CN102482243A - 一种(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β,20-环氧-1,7β,10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂 - Google Patents

一种(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β,20-环氧-1,7β,10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂、制备方法及其在制备药用纯度的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯中的应用。

Description

一种(2R,3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β,20-环氧-1,7β,10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂
技术领域
本发明涉及一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的新型溶剂及其制备方法。本发明还涉及该新型溶剂在制备药用纯度的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯中的应用。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯是一种抗肿瘤药物，在国际通用名(INN)中称为多烯紫杉醇，其分子结构式见下图：
Figure BPA00001498293800011
背景技术
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的现有制备方法为：利用(2R，3S)-3-苯基异丝氨酸前体对受选择性保护的10-脱乙酰基巴卡丁III进行酯化反应，然后去除酯化产物在C7、C10和C2’位置的羟基保护功能。目前有多种方法可以实现这一目标。
专利文件EP253728B1公开了其中一种方法，受保护的10-脱乙酰基巴卡丁III在与肉桂酸或肉桂酰氯反应过程中被酯化，然后所得中间产物与N-叔丁基氯代氨基甲酸钠盐反应，同时可以选择性地去除羟基保护基。
在酯化过程中其他已知的侧链前体有：3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸的线性衍生物(见EP 336841B1，WO 93/16059，WO 94/07876，WO 97/34866)或其环状衍生物，噁唑烷衍生物(见WO 92/09589，WO 94/07877，WO 94/07878，WO 94/07879，WO94/10169，EP 735036B1，WO 97/24345，WO 97/42167，US 5,907,042，WO 02/12216)，β-内酰胺(见EP 617018B1，WO 94/21623，US 5,466,834，WO 2004/033442，WO2006/135692)，噁嗪酮衍生物(US 5,254,703)，氮丙啶(WO 2005/082875)。
在10-脱乙酰基巴卡丁III的C7和C10位置，以及在侧链C2’位置可以实现羟基的保护。现有技术中常见的保护基，如：芳基、甲氧基甲基、苄氧甲基、三烷基甲硅烷基、(β-三甲硅烷基乙氧)甲基、四氢吡喃基、2，2，2-三氯乙氧基、1-乙氧基、苄氧羰基、氯乙酰基、咪唑羰基、苯基、2，2，2-三氯乙基、2-(2-三氯甲基丙基)、2，4-二硝基苯基磺酰等。在酸性或基本条件下借助锌(为去除三氯乙氧基)或催化氢解(存在苄氧羰基时)去除保护基。
在位阻作用影响下，C13-OH基在10-脱乙酰基巴卡丁III中反应性低，酯化反应通常在高温下长时间进行，且额外消耗大量酰化剂，导致生成产物较少。此外，C2’-OH羟基在苯基异丝氨酸残余物中产生差向异构化反应，形成多种降解产物，该降解产物很难从反应产物中去除。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的三水合物是剋癌易注射剂中的活性药物成分。三水多烯紫杉醇的晶体结构和X射线粉末衍射谱在J.Phys.IVFrance 11(2001)Pr10-221中有所论述。通过检验(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的三水合物的脱水过程，证实了多烯紫杉醇的晶化半水化合物的存在，在X射线粉末衍射中也得到进一步证实。
专利文件WO 96/01815公开了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的三水合物，该三水化合物通过水和脂肪醇(如水和乙醇)混合液在有或无抗坏血酸参与条件下通过晶化作用制备而得。进一步的研究在材料科学论坛，第443-444卷(2004)，第411-0页中有所论述，并展示了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯三水合物的两种多晶形态的晶体结构，即形态A和形态B。
由于天然的10-脱乙酰基巴卡丁III资源有限，因此多烯紫杉醇显得尤为珍贵，现有的多烯紫杉醇提纯方法费时费力，因此提纯不完全。
专利文件EP 0253738B1描述了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的提纯方法，该方法利用二氯甲烷和甲醇的混合物(比例为97∶3)作为洗脱剂进行薄层液相层析。
专利文件EP 0336841B1描述了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的制备方法，该方法利用己烷/乙酸乙酯的混合物(比例为1∶1)作为洗脱剂在Geduran硅胶上进行层析，所得产物纯度达90％。
根据专利文件WO 93/06079所述，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯在填充硅胶的色谱柱上进行提纯，所得产物纯度达95％。
在专利文件WO 94/21622中，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯通过离心分配色谱法进行提纯，所得产物纯度达99.7％，理论产量达80.5％。
在专利文件WO 96/01815中，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的三水合物由水和乙醇的混合液(原材料纯度为92.4％)晶化制得，该三水合物的纯度达98.7％。
