CN102432483A - 乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法及其药物用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法及其药物用途,其制备步骤为:(1)将乙酸与左卡尼汀碱混合搅拌制备左卡尼汀碱的乙酸溶液,乙酸与左卡尼汀碱的质量比为1∶0.6-1.2;(2)将盐酸与乙酰氯混合搅拌制备酰化试剂,盐酸与乙酰氯的质量比为1∶2-4;(3)将上述左卡尼汀碱的乙酸溶液与酰化试剂混合进行酰化反应制备乙酰左卡尼汀盐酸盐,本发明方法易于操作、无废气产生、成本较低。以乙酰左卡尼汀盐酸盐为有效成分的药物用于治疗外周神经干或神经根的机械性和炎症性损伤,效果良好。
Description
技术领域
本发明涉及药物技术领域,特别涉及一种乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法及其药物用途。
背景技术
外周神经病变有多种类型,总体特征为一根或多根神经干的感觉和运动神经功能失调。引起外周神经病变的原因有多种,包括糖尿病性外周神经病变、化疗药物的神经毒性引起的外周神经病变以及HIV感染引起的外周神经病变等。
糖尿病性外周神经病变是由于糖尿病所引起的多种神经系统病变,是糖尿病慢性并发症中发病率最高的一种。糖尿病人由于血糖长期过高,从而使神经系统发生变性,另外再加上糖尿病微血管病变造成的局部缺氧,最终导致神经细胞和神经纤维被破坏,并出现糖尿病神经病变相应的症状。主要包括中枢性和外周性神经病变两大类,其中以外周性神经病变比较常见。糖尿病性外周性神经病变包括脑神经病变、运动神经病变、感觉神经病变以及植物神经病变4种。颅神经病变在临床上较为少见,病人可出现眼肌麻痹,其中以动眼神经不全麻痹最为常见,症状一般在出现后6-12周左右可逐渐缓解。外周运动神经对称性多发性病变临床症状以运动障碍为主,表现为全身乏力,肌肉萎缩,上肢最常受累的神经为臂丛神经及正中神经,下肢则以坐骨神经、股神经、闭孔神经的损害较多见。外周感觉神经对称性多发性病变临床上主要表现为双侧对称的远端感觉障碍,如出现双下肢麻木、针刺感或烧灼样感觉异常,甚至会出现刀割样疼痛、自发性疼痛或闪电痛,但当受到冷热刺激或刺伤等外界刺激时,反而没有异常的感觉。症状一般是下肢比上肢重。植物神经病变临床表现包括交感神经或副交感神经异常相关的症状,如排汗功能障碍,主要表现为头面部和躯干多汗,四肢不出汗,又或者半身出汗;出现胃肠功能紊乱的病人会经常感到腹胀,并且会有大便失常,便秘和腹泻交替等症状;而有血管运动障碍的病人心率会一直很快,仰卧时血压高但起立后血压马上下降,甚至会出现头晕、跌倒;另外,有的病人会出现排尿障碍或小便滴漓不尽,甚至阳痿和不育等症状。
糖尿病性外周神经病变治疗方法较多,但尚无被充分肯定的特效药物。
化疗引起的外周神经病变是较严重的临床问题。它的发作可能严重影响癌症患者的生活质量并引起长期不适。常用的抗肿瘤药物如长春生物碱,紫杉醇,铂化合物和沙利度胺引起累积的剂量依赖性毒性,有时引起永久毒性。尽管实际意义的剂量限制很少,药物引起的感觉和运动神经病变具有临床意义,可能会致残,引起永久性不适对患者的生活质量产生负面影响。此外,高剂量的化疗和高强度的给药增加了神经病变的危险。紫杉烷类单剂量和累积剂量给药引起对称性外周感觉神经功能障碍,特征为大纤维的敏感度下降(震颤),频率大于小纤维的敏感度(疼痛,温度)。深腱反射常受到影响导致远端踝反射的下降或消失。轻度的感觉症状通常随着剂量的减少而改善,但较严重的神经症状会持续较长时间,即使停止治疗。运动神经病变很少被认识。紫杉醇的神经病变作用在短时间输注给药后最为突出,随着给药强度的增加更为频繁,如每周定期给药,而目前每周给药被认为是紫杉醇最成功的给药方法。顺铂引起外周感觉神经轴突性神经病变影响大直径和小直径感觉纤维。在累积给药300mg/m2后通常引起典型的临床迹象和症状,且神经病变会持续数年。
目前,最有效控制药物引起的神经病变的方法是限制总剂量,或减少单次剂量或在症状缓和时停药。然而,数年来人们都在试图用药物干涉来防止或减轻化疗引起的神经病变。CIPN的各种临床实践仅限于对感觉异常和疼痛的对症治疗。这些方法,包括离子通道阻滞剂和三环抗抑郁药,成功率非常有限。最近,在大型临床试验中评价了ORG2766,阿米斯丁,还原型谷胱甘肽,钙和镁输注及谷氨酰胺的作用。结果不相一致,需要进一步对这些方法进行评价。
HIV感染引起的神经病变,1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)感染可能通过逆转录病毒的神经毒性直接影响或通过危害免疫系统而间接影响中枢和外周神经系统。关于外周神经系统损伤,5%和20%的HIV-1患者表现出外周神经病变,事实上,在尸检中所有的HIV-1病例都能监测到外周神经损伤。抗HIV-1药物,尤其是去羟肌苷(DDI),扎西他滨(DDC)和司他夫定(d4T)可能引起多发性神经病变。HIV-1感染可能引起不同形式的外周神经病变:末梢对称性多发性外周神经病变(DSP),伴有疼痛,感觉异常,灼烧感和远肢麻木。脱髓鞘炎症性多发神经病变,伴有肌无力和远肢感觉损伤。多重单一神经病变,伴有感觉-运动神经病变病灶。渐进性神经根病变,伴有远肢肌无力,疼痛和感觉异常及尿潴留。
针对于上述外周神经病变,普遍使用的治疗方法都有较大的副作用,因此需要寻找一种能够有效治疗这些疾病的有效方法。
乙酰左卡尼汀盐酸盐,又名:乙酰肉毒碱盐酸盐,英文名称:L-Acetylcarnitine Hydrochloride
乙酰左卡尼汀是三甲基氨基酸酯,它经由乙酰左卡尼汀转移酶在人体的脑、肝脏处被合成。目前,左卡尼汀及其衍生物均为公知化合物,在临床上主要用于治疗各种原因导致的肉碱缺乏,是FDA公认的安全物质。它能够促进线粒体在脂肪酸氧化过程中对乙酰辅酶A的摄取,增加乙酰胆碱的生成,并刺激蛋白质和膜磷脂的合成。乙酰左卡尼汀盐酸盐能够迅速通过血脑屏障,改善神经能量,修复神经作用机制,调节中枢神经系统中乙酰胆碱的生成,能够有效治疗和预防老年性痴呆,其临床应用多采用盐酸盐形式,即乙酰左卡尼汀盐酸盐。近年来,研究报道,乙酰左卡尼汀对神经有一定的保护作用。
