CN102485229B - 抗病毒药物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗病毒药物，具体涉及式I所示的无环核苷酸类似物的结晶：
Description
技术领域
本发明涉及式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐在治疗乙型病毒性肝炎中的用途：
式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐是结晶性的固体，这些结晶的特征可以通过X粉末衍射分析图谱和DSC分析确定。
背景技术
乙型病毒性肝炎是严重威胁人类健康的重大疾病。目前临床常用的HBV治疗药物主要有干扰素、拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等。干扰素治疗有效率只有30-50％，而且副作用较大。拉米夫定能够迅速降低病毒载量，但是清除残留病毒的过程相当缓慢，需要长期给药，从而产生耐药性，用药2年后耐药性发生率高达40-50％，由此引发肝炎的急性发作等严重后果；最近上市的抗乙肝病毒新药恩替卡韦具有高效安全的特点，但是作为核苷类似物，恩替卡韦与拉米夫定有交叉耐药性，对拉米夫定耐药株无效，而且长期应用有产生耐药性的可能。
阿德福韦酯是近年来上市的另一个抗乙肝病毒药物。阿德福韦酯 是一种前体药物，口服进入体内后释放活性形式的阿德福韦：
作为核苷酸类似物，阿德福韦在细胞内只需一步磷酸化，长期应用自身不易产生耐药性，而且对拉米夫定耐药病毒株有效；与核苷类药物合用，有协同作用。但是，阿德福韦酯存在两个不足之处：1、阿德福韦酯对温度湿度较敏感，其原料药及制剂在室温易水解；2、阿德福韦酯具有剂量限制性的肾脏毒性，在临床安全剂量下难以快速抑制病毒复制，起效慢；3、阿德福韦酯进入体内，水解生成甲醛和特戊酸，前者有一定的毒性，后者不易代谢排泄，有一定的副作用。
发明内容
本发明通过研究发现，式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐，以及包含式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂的组合物具有良好的化学稳定性：
本发明人意外地发现，与阿德福韦酯相比，式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐具有更好的安全性，其毒副作用 特别是肾脏毒性显著低于阿德福韦酯。
本发明人还意外地发现，在鸭乙肝模型的评价中，式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐比阿德福韦酯具有更好的抗病毒作用。
因此，本发明一方面提供式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐在治疗乙型病毒性肝炎中的用途：
本发明还提供I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐在治疗乙型病毒性肝炎中的用途，其特征在于式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐用HPLC法测得的化学纯度为≥99％。
本发明还提供I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐在治疗乙型病毒性肝炎中的用途，其特征在于式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐通过粉末X衍射分析或DSC分析可以确定其是结晶性的固体。
本发明还提供I所示的无环核苷酸类似物与有机酸形成的盐。
本发明也提供I所示的无环核苷酸类似物与无机酸形成的盐。
本发明式I化合物可以其本身也可以其药学可接受的盐或溶剂合物的形式使用。式I化合物的药学可接受的盐包括与药学上可接受的无机酸或有机酸形成的盐。合适的酸加成盐的例子包括与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹 果酸、鞣酸等形成的盐。药用盐包括其无机或有机酸盐，其中包括但不限于：氢碘酸盐、硫酸氢盐、磷酸氢盐、丁酸盐、草酸盐、三甲基乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、苦味酸盐、天冬氨酸盐、葡糖酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、双羟萘酸盐、丙酮酸盐、乙醇酸盐、三氟乙酸盐、对氨基水杨酸盐、扑酸盐和抗坏血酸盐等。(参见例如S.M.Berge，et al.，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.，66：1-19(1977)。
本发明还提供具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐的水合物或溶剂合物。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：7.64±0.10，9.88±0.10，10.81±0.10，14.22±0.10，14.92±0.10，15.81±0.10，16.54±0.10，17.77±0.10，19.14±0.10，19.95±0.10，22.11±0.10，22.95±0.10，25.42±0.10.
