CN102675244B

CN102675244B - 噻嗪酰胺衍生物及其在制备神经退行性疾病防治药物的用途

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Publication number: CN102675244B
Application number: CN201110063195.0A
Authority: CN
Inventors: 李松; 肖军海; 韩丹; 王莉莉; 姜丹; 钟武; 郑志兵; 王晓奎; 谢云德; 赵国明; 李行舟
Original assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Current assignee: Institute of Pharmacology and Toxicology of AMMS
Priority date: 2011-03-16
Filing date: 2011-03-16
Publication date: 2016-03-30
Anticipated expiration: 2031-03-16
Also published as: CN102675244A

Abstract

本发明涉及式I化合物，其药物上可接受的盐和/或其溶剂化物和/或其水合物。此化合物的制备方法，含有此化合物的药物组合物及其用于制备神经退行性疾病防治药物的用途。

Description

噻嗪酰胺衍生物及其在制备神经退行性疾病防治药物的用途

发明领域

其中R1为氢，或1-4个碳原子的直链或支链烷烃，R2为1-4个碳原子的直链或支链烷烃，或被苯环取代的1-4个碳原子的直链或支链烷烃。

背景技术

神经退行性疾病是一类由神经系统进行性病变所引起的疾病，包括阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease)，帕金森氏病(Parkinson’sdisease)，亨廷顿氏病(Huntington’sdisease)及肌萎缩性侧索硬化症(ALS)缺血性或出血性脑卒中等，由于这类疾病的发生原因复杂，致病机制不很明确，目前尚没有找到有效的治疗药物。

FKBPs蛋白由于其与免疫抑制剂FK506结合而命名，是FK506产生免疫抑制作用的重要介质，其生理功能仍未完全阐明。SteinerJ.P.等人于1992年发现FKBPs(FKBP家族)在脑和外周的浓度远大于其在免疫组织中的浓度，这就让人猜想FKBPs与神经系统可能存在某种关系。Dawson等人的研究结果表明FK506能够阻断谷氨酸激活NMDA受体引起的神经兴奋性毒性，据推测这可能是抑制了Calcineurin后增加了一氧化氮合成酶(NOS)的磷酸化水平，抑制了NOS的催化活性，避免了神经元受到NO的损伤。另外研究发现与神经元的增长密切相关的蛋白——GAP43同时也是Calcineurin的底物，面神经和坐骨神经损伤的神经再生总伴有明显的GAP43的mRNA水平增加，而同时FKBPs的mRNA水平也相应提高。这些研究结果都表明FKBPs与神经生长可能存在一定的关系。最终促使人们从FKBPs的配体中找到了可促神经生长的有机小分子化合物，而FKBPs也因此被称为神经亲免素。

在这种思想的指导下，1994年，Lyons等人研究发现，免疫抑制剂FK506在体外有显著的促神经生长活性，开创了有机小分子神经生长促进剂研究的先河。虽然FKBPs家族配体促神经生长和保护的机理目前尚未完全弄清楚，但越来越多的研究表明FKBPs参与介导了这一过程。生物学上的评价表明，包括使用体外试验(鸡胚背根神经生长、PC12细胞分化以及神经细胞株氧化损伤等)和多种动物模型(大鼠外周围坐骨神经损伤模型、糖尿病鼠外周神经变性病模型、帕金森氏症动物模型、早老性痴呆症动物模型等)，一些基于FKBPs结构设计和合成的化合物具有显著的促神经生长和保护功能。这些化合物的典型代表是GuilfordPharmaceuticalsInc.的GPI1485，根据该公司将GPI1485作为治疗帕金森氏症及脑卒中的防治药已完成了II期临床研究，III期临床也正在进行之中，与此同时大量的高活性化合物也正不断涌现，使FKBPs成为神经退行性疾病防治药物的重要靶标。

中国发明专利ZL01142744.2(取代六元氮杂环类化合物及其作为神经调节剂的用途)披露了一类全新结构的具有促神经再生的FKBP配体，其中化合物4是最优化合物。但研究发现其血脑屏障通过能力较差，且由于熔点较低，常温下呈油状，不适合用于制备神经退行性疾病防治药物的用途。