目前左卡尼汀盐酸盐的制备方法,有生物发酵法和合成法,但大部分还是采用合成方法,瑞士《化学学报》上报道的方法是将乙酰氯和冰醋酸在80℃搅拌加热3小时后,加左旋肉碱继续反应1小时,蒸出过剩冰醋酸和乙酰氯,得粗品乙酰左卡尼汀盐酸盐,然后用异丙醇进行重结晶,制得合格产品。该方法存在3个不足:冰醋酸耗量大,成本高;析晶需先减压回收过量乙酰氯和冰醋酸,因受热时间长,易产生副反应,如:发生消除反应,生成巴豆甜菜碱;重结晶用无水异丙醇为溶媒,溶解度低,影响重结晶产品质量。
国内有专利报道左卡尼汀盐酸盐的制备方法采用以左卡尼汀内盐为起始原料、冰醋酸为溶媒,在催化剂作用下加入乙酰氯、保温反应2-5小时,降温至-5℃-0℃,析晶、过滤、洗涤、干燥,得粗品左卡尼汀盐酸盐,然后加适量有机溶媒使之全溶,加碳脱色、过滤、降温至-5℃-0℃,保温1-5小时过滤,洗涤、干燥、得精品乙酰左卡尼汀盐酸盐。该方法中使用催化剂,易造成产物的消旋,而手性药物对于光学纯度的要求是很高的,不易操作。
发明内容
本发明的目的是提供一种易于操作、无废气产生、成本较低的乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法及其药物用途。
为解决上述技术问题,采用如下技术方案:
本发明采用如下步骤:
(1)制备左卡尼汀碱的乙酸溶液:在氮气存在的条件下,将乙酸与左卡尼汀碱混合搅拌,乙酸与左卡尼汀碱的质量比为1∶0.6-1.2;
(2)制备酰化试剂:在氮气存在的条件下,将盐酸与乙酰氯混合搅拌,盐酸与乙酰氯的质量比为1∶2-4;
(3)制备乙酰左卡尼汀盐酸盐:将上述左卡尼汀碱的乙酸溶液与酰化试剂混合进行酰化反应,取反应溶液进行高效液相色谱分析,当左卡尼汀碱的剩余量小于或等于原来自身质量的5%时,进行结晶、离心过滤、洗涤、干燥得乙酰左卡尼汀盐酸盐。
步骤(1)的温度条件为40-45℃。
步骤(3)中酰化反应的初始温度维持在30℃以下,结晶所用的试剂为乙酸乙酯,左卡尼汀碱与乙酸乙酯的质量比为1∶1-4,结晶温度为3-7℃。
步骤(3)中洗涤所用的试剂为乙酸乙酯。
步骤(3)中干燥温度为50-80℃,时间为25-40小时。
以乙酰左卡尼汀盐酸盐为有效成分的药物用于治疗外周神经干或神经根的机械性和炎症性损伤。
本发明的积极效果如下:
本发明制备乙酰左卡尼汀盐酸盐的方法,以左卡尼汀内盐为起始原料,在无催化剂存在时,分别制备左卡尼汀基的乙酸溶液和酰化试剂,常压反应便可直接析晶获得乙酰左卡尼汀盐酸盐粗品,然后经重结晶得成品,该方法条件温和,反应安全,无废气产生,易于操作,成本较低。
以乙酰左卡尼汀盐酸盐为有效成分的药物对外周神经干或神经根的机械性和炎症性损伤有较好的疗效,耐受性较好。乙酰左卡尼汀对单一和多神经病变显示出保护作用,外源性乙酰左卡尼汀给药使中枢神经系统中神经生长因子水平升高,乙酰左卡尼汀给药降低了动物模型中顺铂和紫杉醇给药的神经毒性,临床前试验显示乙酰左卡尼汀降低了顺铂和紫杉醇引起的外周神经毒性而不影响其抗肿瘤作用,在紫杉醇,顺铂,奥沙利铂或长春新碱致外周神经病变小鼠和大鼠模型中,乙酰左卡尼汀可保护多种器官避免神经病变并改善感觉神经传导。
具体实施方式
本发明乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法反应原理如下:
用乙酰氯将溶解在乙酸中的左卡尼汀内盐进行酰化,加入乙酸乙酯后,乙酰左卡尼汀盐酸盐从溶液中结晶析出,离心干燥后得到纯化的乙酰左卡尼汀盐酸盐。化学反应式如下:
下面列举几种具体实施例详述其过程。
实施例1:
(1)制备左卡尼汀碱的乙酸溶液:采用3000升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。向反应器内加入800kg乙酸,再向反应器内加入960kg左卡尼汀碱,开始搅拌反应器。将反应器内部温度设定在40℃,保持悬浊直至完全溶解。
(2)制备酰化试剂:采用6000升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。加入600kg乙酰氯和200kg盐酸,开始搅拌,并通过冷却夹套冷却反应器至30℃以下。
(3)酰化反应:将左卡尼汀碱的乙酸溶液缓慢转移至装有酰化试剂的反应器中。由于放热反应,温度升高,因此初始温度必须保持在30℃以下。
(4)反应的控制:在此阶段,取反应液进行高效液相色谱(HPLC)分析。当左卡尼汀碱的剩余量保持在小于或等于原来质量的5%时,则开始进行结晶的步骤。本实施例中所用的HPLC检测条件为:μBondapak-NH210μm(300×3.9mm)型色谱柱,检测器为UV,Waters mod.486或等效装置;流速:1.0mL/min;流动相:0.05M KH2PO4/CH3CN 35/65(v/v);pH约5.6;检测波长:205nm。
(5)结晶:将2700kg乙酸乙酯加入乙酰左卡尼汀盐酸盐中,使乙酰左卡尼汀盐酸盐结晶,得到粗乙酰左卡尼汀盐酸盐,将悬浊液冷却至5℃。
(6)离心:在氮气覆盖下将悬浊液用离心干燥机过滤,过滤物(乙酰左卡尼汀盐酸盐及少量杂质)在反应器内用适量乙酸乙酯洗涤。
(7)干燥:将洗涤后的产物加入干燥器中,在60℃下真空干燥30小时,得到乙酰左卡尼汀盐酸盐,计算最终收率为96%。
实施例2:
(1)制备左卡尼汀碱的乙酸溶液:采用2500升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。向反应器内加入600kg乙酸,再向反应器内加入540kg左卡尼汀碱,开始搅拌反应器。将反应器内部温度设定在42℃,保持悬浊直至完全溶解。
(2)制备酰化试剂:采用5000升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。加入300kg乙酰氯和150kg盐酸,开始搅拌,并通过冷却夹套冷却反应器至30℃以下。