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与盐酸形成的结晶性状的盐C22H24N5O4P·HCl，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：4.72±0.10，10.80±0.10，12.18±0.10，13.06，14.78±0.10，19.34±0.10，23.70±0.10，25.10±0.10，28.54±0.10。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与氢溴酸形成的结晶性状的盐C22H24N5O4P·HBr，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：9.78±0.10，11.32±0.10，12.72±0.10，13.76，14.70±0.10，18.24±0.10，20.80±0.10，21.24±0.10，22.06±0.10，24.64±0.10，25.62±0.10。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与硫酸形成的结晶性状的盐C22H24N5O4P·H2SO4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：5.10±0.10，10.00±0.10，10.24±0.10，12.60，15.400±0.10，20.640±0.10，22.360±0.10。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与磷酸形成的盐C22H24N5O4P·H3PO4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：3.66±0.10，7.35±0.10，7.97±0.10，10.01±0.10，14.74，17.02±0.10，18.42±0.10，22.27±0.10，24.53±0.10，24.83±0.10。
本发明提供式I所示的无环核苷酸类似物与磷酸形成的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在约142.20±2℃。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与甲磺酸形成的盐C22H24N5O4P·CH3SO3H，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：4.34±0.10，8.06±0.10，8.74±0.10，9.62，11.92±0.10，12.56±0.10，12.90±0.10，13.72±0.10，14.98±0.10，16.02±0.10，17.34±0.10，17.56±0.10，20.86，21.82±0.10。
本发明提供式I所示的无环核苷酸类似物与甲磺酸形成的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在约100.01±2℃。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与枸橼酸形成的盐C22H24N5O4P·C6H8O7，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：11.68±0.10，12.82±0.10，13.30±0.10，14.34，19.70±0.10，23.56±0.10，25.32±0.10。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与富马酸形成的盐C22H24N5O4P·C4H4O4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：5.13±0.10，10.35±0.10，20.57±0.10，25.83，31.12±0.10。
本发明提供式I所示的无环核苷酸类似物与富马酸形成的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在约168.65±2℃。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与马来酸形成的盐C22H24N5O4P·C4H4O4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：3.92±0.10，7.14±0.10，8.14±0.10，10.54，11.74±0.10，15.68±0.10， 17.74±0.10，19.66±0.10，24.28。
本发明提供式I所示的无环核苷酸类似物与马来酸形成的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在约127.98±2℃。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与L-酒石酸形成的盐C22H24N5O4P·C4H6O6，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：5.18±0.10，7.50±0.10，10.38±0.10，15.60，31.50±0.10。
本发明还提供式I所示的无环核苷酸类似物与L-苹果酸形成的盐C22H24N5O4P·C4H6O5，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有至少三个选自约为以下位置处的吸收峰：9.90±0.10，10.82±0.10，14.94±0.10，16.56，17.80±0.10，19.16±0.10，19.96±0.10，22.14±0.10，22.98，25.46±0.10。
本发明提供式I所示的无环核苷酸类似物与L-苹果酸形成的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在约140.35±2℃。
本发明另一方面提供一种药物组合物，其包含式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
本发明还提供一种药物组合物，其中，每单位剂量中包含0.1mg至100mg的式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
本发明还提供一种药物组合物，其中，每单位剂量中包含1mg至20mg的式I所示的无环核苷酸类似物及其非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
根据本发明的药物组合物，其可以是例如以下的剂型：片剂例如但不限于速释片、缓缓片、控释片、薄膜衣片、糖衣片、口含片、舌下片、生物粘附片等；胶囊剂例如但不限于硬胶囊剂、软胶囊剂等；注射剂例如但不限于无菌的或含抑菌剂的水性注射液、油性注射液、冷冻干燥粉针剂、注射用微球等；喷雾剂例如但不限于口腔喷雾用、鼻腔喷雾用、局部皮肤喷雾用等的喷雾剂；气雾剂例如但不限于肺吸入用气雾剂、局部皮肤用气雾剂等；滴鼻剂例如但不限于滴鼻用溶液、滴鼻用凝胶等；粉雾剂例如但不限于口腔用粉雾剂、鼻腔用粉雾剂、局部皮肤用粉雾剂等。这些制剂的制备工艺是本领域技术人根据其已有知识或参考相关教科书或工具书而可以制备的。
