CN102462726A

CN102462726A - 白树总生物碱及多羟基生物碱化合物的提取、分离及用途

Info

Publication number: CN102462726A
Application number: CN2010105350605A
Authority: CN
Inventors: 陈若芸; 申竹芳; 晏仁义; 刘泉; 王洪庆; 孙素娟
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2010-11-04
Filing date: 2010-11-04
Publication date: 2012-05-23
Anticipated expiration: 2030-11-04
Also published as: CN102462726B

Abstract

本发明涉及从白树中提取分离得到的具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的白树总生物碱以及一系列多羟基生物碱化合物，以该白树总生物碱或所述多羟基生物碱化合物为活性成分的药物组合物，以及它们在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

Description

白树总生物碱及多羟基生物碱化合物的提取、分离及用途

技术领域

背景技术

多羟基生物碱(polyhydroxy alkaloid)又称氮杂糖(azasugar)、亚氨基糖(iminosugar)或糖型生物碱(sugar-mimic alkaloid)，指糖环上氧原子被氮原子取代而形成的一类化合物，可看作糖的模拟物，其广泛存在于植物与微生物中(参见Watson，AA；Fleet，GWJ；Asano，N；Molyneux，RJ；Nash，RJ Phytochemistry.2001，56，265-295)。药理学研究已经证实多羟基生物碱具有高效的糖苷酶和糖基转移酶抑制活性，糖苷酶和糖基转移酶在肠道的消化、糖蛋白加工、溶酶体代谢等生理过程中起着十分重要的作用，因此多羟基生物碱具有抗糖尿病、抗癌、抗病毒、治疗溶酶体贮积症等多种药理活性(参阅Stüz，AE Iminosugars as Glycosidase Inhibitors：Nojirimycinand Beyond，Wiley-VCH，Weinheim，New York，1999；Compain，P；Martin，OR Iminosugars：From synthesis to therapeutic applications，John Wiley& Sons Ltd，2007)。Ye，XS等最近发现氮杂糖类化合物具有较好的免疫抑制活性(参见Ye，XS；Sun，F；Liu，M；Li，Q；Wang，YH；Zhang，GS；Zhang，LH；Zhang，XL J.Med.Chem.2005，48，3688)。因此，这类化合物引起了各国学者的广泛兴趣。

1996年米格列醇(miglitol)片上市，作为第二代α-葡萄糖苷酶抑制剂用于治疗II型糖尿病，其具有胃肠道不良反应发生率更低等优点。2003年ZavescaTM上市，成为第一个口服治疗戈谢病(Gaucher disease，又称葡萄糖脑苷脂贮积病)的药物。与此前唯一的治疗方法-酶替代疗法相比，具有给药方便，价格便宜等优点。因此，研究开发新的氮杂糖类药物是非常必要的，且具有重要意义。

白树，拉丁名为Suregada glomerulata(BL.)，大戟科白树属植物。乔木，高2-13米；小枝带灰黑色或褐色。叶片革质，宽或狭长椭圆形，或少倒卵形或倒披针形，长5-12厘米，宽3-6厘米，全缘，顶端急尖或钝或圆，稀凹缺，基部渐狭，中脉在两面突起，侧脉每边5-10条；托叶靠近花序，宽三角形，较厚，长约1毫米，宽2毫米，顶端钝，下部的托叶早落；叶柄长3-8毫米(海南植物志，陈焕镛主编第二卷，第一版1965年，P177)。

中国医学科学院药物研究所在前期的研究中发现白树水提取物具有很好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。并申请了专利“白树提取物、其制备方法及其组合物与用途”，申请号为02155523，该专利已于2004年6月23日获得国家专利局授权。

本发明是在前一专利的基础上进行的进一步创新。

发明内容

本发明的一方面提供了一种白树总生物碱，其具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性。

本发明的另一方面提供了上述白树总生物碱的制备方法。

本发明的另一方面提供了一系列多羟基生物碱化合物。

本发明的又一方面提供了上述多羟基生物碱化合物的制备方法。

本发明的又一方面提供了一种药物组合物，其包括有效剂量的作为活性成分的白树总生物碱及药学上可接受的载体。

本发明的再一方面提供了一种药物组合物，其包括有效剂量的作为活性成分的多羟基生物碱及药学上可接受的载体。

本发明的再一方面涉及白树总生物碱及其组合物在预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

本发明的再一方面涉及上述多羟基生物碱化合物在预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

为解决本发明的技术问题，本发明采用如下技术方案：

1、白树总生物碱的制备

一种白树总生物碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)白树药材经干燥并适当粉碎，用溶剂提取，过滤，得滤液；其中所述溶剂选自水、醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物；

(2)将步骤(1)中的滤液在常压或减压下加热浓缩，得浓缩液；

(3)向上述浓缩液中加入醇类溶剂进行沉淀，离心或过滤除去不溶物，将得到的上清液浓缩至无醇，得浓缩物；

(4)将步骤(3)中的浓缩物上阳离子交换树脂柱进行纯化，用碱性水溶液进行洗脱，洗脱液经减压浓缩得阳离子树脂洗脱物；

(5)将步骤(4)中的阳离子树脂洗脱物用适量水溶解，上阴离子交换树脂柱进行纯化，用水进行洗脱，收集洗脱液，并将其浓缩、干燥得干粉，即为白树总生物碱。

其中，步骤(1)中将白树药材经干燥并适当粉碎，以利增大与溶剂的接触面积，提高效率；用于提取白树药材的溶剂可以为水、醇类溶剂或水与醇类溶剂的混合物；醇类溶剂包括但不仅限于甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或它们的混合物；优选的醇类溶剂为乙醇；优选的提取溶剂为水与乙醇的混合溶剂，乙醇的体积百分比优选为40％至80％；更优选，用水作为白树药材的提取溶剂。所述提取溶剂的用量为白树药材重量的5至15倍，优选为白树药材重量的10倍。提取方式可以为冷浸提取、温浸提取、加热提取、回流提取、超声提取和微波提取，优选加热提取，更优选回流提取；提取温度优选60℃至溶剂的回流温度。步骤(1)的提取过程可重复1至4次，优选为3次。

