CN102351698A

CN102351698A - 一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法

Info

Publication number: CN102351698A
Application number: CN2011102318585A
Authority: CN
Inventors: 江邦和; 厉留柱; 徐环昕; 宁方红; 李大芦
Original assignee: SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2011-08-15
Filing date: 2011-08-15
Publication date: 2012-02-15

Abstract

一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，属抗生素的分离纯化技术领域，其特征在于依次包括步骤：截短侧耳素结晶母液真空浓缩，逐渐升温至90℃，直至无馏出液为止，加入水溶性有机溶剂搅拌均匀；泵入非极性大孔吸附树脂柱中，上柱吸附；取体积百分数为20%-70%的水溶性有机溶剂配置洗脱剂，泵入吸附树脂柱中解吸；所得的洗脱液，真空浓缩，加入有机溶剂溶解、再结晶、真空干燥得成品。本发明的有益效果是：吸附色谱法从截短侧耳素结晶母液中回收截短侧耳素的方法，工艺简单、生产成本低，从结晶母液中残留截短侧耳素回收率达85-92%，使得总的生产提取率达到95-98%，从而提高了工业生产效率。

Description

一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法

技术领域

本发明涉及的是一种用吸附色谱法从截短侧耳素结晶母液中回收截短侧耳素的方法，属抗生素的分离纯化技术领域。

背景技术

截短侧耳素能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌及部分革兰氏阴性菌，密螺旋体(螺旋杆菌)、细螺旋体和支原体等。截短侧耳素溶点:170～172℃，在甲醇、乙醇、氯仿和丙酮中溶解。截短侧耳素是一种由侧耳菌产生的一类广谱的二萜类抗生素，其分子结构式为：

截短侧耳素的市场应用主要分为三类：一、主要用于生产衍生物如泰妙菌素、沃尼妙林，约占到89%；二、其次是直接添加到动物饲料里，预防和治疗革兰氏菌、支原体及螺旋体引起的感染，占比例为8%；三、少量用于合成人用抗生素Retapamulin的试验研究。

我国是畜牧业大国，养殖经济动物的群体数量庞大，对动物用截短侧耳素有旺盛的需求基础。但国内截短侧耳素产业发展滞后，工艺技术水平也较落后。现有技术生产流程依次为：发酵、过滤、丙酮提取、浓缩、二氯甲烷溶解、浓缩、结晶、离心、干燥、成品。截短侧耳素产品纯度：92～93％，提取率：82～84％，结晶母液中还残留16～18％截短侧耳素。

截短侧耳素结晶母液中，截短侧耳素含量在20～25％，其余是部分溶剂和大部分的低熔点油溶性杂质，残留的截短侧耳素难以再结晶，又因为杂质含量较大，造成分离纯化的难度较大，往往将这种结晶母液当作废弃物处理，既浪费了资源，降低了截短侧耳素的收率，增加了生产成本，又造成了环境污染。截短侧耳素结晶母液中截短侧耳素的回收利用未见相关的文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，这种方法工艺简单、成本低、满足环保要求，可以高收率高纯度地回收截短侧耳素成品。

为达到上述目的，采用的技术方案是：一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，其特征在于依次包括步骤：

⑴配制上柱液：以重量份计，取一份截短侧耳素结晶母液真空浓缩，逐渐升温至90°，直至无馏出液为止，加入0.5-2份水溶性有机溶剂，搅拌均匀后备用；

⑵上柱吸附：将步骤⑴所得上柱液通过泵加入装填非极性大孔吸附树脂柱中，流速控制1-2倍柱体积/小时；

⑶解吸：取体积百分数为20%-70%的水溶性有机溶剂配置洗脱剂，将三倍柱体积的洗脱剂泵入吸附树脂柱中解吸，流速为1倍柱体积/小时；

⑷后处理：将步骤⑶解吸所得的洗脱液，真空浓缩，回收溶剂，蒸干水分，浓缩物加入有机溶剂溶解、再结晶、真空干燥得成品。

步骤⑴和步骤⑶所述水溶性有机溶剂，可以举出甲醇，乙醇，正丙醇，异丙醇，叔丁醇，二恶烷，四氢呋喃，丙酮，二甲基甲酰胺，二甲亚砜中的一种。

步骤⑵所述非极性大孔吸附树脂为市售比表面积不小于400m²/g,细孔体积不小于1ml/g的大孔吸附树脂HZ816,或HZ818，或HZ830。

步骤⑷所述有机溶剂是乙酸乙酯，甲基异丁酮，二氯甲烷中的一种。

本发明的有益效果是：吸附色谱法从截短侧耳素结晶母液中回收截短侧耳素的方法，工艺简单、生产成本低，从结晶母液中残留截短侧耳素回收率达85-92%，使得截短侧耳素总的生产提取率达到95-98%，从而提高了工业生产效率。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步的说明，说明本发明涉及的技术方案，揭示本发明的最佳实施方式，使本领域的普通技术人员能够应用实施本发明。但应当理解，本发明并不限于下述实施例，基于本发明的启示，任何显而易见的变换或等效替代，也应当被认为是落入本发明的保护范围。

实施例中，玻璃色谱柱内径75mm，长1000mm，充填6000ml非极性大孔吸附树脂HZ816、或HZ818、或HZ830，比表面积不小于400m²/g,细孔体积不小于1ml/g（市售上海华震科技有限公司产品）。