根据专利文件US 6,881,852B2的描述，对初始纯度为70％的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯进行提纯分四步进行：首先在甲醇与水的混合液中精制，其次在丙酮与己烷的混合物中晶化，再在甲醇与水的混合液中晶化，最后在丙酮与己烷混合物中晶化。利用所述方法所得产物的最终纯度达99.65％，总产量达42％。
专利文件US 6,838,569B1介绍了类似的提纯步骤。具体包括：首先在二氯甲烷与己烷的混合液中精制，其次在丙酮与己烷的混合液中二重结晶，最后在乙腈与水的混合液中结晶。通过上述步骤所得三水多烯紫杉醇的纯度达99.59％，总产量达39％。
专利文件US 6,900,342B1论述了一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的提纯方法，该方法利用乙酸乙酯和乙烷(比例为6∶4)作为洗脱剂，通过在硅胶60上使用柱状色谱分离法进行提纯。
根据专利文件WO 2006/037653的描述，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯粗产品先在乙醇与水的混合液中结晶分离，再通过两次结晶纯化。第一次是在乙醇和水的混合液中结晶，第二次是在丙酮和庚烷的混合液中结晶。上述步骤所得的产物纯度达99.4％，产量达83％。
专利文件WO 2006/004896披露了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯粗产品的提纯方法。该方法利用溶剂体系二氯甲烷-乙酸乙酯或丙酮作为洗脱剂，通过柱状色谱分离法进行提纯。
专利文件WO 2007/109654公开了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的两种提纯方法，第一种方法利用乙酸乙酯和正庚烷混合液(比例为4∶1和1∶1)作为洗脱剂，通过在硅胶上借助柱状色谱分离法进行提纯，第二种方法是在丙酮中提纯，所得产物纯度达99％以上，产量达67％。
根据专利文件WO 2008/051465所述，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的提纯方法包括：通过Celite
Figure BPA00001498293800041
、活性炭和活性酸性有害物在乙酸乙酯中过滤上述溶液，然后利用二氯甲烷进行柱状色谱分离。
根据专利文件US 20080200699所述，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯粗产品利用二氯甲烷和甲醇(比例为95∶5)作为洗脱剂通过色谱分离法进行提纯。
专利文件US 7,332,617B2介绍了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的三水合物制备方法，该方法包括：将初始色谱纯度高于99.5％的无水多烯紫杉醇溶解于丙酮中，浓缩反应混合液，将所得的油性物质反复溶解于丙酮中，最后在水与丙酮的混合液进行晶化。
上述(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的所有提纯方法或者是色谱法，或者包括多重提炼或晶化，而色谱法则需要使用大量溶剂，这样不仅延长了提纯过程而且增加了成本。即使上述方法更简单且不需要使用大量溶剂，但所得产物总产量低。
根据人用药品注册技术要求国际协调会(ICH)制定的标准，活性药物成分必须符合相应的纯度要求，即所谓的药物纯度。因此，开发出一种有效的高药物纯度多烯紫杉醇制备方法仍然是一个非常重要的问题。
发明内容
为克服上述制备药用纯度(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯过程的缺陷，可以在制备过程中增加粗产品的提纯环节，所述粗产品是从反应后混合液离析而得的无水或水合形式(例如三水合物)。所述提纯步骤包括：将粗产品转化成含C2-3-甲酸烷基酯的晶体溶剂。
本发明下文提及的“药用纯度”的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯皆指无水形式或水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯，如：任何形态的三水合物，其中单一未知杂质含量低于0.1％或总体未知杂质含量低于0.4％。
一方面，本发明提供一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯以及C2-3-甲酸烷基酯的新型溶剂。
本发明提供的新型溶剂是一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯与甲酸乙酯、甲酸丙酯或甲酸异丙酯的混合物。
本发明将合成粗产品转化成含C2-3-甲酸烷基酯的晶体溶剂使药用纯度(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的制备过程变得更为简单经济。单结晶或双结晶反应使获得的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂产量增加(高于90％)，色谱纯度(高效液相色谱法)高于99％，同时无需使用色谱提纯法以及多重提炼或多重结晶。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的起始粗材料可以是任何形式、任何纯度，如：不高于95-98％的纯度。
另一方面，本发明提供了一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂制备方法，包括：将无水形式或水合物形式，特别是三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯在二氯甲烷和C2-3-甲酸烷基酯混合液中进行晶化，然后干燥所得溶剂，再去除游离溶剂得到所需产物。
再一方面，本发明提供了一种无水形式或水合物形式，特别是三水合物形式的药用纯度的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的制备方法，包括：首先将(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯转化成含C2-3-甲酸烷基酯的晶体溶剂，然后利用去溶剂化法进行处理。
附图说明
图1是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂热重量分析(TGA)图。
图2是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂热重量分析(TGA)图。
图3是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂热重量分析(TGA)图。
图4是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂差示扫描量热法(DSC)热谱图。