(3)酰化反应:将左卡尼汀碱的乙酸溶液缓慢转移至装有酰化试剂的反应器中。由于放热反应,温度升高,因此初始温度必须保持在30℃以下。
(4)反应的控制:在此阶段,取反应液进行高效液相色谱(HPLC)分析。当左卡尼汀剩余的量保持在小于或等于自身质量的5%时,则开始进行结晶的步骤。本实施例中所用的HPLC检测条件为:MC Pack NH2色谱柱;检测器为UV,Waters mod.486;流动相:0.05M KH2PO4/CH3CN 35/65(v/v);流动相pH4.0;检测波长:205nm。
(5)结晶:将540kg乙酸乙酯加入乙酰左卡尼汀盐酸盐中,使乙酰左卡尼汀盐酸盐结晶,得到粗乙酰左卡尼汀盐酸盐,将悬浊液冷却至7℃。
(6)离心:在氮气覆盖下将悬浊液用离心干燥机过滤,过滤物(乙酰左卡尼汀盐酸盐及少量杂质)在反应器内用适量乙酸乙酯洗涤。
(7)干燥:将洗涤后的产物加入干燥器中,在50℃下真空干燥25小时,得到乙酰左卡尼汀盐酸盐,计算最终收率为97%。
实施例3:
(1)制备左卡尼汀碱的乙酸溶液:采用4000升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。向反应器内加入1000kg乙酸,再向反应器内加入600kg左卡尼汀碱,开始搅拌反应器。将反应器内部温度设定在45℃,保持悬浊直至完全溶解。
(2)制备酰化试剂:采用8000升的带有恒温外套的耐腐蚀反应器,如搪瓷反应器,用氮气覆盖反应单元。加入960kg乙酰氯和240kg盐酸,开始搅拌,并通过冷却夹套冷却反应器至30℃以下。
(3)酰化反应:将左卡尼汀碱的乙酸溶液缓慢转移至装有酰化试剂的反应器中。由于放热反应,温度升高,因此初始温度必须保持在30℃以下。
(4)反应的控制:在此阶段,取左卡尼汀样品进行高效液相色谱(HPLC)分析。当左卡尼汀剩余的量保持在小于或等于5%时,则开始进行结晶的步骤。本实施例中所用的HPLC检测条件为:C18柱;检测器为UV,Waters mod.486;流动相:甲醇/庚烷磺酸钠980/20(v/v);检测波长:225nm。
(5)结晶:将2400kg乙酸乙酯加入乙酰左卡尼汀盐酸盐中,使乙酰左卡尼汀盐酸盐结晶,得到粗乙酰左卡尼汀盐酸盐,将悬浊液冷却至3℃。
(6)离心:在氮气覆盖下将悬浊液用离心干燥机过滤,过滤物(盐酸乙酰左卡尼汀及少量杂质)在反应器内用适量乙酸乙酯洗涤。
(7)干燥:将洗涤后的产物加入干燥器中,在80℃下真空干燥40小时,得到乙酰左卡尼汀盐酸盐,计算最终收率为94%。
以乙酰左卡尼汀盐酸盐为有效成分的药物组成为:乙酰左卡尼汀盐酸盐500-600mg,聚维酮40-60mg,微晶纤维素40-50mg,硬脂酸镁5-10mg,纤维醋法酯20-30mg,邻苯二甲酸二乙酯5-10mg,二甲硅油0.5-2mg。其中聚维酮为粘合剂;微晶纤维素为稀释剂和崩解剂;硬脂酸镁为润滑剂;包衣液中纤维醋法酯为肠溶性成膜材料;邻苯二甲酸二乙酯为增塑剂;二甲硅油为包衣液中的抗粘结剂,润滑剂,乙酸乙酯和丙酮为溶剂,溶解成膜材料纤维醋法酯和增塑剂邻苯二甲酸二乙酯,在成品中不含有。
下面通过实施例详述其制备过程。
实施例4:
药物制备过程为常用的片剂生产工艺,步骤如下:
a)称取各组分原料:乙酰左卡尼汀盐酸盐590g,聚维酮56g,微晶纤维素47g,硬脂酸镁7g,纤维醋法酯22.5g,邻苯二甲酸二乙酯9.4g,二甲硅油0.92g。称重在带有高效滤器(DOP检验不低于99.997%)的层流罩下操作。
b)制备粘合液:将56g聚维酮和1200倍体积的纯化水加入不锈钢溶解罐中,在室温下搅拌至聚维酮完全溶解,得到粘合剂溶液。
c)活性成分的微粉化:用装有1532/0020筛的Fitz-Mill粉碎机将590g乙酰左卡尼汀盐酸盐微粉化,并收集在强力混合机中。
d)制粒:将微晶纤维素过18目筛,将乙酰左卡尼汀盐酸盐,微晶纤维素转移至流化床制粒机中,加热约10min,喷(b)步骤得到的聚维酮粘合剂溶液,制粒50min。将其干燥,直至用Karl Fischer自动滴定仪检查水分不超过2.1-2.2%。冷却后,再次测定水分不超过2.1-2.2%。
e)整粒:过0020/1532筛的混合机整粒。
f)与润滑剂混合:将颗粒和7g硬脂酸镁(预先过60目筛)加入混合机中混合。
g)压片:将最终得到的混合物用100,000片/小时的速度用8.5×17.0mm的椭圆形冲压片。在压片开始时取连续得到的50片,检查外观,应为白色椭圆形片。压片中每隔30分钟取20片分别用电子天平称重。每2小时取两片用测径器测量厚度。在压片开始和结束时取20片用脆碎度检查仪检测脆碎度。将药片收集至洁净的聚乙烯袋中置于密闭容器,标明品名和批号。
h)制备包衣液:检查原料标签和称重标签,所有的操作均在防爆室中进行,检查设备的洁净度。将22.5g纤维醋法酯和定量的丙酮加入溶解罐中,二者的质量比一般约为1∶8,搅拌1小时,再加入约为纤维醋法酯7.4倍质量的乙酸乙酯持续搅拌1小时后加入9.4g邻苯二甲酸二乙酯和0.92g二甲硅油,持续搅拌至所有成分完全溶解。检查溶液的最终重量并分为两等份,包衣两批相应的子批次。
i)包衣:将片心置于自动包衣锅内,温度调至30℃。将所有参数设定在预定值,在搅拌下喷入包衣液,直至重量增至30mg。包衣后,将包衣片干燥并冷却至室温。将包衣片收集至洁净的聚乙烯袋中并置于塑料容器中,标明产品名称和批号。收集质量控制的样品。
j)包装:初级包装,用泡罩包装机在铝箔上形成空穴以容纳药片。次级包装,装盒机将3片泡罩卡和一张说明书装入每个盒中。将小盒装入印有品名,批号,有效期和目的地的纸箱中。
以上所有操作在温度湿度可控的室内进行。温度保持在22-26℃,相对湿度保持低于30%。
本发明所述的药物为白色薄膜包衣肠溶片剂,用于口服。
本发明所述药物直接接触包装选用泡罩式初级包装,将片剂单个包装,使每个药片均处于密封状态。
以下通过不同的试验例来证明本发明乙酰左卡尼汀盐酸盐药物的积极效果。
试验例1:盐酸乙酰左卡尼汀长期治疗对链唑霉素-糖尿病大鼠糖尿病性外周神经病变的作用。
1、试验方法:
