CN102512410A - 绿原酸在制备抗应激和延长寿命的药物或食品中的应用 - Google Patents

Abstract

提供绿原酸在制备抗应激性疾病、抗免疫性疾病和延长寿命的药物及功能食品中的应用。绿原酸可制备成各种形式的药物制剂，包括口服、注射、肺吸入制剂、透皮制剂，如注射剂、口服液、片剂、胶囊、颗粒剂、气雾剂、粉雾剂、喷雾剂、贴剂等。

Description

绿原酸在制备抗应激和延长寿命的药物或食品中的应用

技术领域：

本发明属于药物技术领域，具体地，涉及绿原酸在制备抗应激、抗免疫性疾病和延长寿命的药物或食品中的应用。

背景技术：

应激(stress)是机体在各种内外环境因素及社会、心理因素刺激时所出现的全身性非特异性适应反应，又称为应激反应。应激时引起机体功能代谢变化包括中枢神经系统、免疫系统、心血管系统、消化系统、血液系统、泌尿生殖系统等一系列反应，并导致应激性疾病，如应激性溃疡、免疫性疾病等。目前在防治应激相关疾病的病理生理基础手段有排除应激原、应用糖皮质激素、补充营养及综合治疗等。

全人类或一个民族、一个地区人口的平均寿命的增长与延长代表着社会发展、经济状况、医学的进步、医疗条件的改善。据中国国家统计局人口司公布，全国人口的平均预期寿命2009年是74.82岁。人类平均寿命延长的极限，从理论上讲可以达到人的自然寿命的终结。但实际上，无论就人类全体或某个民族人口，甚至所谓长寿民族或长寿地区，活过百岁的个体仍属极少数，人的平均寿命远未达理想的地步。

中药是我国传统文化的瑰宝，是全人类的财富。随着现代医药技术的不断发展，中药的应用和研究又爆发出新的生命力。对中药尤其是植物药的现代化开发主要是利用现代科学技术从植物药中提取有效部位和单体化学成分。从植物药中开发具有抗应激性疾病和延长寿命的药物具有广阔的社会和经济效益前景。

绿原酸在植物中分布广泛，从高等双子叶植物到蕨类植物均有，含量较高的植物有传统中药金银花、杜仲的叶中。其产品分别为金银花提取物、杜仲提取物。绿原酸具有广泛的生物活性，虽然已有多数报道，但未见其在模式生物线虫(Caenorhabditiselegans，C.elegans)抗高温抗氧化应激活性，以及能延长线虫寿命的报道。迄今，现有技术中未见有绿原酸具备延长寿命活性的报道，也没有其在制备抗应激或抗免疫性疾病的药物或功能食物中的应用的报道。

发明内容：

本发明基于绿原酸能提高模式生物线虫的存活率，延缓死亡的机制，将其进一步应用于抗应激疾病和延长寿命的药物或食物中，目的旨在提供绿原酸的医药食品新用途，提供其在制备抗应激疾病、抗免疫性疾病和延长寿命的药物或食品中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

绿原酸在制备抗应激性疾病的药物中的应用。

上述应用中所述的应激性疾病为应激性溃疡病。

上述应用中所述的应激性疾病为应激导致的免疫性疾病。

绿原酸在制备抗免疫性疾病的药物中的应用。

上述应用中所述的免疫性疾病为应激导致的免疫性疾病。

绿原酸在制备延长寿命的药物中的应用。

绿原酸在制备抗应激功能食品中的应用。

绿原酸在制备延长寿命功能食品中的应用。

本发明所述的绿原酸(3-(3，4-Dihydroxycinnamoyl)quinicAcid)，其分子结构特征为：

本发明的绿原酸可直接作为药物或食物使用，也可加入辅料，辅料为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的药用载体或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、超填料以及药物制品辅剂。将绿原酸以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和口腔喷雾两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣片剂、胶囊、酊剂、糖浆、滴丸剂等。

口腔喷雾可用其固体或液体制剂。

附图说明：

图1为线虫在绿原酸(0.05mM，0.5mM)35℃处理14小时生存率曲线；

图2为在5mM二氯百草枯(paraquat，超氧化剂)处理的条件下，20℃培养，线虫在给绿原酸(0.05mM，0.5mM)第3、5、9天存活率；

图3为20℃给绿原酸0.05mM和0.5mM浓度条件下，线虫的平均寿命和最大存活寿命。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例和制剂实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

绿原酸的抗应激疾病和延长寿命药物或食品中的作用：

1、绿原酸在线虫中的活性试验：

以秀丽线虫(C.elegans)作为模型进行实验，该化合物在20℃，0.05mM(毫摩尔)和0.5mM的给药浓度能够增长线虫平均寿和最大寿命，在35℃和5mM二氯百草枯的抗性实验中，存活率得到提升，结果表明，绿原酸具有延长线虫寿命的功能，并能增长线虫在高温和超氧化条件下的存活率。