图5是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂差示扫描量热法(DSC)热谱图。
图6是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂差示扫描量热法(DSC)热谱图。
图7是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)图。
图8是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)图。
图9是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)图。
图10是根据本发明实施例1得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图11是根据本发明实施例2得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图12是根据本发明实施例3得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图13是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂单晶显微镜成像图(利用明治MX4310H光学显微镜)。
图14是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂晶体结构图。
图15是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂单晶X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图16是本发明根据单晶X射线衍射技术得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂，再借助计算机模拟的X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图17是本发明分别根据单晶X射线衍射技术(下线)及单晶X射线衍射技术(上线)得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂，再借助计算机模拟所得的X射线粉末衍射谱(XRPD)及借助实验所得的X射线粉末衍射谱(XRPD)，2θ范围为3-30°。
图18是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂氢键：
a)氢键HO-2’-C＝O(HCOOEt)-HO-7-HO-10和C9＝O；
b)氢键C＝O(Ac-4)-HO-1。
图19是本发明根据单晶X射线衍射技术得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂晶体结构图。
图20是本发明根据单晶X射线衍射技术得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂，再借助计算机模拟所得的X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图21是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂氢键：
a)氢键C＝O(HCOOPr)-HO-7-HO-10和C9＝O；
b)氢键C＝O(Ac-4)-HO-1。
图22是本发明根据单晶X射线衍射技术得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂晶体结构图。
图23是本发明根据单晶X射线衍射技术得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂，再借助计算机模拟所得的X射线粉末衍射谱(XRPD)。
图24是本发明(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂氢键：
a)氢键C＝O(HCOOiPr)-HO-7-HO-10和C9＝O；
b)氢键C＝O(Ac-4)-HO-1。
具体实施方式
本发明提供的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂制备过程包括：
a)将(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶解于二氯甲烷；
b)蒸发二氯甲烷；
c)加入C2-3-甲酸烷基酯；
d)向晶化混合液加入溶剂晶体作为其晶种(可选)；
e)将晶化混合液静置形成溶剂晶体，搅拌或不搅拌均可；
f)将形成的晶体离析；
g)用C2-3-甲酸烷基酯冲洗晶体；
h)将晶体干燥使其达到恒重。
本发明的制备过程优选采用以下步骤：
原材料采用合成粗产物(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯，可以先进行预提纯，使其化学纯度达到约90-95％(用高效液相色谱法测定)。(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯粗产品可以是无水形式或水合物形式，特别是三水合物形式。
优选在室温下将原材料溶解于过量二氯甲烷中。根据本发明优选实施方式，上述溶解过程可以采用肖特漏斗，可以同时过滤固体杂质，或者在溶解完成后过滤。溶解每公斤原材料所需的二氯甲烷使用量应达到22升。
去除不溶性杂质后，蒸馏二氯甲烷。通常，蒸馏二氯甲烷应在减压后进行，水浴温度约40℃，反应混合液的内部温度为25±5℃。持续蒸馏直至(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的浓度高于120g/L。
然后，将反应混合液C2-3-甲酸烷基酯加入880毫升/公斤的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯中，持续清除溶剂直至浓度高于160g/L。
根据本发明优选实施方式，加入C2-3-甲酸烷基酯的同时去除二氯甲烷。
在室温下(热浴器去除后)持续搅拌反应混合液直至溶剂晶体开始形成。还可向晶化混合液加入溶剂晶体作为其晶种(可选)。通常晶体在一小时内形成。然后，静置晶化混合液使其进一步晶化，搅拌或不搅拌均可。溶剂晶体形成后，冷却晶化混合液至0-3℃，静置，不可搅拌。
用冷却至5℃以下的C2-3-甲酸烷基酯过滤、冲洗所形成的晶体，优选为三次。
然后，干燥(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基溶剂的晶体，优选在室温下风干一小时，直至达到恒重。