本试验评价了盐酸乙酰左卡尼汀长期治疗(12周)对糖尿病Sprague-Dawley大鼠的外周和自主神经病变的治疗作用。三组大鼠分别接受:无药物治疗(正常组);单剂量链唑霉素(50mg/kg静脉注射)致糖尿病(糖尿病组);单剂量的链唑霉素继之以12周的盐酸乙酰左卡尼汀50mg/10ml/kg/天腹腔注射(糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组)。
在盐酸乙酰左卡尼汀治疗的12周中的不同时间对下列疗效指标进行评价:
初级治疗指标:神经肌肉传导速度(NMCV);肌肉收缩力(MCF);运动协调;肠组织中的神经肽。研究盐酸乙酰左卡尼汀链唑霉素对糖尿病大鼠模型的作用的理论基础是根据先前的试验盐酸乙酰左卡尼汀能够:促进细胞内细胞器间代谢能量和乙酰基的转运;控制乙酰辅酶A(乙酰CoA)的可用性从而在碳水化物(能量),脂质(能量和膜)及氨基酸(蛋白质代谢)中起关键作用。对神经系统的衰退起有益作用,表现为大鼠的老年性认知缺损,形态学和组织学变化和神经内分泌参数的好转。据诊断与统计手册第3版(DSM-III)所述,可延缓神经变性痴呆患者的认知衰退促进坐骨神经横断后的再生。
二级疗效指标:坐骨神经轴突;组织生化指标;各组织中的卡尼汀;血液生化指标;卡尼汀和代谢变量;体重;摄食;饮水。神经病变状态表现为NMCVH和MCF的下降;相对于未经治疗的糖尿病盐酸乙酰左卡尼汀的治疗对这些功能的促进,表明了神经病变状态的好转。神经功能的变化与神经的形态学部分相关;因此检查坐骨神经轴突能够帮助了解影响神经传导的作用机制。糖尿病大鼠的自主神经病变表现为肠组织内神经肽浓度的变化。盐酸乙酰左卡尼汀治疗对这些状况的改善显示出自主神经病变的好转。
2、实验结果:
糖尿病后糖尿病组的平均NMCV显著低于正常组(-11%,p≤0.05)。患糖尿病后10周显著性水平更高(-17%,p≤0.05)(表1)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组在患糖尿病后5周NMCV显著高于糖尿病组(+19%,p≤0.01)。10周后显著性差异更大(+41%,p≤0.001)。糖尿病后5和10周糖尿病组的MCF明显低于正常组(分别为-23%和-30%)尽管这些差异未达到显著性水平。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组在5和10周的MCF低于正常组(分别为-8%和-19%),但高于糖尿病组(分别为+21%和+15%)。这些差异均未达到显著性水平(表2)。
表1:盐酸乙酰左卡尼汀治疗(50mg/kg/天i.p.4和9周)对链唑霉素糖尿病SD大鼠的神经肌肉传导速度(NMCV)的作用
注:(1)与糖尿病组的差异的Student’s t检验:*p≤0.05;◇p≤0.01;p≤0.001;
(2)圆括号内为动物数。
表2:盐酸乙酰左卡尼汀(50mg/kg/天i.p.4和9周)对链唑霉素糖尿病SD大鼠的肌肉收缩力(MCF)的作用
注:(1)数据为患糖尿病5和10周记录的均值±SE;
(2)与糖尿病组的差异的Student’s t检验:无显著性;
(3)圆括号内为有效试验动物数。
各动物下落的次数及在转轴上停留的时间:正常组,糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的完成试验的动物的百分数分别为100%,62.5%和80%,而无法完成试验的动物的百分数分别为0%,37.5%和20%(表3)。正常组和糖尿病组动物有显著性差异(Fisher氏精确检验:p≤0.02)正常组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组无显著性差异(表3)中值与四分位数间距见表3。得分的统计学评价(Mann-Whitney“U”检验)可见正常组与糖尿病组有显著性差异,但正常组与糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组及糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组组与糖尿病组之间无显著性差异。
表3:盐酸乙酰左卡尼汀治疗(50mg/kg/天i.p.9周)对链唑霉素糖尿病SD大鼠的运动协调性(旋转试验)的作用
注:(1)圆括号内为四分位间距;
(2)分数中值及能够和不能完成试验的动物数及百分数。
(3)Fisher’s精确检验:正常组比糖尿病组p≤0.02;正常组比糖尿病组糖尿病组比糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组无显著性。
患糖尿病后10周糖尿病组的动物周轴突总面积显著低于正常组(p≤0.05)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的轴突面积趋向于增大,但未达到显著性水平。糖尿病组面积属于最小等级0-18μm2的轴突数大于正常组。用轴突总数的百分数表示,正常组,糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组属大小等级属于0-18μm2的轴突分别为58.21%,71.33%和65.69%。组间差异未达到显著性水平。个体轴突面积大小等级值占轴突总数的百分数。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的数据含有反常值严重影响了组内均值使统计分析无意义(未考虑>54μm2的等级,由于属于这一等级的轴突数很少)。对0到18μm2,18到36μm2和36到54μm2的大小等级的分析发现正常组动物的个体差异最大,在36到54μm2尤为明显,在此等级中动物又被分为两个亚等级,分别为上限和下限;糖尿病组的值较为均一。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组有较大的个体差异但与盐酸乙酰左卡尼汀治疗无明显的关系。
NMCV和轴突面积的关系:
经过9周的治疗后(患糖尿病后)糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的NMCV的个体值显著较高,且范围窄于糖尿病组。因此在此种情况下盐酸乙酰左卡尼汀似乎充当了一种“序参数”;NMCV有所增加变化有所减小。
正常组与糖尿病组神经传导的差异比形态学表现得更为明显。正如预期的那样,正常组和糖尿病组动物中“小”面积轴突与NMCV呈负性相关(r=-0.82),表明NMCV受轴突面积的影响。然而,在糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组中这两个变量无相关性,每只动物均有很高的NMCV,与轴突面积无关。在正常组和糖尿病组中“大”轴突面积出现的频率越大,NMCV也越大(r=0.90)。且这种正性相关具有显著性(p≤0.01)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的变量无这种相关性。
总之,盐酸乙酰左卡尼汀可组织或逆转STZ-糖尿病大鼠模型中糖尿病性神经病变的NMCV损害。这种作用还伴随着对糖尿病机性自主神经病变的MCF,运动协调性和肠内神经肽含量的的改善。
试验例2:盐酸乙酰左卡尼汀长期治疗对四氧嘧啶糖尿病大鼠外周神经病变的作用
1、试验方法:
本试验评价了对Sprague-Dawley大鼠腹腔注射剂量为50mg/kg/天的盐酸乙酰左卡尼汀11周的疗效,大鼠在治疗开始前1周用四氧嘧啶(100mg/kg)致糖尿病。实验动物分为三组:对照组,枸橼酸缓冲液给药1周后,随后的11周动物腹腔注射(i.p.)10mg/kg/天的注射用水;糖尿病组,在诱导患糖尿病1周后,大鼠在随后的11周内腹腔注射10mg/kg/天的注射用水;糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组:诱导患糖尿病1周后,大鼠在随后的11周内腹腔注射乙酰左卡尼汀的注射用水溶液50mg/kg。
本试验选择的疗效指标如下:
初级疗效指标:神经肌肉传导速度(NMCV);肌肉收缩力(MCF);运动协调性。
次级疗效指标:形态测量学;血液生化指标;组织生化指标。
2、实验结果:
治疗后4周记录的各组平均NMCV相近;正常组,糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组分别为44,46和49m/sec。治疗9周后(患糖尿病10周)糖尿病组的平均NMCV显著低于正常组(19%)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的平均NMCV高于正常组(+16%)显著高于糖尿病组(表4)。治疗9周测量MCF也有类似的情况。而平均MCF显著低于正常组(-33%),糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的相应值不仅显著高于糖尿病组(+78%)而且高于正常组(+20%)(表5)。
表4:盐酸乙酰左卡尼汀治疗(50mg/kg/天i.p.5和9周)对链唑霉素糖尿病SD大鼠的神经肌肉传导速度(NMCV)的作用
注:(1)与糖尿病组的差异的Student’s t检验:***p≤0.001,圆括号内为动物数;
(2)数据为患糖尿病5和10周记录的均值±SE,圆括号内数字代表有效试验动物数。
表5:盐酸乙酰左卡尼汀治疗(50mg/kg/天i.p.5和9周)对链唑霉素糖尿病SD大鼠的肌肉收缩力(MCF)的作用
注:(1)与糖尿病组的差异的Student’s t检验:***p≤0.001;圆括号内为动物数;
(2)数据为患糖尿病5和10周记录的均值±SE,圆括号内数字代表有效试验动物数。
治疗后9周(患糖尿病10周)糖尿病组中能够完成试验的大鼠百分数(-56.2%)显著低于正常组(100%)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组70%的动物能够完成试验,显著低于正常组,尽管优于糖尿病组单但未能达到显著性水平。评价个体得分时发现,糖尿病大鼠的表现显著低于正常组。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组与另两组之间无显著性差异。
对个体值的评价发现糖尿病组大鼠的表现显著差于正常组。而糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组和其它两组之间无显著性差异。
各组的组内平均坐骨神经轴突面积无显著性差异。然而,糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的轴突面积有大于正常组和糖尿病组的趋势(分别为+14.9%和+7.7%)
总之,在本试验中盐酸乙酰左卡尼汀治疗对四氧嘧啶糖尿病大鼠的NMCV和MCF有有益作用。对运动协调性无显著作用,尽管对两个标准之一有改善趋势。同样,盐酸乙酰左卡尼汀治疗后轴突面积趋向于增大。尚不明确盐酸乙酰左卡尼汀是否逆转了DPN引起的变化或阻止了变化的发生。据此,可推断盐酸乙酰左卡尼汀治疗对神经功能具有有益影响并对四氧嘧啶-糖尿病大鼠有神经保护作用。
试验例3:盐酸乙酰左卡尼汀治疗对大鼠肠自主神经病变的作用
1、试验方法:
本试验评价了盐酸乙酰左卡尼汀(ALCAR)长期治疗(12周)在化学物质致糖尿病的Sprague-Dawley大鼠模型中对糖尿病性自主神经病变的作用。大鼠模型的自主和外周神经出现了类似人体糖尿病的变化。
一次性注射四氧嘧啶引起大鼠糖尿病,剂量为100mg/kg已知该剂量能引起大鼠糖尿病。1周后,用剂量为300mg/kg/天的盐酸乙酰左卡尼汀治疗,通过饮用水给药,持续12周。
观察指标:患糖尿病13周后(治疗12周)检查所有组动物的胃(仅检查Met-Ent),十二指肠,空肠,回肠,盲肠,结肠和直肠样本组织中Met-Ent(甲硫氨酸-脑啡肽),SP(P物质)和VIP(血管活性肠肽)浓度。VIP浓度仅在十二指肠,盲肠和结肠中测定,由于在大鼠中这些肠段受糖尿病影响最多最严重。糖尿病1,3,5,8和13周后(治疗0,2,4,7和12周);对糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组进行检测;在1和13周后对正常组进行检测。在试验开始时和患糖尿病的1,3,5,8和13周(治疗0,2,4,7和12周);对所有组进行体重检查。