发明内容

本发明的目的是寻找新结构的血脑屏障通过能力更强、可固化结晶的FKBP配体，用来促进在各种神经病变状态下的神经生长和再生，包括与神经退变有关的神经疾病，以及由各种物理损伤(如机械损伤或冲击)或疾病(如糖尿病或自身免疫获得缺陷病)引起的神经病变，从而实现对神经退行性疾病如早老性痴呆，、帕金森氏病和肌萎缩侧索硬化、脑卒中的治疗。

本发明提供具有式I结构的噻嗪酰胺衍生物，其药物上可接受的盐和/或其溶剂化物和/或其水合物。此化合物的制备方法，含有此化合物的药物组合物及其用于制备神经退行性疾病防治药物的用途。

根据本发明，本发明式(I)的化合物或其药用盐或水合物优选下面的化合物：

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸乙酯

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸丙酯

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸异丙酯

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸苯甲酯

根据本发明，本发明化合物的可药物盐为本专业领域人士可显而易见的，包括基无机或有机酸盐，其中包括但不限定于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、草酸盐、三甲乙酸盐、乙二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、苦味酸盐、葡糖酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、琥珀酸盐、双羟萘酸盐等。

根据本发明，本发明的药用组合物为本专业领域人士可显而易见的，包括有效剂量的本发明式I化合物或其可药用盐或水合物和一种或多种适宜的可药用载体。这里可药用载体包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血清蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物和羊毛脂。该药物组合物可以经本专业领域人士可显而易见的多种途径施用，包括但不限定于口服片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、透皮制剂等。

本发明另一方面涉及式I化合物或其药用盐或溶剂化物或水合物的制备方法。本发明的化合物可通过下面的反应路线制备：

根据本发明，式I化合物可以透过血脑屏障，且优于中国发明专利ZL01142744.2中的优选化合物4，从而具有更高的生物利用度。进一步讲，式I化合物为白色晶体，较中国发明专利ZL01142744.2中的优选化合物4具有更优异的可加工性能，它们是稳定的高熔点结晶性物质，其固体松散并具有较好的流动性。因此适宜于工业化大规模制备和处理，特别是需要热或产生热的药物加工过程，如研磨、加热干燥、硫化床干燥、及高温高压消毒等。更进一步说明，本发明涉及的化合物在抗小鼠不完全性全脑缺血药效评价中作用明显优于中国发明专利ZL01142744.2中的优选化合物4。

下面的实施例是本发明优选的说明性优选实施方案，对本发明不构成任何限制。

化合物熔点由RY-1型熔点仪测定，温度计未经较正。¹HNMR由ARX-400NMR仪测定。质谱由VG-ZabSpecMS仪测定。所有反应用溶剂未注明都经标准化预处理。

实施例12-羟乙基半胱氨酸

在2000ml的圆底烧瓶中加入109克(0.9mol)半胱氨酸，用1000ml蒸馏水溶解，冰浴冷却至10℃，加入24ml1M的NaOH水溶液中和至PH-7。在10℃下移取提前冷却的环氧乙烷100ml。加毕，10℃下恒温反应1小时，后升至室温再反应1.5小时。

用乙醚400ml×4萃取以除去未反应的环氧乙烷。在低于60℃的条件下蒸除体系中的水层，得黄色固体，用水∶乙醇＝85ml∶350ml重结晶，过滤，用95％的乙醇充分洗涤，得目标化合物，白色鳞片状固体，mp195-196℃，约100克，产率67.5％。¹H-NMR(400MHz，D₂O)δ：3.96131(dd，1H，J₁＝4.272Hz，J₂＝7.816Hz)，3.80680-3.77293(m，2H)，3.17887(dd，1H，J₁＝4.268Hz，J₂＝14.814Hz)，3.08224(dd，1H，J₁＝7.480Hz，J₂＝14.814Hz)，2.80103(t，2H，J＝6.036Hz)

实施例22-氯乙基半胱氨酸盐酸盐

在1000ml圆底烧瓶中加入44克2-羟乙基半胱氨酸，溶于600ml浓盐酸中，加热至外温90-95℃搅拌反应7小时。反应完毕，冰箱中冷藏静置过夜，体系中析出大量针状固体。抽滤去除溶剂，所得固体自然干燥，得灰白色固体，mp185-186℃。约40克，产率＞70％。¹H-NMR(400MHz，D₂O)δ：4.30477-4.26952(m，1H)，3.81913-3.78409(m，2H)，3.25903(dd，1H，J₁＝4.444Hz，J₂＝14.984Hz)，3.18877(dd，1H，J₁＝7.352Hz，J₂＝15.072Hz)，3.04410-3.00625(m，2H)