所得的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基的溶剂的结构应用热重量分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、氢核磁共振光谱学(1H NMR)、傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、X射线粉末衍射谱(XRPD)和X射线单晶研究等方法确认。
溶剂特性
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂
如图1所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂热重量分析曲线表明在30-180℃温度范围内，特别在80-174℃温度范围内约有8.903％的重量损失，减去0.206％的重量后，即相当于根据卡尔·费歇尔滴定法测得的游离水重量，实际重量损失相当于在初始样品重量为8.697％溶剂中的甲酸乙酯含量，甲酸乙酯在单体溶剂中的理论含量为8.40％。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂核磁共振光谱符合溶剂的化学计量配比。
如图4所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂差示扫描量热法热谱图表明无化合水出现。此外，未观察到与水合物分解对应的峰值。
如图7所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)在以下波段具有特色峰：974，1049，1068，1115，1157，1171，1225，1242和1267cm-1。在波段1713，3379，3435和3501cm-1也具有特色峰。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂，其特征在于其X射线粉末衍射谱(XRPD)在2θ值等于4.5°；7.1°；8.8°；11.2°；14.1°；17.4°和18.5°±0.2°时有峰值，进一步地，在2θ值等于12.2°；13.6°；14.6°；15.4°；16.7°；20.5°；22.0°和24.4±0.2°时有额外峰值。
将波长λ＝1.54056A的CuKa1辐射源基于2θ的相对强度(1/I0)得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂，其X射线粉末衍射谱与图10大致相似。
表1列举了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂X射线粉末衍射谱的2θ值、晶面间距d和相对强度1/I0(相对强度大于10％)。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂晶体结构(见图14)由单晶X射线衍射数据决定。分析证明在晶体点阵中同时存在(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯。晶体点阵中的晶胞类型和参数值由单晶X射线衍射确定，并由此表明溶剂晶体属于空间群P2(1)。(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂在单斜晶系中结晶。鉴于计算所得的密度d等于1.295，元素晶胞Z中的分子数量等于2。表2通过列出晶胞参数显示了晶体形式的全部特征。
Figure BPA00001498293800121
利用波长λ＝1.541874A的CuKa1辐射源作为2θ值，晶面间距d用于表示相对强度(1/I0)峰值高于10％，图15和表3显示了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂单晶X射线粉末衍射谱。
单晶体的实验X射线粉末衍射谱与根据单晶X射线衍射数据(见图16)确定的计算机模拟图类似。当2θ值在3-30度(见图17)范围内时，根据单晶X射线衍射研究确定的理论(模拟)X射线粉末衍射谱与实验X射线粉末衍射谱完全重叠，这符合(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯溶剂的相组成的同质性。根据(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂单晶X射线研究，命名了晶体中的各种氢键。所述氢键位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂基团之间，如：HO-2’-C＝O(HCOOEt)-HO-7-HO-10和C9＝O，同时位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的基团之间，如：C＝O(Ac-4)-HO-1。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂
如图2所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂热重量分析曲线表明在30-180℃温度范围内，特别在55-175℃温度范围内约有9.622％的重量损失，减去0.181％的重量后，即相当于根据卡尔·费歇尔滴定法测得的游离水重量，实际重量损失相当于在初始样品重量为9.441％溶剂中的甲酸丙酯含量，甲酸丙酯在单体溶剂中的理论含量为9.834％。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂氢核磁共振光谱符合溶剂的化学计量配比。
如图5所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂差示扫描量热法热谱图表明无化合水出现。
如图8所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)在以下波段具有特色峰：974，1049，1068，1115，1157，1171，1225，1242和1267cm-1。在波段713，3383，3439和3495cm-1也具有特色峰。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂，其特征在于其X射线粉末衍射谱(XRPD)在2θ值等于4.5；7.1；8.8；11.1；14.1；15.4；17.4；18.5；和20.4±0.2°时有峰值，进一步地，在2θ值等于12.1；12.4；12.8；13.5；14.6；16.7；18.9；21.6；22.0；22.3；22.4；23.5；23.8；24.3；24.8；25.6；26.3和27.1±0.2°时有额外峰值。
将波长λ＝1.54056A的CuKa1辐射源用于基于2θ的相对强度(1/I0)得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂，其X射线粉末衍射谱与图11大致相似。
