CN102325771B - 作为jnk调节剂的咪唑并[1,2-a]吡啶类 - Google Patents

Abstract

式(I)化合物或其药用盐调节JNK，其中：x¹和x²各自同时是N或CH；x³是CH-R²或N-SO₂R，其中R是低级烷基；R¹是被0-3个低级烷基基团取代的芳基或杂芳基；R²是(II)，其中R³是H、低级酰基或氨基酸。

Description

作为JNK调节剂的咪唑并[1,2-A]吡啶类

本发明涉及调节c-Jun N-末端激酶(JNK)的方法，和用于治疗患有疾病或病症的受治者的方法，所述疾病或病症可以通过用杂环化合物调节JNK来缓解。本发明进一步涉及新型的杂环化合物和包含所述化合物的药物组合物。 

c-Jun N-末端激酶(JNK)连同p38和细胞外信号调节激酶(ERK)是裂原活化蛋白激酶家族的成员。已经鉴定了三个截然不同的基因(jnk1，jnk2和jnk3)，它们编码10种剪接变体(Y.T.Ip和R.J.Davis，当代细胞生物学评论(Curr.Opin.Cell Biol.)(1998)10：205-19)。JNK1和JNK2在广泛多样的组织中表达，而JNK3主要在神经元中表达，和较小程度地在心脏和睾丸中表达(D.D.Yang等，自然(Nature)(1997)389：865-70)。JNK家族的成员通过促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)以及环境紧张活化。JNK的活化通过它的上游激酶，MKK4和MKK7，经由Thr-183和Tyr-185的双磷酸化而介导(B.Derijard等，细胞(Cell)(1994)76：1025-37)。已经显示，MKK4和MMK7可以通过不同的上游激酶激活，所述不同的上游激酶包括MEKK1和MEKK4，这取决于外部刺激和细胞情境(D.Boyle等，类风湿性关节炎(Arthritis Rheum)(2003)48：2450-24)。JNK信号传导的特异性是通过使用称为JNK-相互作用蛋白的支架蛋白形成JNK-特异的信号传导复合物来实现的，所述复合物含有激酶级联的多个组分(J.Yasuda等，分子细胞生物学(Mol.Cell.Biol.)(1999)19：7245-54)。通过磷酸化特异底物，JNK已经显示在炎症、T细胞功能、编程性细胞死亡和细胞存活中发挥重要作用，所述底物包括转录因子如c-Jun，激活蛋白-1(AP1)家族成员，和ATF2，以及非转录因子如IRS-1和Bcl-2(A.M.Manning和R.J.Davis，自然综述药物开发(Nat.Rev.Drug Discov.)(2003)2：554-65)。认为JNK的过度活化是自身免疫、炎性、代谢、神经学疾病以及癌症和疼痛中的重要机制。 

类风湿性关节炎(RA)是一种系统自身免疫疾病，其特征在于关节的慢性炎症。除了由炎症过程导致的关节肿胀和疼痛以外，大多数RA患者最 终发展使人衰弱的关节损伤和变形。在细胞和动物模型中几条令人信服的药理学和遗传学证据强烈提示活化的JNK在RA发病机理中的相关性和重要性。首先，在来自RA患者的人关节炎关节(G.Schett等，类风湿性关节炎(Arthritis Rheum)(2000)43：2501-12)和来自关节炎动物模型的啮齿动物的关节炎关节(Z.Han等，临床研究杂志(J.Clin.Invest.)(2001)108：73-81)中都检测到JNK的异常激活。另外，通过选择性JNK抑制剂抑制JNK的激活阻断了人滑膜细胞、巨噬细胞和淋巴细胞中的促炎细胞因子和MMP的生成(Z.Han等，(2001)，上文)。重要地，在具有佐剂性关节炎的大鼠中(Z.Han等，(2001)，上文)或在具有胶原诱导性关节炎的小鼠中(P.Gaillard等，药物化学杂志(J Med Chem.)(2005)14：4596-607)施用选择性JNK抑制剂，通过抑制细胞因子和胶原酶表达，有效地保护关节免于破坏并且显著地减轻了爪肿胀。另外，在被动胶原诱导性关节炎模型中，JNK2缺陷型小鼠被部分保护免于关节破坏，但是对于爪肿胀和炎症几乎不显示效果。这些研究表明JNK2与JNK1关于它们在基质降解、炎症和爪肿胀中的作用方面是功能冗余的。因此，JNK1和JNK2两者活性的联合抑制对于RA的有效治疗是必需的(Z.Han等，类风湿性关节炎(Arthritis Rheum.)(2002)46：818-23)。 

哮喘是一种气道慢性炎性疾病，其特征在于细胞炎症过程的存在和与气道结构变化相关的支气管高反应性(B.Bradley等，变态反应临床免疫学杂志(J.Allergy Clin.Immunol.)(1991)88：661-74)。该病症已经显示由气道中的许多细胞类型所驱动，所述细胞包括T淋巴细胞，嗜酸性粒细胞，肥大细胞，嗜中性粒细胞和上皮细胞(J.Bousquet等，美国呼吸和重症护理医学杂志(Am.J.Respir.Crit.Care Med.)(2000)161：1720-45)。基于最近的在使用选择性JNK抑制剂的哮喘的细胞和动物模型中的概念验证研究，JNK已经显现为对于哮喘的有希望的治疗靶标(K.Blease等，新兴药物专家评论(Expert Opin.Emerg.Drugs)(2003)8：71-81)。已经显示，JNK抑制剂显著阻断在活化的人气道平滑细胞中的RANTES生产(K.Kujime等，免疫学杂志(J.Immunol.)(2000)164：3222-28)。更重要地，JNK抑制剂在慢性大鼠和小鼠模型中由于它们减少细胞浸润、炎症、高反应性、平滑肌增生和IgE生产的能力而显示良好的功效(P.Nath等，欧洲药理学杂志(Eur.J.Pharmacol.)(2005)506：273-83；P.Eynott等，英国药理学杂志(Br.J. Pharmacol.)(2003)140：1373-80)。这些观察结果提示JNK在变应性炎症、与高反应性相关的气道重塑过程中的重要作用。因此，预计JNK活性的阻断将对哮喘的治疗有益。 

2型糖尿病是最严重和普遍的代谢疾病，其特征在于胰岛素抗性和胰岛素分泌损害，其是长期低水平炎症和与氧化应激相关的异常脂质代谢的结果。已经报道，JNK活性在肥胖和糖尿病病症下的各种糖尿病靶组织中异常升高(J.Hirosumi等，自然(Nature)(2002)420：333-36；H.Kaneto，治疗靶标专家评论(Expert.Opin.Ther.Targets)(2005)9：581-92)。JNK途径被促炎细胞因子和氧化应激的激活通过在Ser³⁰⁷处磷酸化胰岛素受体底物-1(IRS-1)来负调节胰岛素信号传导，由此促进胰岛素抗性和葡萄糖耐量(J.Hirosumi等，自然(Nature)(2002)，上文；Y.Lee等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)(2003)278：2896-902；Y.Nakatani等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)(2004)279：45803-09)。有说服力的遗传学证据来自精细的动物模型研究，该研究使用与遗传性(ob/ob)肥胖小鼠或饮食性肥胖小鼠杂交的jnk^-/-小鼠。JNK1丧失(JNK1^-/-)，但是JNK2功能未丧失(jnk2^-/-)，保护肥胖小鼠免于体重增加，增加血糖稳态水平，和降低血浆胰岛素水平(J.Hirosumi等，自然(Nature)(2002)，上文)。另外，通过施用小分子JNK抑制剂CC105(B.Bennett等，当前药理学评论(Curr.Opin.Pharmacol.)(2003)3：420-25)或从JNK-相互作用蛋白-1(JIP-1)的JNK结合结构域衍生的JNK抑制性肽I(JIP)(H.Kaneto等，自然医学(Nat.Med.)(2004)10：1128-32)，在遗传性糖尿病模型(db/db小鼠)中观察到了有益效果，包括显著更低的血糖和更高的血浆胰岛素水平。更有趣地，另一个新近的报道(A.Jaeschke等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U S A.)(2005)102：6931-35)揭示了JNK2在由产胰岛素β细胞的自身免疫破坏导致的1型糖尿病中发挥重要作用。JNK2表达缺陷的非肥胖糖尿病小鼠显示减轻的破坏性胰岛炎和较小的糖尿病疾病进展，这可能是由于向Th2表型的偏极化。总之，这些研究证明了JNK抑制剂在治疗肥胖/2型糖尿病中的效用。 