实施例3L-1，4-噻嗪-3-羧酸盐酸盐

取20克2-氯乙基半胱氨酸盐酸盐，溶于水中，冰浴下滴加含7.2克NaHCO₃的水溶液，加毕，充分搅拌中和，用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，Na₂SO₄干燥。

减压蒸除溶剂，加入400ml无水甲醇的室温下搅拌反应5天。减压蒸除溶剂，用甲醇：乙醚重结晶，得近白色固体约6克。m.p.＞230℃；MS(FAB)m/z：148.02；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)，δ：3.67672-3.64308(m，1H)，3.55044-3.50108(m，1H)，3.16622-3.08322(m，1H)，2.92045-2.90326(m，1H)，2.83678-2.75406(m，2H)，2.61390-2.59272(m，1H)。

实施例4L-4-对甲苯磺酰-1，4-噻嗪-3-羧酸

取13.0gL-1，4-噻嗪-3-羧酸盐酸盐悬浮于120ml二氯甲烷中，冷却至0℃，缓慢滴入30ml三乙氨，搅拌1h后，缓慢滴入120ml溶有13.5g对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，室温反应24h，过滤除去白色沉淀，滤液依次用饱和碳酸氢钠溶液、水洗，无水硫酸钠干燥，除去干燥剂，蒸馏出二氯甲烷得白色固体，用乙酸乙酯和环己烷重结晶，得白色晶体19.4g，收率93.5％，m.p.66℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-78.1°(c2.00，CH₂Cl₂)；¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)，δ：7.68268-7.66234(d，2H)，7.30642-7.26434(m，2H)，5.12406-5.10728(m，1H)，4.03322-3.99196(m，1H)，3.46642-3.40848(m，1H)，3.02301-2.99292(m，2H)，2.76875-2.73724(m，1H)，2.42688(s.3H)，2.38062(s，1H)。

实施例5(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-L-亮氨酸乙酯

将4.2克(0.14mol)(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸、3.0g(0.017mmol)L-亮氨酸乙酯盐酸酸盐、3.2g(0.014mol)DCC和1.7g(0.014mol)DMAP200ml的CH₂Cl₂中，加入6ml(0.042mol)的TEA，室温反应24小时。过滤除去固体，蒸去溶剂，以适量的乙酸乙酯溶解残留物，过滤除去不溶物，加入乙酸乙酯稀适，依次以10％NaHCO₃溶液、饱和NaCl溶液洗，无水Na₂SO₄干燥。除去干燥剂，蒸去部分乙酸乙酯，闪色谱柱分离(洗脱剂：CH₂Cl₂∶CH₃Cl＝1∶1)，得油状物4.0g。比旋光度[α]_D ^24.5＝-110.1°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：7.77237-7.74077(m，2H)，7.36382(d，2H，J＝7.988Hz)，6.74090(d，1H，J＝9.244Hz)，4.80098-4.77466(m，1H)，4.68244-4.58898(m，1H)，4.28174-4.15708(m，3H)，3.53789-3.28674(m，1H)，3.13092(d，1H，J＝13.676)，2.56954-2.42247(m，5H)，2.24620-2.20545(m，1H)，1.66352-1.53450(m，3H)，1.30702-1.26745(m，3H)，0.96159-0.91891(m，6H)；MS(EI)m/z：443.1，397.1，369.1，287.1，256.0，213.1，155.0，139.0，112.0，91.0，65.0.

实施例6(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸乙酯

按实施例5，由D-亮氨酸乙酯盐酸酸盐制得(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸乙酯。M.p.88-90℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-88.3°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.77337-7.75377(d，2H，J＝8.4HZ)，7.37582-7，264111(d，2H，J＝8.4Hz)，6.79090(d，1H，J＝8.644Hz)，4.79698-4.58466(m，2H)，4.31444-4.08398(m，3H)，3.31989-3.11674(m，2H)，2.53154-2.45847(m，5H)，2.24620-2.21545(m，1H)，1.69352-1.65150(m，3H)，1.32405-1.27266(m，3H)，0.97759-0.94891(m，6H)；MS(EI)m/z：443.4，397.2，369.2，263.1，256.1，155.0，139.2，101.1.

