CN102397460A

CN102397460A - 一种康尔心胶囊的制备方法

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Publication number: CN102397460A
Application number: CN2011103813556A
Authority: CN
Inventors: 王峰; 王琳; 张发成
Original assignee: Suzhou Paiteng Biomedical Technology Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Kangheng Chemical Co., Ltd.
Priority date: 2011-11-26
Filing date: 2011-11-26
Publication date: 2012-04-04
Anticipated expiration: 2031-11-26
Also published as: CN102397460B

Abstract

本发明涉及一种康尔心胶囊的制备方法，由下列步骤组成：取丹参，微波萃取，大孔吸附树脂纯化，得丹参醇提取物；取人参、麦冬，微波萃取，水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，大孔吸附树脂纯化，得参麦提取物；取上述丹参药渣、枸杞子、何首乌、山楂，CO₂超临界萃取，得超临界萃取物；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊。采用本发明制备的康尔心胶囊便于服用。

Description

一种康尔心胶囊的制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物的制备方法，尤其是一种中药的制备方法。

背景技术

康尔心胶囊收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第二册，由三七、人参、麦冬、丹参、枸杞子、何首乌、山楂七味药组成，具有益气活血，滋阴补肾，增加冠脉血流量，降血脂之功效。用于治疗冠心病，心绞痛，胸闷气短等症。

现有技术中，尚未有康尔心胶囊在治疗痛经方面的报道。

现有技术中，康尔心胶囊的制备采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者日用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种康尔心胶囊的制备方法，使其安全有效，方便服用。

为了解决上述技术问题，本发明提出了下述技术方案。

取丹参120g，粉碎，加入1.2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，分离药渣备用，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参醇提取物；取人参80g、麦冬80g，粉碎，混合，加入1.6L的80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，用水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，收集正丁醇液，减压回收溶剂并浓缩，加入到D102型大孔吸附树脂上吸附，35%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得参麦提取物，备用；取上述丹参药渣、枸杞子150g、何首乌120g、山楂230g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3-5%，萃取压力15-25MPa，温度40-60℃, CO₂流量1-3ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒重0.4g。

丹参微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。

CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。

CO₂超临界萃取的萃取压力20MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。

采用上述技术方案制备的康尔心胶囊，其作为制备治疗痛经药物的应用。

现有技术中，康尔心胶囊每次需服用4粒（相当于3g药材），而采用本发明制备而成的康尔心胶囊每次仅需服用1粒（相当于3g药材），在具有相似药理活性的前提下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。

试验一不同方法制备的康尔心胶囊中三七皂苷R1含量的比较。

1、仪器及试药

康尔心胶囊（超临界法，以下简称K-LJ，下同）：按实施例3方法制备。

康尔心胶囊（传统法K-CT，下同），按《卫生部药品标准中药成方制剂》第二册记载方法制备。

Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平。

三七皂苷R1对照品（中国药品生物制品检定所）。

2、方法

色谱条件 Kromasi C18色谱柱(4.6mm×200mm，5μm)；乙腈-水(19:81)流动相；流速1.0mL·min^－1，检测波长203nm。精密量取对照品溶液、供试品溶液各20μL。

溶液的制备取三七皂苷R1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的对照品溶液。分别取供品2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率55kHz），放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3、结果

试验结果见表1，结果表明采用本发明制备的康尔心胶囊中三七皂苷R1的含量(4.25mg/粒 )是采用传统法(1.01mg/粒)的4.2倍。

表1 不同方法制备的康尔心胶囊中三七皂苷R1的含量

样品	含量（mg/粒）
		K-LJ	4.25
K-CT	1.01

试验二不同方法制备的康尔心胶囊药效学比较。

1、抗心肌缺血作用

1.1 材料与方法

1.1.1 药品：康尔心胶囊（超临界法，以下简称K-LJ，下同）：按实施例3方法制备。

氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、游离脂肪酸(FFA)、过氧化脂质(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)测定试剂盒由南京建成生物科技有限公司生产。