表4列举了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂X射线粉末衍射谱的2θ值、晶面间距d和相对强度1/I0(相对强度大于15％)。
Figure BPA00001498293800141
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂晶体结构(见图19)由单晶X射线衍射数据决定。分析证明在晶体点阵中同时存在(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂。晶体点阵中的晶胞类型和参数值由单晶X射线衍射决定，并确定溶剂晶体属于间隔基P2(1)。(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂在单斜晶系中结晶。鉴于计算所得的密度d等于1.305，晶胞Z中的分子数量等于2。表5通过列举晶胞参数显示了晶体形式的全部特性。
Figure BPA00001498293800161
单晶体的实验X射线粉末衍射谱(见图11)与根据单晶X射线衍射数据(见图20)确定的计算机模拟图类似。根据(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂单晶X射线衍射研究，命名了晶体中的各种氢键。所述氢键位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂基团之间，如：C＝O(HCOOPr)-HO-7-HO-10和C9＝O，同时位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的基团之间，如：C＝0(Ac-4)-HO-1。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂
如图3所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂热重量分析曲线表明在30-180℃温度范围内，特别在45-175℃温度范围内约有10.178％的重量损失，减去0.181％的重量后，即相当于根据卡尔·费歇尔滴定法测得的游离水重量，实际重量损失相当于在初始样品重量为9.997％溶剂中的甲酸异丙酯含量，甲酸异丙酯在单体溶剂中的理论含量为9.834％。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂氢核磁共振光谱符合溶剂的化学计量配比。
如图6所示，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂差示扫描量热法热谱图表明无化合水出现。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂红外光谱(Nujol法)在以下波段具有特色峰：972，1047，1068，1115，1157，1171，1225，1240和1265cm-1。在波段1711，3375，3452和3491cm-1也具有特色峰。
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂，其特征在于其X射线粉末衍射谱(XRPD)在2θ值等于4.6°；7.2°；9.0°；11.2°；14.1°；15.4°；17.4°；18.5°和20.5±0.2°时有峰值，进一步地，在2θ值等于12.2°；12.5°；13.5°；14.6°；16.7°；17.7°；20.8°；21.6°；22.1°；22.4°；24.3°和26.3±0.2°时有额外峰值。
利用波长λ＝1.54056A的CuKa1辐射源根据相对强度(1/I0)和衍射角2θ得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂，其X射线粉末衍射谱与图12大致相似。
表6列举了(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂X射线粉末衍射谱的2θ值、晶面间距d和相对强度1/I0(相对强度大于10％)。
Figure BPA00001498293800171
Figure BPA00001498293800181
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂晶体结构(见图22)由单晶X射线衍射数据决定。分析证明在晶体点阵中同时存在(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂。晶体点阵中的晶胞类型和参数值由单晶X射线衍射决定，并确定溶剂晶体属于间隔基P2(1)。(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂在单斜晶系中结晶。鉴于计算所得的密度d等于1.305，晶胞Z中的分子数量等于2。表7通过列举晶胞参数显示了晶体形式的全部特征。
Figure BPA00001498293800182
单晶体的实验X射线粉末衍射谱(见图12)与根据单晶X射线衍射数据(见图23)确定的计算机模拟图类似。根据(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂单晶X射线衍射研究，命名了晶体中的各种氢键(见图24)。所述氢键位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂基团之间，如：C＝O(HCOOPr)-HO-7-HO-10和C9＝O，同时位于(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的基团之间，如：C＝O(Ac-4)-HO-1。
根据本发明得到的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的晶化溶剂，其色谱纯度(用高效液相色谱法测定)高于99％。
所述(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的晶化溶剂无需进一步提纯即可用于制备无水形式或水合物形式，特别是三水合物形式的药用纯度(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯。
本发明药用纯度(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的制备过程包括：
a)用C2-3-甲酸烷基酯将(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯转化成其晶体溶剂；
b)将步骤a)得到的晶体溶剂进行去溶剂化；