步骤(2)中的浓缩过程优选在减压状态下进行。

步骤(3)为醇沉淀过程，加入的醇类溶剂的量为使醇的体积百分比为40％至80％，优选40％至60％；优选的醇类溶剂为乙醇。醇沉淀后，过滤或离心得上清液，然后，将该上清液减压浓缩至无醇，得浓缩物。

步骤(4)中的阳离子交换树脂优选为交联聚苯乙烯系的强酸型树脂，其型号包括但不仅限于001×4、001×7、001×14、Amberlite IR 120、Dowex50×4和Zerolit 225，优选的型号为001×7。将步骤(3)中的浓缩物上样后，优选先用水洗去不吸附的杂质，然后用碱性水溶液进行洗脱；所述碱性水溶液包括但不仅限于氨水或二乙胺、吡啶、2-甲基吡啶、三甲基吡啶或N-乙基吗琳的水溶液；优选为氨水；碱性水溶液的浓度为0.2至2N，优选为1N。洗脱液经减压浓缩，得阳离子树脂洗脱物，其为棕黄色膏状物。

步骤(5)中的阴离子交换树脂优选为交联聚苯乙烯系的强碱型树脂，其型号包括但不仅限于201×4、201×7、Amberlite IRA-401和Dowex 1×4，优选的型号为201×7；洗脱溶剂为水，优选为蒸馏水或去离子水。收集到的洗脱液经减压浓缩、真空干燥或冷冻干燥成干粉，或者将收集液直接喷雾干燥成型制成干粉，即为白树总生物碱。

2、多羟基生物碱化合物的制备

前述制备得到的白树总生物碱经进一步的分离纯化，可以制备得到一系列多羟基生物碱化合物。其制备方法包括以下步骤：

将上面制得的白树总生物碱用Dowex 50×4强酸性阳离子树脂分离，0.5N氨水洗脱，分离得到五个部分；然后，将每个部分依次经强碱性阴离子树脂Dowex 1×2，用蒸馏水洗脱；羧甲基葡聚糖凝胶C-25(CM Sephadex C-25)，0.01N氨水洗脱；弱酸型阳离子交换树脂Amberlite CG-50，水洗脱，即可分离得到17个新的多羟基生物碱化合物。

在洗脱分离过程中采用薄层硅胶检测，展开剂为正丁醇-醋酸-水及异丙醇-醋酸-水。

分离得到的17个多羟基生物碱化合物经波谱分析，特别是经过多种二维谱的分析，确定它们的化学结构和立体构型如下：

本发明提供一种药物组合物，包括本发明所述的白树总生物碱及药学上可接受的载体。

本发明提供一种药物组合物，包括一种或多种本发明所述的多羟基生物碱化合物及药学上可接受的载体。

本发明还涉及含有作为活性成份的白树总生物碱以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明的白树总生物碱占药物组合物总重量的0.1-95％。

本发明还涉及含有作为活性成份的本发明的多羟基生物碱化合物以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明的多羟基生物碱化合物占药物组合物总重量的0.1-95％。

本发明还提供一种药物组合物，它包括药物有效剂量的作为活性成分的白树总生物碱及药学上可接受的载体。

本发明还提供一种药物组合物，它包括药物有效剂量的作为活性成分的多羟基生物碱化合物及药学上可接受的载体。

另外，本发明还涉及所述白树总生物碱在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

再者，本发明还涉及所述多羟基生物碱化合物在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

本发明所述的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺、皮肤、阴道、腹膜、直肠等，优选口服给药。

本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹腔注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括水包油型、油包水型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等。固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯毗咯烷酮、聚乙二丙醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯毗咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与构椽酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄菩胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。

为了将给药单元制成胶囊，将本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明提取物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

例如，将本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明的药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明药物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物的每天的合适剂量范围：本发明的白树总生物碱或多羟基生物碱化合物的用量为0.001～150mg/Kg体重，优选为0.1～100mg/Kg体重，更优选为1～60mg/Kg体重，最优选为2～50mg/Kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这取决于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。每一种治疗所需总剂量可分成多次或按一次剂量给药。本发明的提取物或药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。

对白树总生物碱和得到的多羟基生物碱化合物进行了与降血糖有关的药理实验后发现，在体外α-葡萄糖苷酶抑制实验中，本发明的白树总生物碱和多羟基生物碱化合物9、13、16均显示出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性，因此，它们可用于糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染及溶酶体贮积症等疾病的预防和治疗。

附图说明：

附图1：17个新的多羟基生物碱类化合物的具体分离路线。

具体实施方式

下面的实施例及药理活性实验用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

白树总生物碱的制备

实施例1

白树枝叶1kg，加蒸馏水5L，100℃加热回流2小时，过滤，滤渣再加蒸馏水5L，继续回流2小时，提取两次，过滤，合并三次滤液，加热减压浓缩提取液，至2L；加入2L体积百分含量为95％的乙醇，在20℃-30℃进行醇沉淀，离心或过滤，除去不溶物；将醇沉淀后的上清液减压浓缩至无醇味，浓缩液经阳离子交换树脂柱聚苯乙烯系的强酸型树脂其型号001×7进行纯化，用蒸馏水洗去不吸附的杂质，再用1N氨水洗脱，洗脱液经减压浓缩除去氨水，得棕黄色膏状物58.5g；将其用蒸馏水溶解，过滤，将滤液经阴离子交换树脂柱聚苯乙烯系的强碱型树脂其型号201×7进行纯化，用蒸馏水洗至无生物碱反应。将收集液浓缩干燥成干粉，得棕黄色的白树总生物碱21.5g。

