CN102391961A - 一种解鸟氨酸拉乌尔菌n-4菌株及其制备和应用 - Google Patents

一种解鸟氨酸拉乌尔菌n-4菌株及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株及其制备和应用，该菌株为杆菌，单独排列，无芽胞，无鞭毛，菌落呈灰白色，圆形；革兰氏染色呈阴性；其制备方法，包括：(1)将河水样接入富集培养基，于摇床中富集培养；(2)将步骤(1)富集培养后的菌株转接至固体分离培养基，置于恒温培养箱培养，经过3次划线分离得到纯化菌种；(3)将纯化菌种富集后，接种到100ml液体分离培养基，测试菌株的反硝化率，筛选出反硝化率75％以上的单一菌株，即得；该菌株应用于反硝化和同步脱氮除磷。本发明的菌株的制备方法操作简便，培养基配方简单，适于生产应用；本发明的解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株具有较高的反硝化作且易于灭活。

Description

一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株及其制备和应用
技术领域
本发明属于拉乌尔菌及其制备和应用领域，特别涉及一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株及其制备和应用。
背景技术
随着工业废水和生活污水的大量排放，水体富营养化日益严重，高效去除水中氮素污染成为当今的一个热点问题。氮污染主要来源为城市污水、工业废水、畜禽养殖废水、垃圾填埋渗滤液等，污染物持续进入水体，造成水生植物和藻类过度生长，同时藻类产生的毒素引起鱼和其他水生需氧动物死亡。
传统理论认为反硝化是一个严格的厌氧过程，而自20世纪80年代首次发现好氧反硝化菌后，好氧反硝化菌的分离及其性能研究迅速发展，国内外最近报道的有戴尔福特菌属(Delftia)，沙门氏菌属(Salmonella)和假单胞菌属(Pseudomonas)等。C.W.Lindau和M.Robert Hamersley等则分别证实了河流和湖泊等地表水中，都存在着大量的反硝化菌和厌氧氨氧化细菌。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株及其制备和应用，该菌株在好氧的条件下具有良好的反硝化作用和脱氮除磷效果，且易于灭活；该菌株制备方法简单。
本发明的一种解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株，其16S rDNA序列如下：
CCTCTGCATCAAAAGTGGTAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTCCCATGGTGTTACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTAGCATTCTGATCTACGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTACGACATACTTTATGAGGTCCGCTTGCTCTCGCGAGGTCGCTTCTCTTTGTATATGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAGTTTATCACTGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGACCGAATCGCTGGCAACAAAGGATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAAAGCATCTCTGCTAAGTTCTCTGGATGTCAAGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCACTCCTCAAGGGAAACAACCTCCAAGTCGACATCGTTTACAGCGTGAACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCGGCAAGGCGGAGTCTACCATGCAGTCGAGCGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACCTTCGGGCCTCATGCCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGAGGAGGAAGGCATTAAGGTTAATAACCTTAGTGATTGACGTTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAGGCTTGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTCCCTTGAGGAGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGACTTAGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGGACTCTGAAACAGTGCTGCATGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAATGTTGGTAAGTCCCGCACGAGCCACCTTTTCTTTGTTGCAGCGATCCGTCGAACTCAGGAACTGCAATGGATAACTGGAGAGTGGATAGACTCGAGTCATCTGGCTACGAAGGGCTCACGTTCCAATGCTTAACAAGGACCCCCCTGGGGGAAACAACGGAACCTA。
本发明的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株已于2011年10月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其保藏号为CGMCC No.5320.，建议分类命名为解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultellaornithioltica)。