附图说明
图1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I1)的粉末X衍射图谱；
图2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·盐酸盐(I2)的粉末X衍射图谱；
图3为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·氢溴酸盐(I3)的粉末X衍射图谱；
图4为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·硫酸盐(I4)的粉末X衍射图谱；
图5-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·磷酸盐(I5)的粉末X衍射图谱；
图5-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·磷酸盐(I5)的DSC图谱；
图6-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·甲磺酸盐(I6)的粉末X衍射图谱；
图6-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·甲磺酸盐(I6)的DSC图谱；
图7为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·枸橼酸盐(I7)的粉末X衍射图谱；
图8-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·富马酸盐(I8)的粉末X衍射图谱；
图8-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·富马酸盐(I8)的DSC图谱；
图9-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·马来酸盐(I9)的粉末X衍射图谱；
图9-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌 呤·马来酸盐(I9)的DSC图谱；
图10-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-酒石酸盐(I10)的粉末X衍射图谱；
图10-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-酒石酸盐(I10)的DSC图谱；
图11-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-苹果酸盐(I11)的粉末X衍射图谱；
图11-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-苹果酸盐(I11)的DSC图谱；
其中X衍射图谱的横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度；DSC图谱的横坐标为温度，纵坐标为热焓。
具体实施方式
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
实施例1 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I1)的制备
将130g(0.508mol)9-[(膦酰基-甲氧基)-乙基]-腺嘌呤、276g(2.00mmol)邻乙氧基苯酚及390g 1-甲基-2-吡咯烷酮加热到85℃，然后加入63g三乙胺，加入309g(1.50mmol)DCC，于100℃加热搅拌16小时。冷却，滤去固体；将滤液减压浓缩，用硅胶(200-300目)柱分离硅胶，用二氯甲烷∶甲醇(20∶1)混合溶剂洗脱，收集所需组 分，减压蒸干，用乙酸乙酯重结晶，得目标物35g，熔点124-127℃。元素分析C22H24N5O4计算值(％)：C 58.28，H 5.34，N 15.44，P 6.83；测定值(％)：C 58.45，H 5.16，N 15.68，P 6.70。
实施例2 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·盐酸盐(I2)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于5ml无水乙醇，滴加氯化氢的乙醚溶液，至pH为2-3，回流10min，自然降温，析出固体，干燥，称重1.33g，熔点184-186℃。元素分析C22H24N5O4P·HCl计算值(％)：C53.94，H 5.14，N 14.30，Cl 7.24，P 6.32；测定值(％)：C 54.25，H 5.02，N 14.37，Cl 7.08，P 6.59。
实施例3 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·氢溴酸盐(I3)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1加热溶于5ml无水乙醇，冷却至30℃，加入5.6M溴化氢的乙醇溶液0.5ml，搅拌，再降温至-5℃，析出类白色固体，抽滤，干燥，称重1.4g，收率93.3％，熔点174-176℃。元素分析C22H24N5O4P·HBr计算值(％)：C 49.45，H 4.72，N 13.11，Br14.95，P 5.80；测定值(％)：C 49.64，H 4.52，N 13.08，Br 15.17，P5.96。
实施例4 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·硫酸盐(I4)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1加热溶于5ml无水乙醇，回流下滴加浓硫酸0.14ml左右，冷却，搅拌20min析出白色固体，抽滤，干燥，称重1.5g，收率96.8％，熔点134-136℃。元素分析C22H24N5O4P·H2SO4计算值(％)：C 47.91，H 4.75，N 12.70，P 5.62；测定值(％)：C 48.10，H 4.79，N 12.51，P 5.28。
实施例5 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·磷酸盐(I5)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于5ml无水乙醇，0.3ml 85％的磷酸，继续回流30min，自然降温，析出白色固体，抽滤，干燥，称重1.4g，收率90.4％，熔点141-143℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：8.08(d，2H)，7.05-7.23(m，8H)，6.86(t，2H)，4.23-4.36(m，4H)，4.03(m，6H)，1.27(m，6H)。元素分析C22H24N5O4P·H3PO4计算值(％)：C47.92，H 4.94，N 12.70，P 11.23；测定值(％)：C 47.73，H 4.92，N12.91，P 11.06。