2、实验结果:
Met-Enk浓度:糖尿病组,胃,十二指肠,空肠,回肠,盲肠,结肠和直肠中平均Met-Enk浓度显著低于正常组相应组织中的浓度。糖尿病组动物Met-Enk水平下降情况:
胃 | -14% | p≤0.05 |
十二指肠 | -43% | p≤0.01 |
回肠 | -44% | p≤0.01 |
盲肠 | -52% | p≤0.01 |
结肠 | -30% | p≤0.01 |
直肠 | -41% | p≤0.01 |
糖尿病组空肠样本中Met-Enk浓度低于正常组(-12%)但无显著性差异。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的胃,回肠,盲肠和结肠组织样本中Met-Enk浓度显著高于糖尿病组的相应组织。糖尿病组与糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的差异如下:
胃 | +25% | p≤0.001 |
回肠 | +41% | p≤0.05 |
盲肠 | +35% | p≤0.001 |
结肠 | +22% | p≤0.05 |
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组胃,空肠和结肠样本中Met-Enk浓度预正常组无显著性差异(表6)。
SP浓度:测定每组胃样本中的SP浓度(表7)。
糖尿病组的平均SP浓度显著低于正常组,如下:
空肠 | -35% | p≤0.05 |
十二指肠 | -40% | p≤0.001 |
回肠 | -50% | p≤0.01 |
盲肠 | -27% | p≤0.01 |
结肠 | -17% | p≤0.05 |
直肠 | -37% | p≤0.05 |
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的空肠,回肠,盲肠和结肠中平均SP浓度显著高于糖尿病组,如下:
十二指肠 | +33% | p≤0.05 |
回肠 | +56% | p≤0.001 |
盲肠 | +23% | p≤0.001 |
结肠 | +20% | p≤0.01 |
空肠和直肠中也有类似的升高但无显著性。所有组织中除了结肠中(-1%)平均SP浓度显著低于正常组。
VIP浓度:糖尿病组的十二指肠,盲肠和结肠组织样本中的平均VIP浓度显著高于正常组(表8),如下:
十二指肠 | +269% | p≤0.001 |
盲肠 | +66% | p≤0.01 |
结肠 | +389% | p≤0.05 |
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的十二指肠和结肠中的VIP浓度显著高于正常组,但盲肠中低于正常组。
十二指肠 | +184% | p≤0.01 |
盲肠 | -26% | p≤NS |
结肠 | +280% | p≤0.001 |
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的所有组织中的VIP浓度低于糖尿病组,但仅盲肠中达到显著性差异(-55%,p≤0.001)
血糖浓度:在诱导患糖尿病后1,3,5,8和13周糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的平均血糖浓度显著高于正常组(p≤0.001)。糖尿病组合糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的差异总体上未达到显著性水平,除了在第8周糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的血糖水平低于糖尿病组(-8%,p≤0.01)。
体重:糖尿病和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的平均体重增加始终显著低于正常组。在糖尿病的5,8和13周糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组显著低于糖尿病组(p≤0.01)。
动物行为,健康状况和死亡率:试验中没有动物因盐酸乙酰左卡尼汀给药而死亡。糖尿病组有6只动物糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组有3只动物因严重的糖尿病在患病第5周死亡。在第13周糖尿病组有1只动物死于麻醉。在治疗期间中大鼠的健康状况没有改变的迹象,整体行为也无变化。
本试验的主要结论是剂量为300mg/kg/天的盐酸乙酰左卡尼汀给药可阻止或减缓糖尿病大鼠的神经肽变化,尽管并非胃肠道的每一部分变化都具有显著性。因此盐酸乙酰左卡尼汀可能有益于治疗糖尿病引起的神经病变。
试验例4:盐酸乙酰左卡尼汀治疗对链唑霉素-糖尿病大鼠坐骨神经中卡尼汀和脂质浓度的影响
1、试验方法:
本试验评价了盐酸乙酰左卡尼汀(ALCAR)对糖尿病性外周神经病变(DPN)的作用,测定链唑霉素-糖尿病大鼠坐骨神经和血清中卡尼汀和脂质的浓度。两组大鼠接受:静脉注射50mg/kg的链唑霉素,一周后腹腔注射10ml/kg/天的生理盐水或10mg/kg/天的盐酸乙酰左卡尼汀,注射5周。另一组静脉注射枸橼酸盐缓冲液1周后开始腹腔注射10ml/kg/天的生理盐水,注射5周。
未治疗的大鼠患糖尿病6周后与正常组相比,卡尼汀浓度下降脂质浓度增加。用盐酸乙酰左卡尼汀治疗的糖尿病大鼠坐骨神经中卡尼汀浓度接近正常,而脂质浓度增加但低于未经治疗的糖尿病组。
观察指标:
(1)坐骨神经检查:在治疗期结束时,即患糖尿病后6周测定坐骨神经样本中的下列参数:
卡尼汀:游离卡尼汀,乙酰卡尼汀,长链卡尼汀和总卡尼汀;