神经变性疾病，如阿尔茨海默病(AD)，帕金森病(PD)和中风，其特征在于突触损失，神经元萎缩和死亡。导致c-Jun活化的JNK途径已经显示在分离的原代胚胎神经元和多种神经元细胞系在引入各种各样的刺激之 后的编程性细胞死亡中发挥因果作用(D.Bozyczko-Coyne等，当代CNS神经病症药物靶标(Curr.Drug Targets CNS Neurol.Disord.)(2002)1：31-49)。在来自AD患者的人脑(J.Pei等，阿尔茨海默病杂志(J.Alzheimers Dis.)(2001)3：41-48)或啮齿动物的脑切片(M.Saporito等，神经化学杂志(J.Neurochem.)(2000)75：1200-08)中观察到了JNK的过度激活，所述啮齿动物的脑切片来源于神经变性疾病的动物模型。例如，在来自AD患者的死后的脑中检测到增加的磷酸-JNK。在啮齿动物的AD模型中施用JNK抑制性肽(JIP-1肽)防止突触可塑性的损害，所述AD是通过施用β-淀粉样蛋白肽来诱导的。在PD的动物模型(MPTP模型)中，与神经元细胞死亡同时观察到升高的磷酸-MKK4和磷酸-JNK。将JNK抑制性肽(JIP-1肽)用腺病毒基因转移到小鼠纹状体中，减轻了行为损伤，其中通过抑制MPTP-介导的JNK、c-Jun和caspase活化，因此阻断了黑质中的神经元细胞死亡(X.Xia等，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)(2001)98：10433-38)。另外，在由谷氨酸兴奋毒性诱导的缺血性中风的动物模型中，缺失JNK3但是不缺失JNK1或JNK2的小鼠对于红藻氨酸(谷氨酸受体激动剂)-介导的发作或神经元死亡具有抗性(D.D.Yang等，自然(Nature)(1997)389：865-70)。这些数据提示，JNK3主要负责谷氨酸兴奋毒性，谷氨酸兴奋毒性是缺血性病症中的一个重要成分。总之，这些数据提示JNK是对于与神经元细胞死亡相关的多种CNS疾病的有吸引力的靶标。 

不受控制的细胞生长，增殖和迁移以及脱调节的血管发生导致恶性肿瘤形成。JNK信号转导途径可能不是独自在编程性细胞死亡中起作用，持续的JNK活化导致AP1活化最近已经暗示促进特定癌症类型的细胞存活，所述癌症如神经胶质肿瘤和BCL-ABL转化的B淋巴母细胞(M.Antonyak等，癌基因(Oncogene)(2002)21：5038-46；P.Hess等，自然遗传学(Nat.Genet.)(2002)32：201-05)。在神经胶质肿瘤的情形中，在大多数原发性脑瘤样品中看到增强的JNK/AP1活性。对于转化的B淋巴母细胞，显示BCL-ABL激活JNK途径，其又上调抗凋亡bcl-2基因的表达。有趣地，在难治性AML患者中看到的多药耐药性和过度增殖已经与这些AML样品中存在的持续的JNK活性因果关联(L.Cripe等，白血病(Leukemia)(2002)16：799-812)。白血病细胞中JNK的激活导致外排泵的诱导表达，所述外排 泵如负责多药耐药性的mdr1和MRP1。此外，激活的JNK途径还上调响应于氧化应激具有生存益处的基因，包括谷胱甘肽-S-转移酶π和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶。 

急性肾衰竭(ARF)是与肾缺血或肾中毒损伤有关的肾功能的突发的和持续的下降。ARF可以由多重原因引起(包括创伤和脓毒病)，并且是显著发病率和死亡率的原因。体外证据表明，JNK激活在与肾小球疾病有关的肾小球膜细胞功能改变上起决定作用，并且已经报道了在ARF的缺血和肾中毒的动物模型中的体内肾JNK激活(Grande和Lopez-Novoa，当代药物化学(Curr.Med.Chem.)(2008)14：2054-70)。JNK抑制剂已经显示改善肾缺血/再灌注(Wang等，生命科学(Life Sci.)(2007)80：2067-75)和肾中毒(顺铂或抗肾小球基膜诱导的)模型(Francescato等，肾脏病学透析移植(Nephrol.Dial.Transplant.)(2007)22：2138-48；Flanc等，肾国际(Kidney Intl.)(2007)72：698-708)中的肾损伤。JNK因此表现为用于治疗和/或预防ARF的新治疗靶。 

因此，JNK调节剂可用于治疗各种各样的疾病和/或病症。 

本发明的一个方面提供式I的化合物： 

其中R¹是H、-OH、-OR或羟基-低级烷基，其中R是低级烷基、苄基、芳基-低级烷基或甲磺酰基-低级烷基；R²是-OH、-NH₂、-SO₂R⁴、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或 其中R³是H、低级酰基或氨基酸；R⁴是低级烷基、-NH₂、低级烷基-氨基或二(低级烷基)氨基；R⁵是H或低级烷基；或其药用盐。 

本发明还提供药物组合物，使用方法和制备上述化合物的方法。 

本发明的化合物和组合物可用于治疗和/或预防c-Jun N-末端激酶介导的疾病，如自身免疫疾病，炎性疾病，代谢疾病，神经性疾病，疼痛和癌症。在一些实施方案中，本发明的化合物和组合物可用于治疗和/或预防类风湿性关节炎，哮喘，II型糖尿病，急性肾衰竭，阿尔茨海默病，帕金森病和/或中风。 

定义 

除非另外指出，用于本申请(包括说明书和权利要求书)中的下列术语具有以下给出的定义。应当注意，如在说明书和后附权利要求书中所用，单数形式“一个(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数对象，除非上下文有清楚的不同指示。 

“烷基”是指单价直链或支链饱和烃部分，其完全由碳和氢原子组成，具有1-12个碳原子。“低级烷基”是指1-6个碳原子的烷基，即C₁-C₆烷基。烷基的实例包括但不限于甲基，乙基，丙基，异丙基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，正己基，辛基，十二烷基，等。“支链烷基”是指具有至少一个支链的烷基部分，例如异丙基，异丁基，叔丁基，等。类似地，“低级烷氧基”是指-OR形式的部分，并且“酰基”是指-C(O)R形式的部分，其中R是低级烷基。 

“亚烷基”是指1-6个碳原子的直链饱和二价烃部分或3-6个碳原子的支链饱和二价烃基团，例如亚甲基，亚乙基，2，2-二甲基亚乙基，亚丙基，2-甲基亚丙基，亚丁基，亚戊基，等。 

“亚烷二氧基”是指式-O-R-O-的二价部分，其中R是本文定义的亚烷基。 

“芳基”是指单价环状芳族烃部分，其由单-、二-或三环芳环组成。芳基可以如本文定义被任选地取代。芳基部分的实例包括但不限于，任选取代的苯基，萘基，菲基，芴基，茚基，并环戊二烯基，甘菊环基，氧联二苯基，联苯基，亚甲二苯基，氨基二苯基，二苯硫基，二苯磺酰基，二苯基亚异丙基，苯并二 烷基，苯并呋喃基，苯并间二氧杂环戊烯基(benzodioxylyl)，苯并吡喃基，苯并 嗪基，苯并 嗪酮基，苯并哌啶基(benzopiperadinyl)，苯并哌嗪基，苯并吡咯烷基，苯并吗啉基，亚甲二氧 基苯基，亚乙二氧基苯基，等，包括它们部分氢化的衍生物。 

“杂芳基”是指具有1、2或3个环杂原子的5至7个环原子的单环部分，所述环杂原子选自N、O或S，其余环原子是C。杂芳基环可以是任选取代的，如本文所限定。杂芳基部分的实例包括，而不限于，任选取代的咪唑基、 唑基、异 唑基、噻唑基、异噻唑基、 二唑基、噻二唑基、吡嗪基、噻吩基(thienyl)、噻吩基(thiophenyl)、呋喃基、吡喃基、吡啶基、吡咯基、吡唑基、嘧啶基、哒嗪基等，包括它们的部分氢化的衍生物。 

术语“卤代”、“卤素”和“卤化物”在本文中可交换地使用并且是指取代基氟、氯、溴或碘。术语“氧代”是指双键氧，即，＝O。术语“缩酮”在本文中使用时是指酮衍生物，其中两个烷氧基结合到相同碳原子上，或者式-O-(低级烷基)-O-的基团的两端都结合到单一碳原子上。 

术语“氨基酸”在本文中使用时是指具有氨基和羧酸基两者的有机部分。例举性氨基酸包括丙氨酸、β-丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸、色氨酸和酪氨酸。 

“任选取代的”是指所提及的基团可以独立地被一个或多个取代基取代，优选被1至4个，更优选被1至3个如上所述的取代基取代。例如，“任选被OH取代的环烷基”将包括在其定义内的、未取代的或被一个或多个羟基取代的全部环烷基基团。符合所述定义的例举性基团包括，而不限于，环丁基、环己基、环戊基、环丙基、2-羟基环丁基、羟基环丙基、3，4-二羟基环己基、3-羟基环戊基等。 