实施例2

白树枝叶14kg，加蒸馏水140L，100℃加热回流2小时，过滤，滤渣再加蒸馏水140L，继续回流1小时，过滤，合并两次滤液，加热减压浓缩提取液，至20L；加入20L体积百分含量为95％的乙醇，在20℃-30℃进行醇沉淀，离心或过滤，除去不溶物；将醇沉淀后的上清液减压浓缩至无醇味，浓缩液经阳离子交换树脂柱聚苯乙烯系的强酸型树脂其型号001×7进行纯化，用蒸馏水洗去不吸附的杂质，再用1N氨水洗脱，洗脱液经减压浓缩除去氨水，得棕黄色膏状物988.5g；将其用蒸馏水溶解，过滤，将滤液经阴离子交换树脂柱聚苯乙烯系的强碱型树脂其型号201×7进行纯化，用蒸馏水洗至无生物碱反应。将收集液浓缩干燥成干粉，得棕黄色的白树总生物碱326.5g。

多羟基生物碱化合物的制备

实施例3

取实施例2中制备的白树总生物碱60g，先用Dowex 50×4强酸性阳离子树脂，0.5N氨水洗脱，分离得到五个部分。每个部分再依次经强碱性阴离子树脂Dowex 1×2，蒸馏水洗脱；羧甲基葡聚糖凝胶C-25(CM SephadexC-25)，0.01N氨水洗脱；弱酸型阳离子交换树脂Amberlite CG-50，水洗脱。共得到17个新的多羟基生物碱类化合物。具体的分离路线如附图1所示：

上述17个新化合物的波谱数据如下：

化合物1：2，5-imino-2，4，5-trideoxy-D-manno-heptitol

无色油状物；

(c，0.17，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，400MHz)：δ_H 4.18(1H，ddd，J＝6.8，6.4，6.4Hz，H-3)，3.74(1H，m，H-6)，3.67(2H，dd，J＝11.6，4.4Hz，H-7b)，3.62(1H，dd，J＝11.6，6.4Hz，H-7a)，3.65(1H，dd，J＝11.6，3.6Hz，H-1b)，3.55(1H，dd，J＝11.6，6.8Hz，H-1a)，3.36(1H，ddd，J＝8.8，6.8，6.8Hz，H-5)，3.15(1H，ddd，J＝5.6，5.6，5.6Hz，H-2)，2.33(1H，ddd，J＝12.4，6.8，6.4Hz，H-4a)，1.75(1H，ddd，J＝12.4，8.4，8.0Hz，H-4b)；¹³C-NMR(D₂O，100MHz)：δ_C 76.6(C-6)，75.3(C-3)，68.3(C-2)，66.4(C-7)，64.1(C-1)，59.6(C-5)，38.1(C-4)；(+)-ESIMS m/z 178.0[M+H]⁺；(-)-ESIMS m/z 176.2[M-H]^-，353.1[2M-H]^-； HR-ESIMS m/z 178.1072[M+H]⁺(calcd 178.1074 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物2：2，5-imino-2，4，5-trideoxy-D-gulo-heptitol

无色油状物； (c，0.16，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，300MHz)：δ_H 4.16(1H，ddd，J＝5.1，3.9，3.9Hz，H-3)，3.69(1H，dd，J＝9.6，3.3Hz，H-7b)，3.64(1H，m，H-6)，3.62(2H，m，H-1)，3.52(1H，dd，J＝9.6，4.8Hz，H-7a)，3.37(1H，ddd，J＝8.7，7.8，6.0Hz，H-5)，3.09(1H，ddd，J＝5.7，5.4，4.5Hz，H-2)，1.89(2H，m，H-4)；¹³C-NMR(D₂O，100MHz)：δC 75.8(C-6)，75.5(C-3)，70.0(C-2)，66.5(C-7)，64.7(C-1)，61.1(C-5)，38.3(C-4)；

¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)：δ_H 4.68(1H，ddd，J＝6.4，3.6，3.6Hz，H-3)，4.20(1H，ddd，J＝5.6，5.2，5.2Hz，H-6)，4.09(1H，m，H-5)，4.05(2H，d，J＝5.6Hz，H-7)，4.03(1H，dd，J＝11.2，5.2Hz，H-1b)，3.98(1H，J＝11.2，5.6Hz，H-1a)，3.70(dd，J＝9.6，5.2Hz，H-2)，2.38(1H，ddd，J＝12.8，8.8，4.0Hz，H-4b)，2.33(1H，ddd，J＝12.8，5.6，3.2Hz，H-4a)；¹³C-NMR(C₅D₅N，100MHz)：δC 74.5(C-6)，73.4(C-3)，68.9(C-2)，65.3(C-7)，63.7(C-1)，59.7(C-5)，36.8(C-4)；(+)-ESIMS m/z 178.0[M+H]⁺；(-)-ESIMS m/z 176.6[M-H]^-，353.1[2M-H]^-；HR-ESIMS m/z 178.1072[M+H]⁺(calcd 178.1074 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物3：2，5-imino-2，4，5，6-teradeoxy-D-gulo-heptitol

无色针状结晶；mp 78-80℃；

(c，0.16，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，300MHz)：δ_H 4.17(1H，ddd，J＝6.0，4.2，1.8Hz，H-3)，3.70(1H，dd，J＝11.4，3.0Hz，H-1b)，3.69(2H，t，J＝7.2Hz，H-7)，3.64(1H，dd，J＝11.4，6.6Hz，H-1a)，3.42(1H，m，H-5)，3.11(1H，td，J＝5.4，4.8Hz，H-2)，1.96(1H，ddd，J＝13.8，6.0，1.8Hz，H-4b)，1.78(2H，m，H-6)，1.72(1H，ddd，J＝13.8，6.6，3.6Hz，H-4a)； ¹³C-NMR(D₂O，100MHz)：δ_C 75.6(C-3)，70.4(C-2)，64.6(C-1)，62.3(C-7)，57.5(C-5)，42.8(C-4)，38.9(C-6)；(+)-ESIMS m/z 162.3[M+H]⁺；HR-ESIMS m/z162.1123[M+H]⁺(calcd 162.1125 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物4：6-C-(1-hydroxyoctyl)-DMDP