实验材料：

野生型秀丽线虫N2：购自美国线虫遗传中心(CGC)；

绿原酸(3-(3，4-Dihydroxycinnamoyl)quinic Acid)：购自瑞士Adamas Reagent公司。

实验方案：

1、线虫复苏、同步化：

(1)从-80℃冰箱中取出冻存的N2线虫(CGC，美国)1-2管，放置在超净台中，自然解冻约5分钟。

(2)吸取离心管中上清冻存液，剩余约0.5ml，注意更换枪头，不能造成交叉污染。

(3)用移液器轻轻吸打沉淀的线虫，使悬浮，全部吸取后，转移到NGM+OP50(大肠杆菌突变株)平板上培养。

(4)在无菌风条件下吹干平板上残余液体，约10-15分钟。

(5)盖上培养皿盖子后，放置在温度20℃，湿度60％的培养箱中培养。

(6)吸出的废液及枪头全部放入烧杯，实验结束后，加入部分次氯酸水处理2小时后倒掉。

(7)复苏培养约50小时后，取出，显微镜下，35倍单视野中有80-100个卵时，可以进行同步化。

(8)ddH₂O 8ml冲洗每个平板。

(9)每个平板收集约7.5ml洗脱液，将洗脱液转移到15ml离心管中。

(10)称取10gNaOH，溶解在50ml无菌水中，配成5N NaOH，5N NaOH/次氯酸钠按照1.5/3配成4.5ml混合液，混匀备用。

(11)向15ml离心管中加入3.5ml上述混合液，每2分钟摇匀1次，管中无线虫残体为止。

(12)1300g离心1分钟。

(13)去上清，加入无菌去离子水3ml，混匀。

(14)1300g离心1分钟。

(15)去上清，用1ml M9重悬，将混匀后的收集液转移到约含有25-35ml M9的50ml离心管中，20℃，湿度60％条件下培养过夜。

(16)1300g离心收集L1期同步化线虫，将收集的同步化线虫转移到90mm NGM平板上培养，20℃，湿度60％条件下培养。

含化合物平板制备和线虫培养：

(1)200ml固体NGM，微波炉融化，65℃以下时，加入以下成分：

1M MgSO₄ 200μl，5mg/ml Chol est erol 200μl，1M CaCl₂200μl，5ml KPO₄(108.3g KH₂PO₄，35.6g K₂HPO₄，H₂O至1升)pH6，4mM fudr 200μl，将绿原酸母液按各终浓度的比例加入65℃以下时的NGM培养基，混合均匀，倒制约10个直径9cm细胞培养板。多余的平板封口后，放4℃保存备用。

(2)在NGM平板上铺制灭活的OP50菌液，无菌风吹干。

(3)每个工作平板挑取60-80条L4后期的线虫，每个待测化合物做两个重复平板，20℃培养。

(4)从铺板的第二天开始，记录为成虫第一天寿命，此后每隔1天显微镜观察各个板，记录每板中线虫的死亡和存活数以及线虫咽泵活动周期、线虫活动量，并及时记录平板的污染状况，若污染及时更换平板。

高温处理实验：

(1)材料准备和线虫处理同上。

(2)将培养的同步化线虫转移到对照、0.05mM绿原酸、0.5mM绿原酸平板上，放置35℃处理，每2个小时统计死亡情况，并记录。

超氧化处理存活率实验：

(1)材料准备和线虫处理同上。

(2)将同步化的线虫，第一天成虫的时候转移到对照组、0.05mM绿原酸、0.5mM绿原酸组平板上，每种NGM平板里都含有5mM二氯百草枯。20℃培养，每隔1天进行死亡统计，记录分析。

实验结果：

1、图1显示高温处理存活率结果：绿原酸(0.05mM，0.5mM)35℃处理线虫14小时的生存率曲线表明，绿原酸显著提高了线虫的抗性和存活率。

2、图2显示在5mM二氯百草枯处理线虫的条件下，在给绿原酸(0.05mM，0.5mM)第3、5、9天进行存活率统计，结果表明绿原酸增强了线虫在超氧化条件下的存活率。

3、图3显示20℃条件下绿原酸0.05mM，0.5mM浓度处理线虫，增长了线虫的平均寿命和最大存活寿命。

实验结果显示：

1、绿原酸显著提高了线虫(C.elegans)在35℃高温条件下的抗性和存活率。

2、在线粒体内源性超氧化物增高的情况下，绿原酸提高了线虫(C.elegans)的存活率，延缓了死亡。

3、绿原酸显著延长了线虫(C.elegans)的平均寿命和最大存活寿命。

绿原酸(3-(3，4-Dihydroxycinnamoyl)quinic Acid)(购自瑞士Adamas Reagent公司)用作药物时，可直接使用，也可加入辅料，辅料为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的药用载体或赋形剂。

所述的药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、超填料以及药物制品辅剂。将绿原酸以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和口腔喷雾两种形式给药。

口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣片剂、胶囊、酊剂、糖浆、滴丸剂等。

口腔喷雾可用其固体或液体制剂。

下面是绿原酸的药物制剂例子：

制剂实施例1：

按绿原酸与赋形剂重量比1∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。

制剂实施例2：

按绿原酸与赋形剂重量比1∶2的比例加入赋形剂，制粒压片。

制剂实施例3：

按常规胶囊制剂方法将绿原酸制成胶囊。

制剂实施例4：

按下述方法制成片剂：

片剂：

制剂实施例5：

胶囊剂：绿原酸 100mg

淀粉           适量

硬脂酸镁       适量

制备方法：将绿原酸与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。

制剂实施例6：

鼻喷雾剂：

制备方法：搅拌下于适当体积的重蒸馏水中每次加入一种成分，直至完全深解，然后再加入另一种成分。加水至2ml后，将该溶液在无菌过滤器上过滤，装入瓶中并按照适当的剂量分隔。

Claims (8)

1.绿原酸在制备抗应激性疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1的应用，所述的应激性疾病为应激性溃疡病。

3.根据权利要求1的应用，所述的应激性疾病为应激导致的免疫性疾病。

4.绿原酸在制备抗免疫性疾病的药物中的应用。

5.根据权利要求4的应用，所述的免疫性疾病为应激导致的免疫性疾病。

6.绿原酸在制备延长寿命的药物中的应用。

7.绿原酸在制备抗应激功能食品中的应用。

8.绿原酸在制备延长寿命功能食品中的应用。

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