“离去基团”是指具有与它在合成有机化学中常规相关的含义的基团，即在置换反应条件下可替换的原子或基团。离去基团的实例包括但不限于卤素，烷基或亚芳基磺酰基氧基，如甲磺酰基氧基，乙磺酰基氧基，硫甲基，苯磺酰基氧基，甲苯磺酰基氧基，和噻吩基氧基，二卤代膦酰基氧基，任选取代的苄氧基，异丙氧基，酰氧基，等。 

“疾病”和“疾病状态”是指任何疾病，病症，症状，障碍或适应症。 

“惰性有机溶剂”或“惰性溶剂”是指溶剂在与之关联描述的反应条件下是惰性的，包括例如苯，甲苯，乙腈，四氢呋喃，N，N-二甲基甲酰胺，氯 仿，亚甲基氯或二氯甲烷，二氯乙烷，二乙醚，乙酸乙酯，丙酮，甲基乙基酮，甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，叔丁醇，二 烷，吡啶，等。除非指示相反，在本发明的反应中使用的溶剂是惰性溶剂。 

“药用的”是指其可用于制备药物组合物，通常是安全、非毒性的和既不在生物学上，也不在其它方面不合需要的，并且包括适合于兽医学以及人类药用的那些。 

化合物的“药用盐”是指如本文定义的药用的盐，并且该盐具有所需的母体化合物药理学活性。这些盐包括： 

与无机酸形成的酸加成盐或与有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，等；所述有机酸如乙酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，富马酸，葡庚糖酸，葡糖酸，谷氨酸，羟基乙酸，羟萘甲酸，2-羟基乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，丙二酸，苦杏仁酸，甲磺酸，粘康酸，2-萘磺酸，丙酸，水杨酸，琥珀酸，酒石酸，对甲苯磺酸，三甲基乙酸，等；或 

当在母体化合物中存在的酸性质子被金属离子(例如碱金属离子，碱土离子，或铝离子)替换时形成的盐或与有机或无机碱配位形成的盐。可接受的有机碱包括二乙醇胺，乙醇胺，N-甲基葡糖胺，三乙醇胺，氨丁三醇，等。可接受的无机碱包括氢氧化铝，氢氧化钙，氢氧化钾，碳酸钠，氢氧化钠，等。 

优选的药用盐是从乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、马来酸、磷酸、酒石酸、柠檬酸、钠、钾、钙、锌和镁形成的盐。 

“保护基”或“保护基团”是指在多官能化合物中选择性地封闭一个活性位点以使化学反应可以选择性地在另一个未保护的活性位点进行的化学基团，其含义属于与其在合成化学中相关的常规含义。本发明的某些方法依赖于保护基以封闭在反应物中存在的活性氮和/或氧原子。例如，术语“氨基保护基”和“氮保护基”在本文中可以交换使用，并且是指意欲在合成过程中保护氮原子免于不希望有的反应的那些有机基团。例举性的氮保护基包括但不限于三氟乙酰基，乙酰氨基，苄基(Bn)，苄氧羰基(苯甲氧甲酰基，CBZ)，对甲氧基苄氧羰基，对硝基苄氧羰基，叔丁氧羰基(BOC)，等。本领域技术人员将知道如何选择易于去除和能够经受下列反应的基团。 

“受治者”是指哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物是指哺乳纲的任何成员，包括但不限于：人类；非人类灵长类如黑猩猩和其它类人猿以及猴种；农畜如牛，马，绵羊，山羊和猪；家畜如兔，狗和猫；实验室动物，包括啮齿动物，如大鼠，小鼠和豚鼠，等。非哺乳动物的实例包括但不限于鸟类等。术语“受治者”不指定具体年龄或性别。 

“治疗有效量”指当向受治者给药以治疗疾病状态时，足以实现对该疾病状态的这种治疗的化合物的量。“治疗有效量”将根据化合物、被治疗的疾病状态、被治疗疾病的严重性、受治者的年龄和相对健康、给药途径和形式、主治医师或兽医从业者的判断、和其它因素而改变。 

术语“如上所定义的那些”和“本文中所定义的那些”当涉及变量时，通过引用而结合该变量的广义定义，以及优选的、更优选的和最优选的定义(如果有的话)。 

疾病状态的“治疗”或“疗法”包括： 

(i)预防疾病状态，也就是使疾病状态的临床症状不会在受治者中发展，所述的受治者可能与该疾病状态接触或易患有该疾病状态但还不曾经历或显现出疾病状态的症状， 

(ii)抑制疾病状态，即，阻止该疾病状态或其临床症状的发展，或 

(iii)缓解疾病状态，也就是引起疾病状态或其临床症状的暂时或永久消退。 

术语“处理”、“接触”和“反应”，当涉及化学反应时，是指在适宜的条件下加入或混合两种或更多种的试剂，以生成所示和/或所需要的产物。应当理解的是，生成所示和/或所需产物的反应可以不必直接由最初加入的两种试剂的组合而得到，即，可以存在一种或多种在混合物中生成的中间体，所述的中间体最终导致所示和/或所需产物的形成。术语“无氧气氛”在本文中使用时是指一般不包括氧的气氛。在无氧气氛下进行的反应可以通过例如使氮气或氩气(或另一种惰性气体)鼓泡通过反应混合物并且优选还将反应物脱气来进行。术语“升高的pH”是指具有中强碱诸如，例如Na₂CO₃存在的反应混合物，无论反应混合物是否完全是水性的。术语“升高的温度”在本文中使用时是指反应温度超过70℃，典型地超过105℃。 

式I的化合物可用于，而不限于，治疗受治者的炎症和/或疼痛。本发 明化合物可以用于治疗由关节炎引起的疼痛和炎症，所述关节炎无限制地包括类风湿性关节炎、脊柱关节病、痛风关节炎、骨关节炎、系统性红斑狼疮和幼年型关节炎、骨关节炎、痛风关节炎和其它关节炎病症。这种化合物还可用于治疗肺部紊乱或肺部炎症，包括成人型呼吸窘迫综合征、肺结节病、哮喘、硅沉着病和慢性肺部炎性疾病。所述化合物还可用于治疗由病毒和细菌感染引起的炎症，包括脓毒病、感染性休克、革兰氏阴性脓毒病、疟疾、脑膜炎、感染或恶性继发的恶病质、肺炎和疱疹病毒。 

“疼痛”是指或多或少的不适、痛苦或剧痛的局部感觉，是由专门的神经末端的刺激引起的。存在许多类型的疼痛，无限制地包括，闪痛、幻痛、射痛、急性痛、炎性疼痛、神经性疼痛、复合区域性疼痛、神经痛、神经病等(Dorland插图医学词典(Dorland′s Illustrated Medical Dictionary)，第28版，W.B.Saunders公司(W.B.Saunders Company)，费城，宾夕法尼亚州)。疼痛治疗的目的是减轻由治疗受治者感知到的疼痛严重程度。“神经性疼痛”是指由周围神经系统中机能失调和/或病变以及非炎性损害引起的疼痛。神经性疼痛的实例包括，但不限于，热或机械痛觉过敏、热或机械异常性疼痛、糖尿病性疼痛、压迫性损害疼痛等。 

命名法和结构 

通常，本申请中使用的命名法基于AUTONOM^TM v.4.0，一种用于生成IUPAC系统命名的Beilstein研究所(Beilstein Institute)计算机化系统。本文中所示的化学结构是使用 2.2版得到的。本文的结构中的碳、氧或氮原子上出现的任何空的价态表示氢原子的存在。 

只要在化学结构中存在手性碳，这就意味着该结构涵盖所有与该手性碳相关的立体异构体。 

在本文中标识的所有专利和出版物通过引用将它们完整地结合于此。 

通用方法 

本发明的一个方面提供式I的化合物： 

其中R¹是H、-OH、-OR或羟基-低级烷基，其中R是低级烷基、苄基、芳基-低级烷基或甲磺酰基-低级烷基； 

R²是-OH、-NH₂、-CH₂SO₂R⁴、-SO₂R⁴、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或 其中R³是H、低级酰基或氨基酸；R⁴是低级烷基、-NH₂、低级烷基-氨基或二(低级烷基)氨基；R⁵是H或低级烷基；或其药用盐。 

在一些实施方案中，本发明提供式I化合物： 

其中R¹是H、-OH、-OR或羟基-低级烷基，其中R是低级烷基、苄基、芳基-低级烷基或甲磺酰基-低级烷基； 

R²是-OH、-NH₂、-SO₂R⁴、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或 其中R³是H、低级酰基或氨基酸；R⁴是低级烷基、-NH₂、低级烷基-氨基或二(低级烷基)氨基；R⁵是H或低级烷基；或其药用盐。 