在色谱处理过程中，色谱柱洗脱过程中可连续进行，或间歇处理。

高效液相色谱法测定产品纯度的检测条件为：高效液相色谱 (岛津VP-ODS，C18色谱柱250mmX 4.6mm，5μm)，流动相为乙腈∶水为4∶1，流速为1.0mL/min，柱温为30⁰C，进样量为10uL，检测波长：210nm，检测器:紫外检测器。

实施例1:

取800克截短侧耳素结晶母液真空浓缩液溶解在600g甲醇中，搅拌均匀制成上柱液；然后用蠕动泵以流速6L/h，将所述上柱液泵入充填有6L非极性大孔吸附树脂HZ816的树脂柱的上部，然后用体积浓度为66%的甲醇水溶液洗脱剂18L，以6L/h流速洗脱，收集并合并洗脱液，真空浓缩，蒸干水分，回收溶剂，浓缩物加入乙酸乙酯溶解结晶，结晶真空干燥得成品，采用高效液相色谱法测定所得产品的纯度，以质量分数计，截短侧耳素纯度为97.2%,总回收率为90.1%。

实施例2 :

除用非极性大孔吸附树脂HZ818取代非极性大孔吸附树脂HZ816外，其他操作与实施例1相同，测定结果，以质量分数计，截短侧耳素纯度为95.7%,总回收率为85.3%。

实施例3 :

色谱柱中改用非极性大孔吸附树脂HZ830，其他操作与实施例1相同，测定结果，以质量分数计，截短侧耳素纯度为92.7%,总回收率为85.8%。

实施例4 :

取900克截短侧耳素结晶母液真空浓缩液溶解在900g丙酮中；然后用蠕动泵将该上柱液，以9L/h流速注入充填6L非极性大孔吸附树脂HZ816的玻璃色谱柱的上部，然后用体积浓度为50%的丙酮水溶液洗脱剂18L，以6L/h流速洗脱，收集并合并洗脱液，真空浓缩，蒸干水分，回收溶剂，浓缩物加入二氯甲烷溶解结晶，结晶真空干燥可得成品，采用高效液相色谱法测定所得产品的纯度，以质量分数计，截短侧耳素纯度为95.2%,总回收率为92.1%。

实施例5 :

取600克截短侧耳素结晶母液真空浓缩液溶解在600g乙醇中；然后用蠕动泵将上柱液以6L/h流速注入充填6L非极性大孔吸附树脂HZ818的玻璃色谱柱的上部，然后用体积浓度为60%的乙醇水溶液洗脱剂18L，以6L/h流速洗脱，洗脱液合并后真空浓缩，蒸干水分，回收溶剂，浓缩物加入甲基异丁酮溶解结晶，结晶真空干燥可得成品，采用高效液相色谱法测定所得产品的纯度，以质量分数计，截短侧耳素纯度为93.5%,总回收率为91.8%。

实施例6 :

取600克截短侧耳素结晶母液真空浓缩液溶解在900g四氢呋喃中；然后用蠕动泵将所述溶液（上柱液）以6L/h流速，注入充填6L非极性大孔吸附树脂HZ818的树脂柱上部，然后用体积浓度为50%的四氢呋喃水溶液洗脱剂18L，以6L/h流速洗脱，并合并收集洗脱液，真空浓缩，蒸干水分，回收溶剂，浓缩物加入甲基异丁酮溶解，结晶、真空干燥可得成品，采用高效液相色谱法测定，以质量分数计，截短侧耳素纯度为92.5%,总回收率为91.1%。

实施例7 :

取600克截短侧耳素结晶母液真空浓缩液溶解在600g异丙醇中；然后用蠕动泵将该上柱液以6L/h流速，注入充填6L非极性大孔吸附树脂HZ830的玻璃色谱柱的上部，然后用体积浓度为60%的异丙醇水溶液洗脱剂18L，以6L/h流速洗脱，收集并合并洗脱液真空浓缩，蒸干水分，回收溶剂，浓缩物加入乙酸乙酯溶解、结晶，真空干燥可得成品。采用高效液相色谱法测定所得产品的纯度，以质量分数计，截短侧耳素纯度为94.5%,总回收率为91.3%。

综上所述，本发明可以从截短侧耳素结晶母液中回收85-92%的残留截短侧耳素，所得截短侧耳素纯度92%以上，使得截短侧耳素总的生产提取率达到95-98%，显著提高了工业生产效率，并且具有工艺简单，生产成本低，环保的特点，具有很好的市场价值，适合工业化应用。

Claims

1.一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，其特征在于依次包括步骤：

⑵上柱吸附：将步骤⑴所得上柱液通过泵加入非极性大孔吸附树脂柱中，流速控制1-2倍柱体积/小时；

2.根据权利要求1所述一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，其特征在于步骤⑴和步骤⑶所述水溶性有机溶剂为甲醇，乙醇，正丙醇，异丙醇，叔丁醇，二恶烷，四氢呋喃，丙酮，二甲基甲酰胺，二甲亚砜中的一种。

3.根据权利要求1所述一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，其特征在于步骤⑵所述非极性大孔吸附树脂为市售比表面积不小于400m²/g,细孔体积不小于1ml/g的大孔吸附树脂HZ816,或HZ818，或HZ830。

4.根据权利要求1所述一种用吸附色谱法从结晶母液中回收截短侧耳素的方法，其特征在于步骤⑷所述有机溶剂是乙酸乙酯，甲基异丁酮，二氯甲烷中的一种。