实施例7(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸丙酯

按实施例5，由D-亮氨酸丙酯盐酸酸盐制得(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸丙酯。M.p.92-94℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-98.1°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.76337-7.74277(d，2H，J＝8.4HZ)，7.37782-7.35712(d，2H，J＝8.4Hz)，6.76390-6.74745(d，1H，J＝8.644Hz)，4.79598-4.70066(m，2H)，4.28444-4.08098(m，3H)，3.54489-3.53274(t，1H，J＝2.6HZ)，3.14892(d，1H，J＝13.676)，2.56954-2.42247(m，5H)，2.23720-2.19945(m，1H)，1.70552-1.62350(m，5H)，0.95459-0.93291(m，9H)；MS(EI)m/z：457.3，397.2，369.3，256.2，174.0，118.1，101.1.

实施例8(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸异丙酯

按实施例5，由D-亮氨酸异丙酯盐酸酸盐制得(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸异丙酯。M.p.80-82℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-103.4°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.76237-7.74077(d，2HJ＝8.208Hz)，7.37382-7.26511(d，2H，J＝8.208Hz)，6.75090(d，1H，J＝8.944Hz)，5.40112(m.1H)，4.79298-4.25166(m，3H)，3.54989-3.53674(t，1H，J＝12.31110)，3.15292-3.11800(d，1H，J＝13.676HZ)，2.56054-2.46247(m，4H)，2.23220-2.20345(m，1H)，1.62552-1.43450(m，4H)，1.26202-1.24745(m，6H)，0.94659-0.93191(m，6H)；MS(EI)m/z：457.3，397.2，369.2，256.2，154.7，101.1.

实施例9(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸苯甲酯

按实施例5，由D-亮氨酸苯甲酯盐酸酸盐制得(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸苯甲酯。M.p.93-95℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-101.7°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.75237-7.71377(d，2H，J＝1.2HZ)，7.36382-7.26322(m，7H)，6.73090(m，1H)，5.18600-5.11600(2H，m)，4.78698-4.75466(m，2H)，4.24244-4.10298(m，1H)，3.37689-3.09274(m，2H)，2.52054-2.44547(m，5H)，2.06820-2.04745(m，1H)，1.66552-1.25450(m，3H)，0.92259-0.90691(m，6H)；MS(EI)m/z：505.6，475.1，457.6，434.7，399.0，370.8，336.7，308.3，272.4，232.6，148.8，106.5.

实施例10(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸

按实施例5，由D-亮氨酸制得(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸。M.p.85-87℃，比旋光度[α]_D ^24.5＝-92.7°(c2.00，CH₂Cl₂)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.75337-7.73377(d，2H，J＝8.4HZ)，7.36582-7.254111(d，2H，J＝8.4Hz)，6.78090(d，1H，J＝8.644Hz)，4.32444-4.09398(m，3H)，2.52154-2.44847(m，5H)，2.25620-2.22545(m，1H)，1.68352-1.44150(m，4H)，0.99759-0.96891(m，6H)；MS(FAB)m/z：414.6.

实施例11化合物血脑屏障通过能力评价

MDCK-MDR1细胞是在MDCK(犬肾上皮细胞)中转染了MDR1基因后，高表达P-gp转运体的单层细胞。该细胞由于其单层细胞的致密性以及高表达药物外排蛋白，是目前用作评价BBB通透性的模型之一。本实施例应用MDCK-MDR1细胞研究其透膜性，评价化合物透BBB的能力。

1.实验材料

Millicell插入式培养皿(聚碳酯膜，0.4μm，12mm直径，MilliPore，USA)，细胞培养板(COSTAR，USA)，细胞电阻仪(Millicell-ERS，Millipore，USA)，超净工作台(SW-CJ-IFD，苏州安泰空气技术有限公司)，二氧化碳培养箱(Sanyo，Japan)，倒置显微镜(CK，Olympus，Tokyo)，培养皿(Corning，USA)。超纯水机(Simplicity，MilliPore，USA)，荧光分光光度计(F-4500，HITACHI，Japan)，万分之一电子天平(BS110S，北京赛多利斯天平有限公司)，LC-MS(Agilent1100LC-MSD_VL，DE，USA)。