在一些实施方案中，R²是-NHSO₂CH₃。在这些实施方案的一些中，R¹是H、苄氧基或2-羟基丙-2-基。 

在一些实施方案中，R²是4-羟基-哌啶-1-基-羰基。在这些实施方案的 一些中，R¹是H、3-甲磺酰基丙氧基、苄氧基或2-羟基丙-2-基。 

在一些实施方案中，R²是-NHSO₂N(CH₃)₂。在这些实施方案的一些中，R¹是苄氧基或2-羟基丙-2-基。 

在一些实施方案中，R²是-OH。在这些实施方案的一些中，R¹是H、苄氧基或2-羟基丙-2-基。 

在一些实施方案中，R²是CO₂R⁵。在这些实施方案的一些中，R⁵是低级烷基。在这些实施方案的一些中，R⁵是乙基。在这些实施方案的一些中，R¹是H或苄氧基。 

本发明的另一方面是治疗炎症的方法，该方法包括将有效量的本发明化合物向需要其的受治者给药。 

本发明的另一方面是药物组合物，所述药物组合物包含本发明化合物和药用赋形剂。 

应当理解，本文中描述的不同基团的组合可以形成其它实施方案。以此方式，各种不同的化合物具体体现在本发明内。 

本发明的代表性化合物显示在下表1中。 

表1.代表性的式I化合物。 

合成 

本发明的化合物可以通过在以下实施例部分中所示的例举性实施例中描述的各种各样的方法进行制备。在制备这些化合物中所用的原料和试剂通常可以从商业供应商如奥尔德利希化学公司(Aldrich Chemical Co.)获得，或者通过本领域技术人员已知的方法，按照在参考文献中规定的程序制备，所述参考文献如有机合成费尔舍和费尔舍氏试剂(Fieser and Fieser’sReagents for Organic Synthesis)；Wiley & Sons：纽约，1991，卷1-15；罗德氏碳化合物化学(Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds)，Elsevier科学出版社(Elsevier Science Publishers)，1989，卷1-5和增刊；和有机反应(Organic Reactions)，Wiley & Sons：纽约，1991，卷1-40。下面的合成反应方案仅仅是一些方法的举例说明，通过所述的方法可以合成本发明的化合物，并且可以对这些合成反应方案进行各种改进，而且本领域的技术人员在参考本文中所包含的公开内容后将受到启示。 

如果需要，可以对合成反应方案中的原料和中间体使用常规技术进行分离和纯化，所述的常规技术包括但不限于，过滤、蒸馏、结晶、色谱法 等。这些物质可以使用常规手段，包括物理常数和光谱数据来表征。 

除非有相反的规定，本文中所述的反应优选在下面的条件下进行：惰性气氛，大气压，反应温度范围为约-78℃至约230℃，并且最优选和适宜地为室温(或环境温度)，例如约20℃。 

在下列方案中，如果没有不同规定，R¹，R²等如上定义。 

方案I： 

步骤(a)：在适合的溶剂诸如EtOH中使用中强碱诸如NaHCO₃将取代的吡啶(II)与卤代-乙醛缩合，加热直到反应完成以形成咪唑[1，2-a]吡啶中间体III。 

步骤(b)：将中间体III通过标准方法卤化，诸如在室温通过在适合的溶剂例如DCM中用NBS处理中间体，以形成中间体IV。 

步骤(c)：将中间体IV偶联到甲硫基嘧啶衍生物以提供中间体V，例如在二 烷中使用Pd₂(dba)₃、Pt-Bu₃·HBF₄和CsF，加热过夜。 

步骤(d)：例如在DCM中使用MCPBA将中间体(V)的硫烷基嘧啶氧化成亚磺酰基，以提供中间体(VI)。 

步骤(e)：然后通过在中强碱诸如三乙胺存在下，在适合的溶剂诸如NMP中加热，将中间体(VI)的甲亚磺酰基基团用4-氨基-环己烷衍生物置换，以提供本发明的化合物。然后可以进一步将R²取代基修饰，例如无限制地，通过酯化、酰胺化等，以提供本发明的其它化合物。 

方案II： 

步骤(a)：在二 烷中使用Pd₂(dba)₃、P(cyc)₃和KOAc将咪唑[1，2-a]吡啶中间体IV用硼酸酯衍生物诸如联(四甲基-[1，3，2]二氧环戊硼烷)处理，以提供中间体IVa。 

步骤(b)：使用PdC(PPh₃)₄、Na₂CO₃、MeCN和水将中间体IVa用二氯嘧啶处理，以提供中间体Va。 

步骤(c)：然后将中间体(IVa)的卤代基团用取代的环己胺置换，例如通过在NMP中加热，以提供本发明的化合物。 

可能有用的其它合成方法描述在2007年9月7日提交的USSN 11/899,758和2007年12月7日提交的USSN 12/001,021中，将两者通过引用全部并入本文。 

然后，可以将产物例如通过萃取、结晶、制备型HPLC，急骤色谱，薄层色谱等纯化。

实用性 

本发明的化合物是JNK调节剂，因此预计有效用于治疗各种各样的JNK介导的疾病。例举的JNK介导的病症包括但不限于自身免疫疾病，炎性疾病，代谢疾病，神经性疾病，和癌症。因此，本发明的化合物可以用于治疗一种或多种这些病症。在一些实施方案中，本发明的化合物可以用于治疗JNK介导的疾病，如类风湿性关节炎，哮喘，II型糖尿病，阿尔 茨海默病，帕金森病或中风。 

给药和药物组合物 

本发明包括药物组合物，该药物组合物包含本发明的至少一种化合物，或其单独的异构体、异构体的外消旋或非消旋混合物，或其药用盐或溶剂化物，以及至少一种药用载体，和任选的其它治疗和/或预防成分。 

通常，本发明的化合物将以治疗有效量，通过所接受的起类似效用的药剂给药方式中的任何一种给药。适宜的剂量范围典型地为每天1-500mg，优选每天1-100mg，并且最优选每天1-30mg，这取决于众多因素，如待治疗疾病的严重性、受治者的年龄和相对健康，所使用化合物的效力，给药途径和形式，给药针对的适应证以及有关医师的喜好和经验。治疗这种疾病的领域中的普通技术人员将能够在不经过多实验并且依靠个人知识和本申请的公开内容的情况下，确定本发明的化合物对于给定疾病的治疗有效量。 

本发明化合物可以以药物制剂形式给药，所述的制剂包括适宜于下列的那些：口服(包括含服和舌下服用)、直肠、鼻、局部、肺、阴道或胃肠外(包括肌肉内、动脉内、鞘内、皮下和静脉内)给药；或以适宜于通过吸入或吹入给药的形式给药。优选的给药方式通常是口服，使用可以根据痛苦的程度而调节的方便的每日剂量服法。 

可以将本发明的一种或多种化合物与一种或多种常规的辅剂、载体或稀释剂放入药物组合物和单位剂量形式中。药物组合物和单位剂量形式可以包括常规比例的常规成分，具有或没有另外的活性化合物或要素，并且单位剂量形式可以含有与将采用的预定每日剂量范围相称的任何适宜有效量的活性成分。药物组合物的采用形式可以是固体如片剂或填充胶囊，半固体，粉剂，持续释放制剂，或液体如溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂，或口服用的填充胶囊；或者是直肠或阴道给药的栓剂形式；或者是胃肠外使用的无菌注射溶液形式。每片含有约一(1)毫克活性成分，或者更广泛地，约0.01至约一百(100)毫克活性成分的制剂相应地是适宜的代表性单位剂量形式。 

可以将本发明的化合物配制成各种各样的口服给药剂量形式。药物组 合物和剂量形式可以包含本发明的一种或多种化合物或其药用盐作为活性组分。药用载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂和分散性颗粒。固体载体可以是一种或多种还可以用作以下的物质：稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、混悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。粉剂中，载体通常是细碎的固体，其是与细碎的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常与具有所需要粘合能力的载体以适宜比例混合并且压制为所需要的形状和大小。粉剂和片剂优选含有约一(1)至约七十(70)百分比的活性化合物。适宜的载体包括但不限于碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂、等。术语“制剂”意在包括活性化合物与作为载体的包封材料的制剂，以提供胶囊，其中在有或没有载体的情况下活性组分被与它结合的载体包围。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以作为适宜于口服给药的固体形式。 

适宜于口服给药的其它形式包括液体形式制剂，其包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水性溶液剂、水性混悬剂，或意欲在即将使用前转变为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以在溶液中制备，例如在丙二醇水溶液中制备，或者可以含有乳化剂，例如，诸如卵磷脂、脱水山梨糖醇一油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可以通过将活性组分溶解于水中并且加入适宜的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性混悬剂可以通过将细碎的活性组分分散在具有粘性物质的水中来制备，所述粘性物质如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的悬浮剂。固体形式制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，并且除了活性组分外，还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂、等。 