脂质:鞘磷脂(SPH);卵磷脂(PC),磷脂酰肌醇+磷脂酰丝氨酸(PI+PS),磷脂酰乙醇胺(PE),脑苷酯(CER),羟化脑苷酯(CER-OH),胆固醇(CHOL),总磷脂(T-PLS)和T-PLS/CHOL(总磷脂/胆固醇)比。
(2)血清测定:在治疗期结束时即患糖尿病后6周,测定血液中下列浓度:
卡尼汀:游离卡尼汀,乙酰卡尼汀,长链卡尼汀和总卡尼汀;
脂质:胆固醇(CHOL),甘油三酯(TRI),磷脂(PLS)和葡萄糖。
(3)体重:在试验中测量个体体重。仅用试验结束时测得的体重值(患糖尿病6周)进行统计分析。
(4)摄食和饮水量:在试验中检测摄食和饮水量。
(5)行为和健康状况:试验中每日检测行为和健康状况。若发生死亡,则应查明原因。
2、实验结果:
(1)坐骨神经测定:
卡尼汀浓度:糖尿病组坐骨神经样本中的总卡尼汀,游离卡尼汀和乙酰卡尼汀浓度显著低于正常组(p≤0.001,)而两组中长链卡尼汀浓度无显著性差异。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组总卡尼汀和游离卡尼汀浓度显著低于正常组(分别为p≤0.05,p≤0.01),而乙酰卡尼汀浓度无显著性差异,糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的长链卡尼汀浓度显著高于正常组(p≤0.01)。然而,糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的总卡尼汀,游离卡尼汀,乙酰卡尼汀和长链卡尼汀浓度显著高于糖尿病组(分别为p≤0.001,p≤0.01和p≤0.05)。组间非胶原蛋白(NCP)浓度无显著性差异。
脂质浓度:糖尿病组的SPH、PC、PS+PI、PE、T-PLS显著高于正常组(分别为p≤0.05,p≤0.05,p≤0.01,p≤0.01)。两组间CER,CER-OH,CHOL或T-PLS/CHOL。糖尿病组的PC、PS+PI、PE、CHOL、CER和CER-OH低于糖尿病组但无显著性差异;SPH浓度显著低于正常组(p≤0.05)。
(2)血清测定:
卡尼汀浓度:糖尿病组的血清总卡尼汀低于正常组但无显著性,游离卡尼汀显著低于正常组(p≤0.01)长链卡尼汀高于正常组但无显著性,乙酰卡尼汀显著高于正常组(p≤0.01)。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组中,总卡尼汀浓度显祖高于糖尿病组(p≤0.05)但与正常组无显著性差异;游离卡尼汀和长链乙酰卡尼汀浓度显著高于糖尿病组(分别为p≤0.01和p≤0.05)。而乙酰卡尼汀非显著性高于糖尿病组。与正常组相比,游离卡尼汀浓度无显著性差异而长链卡尼汀和乙酰卡尼汀显著较高(分别为p≤0.05和p≤0.001).
脂质浓度:糖尿病组的甘油三酯浓度显著高于正常组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组(p≤0.05)。组间胆固醇和磷脂浓度无显著性差异。
葡萄糖浓度:在糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组中,葡萄糖浓度显著显著高于正常组。糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组无显著性差异。
(3)体重:糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的体重显著低于正常组。然而,糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组显著高于糖尿病组。(p≤0.05)。没有因盐酸乙酰左卡尼汀治疗引起的死亡。
总之,本试验的结果显示盐酸乙酰左卡尼汀对糖尿病大鼠的治疗使坐骨神经和血清中卡尼汀浓度完全恢复正常,并改善了脂质浓度。这些发现可部分解释其他试验中盐酸乙酰左卡尼汀对DPN和生物老化中外周神经功能和结构的改善作用。
试验例5:链唑霉素-糖尿病大鼠的外周神经病变:对比目鱼肌神经肌肉接头的形态学和形态测定学分析
1、试验方法:
本试验研究了口服盐酸乙酰左卡尼汀(ACLAR)对链唑霉素(STZ)-糖尿病SD大鼠比目鱼肌神经肌肉接头(NMJ)结构变化的影响。链唑霉素剂量为50mg/kg静脉注射。
初级疗效指标:在试验的9和17周(盐酸乙酰左卡尼汀治疗后8和16周,治疗开始于注射链唑霉素后1周)检查正常大鼠,糖尿病大鼠和盐酸乙酰左卡尼汀治疗(200mg/kg/天口服)的大鼠的比目鱼肌截面的NMJ形态。测定形态测量学变量终板长度(EPL)和神经末梢分支点数量(NTBP),用EPL×NTBP计算萌芽指数(SI)。
2、实验结果:
(1)形态学:
经过9和17周的试验,正常动物具有确定的神经末梢和大量轴突分支,在试验过程中未见显著性差异。试验9周后糖尿病大鼠的一些NMJ出现去神经化。在9和17周后糖尿病组大鼠的神经末梢变薄,轴突分支稀少。盐酸乙酰左卡尼汀治疗的糖尿病大鼠在糖尿病9和17周后(盐酸乙酰左卡尼汀治疗8和16周后)与正常组大鼠相比也出现神经末梢变薄,轴突分支变少。然而在9和17周的研究中糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组大鼠的轴突分支多于糖尿病组大鼠,且糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组大鼠的轴突分支在17周时大于9周时。
(2)形态测量学:
糖尿病组与正常组相比:糖尿病组大鼠在患糖尿病的第9周和17周EPL和NTBP均低于正常组。EPL的减少仅在第9周有显著性差异(-13%p≤0.02),而NTBP的下降在9和17周均有显著性差异(分别为-42%p≤0.001和-51%p≤0.001)。糖尿病组的SI在9和17周均有显著低于正常组(分别为-51.5%p≤0.01和-55%)。