1.1.2 动物：健康成年杂种犬，雌雄兼用，体重12-16kg，由中国药科大学实验动物中心部提供。

1.1.3 仪器：RM-6000型多道生理记录仪，日本光电公司。SC-3型电动呼吸机，上海医疗器械厂。EOS880型半自动血液生化分析仪，意大利。SSW电热恒温水槽，上海博迅实业有限公司。输液泵，保定兰格恒流泵有限公司。医学图像分析系统，成都泰盟科技公司。

1.1.4 方法：取杂种犬，随机分组，每组6只。假手术组，模型组，K-CT（给药剂量0.13g/kg，相当于人临床用量，即9g生药/日)、K-LJ 低、中、高剂量组(0.02、0.03、0.06g／kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即9g生药/日)组。犬用戊巴比妥钠(30.0 mg／kg)iv麻醉，背位固定，切开颈部皮肤，气管插管，连接电动呼吸机。于左侧第4肋间施开胸术，暴露心脏，剪开心包，分离冠状动脉左前降支主干中下1／3交界处，穿线以备结扎，用多点湿布式吸附法标测心外膜电图(EECG)，标测点24个，分正常区(对照点)，梗死边缘区和梗死中心区。术毕，稳定20min，记录各点EECG。除假手术组外，其余各组结扎冠状动脉，制备实验性急性心肌梗死模型。分离十二指肠给药，记录结扎即刻、给药后30、60、90、120、150、180、240、360 min各点EECG，以ST段升高总幅度(Σ-ST，mV)表示缺血程度；以ST 段升高≥2mV 的导联数(N—ST)表示缺血范围。记录360min后，从静脉取血，分离血清，用半自动血液生化分析仪测血清中CPK、LDH活性。根据试剂盒方法测定血清LPO水平及SOD、GSH—Px活性，按一次提取比色法测定FFA水平。取下心脏，沿冠状沟剪去大血管根部和心房，将左心室均匀横断切成5片，置于NBT 染液中，在37℃恒温水浴箱中染色15min。梗死区不着色，非梗死区被NBT染为蓝色。用医学图像分析系统测量心肌梗死面积。

1.1.5 统计学方法：数据以mean±s表示， SPSS11.0软件用单因素方差分析法进行统计学显著性分析。

1.2 、结果

1.2.1 对急性心肌梗死犬心肌梗死面积及血清CPK、LDH 活性的影响：试验结果表明，模型组动物较假手术组心肌梗死面积、CPK 、LDH活性明显升高，且具有非常显著性意义（P <0.01），表明造模成功。NBT染色法观察心肌缺血梗死面积的结果表明，K-LJ低、中、高剂量组和K-CT组的动物心肌梗死面积明显低于模型组 (P<0.05、0.01)。生化测试结果表明K-LJ低、中、高剂量组和K-CT组与模型组比较明显降低血清CPK、LDH 活性（P<0.05、0.01)。与K-LJ中剂量组相比，K-CT组的心肌梗死面积、CPK 、LDH活性无显著性差异（p>0.05）。试验结果见表2。

表2 不同方法制备的心宁片对急性心肌梗死犬心肌梗死面积与血清中CPK、LDH 活性的影响

与模型组比较：*P<0.05 ，**P<0.01。

1.2.2 对急性心肌梗死犬心肌缺血程度(Σ-ST)的影响：K-LJ低、中、高剂量组、K-CT组给药后30-360min作用明显(P<0.05、0.01)。与K-LJ中剂量组相比，K-CT组的Σ-ST无显著性差异（p>0.05）。试验结果见表3。

表3 不同方法制备的心宁片对急性心肌梗死犬Σ-ST的影响

与模型组比较：*P<0.05 ，**P<0.01。

1.2.3 对急性心肌梗死犬心肌缺血范围(N—ST)的影响：K-LJ低、中、高剂量组、CT组给药后30-360min作用明显(P<0.05、0.01)。与K-LJ中剂量组相比，K-CT组的N—ST无显著性差异（p>0.05）。试验结果见表4。