可以配制本发明的化合物用于肠胃外给药(例如，通过注射如推注或连续输注)，并且可以以单位剂量形式存在于安瓿、预装注射器、小体积输注中，或者存在于加有防腐剂的多剂量容器中。该组合物可以采取的形式如在油性或水性赋形剂中的混悬剂、溶液剂或乳剂，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液剂。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如，橄榄油)以及可注射的有机酯类(例如，油酸 乙酯)，并且可以含有配制剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。备选地，活性成分可以是粉末形式，其是通过灭菌固体的无菌分离或通过溶液的冻干而得到的，用于使用前用适宜赋形剂如无菌的无热原水配制。 

可以配制本发明的化合物，作为软膏、乳膏或洗剂，或作为透皮贴片用于对表皮的局部给药。软膏和乳膏例如可以用水性或油性基质，在加入适宜的增稠剂和/或胶凝剂的情况下配制。洗剂可以用水性或油性基质配制，并且通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。适宜于口中局部给药的制剂包括：锭剂，其在调味基质中包含活性成分，所述的调味基质通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶；软锭剂，其在惰性基质中包含活性成分，所述的惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶；以及漱口药，其在适宜液体载体中包含活性成分。 

可以配制本发明的化合物作为栓剂用于给药。首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化，并且将活性组分通过例如搅拌均匀地分散。然后，将熔融的均匀混合物倾倒入适宜大小的模具中，使其冷却，并且固化。 

可以配制本发明的化合物用于阴道给药。除了活性成分外还含有这种载体的子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、膏剂、泡沫或喷雾剂如本领域中已知是适宜的。 

可以配制主题化合物用于经鼻给药。由常规装置例如用滴管、吸管或喷雾器将溶液剂或混悬剂直接施用至鼻腔。制剂可以以单剂量或多剂量形式提供。在滴管或吸管的后一种情况下，这可以通过患者给药适宜的、预定体积的溶液剂或混悬剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量喷雾泵来实现。 

可以配制本发明的化合物用于气雾剂给药，特别是对呼吸道给药，并且包括鼻内给药。该化合物通常将具有小粒度，例如约五(5)微米以下。这样的粒度可以通过本领域中已知的方式获得，例如通过微粉化获得。将活性成分提供在具有适宜推进剂的加压容器中，所述的推进剂如氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其它适宜的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的 剂量可以通过计量阀来控制。备选地，活性成分可以以干粉的形式提供，例如化合物在适宜粉末基质中的粉末混合物，所述的粉末基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如在如明胶的胶囊或药筒中，或泡眼包装中，这些包装中的粉末剂可以通过吸入器给药。 

需要时，可以用适宜于活性成分的持续或受控释放给药的肠溶衣制备制剂。例如，可以将本发明的化合物配制在透皮或皮下药物递送装置中。当需要化合物的持续释放时，以及当患者对治疗方式的顺从性是关键的时，这些递送系统是有利的。常常将透皮递送系统中的化合物粘附至皮肤-粘合性固体载体上。感兴趣的化合物也可以与渗透增强剂例如月桂氮 酮(1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮)组合。将持续释放递送系统通过外科手术或注射皮下插入至皮下层。皮下植入物将该化合物封装在脂溶性膜如硅橡胶或可生物降解的聚合物如聚乳酸中。 

药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式下，将制剂再分成含有适宜量的活性成分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装制剂，该包装含有离散量的制剂，如小包片剂、胶囊和在管瓶或安瓿中的粉剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适宜数量的包装形式的这些中的任何一种。 

其它适宜的药物载体以及它们的制剂描述于：雷明顿：药物科学与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)1995，由E.W.Martin编辑，Mack出版公司，第19版，Easton，宾夕法尼亚州。下面描述了含有本发明化合物的代表性药物制剂。 

实施例

在研究本发明的下列不意欲是限制性的实施例后，本发明的另外的目的、优势和新特征对于本领域技术人员而言将是明显的。 

在研究本发明的下列不意欲是限制性的实施例后，本发明的另外的目的、优势和新特征对于本领域技术人员而言将是明显的。 

缩写名单 

AcOH(乙酸)；Bn(苄基)；BOP(苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基) 六氟磷酸盐)；(BOC)₂O(二碳酸二叔丁酯)；CSI(氯磺酰基异氰酸酯)；DBU(1，8-二氮杂二环[5.4.0]-十一碳-7-烯)；DCM(二氯甲烷(亚甲基氯))；DEA(二乙胺)；DIPEA(二异丙基乙胺)；DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；Et₂O(乙醚)；EtOH(乙醇)；EtOAc(乙酸乙酯)；HOBt(1-羟基苯并三唑)；i-PrOH(异丙醇)；LAH(氢化铝锂)；m-CPBA((也是MCPBA)3-氯过氧苯甲酸)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；MW(微波)；NCS(N-氯丁二酰亚胺)；NMP(1-甲基-2-吡咯烷酮)；p-TSA(对甲苯磺酸)；RT(室温)；TEA(三乙胺)；THF(四氢呋喃)；TLC(薄层色谱法)。 

实施例1：合成2-{3-[2-(4-甲磺酰甲基-环己基氨基)-嘧啶-4-基]-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基}-丙-2-醇(化合物1)

(A)将EtOH(500mL)添加到2-氨基-烟酸(25g)，接着是H₂SO₄(25mL，浓的)，并将混合物在75℃搅拌过夜。然后将反应混合物再溶解在H₂O中，用Na₂CO₃(水溶液)中和，并将得到的沉淀过滤并干燥，提供2-氨基-烟酸乙酯，将其在不进一步纯化的情况下使用。 

(B)将2-氨基-烟酸乙酯(13.845g)、ClCH₂CHO(58mL)和NaHCO₃(11.85g)的混合物在EtOH(500mL)中回流搅拌过夜。将反应混合物浓缩，用H₂O稀释，并用DCM萃取。将产物用ISCO纯化，首先使用100％EtOAc(为了除去未反应的起始原料)，然后使用100％ DCM至5％MeOH/DCM。将产物在3％ MeOH/DCM洗脱，提供咪唑并[1，2-a]吡啶-8-甲酸乙酯(10.5g)。 

(C)将咪唑并[1，2-a]吡啶-8-甲酸乙酯(3.5g)在THF(200mL)中的混合物在室温用MeMgBr(4当量，3M，在Et₂O中)逐滴处理，并搅拌过夜。将反应混合物用水猝灭，用EtOAc萃取，并通过ISCO使用100％ EtOAc纯化，提供2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)-丙-2-醇。 

(D)向DCM(250mL)中的2-(咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)-丙-2-醇(1.5g)添加NBS(1.67g)，并将混合物在室温搅拌1h。然后将反应混合物用水稀释，将有机层萃取并经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。通过ISCO使用20％ EtOAc/己烷至100％ EtOAc纯化产物，提供2-(3-溴-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)-丙-2-醇(1.75g)。 

(E)将二 烷中的2-(3-溴-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基)-丙-2-醇(1.75g)的溶液在150mL瓶中脱气，并用氩气吹扫。向此添加2-甲硫基-4-三丁基锡烷基-嘧啶(2.85g)、Pd₂(dba)₃(0.63g)和Pt-Bu₃·HBF₄(0.8g)以及CsF(2.1g)，将瓶密封，并将混合物在100℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却到室温，过滤，并将滤液浓缩并通过ISCO使用EtOAc/己烷纯化，提供2-[3-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.675g)。 

(F)将DCM(100mL)中的2-[3-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.5g)溶液冷却到0℃，并添加MCPBA(0.376g)。将反应混合物在0℃搅拌2h，然后用10％ Na₂S₂O₃(水溶液)猝灭。将有机层用NaHCO₃(饱和水溶液)洗涤，分离，并经Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩，并用EtOAc研磨(titurate)并过滤，提供2-[3-(2-甲亚磺酰基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.4g)。 

(G)将NMP(2mL)中的2-[3-(2-甲亚磺酰基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(75mg)、4-甲磺酰甲基-环己胺(162mg)和TEA(0.165mL)混合物在100℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却到室温，并用水稀释。将得到的沉淀过滤并干燥，然后通过ISCO使用100％ DCM至10％MeOH/DCM纯化。将级分收集，浓缩，并用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供2-{3-[2-(4-甲磺酰甲基-环己基氨基)-嘧啶-4-基]-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基}-丙-2-醇(化合物1，55.5mg)。熔点＝223-224℃。 

实施例2：合成(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮(化合物2)

(A)将NMP(2mL)中的2-[3-(2-甲亚磺酰基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.19g)、4-氨基-环己烷甲酸乙酯(0.31g)的混合物在100℃搅拌3h。将反应混合物冷却到室温，并用水稀释。将得到的固体过滤并干燥，然后通过ISCO使用100％ DCM至10％ MeOH/DCM纯化。将级分收集，浓缩，并用EtOAc/己烷研磨。将得到的固体过滤并在真空下在 50℃干燥过夜，提供4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸乙酯(0.215g)。 