本发明的菌株N-4经16S rDNA序列测定和分析比较，鉴定为解鸟氨酸克雷伯菌(Klebsiella ornithinolytica)，其同源性达到97％。
本发明的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株为较短粗的杆菌，单独排列，无芽胞，无鞭毛，长度约0.8-1.5微米，直径约0.3-0.6微米；菌落呈灰白色，圆形；革兰氏染色呈阴性。
本发明的一种解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株的制备，包括：
(1)将河水样按1∶100的体积比接入富集培养基，于30℃，110r/min摇床中富集培养24h；
(2)将步骤(1)富集培养后的菌株用稀释平板涂布法转接至固体分离培养基，置于30℃恒温培养箱培养24～48h，经过3次划线分离得到纯化菌种；
(3)将纯化菌种富集后，按18～23％的接种量接种到100ml液体分离培养基，测试菌株在30℃、好氧条件下培养24h时的反硝化率，筛选出反硝化率75％以上的单一菌株，即为鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株，将其转接斜面培养基，4℃下保存。
所述步骤(1)中的富集培养基为：蛋白胨10g，牛肉浸出粉4g，酵母浸出粉3g，NaCl5g，蒸馏水1000ml，pH 7.4-7.6。
所述步骤(2)中的固体分离培养基为：碳源3～5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，FeSO4·7H2O 0.05g，CaCl2 0.02g，定容到1000ml，调节pH 7.4-7.6，最后加1.8％W/V琼脂。
所述步骤(3)中的液体分离培养基为：碳源3～5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，FeSO4·7H2O 0.05g，CaCl2 0.02g，定容到1000ml，调节pH 7.4-7.6。
所述步骤(3)中的斜面培养基为：酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂18g，蒸馏水1000ml，pH 7.0-72。
所述的碳源为乙酸钠、丙酸钠、乙醇、谷氨酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖或碳酸氢钠。
所述的碳源为葡萄糖，其在分离培养基中的用量为5g，分离培养基的初始pH值为7.5。
本发明的一种解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株在反硝化和同步脱氮除磷中的应用。
将解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株在固体分离培养基上划线，于30℃，培养24h；取单菌落接入5ml液体分离培养基，30℃，110r/min摇床中培养24h；按18～23％的接种量再接种到100ml液体分离培养基，测试菌株在30℃、培养24h时的反硝化率及氨氮和磷酸盐的去除效率。
所述的解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的反硝化效率可达87.6％，对氨氮和磷酸盐的去除效率分别达到78.3％和92％。
苏州河是上海市内重要的水体功能地表水，但由于其接纳的污水量大，污染负荷远远超过自净能力，水质受到严重污染，各种水体功能也因此受到损害，因此在污染较严重的地段能筛选出高性能的反硝化菌种。
有益效果
(1)本发明所得的解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株具有较高的反硝化作用和脱氮除磷效果，反硝化效率可达87.6％，对氨氮和磷酸盐的去除效率分别达到78.3％和92％；
(2)本发明的菌株在好氧的条件下具有良好效果，能适应复杂的实际条件，在培养基上能存活数周至数月；解鸟氨酸拉乌尔菌对一般抗生素均无抗性，且易于灭活，55℃30分钟即可杀死，保证了使用的生态安全性；
(3)本发明的菌株的制备方法操作简便，培养基配方简单，适于生产应用。
附图说明
图1解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)的系统进化树；
图2解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)的扫描电镜；
图3解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)的生长曲线及其反硝化效果；
图4解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)在不同接种量下所需的反硝化时间；
图5解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)在不同温度下的反硝化效果；
图6解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)在不同pH下的反硝化效果；
图7解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)降解速率的测定；
图8解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)脱氮除磷效果。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
高效脱反硝化菌的分离筛选与鉴定
(1)将苏州河不同地段取回来的水样，分别吸取1ml至装有100ml富集培养基的250ml锥形瓶中，30℃，110r/min摇床中培养24h；