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组与正常组相比:患糖尿病9和17周后盐酸乙酰左卡尼汀治疗的糖尿病大鼠的EPL非显著性地高于正常组。在9和17周NTBP均有显著下降(分别为-22%p≤0.02和-23%p≤0.02)但下降不如糖尿病组显著。在9和17周糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组大鼠相对于正常组SI有非显著性的下降。
糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组与糖尿病组相比:两组的EPL和NTBP在第9和时无显著性差异,EPL在17周也无显著性差异。而糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组在17周时NTBP显著高于糖尿病组(+59%p≤0.001)SI在9和17周均显著高于糖尿病组(分别为+84%p≤0.02和+76%p≤0.002)。
体重(BW)和比目鱼肌重量(SMW):在试验的9和17周糖尿病组大鼠(9周时:-50%,p≤0.01,17周时-41%,p≤0.001)和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组(9周时:-40%,p≤0.01,17周时-31%,p≤0.001)的体重显著低于正常组。9周(-39%,p≤0.01)和17周(-37%,p≤0.01)时糖尿病组大鼠的SMW显著低于正常组。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组在9周时(-34%,p≤0.02)糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组的SMW在17周有所下降(-20%)但与正常组无显著性差异。
糖尿病组和糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组大鼠的BM和SMW仅在试验的17周有显著性差异。盐酸乙酰左卡尼汀治疗的大鼠BW(+17%,p≤0.05)和SMW(+27%,p≤0.05)显著高于未经治疗的糖尿病大鼠。
在试验的9和17周组间SMW/BW比值无显著性差异。
动物行为及健康状况:动物行为及健康状况未受盐酸乙酰左卡尼汀治疗影响,盐酸乙酰左卡尼汀治疗未引起动物死亡。
本试验发现STZ-致糖尿病大鼠的比目鱼肌NMJ发生结构变化。并证实了对STZ致糖尿病的大鼠用盐酸乙酰左卡尼汀治疗8或16周可阻止或逆转比目鱼肌NMJ的结构变化。
试验例6:糖尿病大鼠坐骨神经和腰脊髓中P物质的含量:盐酸乙酰左卡尼汀的长期疗效
1、试验方法:
本试验评价了盐酸乙酰左卡尼汀长期治疗(7周)对化学致糖尿病的大鼠外周和中枢神经系统中神经肽,P物质的浓度的影响。SP是一种感觉神经肽。
3组SD大鼠分别接受无治疗,一次性皮下注射四氧嘧啶(100mg/kg)诱发糖尿病,或皮下注射四氧嘧啶后1周用盐酸乙酰左卡尼汀连续治疗7周,盐酸乙酰左卡尼汀通过饮用水给药剂量为150mg/kg/天。在诱发糖尿病后8周测定坐骨神经和腰脊髓中SP、体重和血糖浓度。
2、实验结果
SP浓度:糖尿病组的坐骨神经和腰脊髓中SP平均浓度显著(p≤0.001)低于正常组(分别为-52%和-32%)。与之明显相反的是,糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组坐骨神经和腰脊髓中SP平均浓度显著(p≤0.001)高于糖尿病组(分别为+88%和41%)(表1),与正常组无显著性差异。
体重及血糖浓度:在治疗期结束时,正常组的平均体重和血糖浓度分别显著(p≤0.001)高于和低于糖尿病组。糖尿病+盐酸乙酰左卡尼汀组和糖尿病组无显著性差异。
动物行为及健康状况:试验中动物整体行为和健康状况无变化。盐酸乙酰左卡尼汀治疗未引起动物死亡。
总之,本试验得出的最明显的结论是盐酸乙酰左卡尼汀治疗可阻止糖尿病大鼠SP浓度的减少因而可能有助于防止人体糖尿病中神经病变的发展。
以上所述,为本发明的较佳实施案例,并非对发明作任何限制,凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化,均仍属于本发明技术方案的保护范围内。
Claims (6)
1.一种乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法,其特征在于,其采用如下步骤:
(1)制备左卡尼汀碱的乙酸溶液:在氮气存在的条件下,将乙酸与左卡尼汀碱混合搅拌,乙酸与左卡尼汀碱的质量比为1∶0.6-1.2;
(2)制备酰化试剂:在氮气存在的条件下,将盐酸与乙酰氯混合搅拌,盐酸与乙酰氯的质量比为1∶2-4;
(3)制备乙酰左卡尼汀盐酸盐:将上述左卡尼汀碱的乙酸溶液与酰化试剂混合进行酰化反应,取反应溶液进行高效液相色谱分析,当左卡尼汀碱的剩余量小于或等于原来自身质量的5%时,进行结晶、离心过滤、洗涤、干燥得乙酰左卡尼汀盐酸盐。
2.根据权利要求1所述乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法,其特征在于,步骤(1)的温度条件为40-45℃。
3.根据权利要求1所述乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法,其特征在于,步骤(3)中酰化反应的初始温度维持在30℃以下,结晶所用的试剂为乙酸乙酯,左卡尼汀碱与乙酸乙酯的质量比为1∶1-4,结晶温度为3-7℃。
4.根据权利要求1所述乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法,其特征在于,步骤(3)中洗涤所用的试剂为乙酸乙酯。
5.根据权利要求1所述乙酰左卡尼汀盐酸盐的制备方法,其特征在于,步骤(3)中干燥温度为50-80℃,时间为25-40小时。
6.一种乙酰左卡尼汀盐酸盐的药物用途,其特征在于,以乙酰左卡尼汀盐酸盐为有效成分的药物用于治疗外周神经干或神经根的机械性和炎症性损伤。
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