CN102475728B - 片仔癀的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种片仔癀的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定，鉴别：取片仔癀外用制剂制成供试品溶液；另取胆酸、去氧胆酸对照品制成对照品溶液；照薄层色谱法试验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；含量测定：照高效液相色谱法测定，片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg，或不得少于0.43-不得少于0.51mg。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物组合物的检测方法，特别涉及中药片仔癀的检测方法。
背景技术
片仔癀为全国独家生产及中保品种，原标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第18册(标准号WS3-B-3381-98)，片仔癀为类扁椭圆形块状，块上有一椭圆环。表面棕黄色或灰褐色，有密细纹，可见霉斑。质坚硬，难折断。折断面微粗糙，呈棕褐色，色泽均匀，偶见少量菌丝体。粉末呈棕黄色或淡棕黄色，气微香，味苦、微甘。目前尚需要具备更好稳定性、重现性和专属性的质量检测方法对该品种的质量进行有效的控制。
发明内容
本发明目的在于提供中药片仔癀的检测方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
片仔癀检测方法包括如下鉴别和含量测定中的一种或几种：
A、取片仔癀细粉0.1-0.4g，置具塞锥形瓶中，加甲醇2-4ml，超声处理10-20分钟，放置20-40分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.3--0.7g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(60-70∶30-40∶5-15)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点；
B、取片仔癀细粉0.1-0.4g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(5-8∶2-5)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2-3滴，盐酸1-2滴，摇匀，密塞，于暗处放置1-2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为胆红素对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(5-15∶5-15∶1-2)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于100-110℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱Aguanilent HP-1与HP-5或HP-DB17(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定：取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品8-12mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法：取片仔癀，研细，取1-2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液1-3ml，再精密加入无水乙醇2-4ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理8-12分钟，放置1-3小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg，或不得少于0.43--不得少于0.51mg。
本发明质量检测方法优选如下鉴别和/或含量测定的一种或几种：
A、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点；
B、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(7∶3)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟(功率300W，频率40KHz)，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg或不得少于0.43-不得少于0.51mg。
附图说明：
图1是片仔癀三七薄层色谱图；
图2是五种阴性供试品溶液专属性考察；
图3是片仔癀胆红素、胆酸、去氧胆酸薄层色谱图；
图4样品、对照品及缺麝香阴性色谱图；
图5麝香酮标准曲线图。
下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1考察三七的薄层鉴别
原展开剂使用三氯甲烷，曾考察用二氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，但三七皂苷R1的斑点扩散比较严重，与相邻的斑点分离度达不到要求，见图1A，还曾用正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶4∶5)、正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水(16∶4∶20)等展开剂进行试验，分离度均达不到要求，点均散开，故用三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，供试品色谱中在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且缺三七的阴性样品无干扰，谱图见图1。
1～3：样品(批号：080627、080628、080731)
4.三七对照药材(批号：110941-200304中检所)
5.三七皂苷R1(批号：110745-200415中检所)
6.人参皂苷Rb1(批号：110704-200318中检所)
7.人参皂苷Rg1(批号：110703-200302中检所)
8.缺三七阴性(来源：厂家提供)
薄层板：20×10cm(横向展开)，展距：8cm，温度：18℃，湿度：57RH％
实验例2牛黄、蛇胆的薄层鉴别
对胆酸、去氧胆酸鉴别的专属性进行再考察。分别制备①缺牛黄；②缺蛇胆；③缺麝香；④同时缺牛黄、蛇胆的双阴性；⑤同时缺牛黄、蛇胆、麝香的三阴性，五种阴性供试品溶液，展开后荧光下检视，见图2，结果显示：仅牛黄、蛇胆干扰鉴别，故采用缺牛黄、蛇胆的双阴性。供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点。喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点。置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点。色谱图见图3。
1、样品(批号：080627)
2、胆酸对照品(批号：0078-9312来源：中检所)