白色固体； (c，0.12，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，300MHz)：δ_H 4.02(1H，dd，J＝7.5，6.9Hz，H-4)，3.83(1H，dd，J＝7.5，6.9Hz，H-3)，3.70(1H，dd，J＝11.7，4.5Hz，H-1b)，3.68(1H，m，overlap，H-6)，3.61(1H，dd，J＝11.7，6.0Hz，H-1a)，3.59(2H，t，J＝6.3Hz，H-14)，3.02(1H，ddd，J＝7.5，6.3，4.5Hz，H-2)，2.91(1H，dd，J＝7.5，5.4Hz，H-5)，1.54-1.46(4H，m)，1.33(10H，brs)；¹³C-NMR (D₂O，100MHz)：δ_C 81.0(C-3)，80.7(C-4)，75.4(C-6)，66.9(C-5)，64.7(C-14)，64.6(C-1，2)，35.9(C-7)，34.6(C-13)，27.8(C-8，12)，31.3，31.4(C-9，10，11)；(+)-ESIMS m/z 292.2[M+H]⁺；HR-ESIMS m/z 292.2120[M+H]⁺(calcd 292.2119for C₁₄H₃₀NO₅)。

化合物5：6-C-(1-hydroxyoctyl)-2，5-dideoxy-2，5-imino-D-galactitol

无色油状物； (c，0.13，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，300MHz)：δ_H 4.17(1H，brs，H-4)，4.15(1H，brs，H-3)，3.78(1H，dd，J＝11.7，6.6Hz，H-1b)，3.69(1H，m，overlap，H-6)，3.64(1H，overlap，H-1a)，3.60(2H，t，J＝6.6Hz，H-14)，3.29(1H，td，J＝6.3，3.0Hz，H-5)，3.00(1H，ddd，J＝7.5，5.1，2.4Hz，H-2)，1.53(6H，m)，1.33(8H，brs)；¹³C-NMR(D₂O，100MHz)：δ_C 76.1(C-3)，75.3(C-4)，75.2(C-6)，67.1(C-5)，64.7(C-14)，63.1(C-1)，62.9(C-2)，36.0(C-7)，34.1(C-13)，31.3，31.4(C-9，10，11)，28.0(C-12)，27.8(C-8)。

¹H-NMR(C₅D₅N，400MHz)：δH 4.78(1H，dd，J＝6.0，5.6Hz，H-4)，4.61(1H，dd，J＝4.8，4.4Hz，H-3)，4.33(2H，dd，J＝6.0，1.6Hz，H-1)，4.06(1H，ddd，J＝7.2，5.2，5.2Hz，H-6)，3.81(2H，t，J＝6.4Hz，H-14)，3.80(1H，overlap，H-2)，3.71(1H，dd，J＝6.0，4.8Hz，H-5)，1.94(2H，m，H-7)，1.74(2H，m，H-13)，1.76(1H，m，H-8b)，1.53(1H，m，H-8a)，1.40(2H，m，H-2)，1.28(6H，brs，H-9～H-11)； ¹³C-NMR(C₅D₅N，100MHz)：δ_C 74.2(C-3)，74.0(C-4)，72.9(C-6)，67.0(C-5)，62.6(C-1，14)，62.0(C-2)，34.8(C-7)，33.6(C-13)，30.1，30.0，29.8(C-9～11)，26.7(C-8)，26.4(C-2)；(+)-ESIMS m/z 292.2[M+H]⁺；HR-ESIMS m/z 292.2121[M+H]⁺(calcd 292.2119 for C₁₄H₃₀NO₅)。

化合物6：6-C-butyl-4-deoxyDMDP

白色固体；

(c，0.54，H₂O)；¹H-NMR(D₂O，300MHz)：δ_H 4.17(1H，ddd，J＝6.8，6.4，6.4Hz，H-3)，3.68(1H，dd，J＝11.6，5.6Hz，H-1b)，3.65(1H，m，H-6)，3.61(1H，dd，J＝11.6，6.4Hz，H-1a)，3.23(1H，ddd，J＝8.8，7.2，6.4Hz，H-5)，3.13(1H，dt，J＝5.6，5.6Hz，H-2)，2.31(1H，ddd，J＝12.0，7.2，6.0Hz，H-4a)，1.68(1H，ddd，J＝12.0，8.8，8.0Hz，H-4b)，1.57(1H，m，H-7a)，1.33-1.45(5H，m，CH₂CH₂CH₂)，0.91(3H，t，J＝7.2Hz，CH3)；¹³C-NMR(D₂O，100MHz)：δ_C 75.8(C-6)，75.4(C-3)，68.3(C-2)，64.3(C-1)，62.6(C-5)，37.6(C-4)，36.2(C-7)，30.0(C-8)，24.8(C-9)，16.1(C-10)；(+)-ESIMS m/z 204.1[M+H]⁺，226.0[M+Na]⁺；(-)-ESIMS m/z 405.3[2M-H]^-；HR-ESIMS m/z 204.1592[M+H]⁺(calcd 204.1594 for C₁₀H₂₂NO₃)。

