CN102499270A - 一种果梅果实浸提液的提取方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种果梅果实浸提液的提取方法和应用，属于农业微生物病害防治领域，该方法包括：将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入有机溶剂浸提得到浸提液，将浸提液在低于100℃温度下加热后离心取上清液得到果梅果实浸提液。本发明还公开了一种用上述方法制得的果梅抑菌剂。本发明还公开了上述果梅抑菌剂在真菌抑制上的应用。

Description

一种果梅果实浸提液的提取方法和应用
技术领域
本发明涉及农业微生物病害防治领域，具体地说涉及一种果梅果实浸提液的提取方法和应用。
背景技术
梅(Prunus mume Sieb.et Zucc)是蔷薇科植物，落叶果树，主要分布在我国的浙江、广东、江苏、云南、福建、湖南和台湾等地，在日本和韩国也有种植。果梅作为一种传统的加工品和食物被广泛推广，但在加工过程中对果梅果实的品质要求较高，一些品质较差的果实被遗弃，造成浪费，并且多年来国内果梅加工产品品种单一，市场空间小，种植者的收益少，因此充分利用果梅这一资源，开发新产品对提高我国农民收入有重要意义。
古中医学书籍上就有关于果梅药理学作用的记载，果梅可以清热、止咳、消肿止痛、下气、安心、解毒等。近年来的研究表明果梅具有净血杀菌、抑制癌细胞生长的作用；也有研究表明果梅种子提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、白色念球菌等多种细菌有抑制作用。
现在人们对环境和自身健康越来越重视，无公害生物农药被广泛关注。由于化学合成的杀菌剂不宜长期使用，否则会造成生物抗药性，且农药的残留会给人体健康造成伤害，因此研制出抑菌效果好的生物杀菌剂具有重大意义。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种果梅果实提取液的提取方法，用于提取果梅中的抑菌有效成分；本发明的另一个发明目的是提供一种由果梅果实浸提得到的果梅抑菌剂；本发明还有一个发明目的是提供前述果梅抑菌剂在真菌抑制上的应用。
技术方案：对于一种果梅果实浸提液的提取方法，本发明采用有机溶剂浸提，加热、离心后取上清液的工艺，具体包括：将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入有机溶剂浸提得到浸提液，将浸提液在低于100℃温度下加热后离心取上清液得到果梅果实浸提液。
进一步的，为了得到抑菌效果较好的果梅抑菌剂，将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入等体积有机溶剂浸提20～30h得到浸提液，将浸提液在90℃温度下加热10min后，以1000rpm离心30min，取上清液得到果梅果实浸提液。
所述有机溶剂包括正己烷、丙酮的任意一种。一方面起到浸提植物中抑菌活性物质的作用，另外还具有一定的抑菌效果。其中，丙酮的抑菌效果要优于正己烷。
本发明的一种果梅抑菌剂，是通过上述果梅果实浸提液的提取方法制得。该抑菌剂为无公害的生物抑菌剂，平时可保存在4℃冰箱中，可喷洒在农作物上以有效防治真菌病害，其中，对苹果轮纹病菌、草莓炭疽病菌、辣椒疫霉病菌、禾谷镰孢菌和马铃薯干腐病菌等五种真菌病害具有明显抑制作用，抑制率在80％以上。所述果梅抑菌剂还可用于组织培养，组织培养过程中采用0.22μm水系滤膜过滤，使用浓度为1g/mL，可有效提高组培苗的成活率，降低真菌病害。所述果梅抑菌剂还可用于农业生产，喷洒于叶面上进行病害防治，使用浓度为300mg/mL。须注意的是，上述果梅抑菌剂或果梅果实浸提液的浓度为质量浓度，表示每毫升浸提液中包含的果肉质量。
有益效果：本发明的一种果梅果实浸提液的提取方法可实现高效浸提果梅中抑菌活性成分，使用在组织培养上可使培养基污染的概率下降，提高组培苗成活率；使用在农业栽种方面可实现绿色无公害生产，可有效预防一些真菌病害，且对其他作物和环境不产生威胁。
附图说明
图1是实施例4苹果轮纹病菌接种后的抑菌效果对比图；
图2是实施例4禾谷镰孢菌接种后的抑菌效果对比图；
图3是实施例4草莓炭疽病菌接种后的抑菌效果对比图；
图4是实施例4马铃薯干腐病菌接种后的抑菌效果对比图；
图5是实施例4辣椒疫霉病菌接种后的抑菌效果对比图。
具体实施方式
实施例1