表4 不同方法制备的心宁片对急性心肌梗死犬N—ST的影响

与模型组比较：*P<0.05 ，**P<0.01。

1.2.4 对急性心肌梗死犬血清FFA、LPO 水平及SOD、GSH—Px活性的影响：K-LJ各剂量组和K-CT组与模型组比较明显降低血清FFA 及LPO 水平(P<0.05、0.01)，提高SOD 及GSH—Px 活性(P< 0.05、0.01)。与K-LJ中剂量组相比，K-CT组的FFA 及LPO 水平, SOD 及GSH—Px 活性无显著性差异（p>0.05）。试验结果见表5。

表5 不同方法制备的心宁片对急性心肌梗死犬血清FFA、LPO水平及SOD、GSH—Px活性的影响

与模型组比较：*P<0.05 ，**P<0.01。

上述结果表明，康尔心胶囊能显著减少缺血范围、降低缺血程度，降低血清CPK、LDH 活性，降低血清FFA 及LPO 水平，提高SOD 及GSH—Px 活性，上述作用是其治疗缺血性心脏病的药理学基础。在相应剂量下(相当于人临床用量，即9g生药/日),采用本发明制备的康尔心胶囊与采用传统方法者在抗心肌缺血活性方面无显著显著性差异。

2、抗模型动物痛经的作用。

2.1 材料与方法

2.1.1 药品：康尔心胶囊（超临界法，以下简称K-LJ，下同）：按实施例3方法制备。

己烯雌酚注射液，广州明兴制药厂生产；缩宫素注射液：上海禾丰制药有限公司；氯氟前列烯醇(PGF2a类似物)，上海市计划生育研究所；阿普唑仑片，上海医药(集团)有限公司信谊制药总厂苯甲酸雌二醇(E₂)，浙江仙琚制药股份有限公司；雌二醇放射免疫分析药盒，北京北方技术研究所。

2.1.2 动物

昆明种小鼠，雌性；SD大鼠，雌性；由上海斯莱克实验动物有限公司提供。

2.1.3 方法

2.1.3.1抗缩宫素致小鼠痛经　雌性小鼠，随机分为正常对照组；模型对照组；K-CT组；K-LJ低、中、高剂量组。K-LJ组分别按低、中、高剂量(0.09g/kg、0.19g/kg、0.38g/kg，其中中剂量组相当于人临床用量，即9g生药/日)ig给药，K-CT组ig 0.77g/kg（相当于人临床用量，即9g生药/日），正常对照组给予等体积蒸馏水10ml/kg，每天1次，连续5d。除正常对照组外，其他各组每只小鼠从第2天开始sc己烯雌酚，连续4d，剂量依次为0.2，0.1，0.1，0.2 mg/d，同时正常对照组ip等体积的生理盐水。末次给药或蒸馏水90min后，正常对照组sc等体积的生理盐水，其余各组小鼠sc缩宫素20 u/kg，观察记录30 min内小鼠扭体次数和扭体抑制百分率。

2.1.3.2 抗PGF2a致小鼠痛经　雌性小鼠，分组及给药方法同2.1.1，末次给药或蒸馏水1 h后，除正常对照组外，其他各组小鼠ip PGF2a2mg/kg，正常对照组ip等体积的生理盐水，观察记录20 min内小鼠扭体次数和扭体抑制百分率。

2.1.4 数据及统计

数据以mean±s表示， SPSS11.0软件用单因素方差分析法进行统计学显著性分析。

2.2 结果

结果（见表6）表明，K-LJ低、中、高剂量组均能显著减少缩宫素、PGF2a致痛经模型小鼠的扭体次数（p<0.05、0.01），表明采用本发明制备的康尔心胶囊具有抗痛经作用。K-CT组与F-LJ中剂量相比，扭体次数及扭体抑制百分率有显著性差异（p<0.05），表明在相应剂量下（相当于人临床用量，即9g生药/日），采用本发明制备的康尔心胶囊在抗痛经方面具有优于采用传统方法制备者的药理活性。