化合物7：α-4-deoxyhomonojirimycin

无色油状物；

(c，0.21，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 3.98(1H，ddd，J＝11.4，5.4，4.2Hz，H-5)，3.87(1H，d，J＝11.7Hz，H-1b)，3.85(1H，dd，J＝11.7，6.6Hz，H-7b)，3.73(1H，dd，J＝11.7，4.5Hz，H-7a)，3.52(1H，dd，J＝11.7，7.5Hz，H-1a)，3.50(1H，ddd，J＝9.9，9.0，4.5Hz，H-3)，3.14(1H，ddd，J＝9.9，5.1，4.5Hz，H-6)，2.76(1H，ddd，J＝8.7，7.8，3.3Hz，H-2)，2.11(1H，ddd，J＝12.3，4.8，4.2Hz，H-4eq)，1.57(1H，dt，J＝12.3，10.8Hz，H-4ax)；¹³C-NMR(D₂O100MHz)：δ_C 69.6(C-3)，69.4(C-5)，64.7(C-1)，59.6(C-7)，58.7(C-6)，58.1(C-2)，38.6(C-4)；(+)-ESIMS m/z 178[M+H]⁺，200[M+Na]⁺；(-)-ESIMS m/z 176[M-H]^-，353[2M-H]^-；HR-ESIMS m/z 178.1072[M+H]⁺(calcd 178.1074 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物8：α-4，7-dideoxyhomonojirimycin

无色油状物；

(c，0.82，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 3.86(1H，ddd，J＝11.4，5.1，4.5Hz，H-5)，3.79(1H，dd，J＝11.4，3.3Hz，H-1b)，3.63(1H，dd，J＝11.4，6.3Hz，H-1a)，3.50(1H，ddd，J＝10.2，9.9，4.5Hz，H-3)，3.22(1H，m，H-6)，2.72(1H，ddd，J＝9.0，5.7，3.3Hz，H-2)，2.09(1H，ddd，J＝11.4，4.5，4.2Hz，H-4eq)，1.65(1H，dt，J＝11.4，11.4Hz，H-4ax)，1.13(3H，d，J＝6.9Hz，H-7)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δC 70.6(C-5)，69.4(C-3)，63.9(C-1)，57.5(C-2)，52.9(C-6)，37.4(C-4)，13.3(C-7)；(+)-ESIMS m/z 162[M+H]⁺，184[M+Na]⁺；HR-ESIMS m/z 162.1123[M+H]⁺(calcd 162.1125 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物9：N-methyl-β-4-deoxyhomonojirimycin

白色固体；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 3.92(2H，dd，J＝12.3，2.4Hz，H-1b，7b)，3.82(2H，dd，J＝12.3，2.4Hz，H-1a，7a)，3.59(2H，ddd，J＝11.4，9.9，4.5Hz，H-3，5)，2.38(1H，dt，J＝12.7，4.5Hz，H-4eq)，2.36(3H，s，N-Me)，2.04(2H，dt，J＝9.9，3.0Hz，H-2，6)，1.40(1H，dt，J＝12.7，11.4Hz，H-4ax)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C 72.3(C-2，6)，67.0(C-3，5)，61.2(C-1，7)，44.0(C-4)，38.6(N-Me)；(+)-ESIMS m/z 192[M+H]⁺，214[M+Na]⁺；HR-ESIMS m/z 192.1229[M+H]⁺(calcd 192.1230 for C₈H₁₈NO₄)。

化合物10：β-4-deoxy-3，5-di-epi-homonojirimycin

无色油状物；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 4.19(2H，ddd，J＝6.6，6.0，6.0Hz，H-3，5)，3.73(4H，d，J＝6.0Hz，H-1，7)，3.10(2H，m，H-2，6)，1.86(2H，t，J＝ 6.0Hz，H-4)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C 67.9(C-3，5)，61.7(C-1，7)，57.4(C-2，6)，37.4(C-4)；(+)-ESIMS m/z 178[M+H]⁺，200[M+Na]⁺；HR-ESIMSm/z 178.1072[M+H]⁺(calcd 178.1074 for C₇H₁₆NO₄)。

化合物11：4，7-dideoxy-7-C-(1-hydroxyheptyl)-α-homonojirimycin

白色粉末，mp 109-110℃，

(c 0.13，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 3.94(1H，ddd，J＝10.4，4.4，4.0Hz，H-5)，3.87(1H，dd，J＝11.2，3.2Hz，H-1b)，3.62(2H，t，J＝6.4Hz，H-14)，3.55(1H，dd，J＝11.2，6.8Hz，H-1a)，3.55(1H，overlap，H-3)，3.05(1H，ddd，J＝9.6，5.4，4.8Hz，H-2)，2.79(1H，m，H-2)，2.09(1H，dt，J＝12.4，4.8Hz，H-4eq)，1.66(1H，dt，J＝12.4，11.2Hz，H-4ax)，1.57(4H，m，H-7，13)，1.35(10H，brs，H-8～12)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C70.2(C-5)，69.4(C-3)，64.7(C-14)，64.3(C-1)，58.2(C-2)，57.5(C-6)，37.9(C-4)，34.1(C-13)，31.4，31.3，31.2(C-9～11)，27.85，27.86(C-7，12)，26.6(C-8)；(+)-ESIMS m/z 276[M+H]⁺，298[M+Na]⁺；HR-ESIMS m/z 276.2170[M+H]⁺(calcd 276.2169 for C₁₄H₃₀NO₄)。

化合物12：4，7-dideoxy-7-C-(1-hydroxyheptyl)-α-homomannojirimycin

白色固体；

(c 0.14，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 3.85(2H，m，H-3，5)，3.71(2H，d，J＝5.1Hz，H-1)，3.60(2H，J＝6.6Hz，H-14)，2.72(2H，m，H-2，6)，1.87(2H，m，H-4)，1.53(4H，m，H-7，13)，1.32(10H，brs，H-8，9，10，11，12)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C 71.3(C-5)，67.5(C-3)，64.7(C-14)，63.7(C-1)，59.2(C-2)，59.0(C-6)，37.4(C-4)，34.1(C-13)，31.5，31.34，31.25(C-9～11)，28.3(C-7)，27.8(C-8，12)；