c)将无水或水合的，如优选为三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯进行离析。
根据本发明优选实施方式，步骤b)中的去溶剂化过程可以利用已知的晶化方式通过晶化(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂而实现，如在溶剂或溶剂混合液中晶化。如：专利文件US 6,881,852公开的在丙酮和己烷中晶化，专利文件WO 96/01815描述的在乙醇和水中晶化，专利文件US 6,838,569公开的在乙腈和水中晶化。晶化后得到无水形式或水合物形式，特别是三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯。
下面通过具体实施例对本发明作进一步详细的描述。
实施例
分析法：
差示扫描量热法的热力曲线可以使用样品加热速率等于5K/分钟的TA InstrumentsDSC2920仪器在铝坩埚中获得。
热解重量的测量可以使用样品加热速率等于5K/分钟的TA Instruments TGA4950仪器在铂金锅中进行。
结构的X射线测量可以使用带有MoKa辐射的Brucker Smart Apex 2衍射仪。
X射线粉末衍射谱可以在室温下使用Seifert HZG-4X射线粉末衍射仪，CuKaI辐射源，波长λ＝1.54056A，2θ范围从4°至45°，步长为0.04°，扫描速度为5s。
单晶X射线粉末衍射谱的测量可以在室温下使用PANanalytical X’Pert PRO MPD仪器，CuKa辐射源，波长λ＝1.541874，2θ范围从4°至60°，步长为0.0167°，扫描速度为25s。
所得的衍射图可以使用西门子生产的EV A3.11X射线分析仪，帕纳科生产的X’pert数据据采集器和X’pert Histore Plus进行分析。
红外光谱在岛津FTIR-8400S光谱仪的Nujol上有记录，范围4000-500cm-1，32次扫描，分辨率4.0cm-1。
实施例1(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂制备方法
将9.673g(11.25mmol)三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯置于肖特漏斗中，同时将其溶于210mL二氯甲烷并过滤至烧瓶中。用旋转式蒸发器持续蒸发浓缩所得溶液，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯三水合物中的水分和二氯甲烷经共沸蒸馏，混合液在水浴温度为38℃时浓缩至80mL，然后继续蒸发二氯甲烷，同时加入等量的甲酸乙酯，待加入85mL甲酸乙酯后，晶化混合液被浓缩至60mL，待混合液温度逐渐降低至室温时，搅拌混合液1小时。将晶化混合液置于冷柜中，在0-3℃下放置一夜。然后用肖特漏斗过滤形成的晶体，用12mL冷甲酸乙酯(约-15℃)冲洗两次，在室温下，在肖特漏斗上风干晶体1小时直至其达到恒重。最终(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶剂的成品为9.006g(10.22mmol，91％)。其溶剂结构经以下方式确定：
红外光谱(Nujol法)：974，1049，1068，1115，1157，1171，1225，1242和1267cm-1。光谱在1713，3379，3435和3501cm-1有特色峰。
氢核磁共振光谱学(500MHz，DMSO-d6，δin ppm)：0.96(s，3H1 H-16)；0.99(s，3H，H-17)；1.19(t，3H，HCOOCH2CH3)；1.34(s，9H，t-Bu)；1.50(s，3H，H-19)；1.61-1.69(m，2H，H-14和H-6β)；1.72(s，3H，H-18)；1.84-1.89(m，1H，H-14)；2.20(s，3H，Ac-4)；2.22-2.28(m，1H，H-6α)；3.64(d，1H，H-3)；3.97-4.05(m，3H，H-7和H-20)；4.12(q，2H，HCOOCH2CH3)；4.31(t，1H，H-2’)；4.51(s，1H，HO-10)；4.84-4.90(m，2H，H-5和H-3’)；4.98(d，1H，HO-1)；5.03(d，1H，HO-7)；5.07(s，1H，H-10)；5.39(d，1H，H-2)；5.83(t，1H，H-13)；5.90(d，1H，HO-2’)；7.18(t，1H，Ph)；7.28(d，2H，Ph)；7.36(t，2H，Ph)；7.47(d，1H，NH)，7.61(t，2H，Bz)，7.70(t，1H，Bz)，7.95(d，2H，Bz)，8.18(s，1H，HCOOCH2CH3)。
实施例2(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂制备方法
将479mg(594μmol)的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶解于5mL二氯甲烷。用旋转式蒸发器，在水浴温度为40℃时浓缩所得溶液至2mL，然后加入4mL甲酸丙酯，蒸发所得溶剂直至剩余溶液为3mL，用旋转式蒸发器搅拌混合液直至其达到室温，然后在2℃条件下静置混合液12小时。用肖特漏斗过滤形成的晶体，用1mL冷甲酸丙酯(低于0℃)冲洗。在室温下风干晶体1小时，最终(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的晶化溶剂成品为430g(489μmol，81％)。其溶剂结构经以下方式确定：
红外光谱(Nujol法)：974，1049，1068，1115，1157，1171，1225，1242和1267cm-1。光谱在1713，3383，3439和3495cm-1有特色峰。
氢核磁共振光谱学(500MHz，DMSOd6，δin ppm)：0.88(t，3H，HCOOCH2CH2CH2)；0.97(s，3H，H-16)；0.99(S，3H，H-17)；1.34(s，9H，t-Bu)；1.50(s，3H，H-19)；1.59(sep，2H，HCOOCH7CH2CH.，)；1.62-1.69(m，2H，H-14和H-6β)；1.72(s，3H，H-18)；1.85-1.90(m，1H，H-14)；2.20(s，3H，Ac-4)；2.22-2.28(m，1H，H-6α)；3.4(d，1H，H-3)；3.97-4.05(m，3H，H-7，H-20和HCOOCH2CH2CH3)；4.31(t，1H，H-2’)；4.51(s，1H，HO-10)；4.84-4.90(m，2H1 H-5和H-3’)；4.96(d，1H，HO-1)；5.02(d，1H，HO-7)；5.08(s，1H，H-10)；5.39(d，1H，H-2)；5.84(t，1H，H-13)；5.88(d，1H，HO-2’)；7.18(t，1H，Ph)；7.28(d，2H，Ph)；7.36(t，2H，Ph)；7.44(d，1H，NH)，7.61(t，2H1 Bz)，7.70(t，1H，Bz)，7.96(d，2H，Bz)，8.21(s，1H，HCOOCH2CH2CH3)。