(B)将4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸乙酯(0.215g)、LiOH·H₂O(0.106g)、THF(20mL)、EtOH(5mL)和水(5mL)的混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩以除去THF和EtOH，用HCl(1N)中和，并将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸(0.175g)，将其在不进一步纯化的情况下使用。 

(C)将DMF(5mL)中的4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸(0.175g)、BOP(0.39g)、DIEA(0.23mL)和哌啶-4-醇(67mg)的混合物在室温搅拌过夜。将得到的固体过滤并干燥，通过ISCO使用100％ DCM至20％ MeOH/DCM纯化。将级分收集并浓缩，然后用EtOAc研磨，并将得到的固体过滤并在50℃干燥过夜，提供(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮(化合物2，140.4mg)。熔点＝188.0-190.0℃。 

实施例3：合成N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲磺酰胺(化合物3) 

将NMP(1.5mL)中的2-[3-(2-甲亚磺酰基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.15g)和N-(4-氨基-环己基)-甲磺酰胺(0.325g)的混合物用TEA(0.33mL)处理并在105℃加热18h。然后将反应混合物冷却到室温并用水稀释。将得到的沉淀过滤，用水洗涤，并干燥。通过ISCO使用100％ DCM至15％ MeOH/DCM纯化产物。将纯级分收集，浓缩，并用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲磺酰胺(化合物3，84.9mg)。 

实施例4：合成N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(N，N-二甲基氨基)磺酰胺(化合物4) 

将NMP(2mL)中的2-[3-(2-甲亚磺酰基-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基]-丙-2-醇(0.14g)和N-(4-氨基-环己基)-N’，N’-二甲基氨基磺酰胺(0.34g)的混合物用TEA(0.31mL)处理并在100℃加热8h。然后将反应混合物冷却到室温并用水稀释。将产物用EtOAc萃取并通过ISCO使用100％DCM至15％ MeOH/DCM纯化，提供N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(N’，N’-二甲基)磺酰胺(化合物4，70mg)。 

实施例5：合成(4-羟基-哌啶-1-基)-(4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲酮(化合物5)

(A)将3-苄氧基-2-氨基吡啶(25.0g)、氯乙醛(16.7mL，50％水溶液)和EtOH(200mL)的混合物在密封的500mL管中在80℃加热19h。然后将反应混合物冷却到室温并浓缩成残留物。将残留的油放入NaOH(1N水溶液，125mL)中，并用DCM萃取。将有机层用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，并浓缩，提供固体，将其在真空下干燥过夜。在不进一步纯化的情况下使用产物8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶(25.6g)。 

(B)在室温向EtOH(250mL)中的8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶(25.46g)的溶液滴加在水(7mL)中的Br₂(7.03mL)。将得到的深橙色悬浮液在室温搅拌1h。将反应混合物用NaOH(90mL，1N)稀释并用DCM萃取。将有机层经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。产物在尝试纯化期间在柱上和装管(tubing)中粉碎。回收的产物提供8-苄氧基-3-溴-咪唑并[1，2-a]吡啶(21g)。 

(C)将二 烷(150mL)中8-苄氧基-3-溴-咪唑并[1，2-a]吡啶(18.7g)的溶液添加到350mL管并脱气。向此添加Pd₂(dba)₃(1.122g)、P(cyc)₃(1.37g)、4，4，5，5，4’，4’，5’，5’-八甲基-[2，2’]联[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷](18.7g)和KOAc(18.14g)，并将混合物在95℃搅拌过夜。将反应混合物冷却到室温，并用水和EtOAc稀释。将有机层分离，经Na₂SO₄干燥，过滤，并浓缩。将残留物用EtOAc研磨，并将得到的固体过滤并干燥。将产物放入热EtOAc中，用加热枪加热，并热滤。将滤液冷却，并将固体分离，过滤， 并在真空下在50℃干燥过夜，提供8-苄氧基-3-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(1.67g)。 

(D)将MeCN(100mL)中的2，4-二氯嘧啶(1.95g)放入350mL管中，并将混合物脱气。向此添加四(三苯基膦)钯(Pd(PPh₃)₄，0.5g)，接着是Na₂CO₃(1.85g，在100mL水中)和8-苄氧基-3-(4，4，5，5-四甲基[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(1.167g)。将反应混合物脱气，将管用氩气吹扫并密封，并将混合物在95℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却到室温并浓缩，用EtOAc萃取，通过ISCO使用50％ EtOAc/己烷至100％EtOAc纯化。将纯级分收集并浓缩，并将残留物用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供8-苄氧基-3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.5g)。 

(E)将NMP(1mL)中8-苄氧基-3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.19g)和4-氨基-环己烷甲酸乙酯(0.29g)的混合物在100℃搅拌1h。将反应混合物冷却到室温，用水稀释，并将得到的固体分离，用水洗涤，并干燥。将固体用热EtOAc研磨并过滤，提供4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯(化合物8，0.25g)，将其在不进一步纯化的情况下使用。 

(F)将EtOH(200mL)中4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯(0.215g)和Pd/C(10％，600mg)的混合物在H₂下搅拌过夜。将反应混合物加热并通过二氧化硅热过滤。将产物用DCM洗涤，并将滤液浓缩并干燥，提供4-[4-(8-羟基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯(128mg)，将其在不进一步纯化的情况下使用。 

将NMP(1mL)中4-[4-(8-羟基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯(0.127g)、1-氯-3-甲磺酰基丙烷(63.5mg)，K₂CO₃(137mg)和NaI(5mg)的混合物在90℃搅拌1h。将反应混合物冷却到室温并用水稀释。将得到的固体过滤并用水洗涤，然后干燥并通过ISCO使用100％ DCM至20％ MeOH/DCM纯化，提供4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基甲基}-环己烷甲酸乙酯(0.1g)。 

(H)将THF(20mL)、EtOH(5mL)和水(5mL)中4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸乙酯(0.1g)和LiOH·H₂O(42mg)的混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物浓缩，用水稀释，用HCl(1N)中和，并将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸(90mg)，将其在不进一步纯化的情况下使用。 

(I)将DMF(3mL)中4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己烷甲酸(0.09g)的溶液用BOP(0.126g)处理，并将混合物在室温搅拌15min。添加DIEA(0.1mL)和哌啶-4-醇(29mg)，并将混合物在室温搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释并在室温搅拌30min，容许产物沉淀。将得到的固体过滤，用水洗涤，干燥，并用EtOAc研磨。将产物过滤，在真空下在50℃干燥过夜，提供(4-羟基-哌啶-1-基)-(4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲酮(化合物5，71mg)。 

实施例6：合成{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮(化合物6)

将4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯(0.23g)在DMF(10mL)中的混合物用BOP(79mg)、然后用DIEA(0.345g)、然后用哌啶-4-醇(79mg)处理，并将混合物在室温搅拌5h。然后将反应混合物用水稀释，并将得到的固体过滤，用水洗涤，并干燥。然后将固体溶解在热EtOAc、MeOH和DCM中，并将溶液热滤。将产物在真空下在50℃干燥过夜，提供{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮(化合物6，244mg)。 

实施例7：合成N-{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-甲磺酰胺(化合物7)

将NMP(2mL)中8-苄氧基-3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.1g)，N-(4-氨基-环己基)-甲磺酰胺(0.2g)和TEA(0.21mL)的混合物在100℃搅拌过夜。将反应混合物冷却到室温，用水稀释，并将得到的固体过滤，用 水洗涤，并干燥。通过ISCO使用100％ DCM至15％ MeOH/DCM将产物纯化两次。将纯级分收集，浓缩，并用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供N-{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-甲磺酰胺(化合物7，14mg)。 

实施例8：合成4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己醇(化合物9)

将NMP(2mL)中8-苄氧基-3-(2-氯-嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.1g)和4-氨基-环己醇(0.1g)的混合物在100℃搅拌3h。然后将反应混合物冷却到室温，用水稀释，并将得到的固体过滤，用水洗涤，并干燥。通过ISCO使用100％ DCM至15％ MeOH/DCM纯化产物。将纯级分收集并浓缩。将残留物用EtOAc研磨，并将固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供N-[1-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己醇(化合物9，84.8mg)。 

实施例9：合成N-[4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己基]-甲磺酰胺(化合物10) 

(A)将MeCN(25mL)中的2，4-二氯嘧啶(0.9g)的溶液脱气，然后用Pd(PPh₃)₄(0.348g)、3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.75g)和Na₂CO₃(0.954g，在25mL水中)处理。将反应混合物脱气并在100℃搅拌过夜。然后将反应混合物冷却到室温并用水稀释，并将得到的固体过滤，用水洗涤，并干燥。将产物通过ISCO使用100％ DCM至10％ MeOH/DCM纯化，将级分合并并浓缩，并将残留物用EtOAc研磨。将得到的固体过滤，用EtOAc洗涤，并在真空下干燥过夜，提供3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(125mg)。 