3、去氧胆酸对照品(批号：727-9204来源：中检所)
4、胆红素对照品(批号：100077-200503来源：中检所)
5、缺牛黄阴性供试品(来源：厂家)
6、缺蛇胆阴性供试品(来源：厂家)
7、缺麝香阴性供试品(来源：厂家)
8、同时缺牛黄、蛇胆阴性供试品(来源：厂家)
9、同时缺牛黄、蛇胆、麝香阴性供试品(来源：厂家)；
薄层板：10×20cm(横向展开)，展距：13cm，温度：18℃，湿度：57RH％。
1.胆红素对照品(批号：100077-200503来源：中检所)
2～4：样品(批号：080627、080628、080731)
5.胆酸、去氧胆酸对照品(批号：0078-9312，727-9204来源：中检所)
6.同时缺牛黄、蛇胆阴性(来源：厂家提供)
薄层板：10×20(横向展开)，展距：9cm，温度：18℃，湿度：57RH％
实验例3麝香含量测定
片仔癀中含有麝香、牛黄、三七、蛇胆等药材，但由于胆红素在供试品溶液中极其不稳定，供试品溶液在提取20分钟后，即由原溶液的黄色变为绿色，蛇胆等胆汁类药材中也含有胆红素，因此用胆红素作为指标成分缺乏专属性。故建立用气相色谱法测定方中麝香酮含量。
1、仪器与试药：仪器：Agilent 6890N气相色谱仪、Agilent 7683自动进样器、氢火焰检测器(FID)、Agilent HP-5毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)、LM-ID氢气发生器(山东省化工研究院)、AG-I静音空气发生器(山东省化工研究院)。试药：麝香酮[来源：中国药品生物制品检定所批号：719-200208(方法学考察用)，110719-200512(6批检品含量测定用)]；百秋里醇(来源：中国药品生物制品检定所 批号：110772-200404)；样品：由福建漳州片仔癀药业股份有限公司提供。无水乙醇为分析纯。
2、方法与结果
系统适用性试验：按本发明方法方法及色谱条件试验，对对照品供试品溶液进行测定，系统适用性以麝香酮峰计，理论板数均能达到5000以上；柱子选择：采用Agilent HP-1与HP-5、HP-DB17毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)对同一份供试品溶液进行测定，结果系统适用性均良好；试验色谱条件：试验中发现供试品溶液杂质较多，如未经过程序升至高温后较长时间的冲洗，会影响序列的连续进样。条件设定为：弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于10000。检测器：FID；气体流速：N2-1ml/min；H2-40ml/min；空气-400ml/min；分流2∶1；进样量：2μl(自动进样)。
按上述色谱条件，麝香酮峰理论塔板数均大于5000，分离度均大于1.5。
3、内标物质的选择：
曾取水杨酸甲酯、丹皮酚、樟脑、正十四烷、丁香酚、百秋里醇适量，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液作为内标溶液。实验结果表明：只有选择百秋里醇为内标物，在上述色谱条件下，样品色谱中与其保留时间相对应处无杂质峰干扰，样品加入内标后，内标物与样品中其它相邻峰达到满意的分离(分离度＞1.5)，所以选择百秋里醇为内标物。见图4。
4、内标溶液、对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液的制备
内标溶液、对照品溶液及供试品的制备：同本发明方法。
阴性对照溶液的制备：取缺麝香样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性样品溶液。
5、专属性试验：
分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液，注入色谱仪进行测定，实验结果阴性样品溶液在与对照品相应的保留时间处，无色谱峰出现(见图4)，表明方中其他各味药材不干扰麝香酮的测定。
6、供试品溶液的制备：
提取溶剂的选择：曾取样品(0401004)0.15g，精密称定，分别精密加入无水乙醇、乙醚、乙酸乙酯等溶剂3ml，分别超声处理10分钟，放置2小时后，取续滤液进样。具体数据见表1。
表1不同溶剂提取得到麝香酮含量比较
由以上数据得：无水乙醇提取的麝香酮量最高。
提取溶剂用量的选择：对不同体积的无水乙醇加入量进行比较。取样品1.0g，精密称定，分别精密精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml、10ml，15ml，按本发明方法方法提取，取续滤液进样。具体数据见表具体数据见表2。
表2不同体积无水乙醇提取得到麝香酮含量比较
综合以上试验数据：提取所用的无水乙醇用量对提取率无明显影响，故选用加无水乙醇3ml，即定容至5ml，即可。
提取方法的选择
曾取样品0.15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液1ml，再精密加入无水乙醇2ml，混匀，密塞，称定重量，分别采用①：超声处理30分钟，②：超声处理30分钟，放置2小时，③：放置2小时，④：超声处理10分钟，放置2小时后，分别用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。具体数据见表具体数据见表3。
表3不同提取方法得到麝香酮含量比较
由上数据：故选用超声处理10分钟，放置2小时，即可。
曾取样品0.75g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟，分别放置1、2、5、24小时后，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。具体数据见表具体数据见表4。
表4不同静置时间得到麝香酮含量比较
由上数据：静置时间长短影响不大，故静置2小时即可。
综上：供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟，放置2小时，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。
7、线性关系的考察：
精密称取麝香酮对照品(中国药品生物制品检定所批号：719-200208供含量测定用)适量，加无水乙醇溶解，按本发明方法制成对照品母液(C＝2.1576mg/ml)，按下表方法精密吸取不同体积的对照品母液，置10ml量瓶中，精密加入内标溶液(C＝0.4112mg/ml)2ml，再用无水乙醇稀释定容至刻度，同本发明方法色谱条件进行测定。结果见下表5，线性关系图见图5：
表5麝香酮线性关系实验数据
结果表明麝香酮在0.0044～0.43ug进样范围内具有良好的线性关系。回归方程：y＝6.9981x+0.0011；相关系数：R＝0.9995。
8、精密度试验(重复性试验)：
取片仔癀样品(批号：041004)，按本发明方法供试品溶液的方法平行制备6份，依上述色谱条件进行测定并计麝香酮的含量，结果见表6，表明该方法重复性良好。
表6重复性测定结果
9、耐用性试验(稳定性试验)
取供试品溶液在0、4、6、8小时后按上述色谱条件测定样品中麝香酮峰面积，结果见表8。表明麝香酮在供试品溶液中8小时内稳定性良好。结果见表7。
表7稳定性试验结果
10、准确度试验
取已知含量的同一批样品(批号：041004)9份，每份约0.5g，采用加样回收，分别按下表精密加入一定量的麝香酮对照品，再加入适量内标溶液，按供试品溶液的制备方法及上述色谱条件进行测定，计算回收率。回收率测定结果见表8。表明本法具有较好的回收率。结果见表8。