实施例3(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂制备方法
将320mg(397μmol)的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶于3mL二氯甲烷。用旋转式蒸发器，在水浴温度为40℃时浓缩所得溶液至约1mL，然后加入2mL甲酸异丙酯，蒸发所得溶剂直至剩余溶液为2mL，加入1mL甲酸异丙酯，蒸发所得溶剂直至剩余溶液为2mL。用旋转式蒸发器搅拌混合液直至其达到室温，静置混合液4小时使其温度降至2℃。然后用肖特漏斗过滤形成的晶体，在室温下风干晶体1小时，最终(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的晶化溶剂成品为351.5mg(393μmol，99％)。其溶剂结构经以下方式确定：
红外光谱(Nujol法)：972，1047，1068，1115，1157，1171，1225，1240和1265cm-1。光谱在1711，3375，3452和3491cm-1有特色峰。
氢核磁共振光谱学(500MHz，DMSO-d6，δ in ppm)：0.97(s，3H，H-16)；0.99(s，3H，H-17)；1.20(d，6H，HCOOCH(ChU)2)；1.34(s，9H，t-Bu)；1.50(s，3H，H-19)；1.61-1.69(m，2H，H-14和H-6β)；1.72(s，3H，H-18)；1.85-1.90(m，1H，H-14)；2.20(s，3H1Ac-4)；2.24-2.28(m，1H，H-6α)；3.64(d，1H，H-3)；3.98-4.06(m，3H，H-7和H-20)；4.31(t，1H，H-2’)；4.51(s，1H，HO-10)；4.84-4.90(m，2H，H-5和H-3’)；4.97(m，1H，HCOOCH(CH3)2)；4.98(d，1H1 HO-1)；5.03(d，1H1 HO-7)；5.08(s，1H，H-10)；5.39(d，1H，H-2)；5.84(t，1H1 H-13)；5.90(d，1H，HO-2’)；7.18(t，1H，Ph)；7.28(d，2H，Ph)；7.36(t，2H1 Ph)；7.47(d，1H1 NH)；7.61(t，2H1 Bz)；7.70(t，1H1 Bz)；7.96(d.2H1 Bz)；8.15(s，1H，HCOOCH(CH3)2)。
实施例4(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂单晶生长
将1135μmol(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶解于10mL二氯甲烷，用旋转式蒸发器，在水浴温度为38℃时浓缩所得溶液至约3mL。然后用注射器式聚四氟乙烯过滤器(0.45μm)过滤所得溶液至直径为120mm的晶化盘中。向所得溶液中加入45mL甲酸乙酯，在水浴温度38℃条件下加热。然后在室温下将混合液放置一夜，使其缓慢晶化并覆盖晶化盘，晶化盘应部分用铝箔覆盖，以便溶剂缓慢蒸发。隔天将溶液缓慢倒出，并风干形成的晶体。最终(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂成品为680mg(772μmol，68％)。
实施例5(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯的溶剂单晶生长
将568μmol(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶解于5mL二氯甲烷，蒸发浓缩所得溶液至2.5mL，然后加入2.5mL二氯甲烷，并再次蒸发浓缩所述溶液至约2.5mL。将所得溶液置入直径为99mm的晶化盘中，加入22.5mL甲酸丙酯。在室温下静置所得混合液四天，使其缓慢晶化并覆盖晶化盘，晶化盘应部分用铝箔覆盖，以便溶剂缓慢蒸发。四天后，将溶液缓慢倒出，并风干形成的晶体。
实施例6(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯的溶剂单晶生长
将159μmol(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶于1mL二氯甲烷，蒸发浓缩所得溶液至0.5mL，然后加入1mL二氯甲烷，并再次蒸发浓缩所述溶液至1mL。然后用注射器式聚四氟乙烯过滤器(0.45μm)过滤所得溶液至直径为40mm的晶化盘中，加入2.5mL甲酸异丙酯，在室温下静置所得混合液四天，使其缓慢晶化并覆盖晶化盘，晶化盘应部分用铝箔覆盖，以便溶剂缓慢蒸发。四天后，将溶液缓慢倒出，并风干形成的晶体。
实施例7(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯借助甲酸乙酯溶剂的提纯过程
在粗反应混合液中，(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯中包括锌、四氢呋喃、乙酸和其他固体杂质，在去除保护基后，利用以下常用方法离析所得产物：过滤去除固体杂质，浓缩滤出液，用二氯甲烷和水进行提取，干燥所得有机提取物并加以浓缩。所得半成品的高效液相层析纯度为93.91％，单一已知杂质含量不高于0.83％，单一未知杂质不高于0.60％。利用专利文件WO 96/01815所述的方式在乙醇与水的混合液中将所得半成品进行晶化。所得最终产物的高效液相层析纯度为96.86％，单一已知杂质含量不高于0.85％，单一未知杂质不多于0.23％(Waters SunFire色谱柱3.5μm；高效液相色谱柱分析15x4.6mm)。根据实施例1所述的制备方法，利用二氯甲烷和甲酸乙酯将所得的500mg(580μmol)三水合物形式产物进行晶化后，最终得到435mg(493μmol，85％)(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯的溶剂，其高效液相层析纯度为99.18％，已知杂质(7-pT-DOC)含量不多于0.21％，未知杂质(Unlmp.RT41)含量不多于0.06％。
Figure BPA00001498293800251
(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯，其中：1代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β，13α-四羟基-9-氧-紫杉-11-烯(7-epi-DAB-MI)。