将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入等体积丙酮浸提20～30h得到浸提液，将浸提液在90℃温度下加热10min后，以1000rpm离心30min，取上清液得到果梅果实浸提液即果梅抑菌剂。由该方法制得的果梅抑菌剂对真菌具有显著抑制作用。
实施例2
将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，按1∶1.5(v/v)加入正己烷浸提20～30h得到浸提液，将浸提液在85℃温度下加热10min后，以1000rpm离心30min，取上清液得到果梅果实浸提液即果梅抑菌剂。由该方法制得的果梅抑菌剂对真菌具有显著抑制作用。
实施例3
将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入等体积丙酮浸提24h得到浸提液，将浸提液在100℃温度下加热8min后，以1000rpm离心30min，取上清液得到果梅果实浸提液即果梅抑菌剂。由该方法制得的果梅抑菌剂对真菌具有显著抑制作用。
实施例4
用琼脂平板法制成含不同浓度浸提液的培养基，将实施例1所述的5mL、10mL果梅抑菌剂(1g/mL)分别倒入已灭菌的装PDA培养基的三角瓶内(每个三角瓶内为50mLPDA培养基)，震荡摇匀，制得的培养基中浸提液质量浓度分别为100mg/mL(处理1)和200mg/mL(处理2)，在超净工作台上，趁热倒入90mm培养皿中制成平板。另外，以相同体积的丙酮代替浸提液作对照，将制好的平板放在超净工作台上冷却后封口备用。
试验依次接种不同真菌，包括苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea(Moug.)Ces.etDe Not)、草莓炭疽病菌(Colletotrichum fragariae Brooks)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici Leonian)、马铃薯干腐病菌(Fusarium solani(Mart.)Sacc.)和禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum Schwl)。
采用菌丝生长速率法测定果梅果实丙酮提取液的抑菌作用。以PDA培养基作为对照，重复试验3次。用打孔器在培养好的供试真菌菌落边缘切直径为6mm的菌饼反接于培养皿内，于28℃培养72小时，间隔12小时，用十字交叉法测定菌饼扩展直径，记录结果，并按公式计算菌丝生长抑制率：
菌落净生长直径(mm)＝测量直径-6
抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100
以上得到的结果如图1、图2、图3、图4和图5所示，可以看出，丙酮对照组与空白对照相比具有一定的真菌抑制效果，但不明显，马铃薯干腐病菌的试验两组的抑菌效果相差不大；而处理一和处理二具有明显的抑菌效果，浸提液浓度较大的处理组效果更优。在浸提液浓度为200mg/mL时，草莓炭疽病在接种后12小时开始生长，苹果轮纹病和水稻恶苗病在接种后24小时开始生长，辣椒疫霉病在接种后36小时开始生长而禾谷镰孢菌在接种60小时内未见生长。在浸提液浓度为100mg/mL时，供试菌的生长与对照一样，在接种12小时后开始生长，但其生长量小于对照。
本发明的果梅抑菌剂的真菌抑制率达80％，一般使用7天后即可得到显著抑制效果。试验过程中还发现，空白对照容易受到细菌污染，而加入果梅果实浸提液的培养基未发现细菌污染现象。因此该果梅果实浸提液还对细菌具有一定的抑制作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种果梅果实浸提液的提取方法，其特征在于该方法包括：将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入有机溶剂浸提得到浸提液，将浸提液在低于100℃温度下加热后离心取上清液得到果梅果实浸提液。
2.根据权利要求1所述的一种果梅果实浸提液的提取方法，其特征在于该方法包括：将成熟果梅果实的果肉榨成匀浆，加入等体积有机溶剂浸提20~30h得到浸提液，将浸提液在90℃温度下加热10min后，以1000rpm离心30min，取上清液得到果梅果实浸提液。
3.根据权利要求1或2所述的一种果梅果实浸提液的提取方法，其特征在于：所述有机溶剂包括正己烷、丙酮的任意一种。
4.一种果梅抑菌剂，其特征在于是通过权利要求1所述的方法制得。
5.一种如权利要求4所述的果梅抑菌剂在真菌抑制上的应用。
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