(B)将NMP(3mL)中3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(0.125g)，N-(4-氨基-环己基)-甲磺酰胺(0.372g)和TEA(0.38mL)的混合物在105℃搅拌10h。将反应混合物冷却到室温，用水稀释，并将得到的固体过滤，用水洗涤，并干燥。通过ISCO使用100％ DCM至15％ MeOH/DCM纯化产物，将纯级分合并并浓缩，然后用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在 真空下在50℃干燥过夜，提供N-[4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己基]-甲磺酰胺(化合物10，5.8mg)。 

实施例10：合成4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己醇(化合物11) 

将NMP(1mL)中3-(2-氯嘧啶-4-基)-咪唑并[1，2-a]吡啶(30mg)和4-氨基环己醇(45mg)的混合物在105℃搅拌5h。然后将反应混合物冷却到室温并用水研磨。将得到的固体过滤，用水洗涤并干燥。通过ISCO使用100％ DCM至15％ MeOH/DCM纯化产物，并将纯级分合并，浓缩，并用EtOAc研磨。将得到的固体过滤并在真空下在50℃干燥过夜，提供4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己醇(化合物11，22mg)。 

实施例11：制剂 

如下表所示配制用于通过各种路线递送的药物制剂。表中所使用的“活性成分”或“活性化合物”是指一种或多种式I的化合物。 

用于口服给药的组合物 

成分	％重量/重量
		活性成分	20.0％
乳糖	79.5％
		硬脂酸镁	0.5％

将这些成分混合，并且分配在胶囊中，每个胶囊含有约100mg；一个胶囊将接近于总的每日剂量。 

用于口服给药的组合物 

成分	％重量/重量
		活性成分	20.0％
硬脂酸镁	0.5％
		交联羧甲纤维素钠	2.0％
乳糖	76.5％
		PVP(聚乙烯吡咯烷酮)	1.0％

将这些成分混合，并且使用溶剂如甲醇造粒。然后将制剂干燥，并且用合适的压片机形成为片剂(含有约20mg的活性化合物)。 

用于口服给药的组合物 

将这些成分混合，形成口服给药的混悬液。 

肠胃外制剂 

成分	％重量/重量
		活性成分	0.25g
氯化钠	适量以等渗
		注射用水	100ml

将活性成分溶解在部分注射用水中。然后在搅拌下加入足够量的氯化钠，以使溶液等渗。用剩余的注射用水将该溶液补足重量，用0.2微米膜过滤器过滤，并且在无菌条件下包装。

栓剂制剂 

成分	％重量/重量
		活性成分	1.0％
聚乙二醇1000	74.5％
		聚乙二醇4000	24.5％

在蒸气浴上将这些成分一起熔化并且混合，倾倒入容纳2.5g总重量的模具中。 

局部制剂 

将除水外的所有成分混合，并且在搅拌的情况下加热至约60℃。然后，在剧烈搅拌的情况下加入足够量的约60℃的水，以乳化成分，然后加入适量水至约100g。 

鼻喷雾制剂 

制备几种含有约0.025-0.5％的活性化合物的水性混悬液，作为鼻喷雾制剂。这些制剂任选含有诸如例如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、葡萄糖等的惰性成分。可以加入盐酸以调节pH。鼻喷雾制剂可以通过鼻喷雾计量泵来输送，该计量泵典型地每次启动输送约50-100μL制剂。典型的剂量进度是每4-12h喷2-4次。 

实施例12：体外JNK测定 

通过用[γ-³³P]ATP磷酸化GST-ATF2(19-96)来测量JNK活性。在缓冲液中以40μl的终体积以Km浓度的ATP和底物进行酶反应，所述缓冲液含有25mM HEPES，pH 7.5，2mM二硫苏糖醇，150mM NaCl，20mM MgCl₂，0.001％吐温 20，0.1％ BSA和10％ DMSO。人JNK2α2测定含有1nM酶，1μM ATF2，8μM ATP和1uCi[γ-³³P]ATP。人JNK1α1测定含有2nM酶，1μM ATF2，6μM ATP和1μCi[γ-³³P]ATP。人JNK3(Upstate生物技术(Upstate Biotech)#14-501M)测定含有2nM酶，1μM ATF2，4μM ATP和1μCi[γ-³³P]ATP。在存在或不存在几种化合物浓度下进行该酶测定。将JNK和化合物预温育10min，接着通过加入ATP和底物引发酶促反应。将反应混合物在30℃温育30min。在温育结束时，通过将25μl反应混合物转移至150μl的含有135mM EDTA的10％谷胱甘肽琼脂糖 淤浆(Amersham # 27-4574-01)来终止反应。将反应产物捕获在亲和树脂上并在过滤板(Millipore，MABVNOB50)上用磷酸盐缓冲盐水洗涤6次以去除游离的放射性核苷酸。在微板闪烁计数器(Packard Topcount)上将³³P对ATF2的参入定量。通过IC₅₀值测量化合物对JNK的抑制效力，所述IC₅₀值是从拟合到以下3-参数模型的10个浓度抑制曲线产生的：％抑制＝最大值/(1+(IC₅₀/[抑制剂])^斜率)。在微软Excel上分析数据以用于参数评估。结果显示于下表2中： 

表2：人JNK的抑制 

化合物	JNK1-IC50(μM)	JNK2-IC50(μM)
			1		0.2949
2		0.3691
			3		0.1233
4		0.1238
			5	0.0216	0.0503
6	0.0333	0.0559
			7	0.0237	0.0527
8	0.0489	0.1043
			9	0.0269	0.0494
10	0.0567	0.2138
			11	0.0866	0.2535

实施例13：磷-c-Jun易位测定 

炎症是部分通过c-Jun对于炎性途径中的其它基因的作用而调节的。因而，磷酸化的c-Jun易位对于细胞核的抑制提供了化合物的抗炎性活性的指示。SW1353细胞购自美国典型组织培养物保藏中心(American TissueCulture Collection)并在培养条件(在37℃，具有5％CO₂)下维持在含有DMEM培养基(Invitrogen)的生长培养基中，其具有10％胎牛血清(Invitrogen)、抗坏血酸(Sigma)和青霉素/链霉素/谷氨酸(Invitrogen)。将细胞以100μl生长培养基中8,000细胞/孔的密度放入板中，24h以后进行化合物处理。在即将化合物处理之前将生长培养基用90μl新鲜培养基代替。首先将10mM的化合物原液在化合物赋形剂(DMSO)中稀释到3mM，然后在无血清培养基中稀释并以10μl体积的10×浓度溶液的形式添加到每个孔，混合，并与细胞在37℃在5％ CO₂中预温育30分钟。对于全部样品，将化合物赋形剂(DMSO)保持在1％的最终浓度。在30分钟温育以后，将细胞用TNFα(1ng/ml，Roche Biochem)活化20分钟。然后将细胞固定，透化，并用抗磷-c-Jun抗体(Santa Cruz)、接着是Alexa Fluor 488标记的二次抗体和Hoechet 33342染料(Invitrogen)按照制造商的指示染色。通过 ArrayScan HCS系统(Cellomic)，对于每孔400个细胞测量磷-c-Jun的信号。在ActivityBase程序(IDBS)中使用4-参数拟合函数，将IC₅₀值计算为磷-c-Jun活性被抑制到对照值的50％时的化合物浓度。 

实施例14：大鼠体内TNFα-诱导的IL-6生产测定 

使由Charles River实验室(Charles River Laboratories)获得的雌性Wistar-Han大鼠在使用前适应一周，并且达到约95-130g的体重。经由经口管饲对大鼠给药测试化合物，30分钟之后腹膜内激发0.5μg重组大鼠TNF-α(Biosource)。在TNF-α激发90分钟以后，经由心脏穿刺术收集血液。使用肝素锂分离管(BD microtainer)制备血浆并在-80℃冷冻直至分析。使用大鼠特异性IL-6 ELISA试剂盒(Biosource)确定IL-6水平。确定百分比抑制和ED₅₀值(计算为TNF-α生产是对照值的50％时的化合物剂量)。结果表明，本发明化合物抑制TNFα-诱导的IL-6生产。 

实施例15：啮齿动物胶原诱导的关节炎 

在使用前使获自Harlan实验室(Harlan Laboratories)的7-8周龄的雌性Lewis大鼠适应一周，并达到约120-140g的体重。在研究的第0天，在背部不同部位将大鼠皮内(i.d.)接触抗原，其中使用100μg II型牛胶原(Chondrex)在不完全弗氏佐剂(IFA；在2-3个部位总共0.1ml)中的乳剂。在接触抗原后12-14天通常观察到关节炎诱导；然而，在约第7-10天在尾巴基部或背部的备选位点提供100μg胶原/IFA的加强注射(i.d.总共可达0.1ml)，以使疾病诱导同步化。化合物剂量给药可以是预防性的(在加强时或之前1-2天开始)或治疗性的(在加强和符合1-2的初始疾病得分后开始-参见以下临床得分)。在接下来的21天内评估动物的疾病发展和进展。 