表8麝香酮准确度测定结果
11、样品含量测定
按本发明方法色谱条件，对六批样品进行测定，结果见表9。
表9样品含量测定结果
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1：片仔癀的检测
A、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。
B、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(7∶3)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
实施例2：片仔癀的检测
取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(7∶3)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟(功率300W，频率40KHz)，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg。
实施例3：片仔癀的检测
A、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。
B、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(7∶3)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟(功率300W，频率40KHz)，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg。
实施例4：片仔癀的检测
取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5：片仔癀的检测
取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加二氯甲烷-乙醇(7∶3)混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液(两种溶液)，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以甲苯-冰醋酸-水(10∶10∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点。
实施例6：片仔癀的检测
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定 取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟(功率300W，频率40KHz)，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.47mg。
实施例7：片仔癀的检测
取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：麝香照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI E)测定；
色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm)HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，超声处理10分钟(功率300W，频率40KHz)，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于0.27mg。
Claims (1)
1.一种片仔癀的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定：
A、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加甲醇3ml，超声处理15分钟，放置30分钟，时时振摇，放置，取上清液作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含各对照品均为1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以65：35：10的三氯甲烷—甲醇—水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，分别在与对照药材及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点；
B、取片仔癀细粉0.3g，置具塞锥形瓶中，加7：3二氯甲烷—乙醇混合溶液10ml，依次加入10％亚硫酸氢钠2滴，盐酸1滴，摇匀，密塞，于暗处放置2小时，时时振摇，滤过，滤液作为供试品溶液；另取胆红素对照品，加二氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；再取胆酸、去氧胆酸对照品，加甲醇分别制成每1ml含对照品1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取胆红素对照品溶液10μL，其余三种溶液各6μL，，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以10：10：1的甲苯—冰醋酸—水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的黄色斑点；喷以10％硫酸乙醇溶液，于105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与胆红素对照品色谱相应位置，显相同的绿色斑点；置365nm紫外光灯下检视，在与胆酸、去氧胆酸对照品色谱相应位置，显相同的荧光斑点；
含量测定:麝香照气相色谱法测定；
色谱条件与系统适用性试验柱长30m，内径0.32mm，膜厚度0.25цm的弹性石英毛细管柱HP-5；程序升温：初始温度150℃，保持30分钟，以每分钟20℃的速率升温至250℃，保持15分钟；进样口温度250℃，检测器温度300℃；理论板数按麝香酮峰计应不低于5000；
校正因子的测定：取百秋李醇适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为内标溶液；另取麝香酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取2цL，注入气相色谱仪，计算校正因子；
测定法：取片仔癀，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液2ml，再精密加入无水乙醇3ml，混匀，密塞，称定重量，功率300W，频率40KHz超声处理10分钟，放置2小时，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液2цL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得；片仔癀每1g含麝香以麝香酮计，不得少于0.27mg或不得少于0.43--不得少于0.51mg。
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