2实验方法

2.1细胞培养

取冻存的MDCK-MDR1细胞，于37℃水浴中快速解冻。复苏后的细胞加入含10％FBS的DMEM培养基中，在37℃，5％CO₂，相对湿度90％培养箱中培养，隔天更换培养基。生长1-2天细胞融合后，用0.25％胰蛋白酶-EDTA(0.2％)混合消化液，于37℃条件下消化，按一定比例传代培养，实验用的细胞代数为40-60代。

细胞达到80％融合，消化后用完全培养基将细胞悬浮，按1×10⁶个·mL^-1接种到Millicell板上。以后每2天换培养液1次，1周后每1天换液。培育5天，电阻值达到坪台(＞200Ω·cm²)，即可以用于转运实验。

2.2药物转运实验

试验前以37℃HBSS液浸泡接种有细胞的Millicell合适时间，轻微冲洗Millicell，除去细胞表面的附着物。腔面到基底面的通透性：在顶侧(AP)加入含药的HBSS液0.35mL，底侧(BL)加入空白HBSS液1.2mL。置37℃，以50r·min^-1振摇，并分别于0、30、90、120min于下层采样50μL，并补充同体积空白HBSS液。每个浓度重复3个孔，取出的样品精密加入内标溶液50μL，乙酸乙酯350μL，震荡混匀，离心12000rmp，5min，取上清300μL，挥干，50μL乙腈复溶，取10μL进样测定。基底面到腔面的通透性则将药物加入底侧(BL)，顶侧(AP)加入空白的HBSS液，以下步骤同腔面到基底面的通透性试验操作。

药物的表观通透系数(P_app)的大小反映了药物透过单层细胞的能力以及药物吸收的速度、程度。它可由下式计算：

P_{app} = \frac{ΔQ}{Δt \cdot A \cdot C_{0}}

其中，ΔQ为药物在Δt时间段内透过的量，A为细胞表面积，在本模型中即为支持膜的面积(0.6cm²)，C₀为初始浓度。P_app的单位常用厘米/小时(cm·h^-1)或厘米/秒(cm·s^-1)表示。

2.3样品检测

应用LC/MS进行检测。每个样品浓度应用其标准曲线(50nM-10000nM)进行定量。

3.实验结果

实施例12化合物神经营养活性评价

本发明化合物的神经营养活性可在多种体外生物模型上体现，如鸡胚背根神经节体外无血清培养模型.取孵育8d的鸡胚，无菌环境中，在解剖镜下暴露其脊柱及两侧神经节，用尖镊逐个摘取背根神经节，接种于铺有鼠尾胶原的培养瓶中，每瓶接种5～6个，每剂量2瓶.置37℃，5％CO₂培养箱内贴壁1h后，加入含NGF(0.15ng/mL)的无血清培养基DMEM及本发明化合物，对照组只加培养基和相同剂量的NGF.如上培养箱中培养48h后，倒置相差显微镜下观察背根神经节周围突起生长情况，依突起的长短及疏密打分：0：不长突起；1：长稀少突起；2：突起较长或较密；3：突起长且密.表1所示为各实施例化合物在不同剂量下促鸡胚背根神经节突起生长分值情况，该分值为5个神经节平均分值。

表1化合物促鸡胚背根活性评价结果

实施例13化合物在脑卒中的体内药效学评价

1.实验方案

本实施例以昆明种小鼠为实验对象，采用静脉给药及灌胃给药两种给药方式，应用小鼠双侧颈总动脉结扎合并低血压(bilateralcarotidarteryocclusionwithlowbloodpressure，BCAO-LBP)模型，通过测定小鼠神经功能学评分及脑内MDA含量，考察HD系列化合物预防给药对小鼠不完全性全脑缺血的保护作用。

2.实验方法

2.1药物配制

2.1.10.7％CMC-Na的配制：临用前一天称取0.7g(700mg)CMC-Na干粉，加入到100ml蒸馏水中，边适度加热边搅拌，待全部溶解后，放置过夜，使其充分混匀，密封装。