¹H-NMR(C₅D₅N 400MHz)：δ_H 4.54(1H，ddd，J＝8.8，8.4，4.4Hz，H-3)，4.25(2H，d，J＝5.2Hz，H-1)，4.15(1H，m，H-5)，3.84(2H，t，J＝6.8Hz，H-14)，3.24(1H，ddd，J＝7.6，5.2，5.2Hz，H-2)，3.09(1H，ddd，J＝8.8，4.4，4.4Hz，H-6)，2.47(1H，ddd，J＝13.6，5.2，4.4Hz，H-4eq)，2.25(1H，ddd，J＝13.6，9.2，2.8Hz，H-4ax)，1.76～1.58，1.39(8H，m，H-7，8，12，13)，1.25(6H，m，H-9～11)；¹³C-NMR(C₅D₅N 100MHz)：δ_C 69.8(C-5)，66.0(C-3)，63.1(C-1)，62.0(C-14)，58.6(C-6)，58.3(C-2)，38.2(C-4)，33.7(C-13)，31.1(C-7)，30.0，29.9，29.8(C-9～10)，27.0(C-8)，26.5(C-12)；(+)-ESIMS m/z 276[M+H]⁺；HR-ESIMS m/z 276.2167[M+H]⁺(calcd 276.2169 for C₁₄H₃₀NO₄)。

化合物13：7-deoxy-7-C-(1-hydroxyheptyl)-α-homonojirimycin

白色粉末；mp 175-177℃； (c 0.24，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300 MHz)：δ_H 3.88(1H，dd，J＝11.1，2.7Hz，H-1a)，3.67(1H，dd，J＝11.1，7.5Hz，H-1b)，3.59(2H，t，J＝6.3Hz，H-14)，3.58(1H，overlap，H-5)，3.55(1H，t，J＝8.7Hz，H-4)，3.19(1H，dd，J＝9.6，8.7Hz，H-3)，3.11(1H，ddd，J＝9.0，5.7，5.4Hz，H-6)，2.79(1H，ddd，J＝3.0，7.5，10.5Hz，H-2)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C77.0(C-4)，75.5(C-3)，75.1(C-5)，64.8(C-14)，64.8(C-1)，58.2(C-6)，56.8(C-2)，34.1(C-13)，31.6，31.3，31.2(C-9～11)，27.8(C-12)，28.1(C-8)，26.5(C-7)；

¹H-NMR(C₅D₅N 300MHz)：δ_H 4.54(1H，dd，J＝10.4，3.2Hz，H-1b)，4.34(1H，dd，J＝9.2，5.6Hz，H-5)，4.24(1H，dd，J＝9.6，9.2Hz，H-4)，4.16(1H，dd，J＝10.4，7.2Hz，H-1a)，3.95(1H，dd，J＝9.6，8.8Hz，H-3)，3.77(2H，t，J＝6.4Hz，H-14)，3.43(1H，ddd，J＝10.4，7.2，3.2Hz，H-6)，3.36(1H，ddd，J＝10.0，7.2，3.2Hz，H-2)，2.00(1H，m，H-7b)，1.78(1H，m，H-7a)，1.63(2H，m，H-13)，1.30(1H，m，H-12b)，1.29(m，H-8)，1.19(1H，m，H-12a)，1.15(6H，m，H-9，10，11)； ¹³C-NMR(C₅D₅N 100MHz)：δ_C 76.5(C-4)，74.7(C-3)，74.6(C-5)，62.0(C-14)，64.0(C-1)，57.2(C-6)，56.3(C-2)，33.6(C-13)，30.1，30.0，29.8(C-9～11)，27.0(C-12)，26.4(C-8)，25.5(C-7).(+)-ESIMS m/z 292[M+H]⁺；HR-ESIMS m/z292.2121[M+H]⁺(calcd 292.2119 for C₁₄H₃₀NO₅)。

化合物14：

3-O-β-D-glucopyranosyl-4，7-dideoxy-7-C-(1-hydroxyheptyl)-α-homo-nojirimycin

无色油状物，

(c 0.30，H₂O)；¹H-NMR(C₅D₅N 400MHz)：δ_H 5.01(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，4.43(1H，dd，J＝12.0，2.4Hz，H-6′b)，4.36(1H，dd，J＝10.4，4.0Hz，H-1b)，4.31(1H，dd，J＝12.0，5.2Hz，H-6′a)，4.23(1H，dd，J＝10.4，6.4Hz，H-1a)，4.16-4.21(4H，m，H-3，5，3′，5′)，4.00(1H，t，J＝8.0Hz，H-2′)，3.87(1H，m，H-5′)，3.82(2H，t，J＝6.8Hz，H-14)，3.33(1H，ddd，J＝9.2，6.4，4.8Hz，H-2)，3.15(1H，ddd，J＝9.6，4.8，4.4Hz，H-6)，2.72(1H，dt，J＝12.8，4.0Hz，H-4eq)，2.30(1H，dt，J＝12.8，9.6Hz，H-4ax)，1.88(1H，m，H-7b)，1.77(1H，m，H-7a)，1.68(2H，m，H-13)，1.56(1H，m，H-8b)，1.40(3H，m，H-12，H-8a)，1.22(6H，m，H-9，10，11)；¹³C-NMR(C₅D₅N 100MHz)：δ_C 104.9(C-1′)，78.21(C-3′)，78.15(C-5′)，77.6(C-3)，75.2(C-2′)，71.3(C-4′)，68.6(C-5)，62.6(C-6′)，62.5(C-1)，61.9(C-14)，56.1(C-6)，55.9(C-2)，36.8(C-4)，33.5(C-13)，30.1，29.9，29.8(C-9～11)，26.7(C-8)，26.4(C-12)；(+)-ESIMS m/z 438[M+H]⁺，460[M+Na]⁺；(-)-ESIMS m/z 437[M-H]^-；HR-ESIMS m/z 438.2706[M+H]⁺(calcd438.2698 for C₂₀H₄₀NO₉)。