实施例6 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·2甲磺酸盐(I6)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于5ml无水乙醇，加入甲磺酸0.4ml，冷却，析出固体，干燥，称重1.43g，收率90.5％，熔点98-100℃。 1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：9.56(br s，1H)，8.72(br s，1H)，8.44(d，2H)，7.03-7.10(m，6H)，6.87(t，2H)，4.47-4.49(t，2H)，4.26(d，2H)，4.01-4.08(m，6H)，2.34(s，6H)，1.29(t，6H)。元素分析C22H24N5O4P·2CH3SO3H计算值(％)：C 44.65，H 5.00，N 10.85，P4.80；测定值(％)：C 44.27，H 5.14，N 10.63，P 6.50。
实施例7 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·枸橼酸盐(I7)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于10ml无水乙醇，加入0.53g(2.53mmol)枸橼酸，继续回流30min，自然降温，析出白色固体，过滤，干燥，称重1.47g，收率80.3％，熔点148-150℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：12.38(br s，2H)，8.08(d，2H)，7.05-7.15(m，8H)，6.86(t，2H)，4.23-4.36(m，4H)，4.03(m，6H)，2.67(dd，4H)，1.25(m，6H)。元素分析C22H24N5O4P·C6H8O7计算值(％)：C 52.10，H 5.00，N 10.85，P 4.80；测定值(％)：C 52.05，H 5.00，N 10.74，P 4.65。
实施例8 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·富马酸盐(I8)的制备
将2.6g(5.06mmol)I1溶于16ml乙醇，加入0.6g(5.16mmol)富马酸及1ml水，回流至澄清，自然冷却降温，析出白色固体，抽滤，滤饼用10ml冷乙醇洗涤，干燥，称重得2.83g，收率：90.7％，熔点168-170℃。元素分析C22H24N5O4P·C4H4O4计算值(％)：C 54.83，H4.96，N 12.30，P 5.44；测定值(％)：C 55.11，H 4.79，N 12.17，P 5.24。
实施例9 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·马来酸盐(I9)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于10ml无水乙醇，加入0.3g(2.53mmol)马来酸，回流至马来酸全部溶解，再回流30min，冷却析出固体，抽滤，滤饼用5ml冷乙醇洗涤，干燥，称重1.4g，收率87.5％，熔点126-129℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：13.78(br s，1H)，8.16(d，2H)，7.65(br s，2H)，7.04-7.10(m，6H)，6.86(t，2H)，6.22(s，2H)，4.24(dd，4H)，4.04(m，6H)，1.27(m，6H)。元素分析C22H24N5O4P·C4H4O4计算值(％)：C 54.83，H 4.96，N 12.30，P 5.44；测定值(％)：C 55.06，H 5.09，N 12.18，P 5.33。
实施例10 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-酒石酸盐(I10)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于10ml无水乙醇，加入0.38g(2.53mmol)L-酒石酸，加热熔解；冷却后析出油状物，滴加0.15ml水，搅拌澄清，加热至40℃左右，搅拌，析出白色固体，干燥，称重1.27g，熔点176-180℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：8.08(d，2H)，7.13(br s，1H)，7.05-7.14(m，8H)，6.86(t，2H)，5.07(br s，1H)，4.23-4.36(m，4H)，4.03(m，6H)，2.67(dd，4H)，1.27(t，6H)。元素分析C22H24N5O4P·C4H6O6计算值(％)：C 51.74，H 5.01，N 11.60，P 5.13；测定值(％)：C 51.82，H 5.25，N 11.37，P 5.10。
实施例11 9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-苹果酸盐(I11)的制备
将1.3g(2.53mmol)I1溶于10ml无水乙醇，加入0.33g(2.53mmol)L-苹果酸，继续回流30min，冷却，析出固体，过滤干燥，得1.19g，收率73.0％，熔点139-141℃。1H-NMR(DMSO-d6)δ(ppm)：8.07(d，2H)，7.05-7.21(m，8H)，6.86(t，2H)，4.23-4.36(m，4H)，4.02(m，6H)，1.27(t，6H)。元素分析C22H24N5O4P·C4H6O5计算值(％)：C 53.15，H 5.15，N 11.92，P 5.27；测定值(％)：C 53.13，H 5.09，N 11.76，P 5.48。
实施例12 结晶型的表征
采用粉末X-射线衍射法和差示扫描量热法(DSC)对本发明的目标化合物的结晶型进行表征。
粉末X-射线衍射测试条件及方法：仪器型号：DMAX-2500；实验方法：将待测样品研细为200-300目，扫描角度范围3.0-60.0度，扫描速度为0.15度/秒计数。
差示扫描量热法测试条件及方法：仪器型号：TGA-7；实验方法：设置升温速度为10.00℃/min，升温，观测并纪录20.00℃-300.00℃温度范围内的dq/dt变化。
测试结果：
图1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤(I1)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·盐酸盐(I2)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图3为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·氢溴酸盐(I3)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图4为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌 呤·硫酸盐(I4)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图5-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·磷酸盐(I5)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图5-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·磷酸盐(I5)的DSC图谱；横坐标为温度，纵坐标为热焓。