2代表4-乙酰氧基-2α-[(1E)-1-甲基-丙醇-1-烯酰基]氧-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(Imp.A)。
3代表(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯(DOC)。
4代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β-三羟基-9，10-氧-紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(10-oxo-DOC)。
5代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7α，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(7-epi-DOC)。
6代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7α-二羟基-9，10-二氧--紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(7-epi-10-oxo-DOC)。
7代表未知杂质RT 41(Unlmp.RT 41)。
8代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β-二羟基-9-氧-10β-(2，2-二氯乙氧基)羰基-紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(10-pT-DOC)。
9代表4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，10β-二羟基-9-氧-7β-(2，2-二氯乙氧基)羰基-紫杉-11-烯-13α-酯(2R，3S)-N-叔丁氧羰基-3-苯基异丝氨酸(7-pT-DOC)。

Claims (15)

1.一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂。
2.如权利要求1所述的溶剂，其特征在于：(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸乙酯是一种化学计量的溶剂，包括重量约8％-9％的甲酸乙酯。
3.如权利要求2所述的溶剂，其特征在于：其X射线粉末衍射谱在2θ值等于4.5°；7.1°；8.8°；11.1°；14.1°；15.4°；17.4°；18.5°和20.5+0.2°时有峰值。
4.如权利要求1所述的溶剂，其特征在于：(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸丙酯是一种化学计量的溶剂，包括重量约9.4％-10.4％的甲酸丙酯。
5.如权利要求4所述的溶剂，其特征在于：其X射线粉末衍射谱在2θ值等于4.5°；7.1°；8.8°；11.1°；14.1°；15.4°；17.4°；18.5°和20.4±0.2°时有峰值。
6.如权利要求1所述的溶剂，其特征在于：(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和甲酸异丙酯是一种化学计量的溶剂，包括重量约9.4％-10.4％的甲酸异丙酯。
7.如权利要求6所述的溶剂，其特征在于：其X射线粉末衍射谱在2θ值等于4.6°；7.2°；9.0°；11.2°；14.1°；15.4°；17.4°；18.5°和20.5+0.2°时有峰值。
8.一种(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂的制备方法包括用二氯甲烷和C2-3-甲酸烷基酯混合液使(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯晶化。
9.如权利要求8所述的制备方法，包括：
a)将无水或水合的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯溶解于二氯甲烷中；
b)蒸发二氯甲烷；
c)加入C2-3-甲酸烷基酯；
d)向晶化混合液加入溶剂晶体作为其晶种(可选)；
e)将晶化混合液静置形成溶剂晶体，搅拌或不搅拌均可；
f)将形成的晶体离析；
g)用C2-3-甲酸烷基酯冲洗晶体；
h)将晶体干燥使其达到恒重。
10.如权利要求8-9所述的制备方法，其特征在于：步骤b)和步骤c)可以在蒸发二氯甲烷的同时进行，在加入C2-3-甲酸烷基酯后，使(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯浓缩至高于160g/L。
11.如权利要求8-10所述的制备方法，其特征在于：所得的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯和C2-3-甲酸烷基酯的溶剂纯度不低于99％(用高效液相色谱法测定)。
12.权利要求1-7所述的溶剂在制备药用纯度的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯中的应用。
13.一种药用纯度的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯的制备方法，包括：
a)用C2-3-甲酸烷基酯将无水或水合的，如三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯粗产品转化成其晶体溶剂；
b)将步骤a)得到的晶体溶剂进行去溶剂化；
c)将无水或水合的，如三水合物形式的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯进行离析。
14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于：步骤b)的去溶剂化过程通过晶化C2-3-甲酸烷基酯和(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯组成的溶剂来实现。
15.如权利要求13-14所述的制备方法，其特征在于：步骤b)的去溶剂化过程在水与乙醇的混合液或水与乙腈的混合液中进行，且被离析的(2R，3S)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羟基-3-苯基丙酸-4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-环氧-1，7β，10β-三羟基-9-氧-紫杉-11-烯-13α-基酯为三水合物形式，纯度高于99.0％(用高效液相色谱法测定)。
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