化合物15：

4-O-β-D-glucopyranosyl-7-deoxy-7-C-(1-hydroxyheptyl)-α-homono-jirimycin

无色油状物，

(c 0.40，H₂O)；¹H-NMR(C₅D₅N 400MHz)：δ_H 5.18(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，4.56(1H，dd，J＝10.4，2.8Hz，H-1b)，4.52(1H，dd，J＝12.0，2.0Hz，H-6′b)，4.32(1H，dd，J＝9.6，5.6Hz，H-5)，4.26(1H，dd，J＝12.0，6.0Hz，H-6′a)，4.22(1H，t，J＝8.8Hz，H-3′)，4.19(1H，t，J＝8.8Hz，H-4′)，4.16(1H，dd，J＝9.6，9.2Hz，H-4)，4.12(1H，dd，J＝10.4，4.4Hz，H-1a)，4.09(1H，t，J＝8.0Hz，H-2′)，4.02(1H，ddd，J＝12.8，10.0，2.4Hz，H-5′)，3.87(1H，t，J＝8.8Hz，H-3)，3.81(2H，t，J＝6.8Hz，H-14)，3.40(1H，ddd，J＝8.8，5.2，3.2Hz，H-6)，3.30(1H，ddd，J＝9.2，7.2，3.2Hz，H-2)，1.98(1H，m，H-7b)，1.77(1H，m，H-7a)，1.69(3H，m)，1.39(2H，m)，1.21～1.27(m)；¹³C-NMR(C₅D₅N 100MHz)：δ_C 105.9(C-1′)，89.1(C-4)，78.6(C-5′)，78.0(C-3′)，75.4(C-2′)，73.6(C-5)，72.4(C-3)，71.4(C-4′)，63.3(C-1)，62.3(C-6′)，61.9(C-14)，56.5(C-6)，55.9(C-2)，33.5(C-13)，30.0，29.9，29.7(C-9～11)，26.7(C-8)，26.4(C-12)，25.2(C-7).(+)-ESIMSm/z 454[M+H]⁺，476[M+Na]⁺；(-)-ESIMS m/z 488[M+Cl]^-；HR-ESI MS m/z454.2661[M+H]⁺(calcd 438.2647 for C₂₀H₄₀NO₁₀)。

化合物16：N-methyl-7-O-β-D-glucopyranosyl-α-homonoji rimycin

白色粉末；mp 148-150℃， (c 0.21，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 4.44(1H，d，J＝7.8Hz，H-1′)，4.27(1H，dd，J＝11.4，2.4Hz，H-7a)，3.90(1H，dd，J＝11.4，9.6Hz，H-7b)，3.83(1H，dd，J＝13.2，3.0Hz，H-1a)，3.87(1H，dd，J＝13.2，3.3Hz，H-1b)，3.85(1H，brd，J＝12.0Hz，H-6′b)，3.75(1H，dd，J＝9.0，6.0Hz，H-5)，3.71(1H，dd，J＝12.0，6.0Hz，H-6′a)，3.55(1H，dd，J＝9.9，9.0Hz，H-4)，3.49(1H，t，J＝9，3Hz，H-3′)，3.43(1H，m，H-5′)，3.39(1H，t，J＝9.6Hz，H-4′)，3.37(1H，dd，J＝9.9，9.0Hz，H-3)，3.28(1H，dd，J＝9.0，8.1Hz，H-2′)，3.18(1H，m，H-6)，2.65(1H，brd，J＝9.9Hz，H-2)，2.51(3H，s，N-Me)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C 105.5(C-1′)，78.8(C-5′)，78.6(C-3′)，77.4(C-4)，76.0(C-2′)，72.89(C-5)，72.87(C-3)，72.6(C-4′)，67.5(C-6)，66.7(C-7)，64.4(C-2)，63.6(C-6′)，60.7(C-1)，41.0(N-Me)；(+)-ESIMS m/z 370[M+H]⁺；(-)-ESIMS m/z 368[M-H]^-；HR-ESI MS m/z 370.1712[M+H]⁺(calcd 370.1708 for C₁₄H₂₈NO₁₀)。

化合物17：7-O-α-D-glucopyranosyl-α-homonojirimycin

无色油状物；

(c 0.56，H₂O)；¹H-NMR(D₂O 300MHz)：δ_H 4.98(1H，d，J＝3.9Hz，H-1′)，4.07(1H，t，J＝10.2Hz，H-7a)，3.91(1H，dd，J＝11.7，2.4Hz，H-1b)，3.87(1H，brd，J＝9.9Hz，H-6′a)，3.77(1H，dd，J＝8.4，5.1Hz，H-2′)，3.73 (1H，dd，J＝10.5，9.9Hz，H-3′)，3.66(2H，m，overlap，H-6′b，H-5′)，3.63(1H，dd，J＝10.2，3.9Hz，H-7b)，3.57(1H，dd，J＝9.9，3.6Hz，H-5)，3.53(1H，dd，J＝9.9，9.0Hz，H-4)，3.53(1H，m，H-1a)，3.52(1H，m，H-6)，3.42(1H，t，J＝9.6Hz，H-4′)，3.20(1H，t，J＝9.9Hz，H-3)，2.91(1H，ddd，J＝9.9，7.2，2.7Hz，H-2)；¹³C-NMR(D₂O 100MHz)：δ_C 101.3(C-1′)，77.3(C-4)，75.9(C-3′)，75.0(C-5′)，74.8(C-3)，74.2(C-5)，74.1(C-2′)，72.4(C-4′)，66.0(C-7)，64.9(C-1)，63.4(C-6′)，57.5(C-2，C-6)；(+)-ESIMS m/z 356[M+H]⁺，378[M+Na]⁺；HR-ESI MS m/z 356.1555[M+H]⁺(calcd 356.1551 for C₁₃H₂₆NO₁₀)。