表6 不同方法制备的心宁片对痛经模型小鼠的影响（n=12）

注：与模型对照组相比，*p<0.05、**p<0.01；与K-LJ中相比，^△p<0.05。

上述研究表明，采用本发明制备的康尔心胶囊，有效成分含量是传统法制备的康尔心胶囊的4倍。在服用量减少3/4的情况下，两者在抗心肌缺血方面的药理活性相当。而前者在抗痛经方面的活性明显优于后者。前者可以在制备治疗痛经药物中应用。

为了更好的说明本发明的技术方案，下文将对其具体实施方式做进一步的表述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取丹参120g，粉碎，加入1.2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分钟，分离药渣备用，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参醇提取物；取人参80g、麦冬80g，粉碎，混合，加入1.6L的80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，用水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，收集正丁醇液，减压回收溶剂并浓缩，加入到D102型大孔吸附树脂上吸附，35%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得参麦提取物，备用；取上述丹参药渣、枸杞子150g、何首乌120g、山楂230g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力15MPa，温度40℃, CO₂流量1ml/g生药·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，备用；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒重0.4g。

经检测，成品中三七皂苷R1含量4.21mg/粒。

成品抗心肌缺血的药理作用见表7。

表7 对急性心肌缺血犬心肌梗死面积的影响

与模型组相比，* p<0.05、** p<0.01。

实施例2

取丹参120g，粉碎，加入1.2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，分离药渣备用，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参醇提取物；取人参80g、麦冬80g，粉碎，混合，加入1.6L的80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，用水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，收集正丁醇液，减压回收溶剂并浓缩，加入到D102型大孔吸附树脂上吸附，35%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得参麦提取物，备用；取上述丹参药渣、枸杞子150g、何首乌120g、山楂230g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度60℃, CO₂流量3ml/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，备用；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒重0.4g。

经检测，三七皂苷R1含量4.13mg/粒。

成品抗心肌缺血的药理作用见表8。

表8 对急性心肌缺血犬心肌梗死面积的影响

与模型组相比，* p<0.05、** p<0.01。

实施例3

取丹参120g，粉碎，加入1.2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，分离药渣备用，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参醇提取物；取人参80g、麦冬80g，粉碎，混合，加入1.6L的80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，用水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，收集正丁醇液，减压回收溶剂并浓缩，加入到D102型大孔吸附树脂上吸附，35%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得参麦提取物，备用；取上述丹参药渣、枸杞子150g、何首乌120g、山楂230g，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力20MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，备用；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒重0.4g。

Claims

1.一种康尔心胶囊的制备方法，由三七50g、人参80g、麦冬80g、丹参120g、枸杞子150g、何首乌120g、山楂230g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取丹参，粉碎，加入1.2L的70%乙醇, 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，分离药渣备用，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，干燥，得丹参醇提取物；取人参、麦冬，粉碎，混合，加入1.6L的80%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，用水饱和正丁醇进行7级逆流萃取，收集正丁醇液，减压回收溶剂并浓缩，加入到D102型大孔吸附树脂上吸附，35%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集4倍量洗脱液，与上述洗脱液合并，减压回收乙醇并浓缩，干燥，得参麦提取物，备用；取上述丹参药渣、枸杞子、何首乌、山楂，加入到CO₂超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3-5%，萃取压力15-25MPa，温度40-60℃, CO₂流量1-3ml/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取三七，粉碎，加入上述丹参醇提取物、参麦提取物、超临界萃取物混合，加入糊精，制粒，灌胶囊，制成250粒，每粒重0.4g。

2.根据权利要求1所述一种康尔心胶囊的制备方法，其特征在于所述丹参微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。

3.根据权利要求1所述一种康尔心胶囊的制备方法，其特征在于所述CO₂超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。

4.根据权利要求1所述一种康尔心胶囊的制备方法，其特征在于所述CO₂超临界萃取的萃取压力20MPa，温度50℃, CO₂流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。