2.1.2灌胃给药途径药物的配制：HD化合物用0.7％CMC-Na配制成30mg/kg，超声使充分混匀，得1.5mg/ml溶液。按0.2ml/10g灌胃(i.g)给药。

2.1.310％DMSO的配制：用微量移液枪吸取1000μL的DMSO分析纯，加入9mlN.S.混匀。现用现配。

2.1.4静脉给药途径药物的配制：先用少许DMSO溶解HD化合物，几分钟后加入N.S.至所需体积并充分混匀，得1mg/ml溶液(DMSO终浓度为10％。配制HD1-2时，DMSO终浓度为12％)，现用现配。按0.1ml/10g尾静脉(i.v)给药，则小鼠给药剂量为10mg/kg。

2.2分组与给药

取已适应实验室环境一周的小鼠28只，按体重均衡分组，分别i.g给予0.7％CMC-Na或各HD化合物，1次/d，连续3d。具体组别如下：

假手术组：4只，i.g0.7％CMC-Na溶液

脑缺血模型组：12只，i.g0.7％CMC-Na溶液

给药组：12只，分别i.g各不同HD系列化合物溶液，剂量30mg/kg

2.3小鼠不完全性全脑缺血及大脑MDA含量的测定

2.3.1小鼠双侧颈总动脉结扎：末次给药1h后，将小鼠眼眶放血降压(约为小鼠总血量的30％)后，然后将其仰背位固定于手术板上，颈部正中开口，钝性剥离颈总动脉，每侧备线2根，分别结扎，当第三根线结扎完时开始计时，然后在两根线中间将颈总动脉剪断，缝合切口，假手术组只剥离颈总动脉不接扎。手术结束后迅速松开小鼠，观察并记录6h小鼠的行为状态(盲法按下表打分)和死亡时间，小鼠死亡后迅速取脑，去除小脑，TBA法测其大脑全脑的MDA含量，6h还没死亡的小鼠处死取脑。

2.3.2神经功能评分：评分标准见表2

表2神经行为评价表

2.3.3小鼠脑MDA含量测定：

取小鼠大脑，称重，用N.S制成15％脑匀浆，取1.2ml于37℃水浴1h(每10min震荡一次)后取出，加20％三氯乙酸0.6ml，混匀，放置10min，2000r离心10min，取上清液1.2ml，加0.67％TBA0.6ml沸水浴10min，取出冷却，于532nm处测OD值。

3.统计分析

实验数据以表示，应用SPSS13.0统计学软件，通过单因素方差分析Homogeneityofvariancetest判断方差是否齐性，方差齐性采用LSD检验，方差非齐性采用Dunnett’sT3检验，比较各组间显著性差异，P＜0.05有统计学意义。结果如表3

表3化合物在BCAO-LBP小鼠上MDA含量及神经行为得分评价结果

＊p＜0.05，与假手术组比较；＊＊p＜0.01，与假手术组比较；#p＜0.05，与脑缺血模型组比较；##p＜0.01，与脑缺血模型组比较；###p＜0.001，在SPSS13.0软件上采用ANOVA和LSD分析，与脑缺血模型组比较。

Claims

1.式I结构的噻嗪酰胺衍生物，或其可药用盐，

其中R1为1-4个碳原子的直链或支链烷烃，R2为1-4个碳原子的直链或支链烷烃。

2.噻嗪酰胺衍生物或其可药用盐，其选自下面的化合物：

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸；

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸乙酯；

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸丙酯；

(3R)-4-[(4-甲基苯磺酰基)]-1，4-噻嗪-3-羧酸-D-亮氨酸异丙酯。

3.药物组合物，其中至少包括一种权利要求1-2任一项所述的噻嗪酰胺衍生物或其可药用盐以及一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。

4.权利要求1-2任一项所述的噻嗪酰胺衍生物或其可药用盐用于制备预防和/或治疗由于生理或物理损伤或进行性病变所致神经退行性疾病的药物中的用途。

5.权利要求4的用途，所述的疾病选自阿尔兹海默、帕金森氏症、享廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化，获得性免疫缺陷相关的神经病变，脑脊髓多发性硬化，中风或物理刺激相关的脑损伤。