药理实验

体外实验

实验例1本发明的白树总生物碱的体外α-葡萄糖苷酶抑制实验

将本发明制备的白树总生物碱与对照药物阿卡波糖分别配成1mg/mL的溶液。分别用PH 6.0的磷酸缓冲液将其稀释成4，0.4，0.04，0.004，0.0004mg/mL五个剂量。各取该液80μL，分别加入100μL酶液，37℃振摇5min，加蔗糖或麦芽糖液20μL，在37℃振摇30min，于83℃灭活3min，测定反应产物中的含糖量。

表1.白树水提取物和白树总生物碱的α-葡萄糖苷酶抑制活性

由实验结果可以看出，以蔗糖为底物时，白树总生物碱的作用强度比阳性对照药阿卡波糖(Acarbose)强；以麦芽糖为底物时，其作用强度和阳性对照药阿卡波糖相当。白树总生物碱的作用强度比水提取物显著增强。

实验例2本发明的多羟基生物碱化合物的体外α-葡萄糖苷酶抑制实验(蔗糖底物)

将本发明制备的多羟基生物碱化合物与对照药物阿卡波糖分别配成1mg/mL的溶液。分别用PH 6.0的磷酸缓冲液将其稀释成4，0.4，0.04，0.004，0.0004mg/mL五个剂量。各取该液80μL，分别加入100μL酶液，37℃振摇5min，加蔗糖液20μL，在37℃振摇30min，于83℃灭活3min，测定反应产物中的含糖量。

表2.本发明化合物对体外α-葡萄糖苷酶抑制实验结果(蔗糖底物)

由实验结果可以看出，多羟基生物碱化合物9、13、16呈现较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

体内实验

考察本发明制备的白树总生物碱对正常小鼠淀粉和蔗糖负荷后对血糖的影响。

实验例3对正常小鼠淀粉负荷后血糖的影响

样品和阳性对照组(阿卡波糖)剂量均为10mg/kg，结果表明白树总生物碱对正常雄性ICR小鼠口服淀粉耐量均有明显影响，且作用强度与阿卡波糖相当。

表3本发明白树总碱对正常雄性ICR小鼠口服淀粉耐量的影响

^**与Nor组相比，P＜0.01；^***与Nor组相比，P＜0.001。

实验例4对正常小鼠蔗糖负荷后血糖的影响

样品和阳性对照组(阿卡波糖)剂量均为10mg/kg，结果表明本发明制备的白树总生物碱对正常雄性ICR小鼠口服蔗糖耐量有明显影响，且作用强度与阳性对照药阿卡波糖相当。

表4本发明的白树总生物碱对正常雄性ICR小鼠口服蔗糖耐量的影响

^*与Nor组相比，P＜0.05；^**与Nor组相比，P＜0.01；^***与Nor组相比，P＜0.001。^*，与Nor组相比，P＜0.05，^**，与Nor组相比，P＜0.01，^***，与Nor组相比，P＜0.001。

Claims

1.一种白树总生物碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(2)将步骤(1)中的滤液在常压或减压下加热浓缩，得浓缩液；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中的醇类溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或它们的混合物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其中所述的醇类溶剂优选为乙醇。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其中提取溶剂优选为水。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中提取溶剂的用量为白树药材重量的5至15倍。

6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法，其中的提取方式为冷浸提取、温浸提取、回流提取、超声提取或微波提取。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(1)的提取过程可以重复1至4次，然后合并所得滤液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述提取是在60℃至溶剂的回流温度的范围内进行。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(3)中加入的醇类溶剂的量为使醇的体积百分比为40％至80％。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(4)中的阳离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强酸型树脂，其型号选自001×4、001×7、001×14、Amberlite IR 120、Dowex 50×4和Zerolit 225。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(4)中所述的碱性水溶液选自氨水或二乙胺、吡啶、2-甲基吡啶、三甲基吡啶或N-乙基吗琳的水溶液，浓度为0.2至2N。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其中步骤(4)中所述的碱性水溶液优选为1N的氨水。

13.根据权利要求1所述的制备方法，其中步骤(5)中所述的阴离子交换树脂为交联聚苯乙烯系的强碱型树脂，其型号选自201×4、201×7、Amberlite IRA-401和Dowex 1×4。

14.根据权利要求1至13任一项所述的制备方法得到的白树总生物碱。

15.一类多羟基生物碱化合物，其为：

16.权利要求15所述的多羟基生物碱的制备方法，其包括：将权利要求14所述的白树总生物碱用Dowex 50×4强酸性阳离子树脂分离，0.5N氨水洗脱，分离得到五个部分；然后，将每个部分依次经强碱性阴离子树脂Dowex1×2，用蒸馏水洗脱；羧甲基葡聚糖凝胶C-25(CM Sephadex C-25)，0.01N氨水洗脱；弱酸型阳离子交换树脂Amberlite CG-50，水洗脱；可分离得到权利要求15所述的化合物1-17。

17.一种具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的药物组合物，其特征在于含有有效剂量的权利要求14所述的白树总生物碱以及药学上可接受的载体。

18.一种具有糖苷酶或糖基转移酶抑制活性的多羟基生物碱药物组合物，其包含至少一种选自权利要求15所述的化合物以及药学上可接受的载体。

19.权利要求14所述的白树总生物碱在制备预防和/或治疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。

20.权利要求15所述的多羟基生物碱化合物在制备预防治和/或疗糖尿病、肥胖症、高血脂、病毒感染性疾病及溶酶体贮积症的药物中的应用。