使用得分系统(以下描述)，对每个爪使用体积测量计测量爪体积，或用卡钳测量爪或关节厚度，对大鼠进行评估。在第0天进行基线测量，在肿胀的第一个征候时再次开始，每周可达三次，直至实验结束。如下对于每个爪评估得分： 

1＝爪或一个趾的肿胀和/或发红。 

2＝两个或多个关节肿胀。 

3＝爪的严重肿胀，涉及多于两个关节。 

4＝整个爪和趾的严重关节炎。 

通过将四个单爪得分加和来评估每只大鼠的关节炎指数，得出最大分数为16。为了连续测量疾病发作和进展，还通过使用体积测量计测定后爪的爪体积。 

在研究结束时，收集后爪(和其它组织)以进行重量测定，组织学，细胞和/或分子分析。另外，通过心脏穿刺术收集血液，使用肝素锂分离管(BDmicrotainer)制备血浆，并在-70℃冷冻直至进行分析。使用大鼠特异性ELISA试剂盒(R&D)测定来自血浆或来自均化关节组织的炎症细胞因子水平(例如，TNF-α，IL-1和IL-6)。综合相对于对照动物在临床得分、爪体积和组织病理学方面的变化来测定疾病防护或抑制水平。 

实施例16：在TNFα-诱导的人软骨肉瘤SW1353细胞中的IL-8生产测定 

SW1353细胞购自美国典型组织培养物保藏中心并且在37℃、5％ CO₂中的培养条件下在生长培养基中保持，所述培养基由DMEM培养基(Invitrogen)组成，其中含有10％胎牛血清(Invitrogen)，抗坏血酸(Sigma)和青霉素(Invitrogen)。将细胞以1.0×10⁴细胞/孔的密度在100μl培养基中放入板中，48小时后用化合物处理。在即将进行化合物处理前，用160μl的新鲜培养基替换培养基。在生长培养基中稀释化合物原液(10mM)，并以20μl的体积作为10x浓度的溶液加入每孔，混合并使得与细胞预温育30min。保持化合物赋形剂(DMSO)的终浓度在所有样品中为1％。在30min后，用10ng/ml的TNF-α(罗氏生物化学(Roche Biochem))活化细胞。将TNF-α作为在生长培养基中制成的10x浓度的溶液加入，并且以20μl/孔的体积加入。培养细胞板5h。收集细胞培养基并贮存在-20℃。按照制造商的使用说明(BD Bioscience)，通过夹层ELISA分析培养基等分试样中IL-8的存在。使用微软Excel程序中的Xlfit3，将IC₅₀值计算为IL-8生产降低至对照值的50％时化合物的浓度。在本测定中，某些化合物具有的IC₅₀值在0.1-20μM范围内。 

实施例17：卵清蛋白-敏化的哮喘模型 

(A)腹膜内(i.p.)用0.2ml明矾中的100μg的OA(卵清蛋白)将雄性Brown-Norway大鼠敏化三周，每周一次(第0、7和14天)。在最后敏化以后的那周，大鼠准备好用于测试。在激发之前1至2天，将动物称重。在第21天，用赋形剂或化合物制剂对大鼠皮下给药q.d.，30分钟以后OA气雾剂激发(1％ OA，45分钟)并在激发以后4或24小时终止。在处死时，将大鼠麻醉(乌拉坦，约2g/kg，腹膜内)。在终止时从大鼠收集血浆用于PK。在终止时从腹主动脉抽血。插入气管插管并用3×3ml PBS灌洗肺。分析BAL流体的总白细胞数和白细胞分类计数。细胞等分部分(20-100μl)中的总白细胞数使用库尔特计数器(Coulter Counter)确定。对于白细胞分类计数，将50-200μl样品在Cytospin中离心并用Diff-Quik将载玻片染色。使用标准形态规范在光学显微镜下计数单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞的比例并表示为百分比。将残留的BAL流体离心(1500rpm，10min)并将上清液储存在-80℃。还收获肺用于蛋白质和/或RNA分析。 

实施例18：CFA诱导的热痛觉过敏测定 

雄性Wistar大鼠(～200g)购自Charles River实验室(Charles RiverLaboratories)。在研究之前，允许随意的食物和水。在第0天，在异氟烷麻醉下，用50μl(1.0mg/ml)的100％完全弗氏佐剂(CFA；希格玛化学品公司(Sigma Chemical Co)，圣路易斯，密苏里州，美国)注射动物到右后爪的脚底侧中。在从麻醉恢复以后，将大鼠转移到研究室并放在清洁矩形塑料盒中，在那里将热痛觉过敏试验进行30分钟。在习惯化以后，将大鼠返回到它们的正常住处。 

在第1天，使大鼠禁食过夜，并在第2天(CFA注射后48小时)将大鼠转移回到研究室并习惯于该室至少1小时。然后将大鼠在清洁塑料地板上的清洁塑料盒中单独放10分钟，之后开始研究。哈格里夫斯(Hargreaves)试验用于测量热的爪收回阈值。使用脚底试验器(Ugo Basile，意大利)的纤维光学辐射热(强度设定60)通过塑料地板施加到每个后部后爪。记录大鼠从热源移开它的爪的时间。对侧爪的目标阈值是～10s。每只爪测试3次，至少5分钟间隔，在同侧和对侧爪之间交替。在确定基线以后，用赋形剂或药物 对大鼠剂量给药，并当给药后30-120分钟以上时重复试验。试验者对于处理组是盲的。在研究结束时使大鼠通过吸入CO₂而安乐死，并观察5至10分钟以确认发生死亡。本发明化合物有效减轻该测定中的疼痛。 

Claims (14)

1.式I化合物：

其中

R¹是H、-OR或羟基-c_1-6烷基，其中R是苯基-c_1-6烷基或甲磺酰基-C_l-6烷基；

R²是-OH、-CH₂SO₂R⁴、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或其中R³是H；R⁴是C_1-6烷基、-NH₂、c_1-6烷基-氨基或二(c_1-6烷基)氨基；R⁵是H或C_l-6烷基；或其药用盐。

2.权利要求1所述的化合物，其中

R¹是H、-OR或羟基-C_1-6烷基，其中R是苯基-C_1-6烷基或甲磺酰基-C_l-6烷基；

R²是-OH、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或其中R³是H；R⁴是c_l-6烷基、-NH₂、c_l-6烷基-氨基或二(c_1-6烷基)氨基；R⁵是H或c_l-6烷基；

或其药用盐。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R²是-NHSO₂CH₃。

4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R¹是2-羟基-丙-2-基。

5.根据权利要求l或2所述的化合物，其中R¹是苄氧基。

6.根据权利要求l或2所述的化合物，其中R¹是H。

7.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R²是4-羟基-哌啶-l-羰基。

8.权利要求7所述的化合物，其中R¹是2-羟基-丙-2-基。

9.权利要求7所述的化合物，其中R¹是苄氧基。

10.权利要求7所述的化合物，其中R¹是3-甲磺酰基丙氧基。

11.权利要求1所述的化合物，其中R²是-NHsO₂N(cH₃)₂。

12.权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下化合物组成的组：

2-{3-[2-(4-甲磺酰甲基-环己基氨基)-嘧啶-4-基]-咪唑并[1，2-a]吡啶-8-基}-丙-2-醇；

(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮；

N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲磺酰胺；

N-(4-{4-[8-(1-羟基-1-甲基-乙基)-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-(N，N-二甲基氨基)磺酰胺；

(4-羟基-哌啶-1-基)-(4-{4-[8-(3-甲磺酰基-丙氧基)-咪唑并[1，2-a批吡啶-3-基]-嘧啶-2-基氨基}-环己基)-甲酮；

{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-(4-羟基-哌啶-1-基)-甲酮；

N-{4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a1吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己基}-甲磺酰胺；

4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己烷甲酸乙酯；4-[4-(8-苄氧基-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)-嘧啶-2-基氨基]-环己醇；

N-[4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己基卜甲磺酰胺；和4-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基-嘧啶-2-基氨基)-环己醇。

13.用于治疗炎症的药物组合物，所述药物组合物包含：

有效量的式I化合物：

其中

R¹是H、-OR或羟基-c_1-6烷基，其中R是苯基-c_l-6烷基或甲磺酰基-c_1-6烷基；

R²是-OH、-NHSO₂R⁴、-CO₂R⁵或其中R³是H；R⁴是C_l-6烷基、-NH₂、C_1-6烷基-氨基或二(C_l-6烷基)氨基；R⁵是H或C_1-6烷基；

或其药用盐；

和药用赋形剂。

14.权利要求1至12中任一项所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗炎性病症。