富集培养基：蛋白胨10g，牛肉浸出粉4g，酵母浸出粉3g，NaCl 5g，蒸馏水1000ml，pH 7.4-7.6。
(2)然后用稀释平板涂布法接种至固体分离培养基，置于30℃恒温培养箱培养24～48h，经过3次划线分离得到纯化菌种；
固体分离培养基：葡萄糖5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O0.05g，CaCl2 0.02g，琼脂18g，定容到1000ml，调节pH 7.4～7.6。
(3)将纯化得到的菌株富集后，按20％接种量接种到100ml液体分离培养基，测试各菌株在不同碳源(乙酸钠、丙酸钠、乙醇、木糖、乳糖、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖或碳酸氢钠)中，于30℃、好氧条件下培养24h时后的反硝化率，筛选出反硝化率在75％以上性能良好的菌株。将筛选出的性能最好的反硝化菌命名为N-4。
液体分离培养基：葡萄糖5g(或等量替代上述碳源)，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O 0.05g，CaCl2 0.02g，蒸馏水1000ml，pH 7.4～7.6。
(4)然后对菌株N-4进行革兰氏染色和电镜扫描(图2)，观察菌株的外部形态特征，并将菌株N-4接种到斜面培养基上，4℃下保存于冰箱中待后续进行降解试验，同时将菌株N-4的单一菌落送至上海基康生物技术公司测定其16S rDNA序列，对菌株N-4进行菌种鉴定。
斜面培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂18g，蒸馏水1000ml，pH 7.0-7.2。
实施例2
高效反硝化菌的最佳条件
将菌株N-4以1％接种量，分别接种于实施例1富集培养基和液体分离培养基，在30℃好氧条件下，检测30h内菌种生物量及其硝态氮含量的变化(图3)，由图可知，生物量在15h前后达到峰值，而硝态氮含量在24h达到最低，并且在接种量较小情况下，菌种延迟期时间较长，不能短时间内发挥反硝化作用。然后分别测定N-4菌在1％-30％接种量情况下(其余培养条件相同)，反硝化所需的时间(图4)，由图可知，在接种量由1％增加到20％时，反硝化时间大大缩短，但当接种量大于20％后，反硝化时间都没有太大变化，而且随菌体浓度增加，营养物质消耗加快，菌体进入衰亡期时间提前，不利于长期观察。因此菌株N-4的最佳接种量为20％左右。
(1)将菌株N-4接种于不同初始pH值的试验培养基中(培养基成分相同)，接种量为20％，30℃培养24h，测定反硝化率知反硝化适宜在偏碱条件下(pH为6.5～8.5)进行，pH低于7.0和高于8.0反硝化速率下降幅度很大见(图5)，最适生长pH值为7.5。
(2)不同温度下，在pH值7.5的反硝化试验培养基中接入20％的含菌株N-4的培养液，培养测定菌株N-4的反硝化速率和反硝化率(图6)。由图7可知30℃时菌株N-4的反硝化效率最大，从应用角度考虑，生物反硝化宜选用在30℃左右条件下进行。
试验培养基：NH4Cl 0.67g/L，KH2PO4 0.018g/L，MgSO4·7H2O 0.075g/L，CaCl2·7H2O0.05g/L，微量元素0.075ml/L，pH 7.0-7.2。
反硝化试验培养基：葡萄糖5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O0.05g，CaCl2 0.02g，蒸馏水1000ml，pH 7.5。
通过生长条件优化得出N-4的最适生长条件为在葡萄糖为唯一碳源下，最适接种量为20％，最适培养基初始pH值为7.5，最佳温度为30℃。
表1反硝化菌株筛选的碳源试验
Figure BDA0000104887440000061
实施例3
高效反硝化菌的降解效率分析
在反硝化试验培养基中，培养基初始pH值调为7.5，NO3-N质量浓度为280mg·L-1接种量为20％，在30℃下培养，间隔2h取样测定培养基中硝态氮的降解速率(图7)。由图可知，N-4对NO3-N的降解效果良好，在培养基中延迟期很短。在0～8h营养液中的NO3-N浓度迅速下降，8h后NO3-N浓度继续呈下降趋势，但趋于平缓，16h内降解率达87.6％。
实施例4
高效反硝化菌的脱氮除磷效果分析
将菌株N-4按20％接种量接种到100ml反硝化试验培养基中，在30℃培养24h(前8小时为厌氧培养，后16小时在摇床内好氧培养)，测定其脱氮除磷效果(图8)。由图可知，前8小时的厌氧培养阶段，磷酸盐含量急剧增加，此时氨氮含量基本没有变化，说明菌株在厌氧状态下不具备去除氨氮的效果；后16小时好氧培养阶段内，氨氮含量急剧降低，与此同时亚硝态氮浓度先急剧上升，后随着时间推移渐渐降低，磷酸盐含量亦缓慢降低，此时细菌表现出反硝化除磷的特性，既能以氧气也能以亚硝酸盐为电子受体，在吸磷的同时进行反硝化作用，将亚硝态氮转化为氮气排出水外，达到脱氮除磷的效果。24h内氨氮去除率达到78.3％，磷酸盐去除率达到92％。
Figure IDA0000104887550000011
Figure IDA0000104887550000031

Claims (9)

1.一种解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)N-4菌株，其16S rDNA序列如下：
CCTCTGCATCAAAAGTGGTAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTCCCATGGTGTTACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGTAGCATTCTGATCTACGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTACGACATACTTTATGAGGTCCGCTTGCTCTCGCGAGGTCGCTTCTCTTTGTATATGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCAGTTTATCACTGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGACCGAATCGCTGGCAACAAAGGATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAAAGCATCTCTGCTAAGTTCTCTGGATGTCAAGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGACTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCACTCCTCAAGGGAAACAACCTCCAAGTCGACATCGTTTACAGCGTGAACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCGGCAAGGCGGAGTCTACCATGCAGTCGAGCGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGACGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGTGGGGGACCTTCGGGCCTCATGCCATCAGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAATGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGAGGAGGAAGGCATTAAGGTTAATAACCTTAGTGATTGACGTTACTCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTTGAAACTGGCAGGCTTGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGTAAACGATGTCGACTTGGAGGTTGTTCCCTTGAGGAGTGGCTTCCGGAGCTAACGCGTTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTACTCTTGACATCCAGAGACTTAGCAGAGATGCTTTGGTGCCTTCGGGACTCTGAAACAGTGCTGCATGCTGTCGTCAGCTCGTGTTGTGAATGTTGGTAAGTCCCGCACGAGCCACCTTTTCTTTGTTGCAGCGATCCGTCGAACTCAGGAACTGCAATGGATAACTGGAGAGTGGATAGACTCGAGTCATCTGGCTACGAAGGGCTCACGTTCCAATGCTTAACAAGGACCCCCCTGGGGGAAACAACGGAACCTA。
2.根据权利要求1所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株，其特征在于：所述的菌株为杆菌，单独排列，无芽胞，无鞭毛，长度约0.8-1.5微米，直径约0.3-0.6微米；菌落呈灰白色，圆形；革兰氏染色呈阴性。
3.一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，包括：
(1)将河水样按1∶100的体积比接入富集培养基，于30℃，110r/min摇床中富集培养24h；
(2)将步骤(1)富集培养后的菌株用稀释平板涂布法转接至固体分离培养基，置于30℃恒温培养箱培养24～48h，经过3次划线分离得到纯化菌种；
(3)将纯化菌种富集后，按18～23％的接种量接种到100ml液体分离培养基，测试菌株在30℃、好氧条件下培养24h时的反硝化率，筛选出反硝化率75％以上的单一菌株，即得鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株。
4.根据权利要求3所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的富集培养基为：蛋白胨10g，牛肉浸出粉4g，酵母浸出粉3g，NaCl 5g，蒸馏水1000ml，pH 7.4-7.6。
5.根据权利要求3所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的固体分离培养基为：碳源3～5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，FeSO4·7H2O 0.05g，CaCl2 0.02g，定容到1000ml，调节pH 7.4-7.6，最后加1.8％W/V琼脂。
6.根据权利要求3所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的液体分离培养基为：碳源3～5g，KNO3 2g，K2HPO4 0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，FeSO4·7H2O 0.05g，CaCl2 0.02g，定容到1000ml，调节pH 7.4-7.6。
7.根据权利要求5或6所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，其特征在于：所述的碳源为乙酸钠、丙酸钠、乙醇、谷氨酸钠、柠檬酸钠、酒石酸钾钠、甲醇、硫代硫酸钠、葡萄糖或碳酸氢钠。
8.根据权利要求5或6所述的一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株的制备方法，其特征在于：所述的碳源为葡萄糖，其在分离培养基中的用量为5g，分离培养基的初始pH值为7.5。
9.一种解鸟氨酸拉乌尔菌N-4菌株在反硝化和同步脱氮除磷中的应用。
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