐酸盐，将pH值调为5.0～6.0后继续通氮后注入步骤（1）制备的NaHTe水溶液，于50～120℃恒温回流10～90min，得到橙红色澄清的CdTe/MA QDs溶液，于4～8℃保存；其中，氯化镉、NaHTe水溶液以及巯基乙胺·盐酸盐的用量按照如下方法计算：Cd²⁺、Te^2-和MA按摩尔1:（0.1～0.5）:（2～3）配比；

（3）制备基于量子点的植物细胞钙离子探针：将碳二亚胺溶于乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸碱性水溶液中，置于25～60℃水浴中搅拌活化1～10min后，在均匀搅拌下加入步骤（2）制备的CdTe/MA QDs溶液，避光继续搅拌反应10～60min；反应结束后，于4～8℃放置过夜终止反应，得到基于量子点的植物细胞钙离子探针CdTe/MA-EGTA；其中，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MA QDs溶液的用量按照如下方法计算：CdTe/MA QDs以步骤（2）中加入的巯基乙胺计，碳二亚胺、乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸和CdTe/MAQDs按摩尔比1:（0.5～2）:（0.5～4）配比。

2.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的碲和所述的硼氢化钠按摩尔比1:1.8～3配比。

3.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的N₂饱和的二次蒸馏水的用量根据硼氢化钠溶解后浓度为1mol/L进行计算。

4.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的二次蒸馏水的用量根据氯化镉溶解后浓度为0.008mol/L进行计算。

5.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的pH值通过氢氧化钠进行调节。

6.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的CdTe/MA QDs溶液还通过如下步骤处理：于4～8℃用二次蒸馏水和截留分子量为14000Da的透析袋对所述的CdTe/MA QDs溶液进行透析，透析后的CdTe/MA QDs溶液于4～8℃避光保存。

7.根据权利要求1所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的乙二醇双(乙二氨乙基醚)四乙酸碱性水溶液的pH值为7～9，且pH值不为7。

8.一种基于量子点的植物细胞钙离子探针，通过权利要求1～7任一项所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针的制备方法制备得到。

9.权利要求8所述的基于量子点的植物细胞钙离子探针在细胞内游离钙离子浓度监测中的应用。

Images