图6-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·甲磺酸盐(I6)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图6-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·甲磺酸盐(I6)的DSC图谱；横坐标为温度，纵坐标为热焓。
图7为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·枸橼酸盐(I7)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图8-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·富马酸盐(I8)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图8-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·富马酸盐(I8)的DSC图谱；横坐标为温度，纵坐标为热焓。
图9-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·马来酸盐(I9)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图9-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·马来酸盐(I9)的DSC图谱；横坐标为温度，纵坐标为热焓。
图10-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-酒石酸盐(I10)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图10-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-酒石酸盐(I10)的DSC图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为 吸收峰的强度。
图11-1为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-苹果酸盐(I11)的粉末X衍射图谱；横坐标为2θ角，纵坐标为吸收峰的强度。
图11-2为9-[[[双-(邻乙氧基苯氧基)-膦酰基]-甲氧基]-乙基]-腺嘌呤·L-苹果酸盐(I11)的DSC图谱；横坐标为温度，纵坐标为热焓。
实施例13、稳定性试验
照高效液相色谱法(中国药典2000年版二部附录VD)测定测定样品的含量。
色谱条件与系统适用性试验：用氨基键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液(22∶78)为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为260nm。理论塔板数按阿德福韦酯计算，应不低于2000。
测定法：取待测样品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取经减压干燥至恒重的相应的对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表1：
表1 稳定性试验结果
实施例14、体内抗鸭肝病毒作用的评价
本实验选用十二月龄雌性麻鸭，体重在900克至1100克之间，经筛选确认为垂直传播感染，鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)检测呈阳性。
实验分为低、中、高三个剂量组，剂量分别为2mg/kg、5mg/kg和10 mg/kg，均为口服途径给药，每天一次，共30天。阿德福韦治疗阳性对照组剂量为10mg/kg，亦为口服途径给药，连续给药30天。此外，实验又设DHBV DNA阳性对照组和阴性对照组。
实验组和对照组的麻鸭分别在给药前、给药15天、给药30天和停药后第二周时静脉采血，进行血清DHBV DNA定量PCR检测；DHBVDNA定量方法采用外标准TaqMan实时荧光PCR法检测，由实验室标定的相对外标准作为参比，定量线性范围为1×103-1×108copies/ml。测定各实验组的DHBV DNA定量结果见表2：
表2、体内抗鸭肝病毒作用的评价结果
实施例15、生物利用度测定
采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定大鼠和猴单次口服阿德福韦酯及目标化合物后的血浆药物浓度，通过测定给药后血浆中阿德福韦(PMEA)的药代动力学参数，计算其绝对或相对生物利用度。
15.1大鼠灌胃给药的生物利用度
雄性SD大鼠，禁食16h，随机分为3组，每组3只，分别静脉注射给予PMEA的生理盐水溶液或灌胃给予阿德福韦酯及目标化合物的羧甲基纤维素钠的悬浮液，分别于给药前和给药后不同时间点从眼底静脉丛采血0.5mL，离心10min(3500r.p.m.)，分离出血浆，测定PMEA的血药浓度，将血药浓度-时间数据输入计算机，采用非室模型法计算药物动力学参数。由平均血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-∞)，经剂量校正计算大鼠口服受试药后活性PMEA的绝对生物利用度(F)。结果见表3：
表3 大鼠灌胃给药的生物利用度
15.2猕猴灌胃给药的生物利用度
雄性猕猴分别静脉注射给予PMEA的生理盐水溶液或灌胃给予阿德福韦酯及目标化合物的羧甲基纤维素钠的悬浮液，口服剂量为20mg/kg(按PMEA计算)，分别于给药前和给药后5min，15min，30min，45min，1.0h，2.0h，4.0h，6.0h，8.0h，12.0h，24h采血，离心10min(3500r.p.m.)，分离出血浆，测定给药后不同时间血浆中PMEA的药物浓度，将血药浓度-时间数据输入计算机，采用非室模型法计算药物动力学参数，由平均血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-∞)，经剂量校正计算猴口服目标化合物后PMEA的相对生物利用度(F)。结果见表4：
表4 猕猴灌胃给药的生物利用度
实施例16、小鼠亚急性毒性试验
雄性昆明种小鼠，体重22克左右，随机分组，10只/组。将受试药用0.5％羧甲基纤维素钠配成10mg/kg浓度，按30ml/kg(300mg/kg，高剂量)和10ml/kg(100mg/kg，低剂量)灌胃给药，持续观察28天，测定体重；至28天处死动物，取血，测定血液各项指标。结果见表5：
表5 小鼠亚急性毒性试验
Claims (19)
1.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与盐酸形成的结晶性状的盐C24H28N5O6P·HCl，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：4.72±0.10，10.80±0.10，12.18±0.10，13.06，14.78±0.10，19.34±0.10，23.70±0.10，25.10±0.10，28.54±0.10。
2.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与氢溴酸形成的结晶性状的盐C24H28N5O6P·HBr，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：9.78±0.10，11.32±0.10，12.72±0.10，13.76，14.70±0.10，18.24±0.10，20.80±0.10，21.24±0.10，22.06±0.10，24.64±0.10，25.62±0.10。
3.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与硫酸形成的结晶性状的盐C24H28N5O6P·H2SO4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：5.10±0.10，10.00±0.10，10.24±0.10，12.60，15.400±0.10，20.640±0.10，22.360±0.10。
4.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与磷酸形成的盐C24H28N5O6P·H3PO4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：3.66±0.10，7.35±0.10，7.97±0.10，10.01±0.10，14.74，17.02±0.10，18.42±0.10，22.27±0.10，24.53±0.10，25.83±0.10。
5.权利要求4所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在142.20±2℃。
6.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与甲磺酸形成的盐C24H28N5O6P·2CH3SO3H，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：4.34±0.10，8.06±0.10，8.74±0.10，9.62，11.92±0.10，12.56±0.10，12.90±0.10，13.72±0.10，14.98±0.10，16.02±0.10，17.34±0.10，17.56±0.10，20.86，21.82±0.10。
7.权利要求6所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在100.01±2℃。
8.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与枸橼酸形成的盐C24H28N5O6P·C6H8O7，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：11.68±0.10，12.82±0.10，13.30±0.10，14.34，19.70±0.10，23.56±0.10，25.32±0.10。
9.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与富马酸形成的盐C24H28N5O6P·C4H4O4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：5.13±0.10，10.35±0.10，20.57±0.10，25.83，31.12±0.10。
10.权利要求9所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在168.65±2℃。
11.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与马来酸形成的盐C24H28N5O6P·C4H4O4，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：3.92±0.10，7.14±0.10，8.14±0.10，10.54，11.74±0.10，15.68±0.10，17.74±0.10，19.66±0.10，24.28。
12.权利要求11所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在127.98±2℃。
13.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与L-酒石酸形成的盐C24H28N5O6P·C4H6O6，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：5.18±0.10，7.50±0.10，10.38±0.10，15.60，31.50±0.10。
14.权利要求13所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在64.84±2℃。
15.具有结晶性状的式I所示的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，
其为与L-苹果酸形成的盐C24H28N5O6P·C4H6O5，其特征在于使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的粉末X-射线衍射图谱，具有以下位置处的吸收峰：9.90±0.10，10.82±0.10，14.94±0.10，16.56，17.80±0.10，19.16±0.10，19.96±0.10，22.14±0.10，22.98，25.46±0.10。
16.权利要求15所述的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐，其特征还在于，其DSC吸热转变在140.35±2℃。
17.一种药物组合物，其包含权利要求1-16任一项的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
18.权利要求17的药物组合物，其中，每单位剂量中包含0.1mg至100mg的权利要求1-16任一项的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
19.权利要求17的药物组合物，其中，每单位剂量中包含1mg至20mg的权利要求1-16任一项的无环核苷酸类似物的非毒性药学上可接受的盐作为活性成分及制药领域中常用的药用赋形剂。
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