CN102316868A - 用于治疗黄斑变性的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供用于预防、治疗或改善患者的诸如干性黄斑变性、湿性黄斑变性和年龄相关性黄斑变性等黄斑变性的新的有用方法。

Description

用于治疗黄斑变性的方法

发明领域

本发明涉及治疗、预防或改善患者的黄斑变性的方法。

发明背景

黄斑变性是其中称为黄斑的视网膜的一部分退化的疾病的通用术语。年龄相关性黄斑变性(AMD)是最见的黄斑变性类型。有报道指出在美国AMD是大于55岁人群失明的主要原因。在美国有超过一千万的人患有该疾病，其中包括23％超过90岁的人。(www.webmd.com/eye-health/macular-degeneration/macular-degeneration-overview)。

影响患者的黄斑变性有多种类型。黄斑变性的一种类型是“干性”黄斑变性，亦称地图样萎缩(geographical atropy)。干性黄斑变性是该疾病的早期阶段，其中脉络膜小疣(drusen)沉积在视网膜下水平的黄斑上。这种脉络膜小疣的沉积可由黄斑组织老化或变薄引起。作为脉络膜小疣的这种沉积的结果，可逐渐引起中心视力丧失。AMD常常始于干性黄斑变性。

AMD的另一种类型是“湿性”黄斑变性。湿性黄斑变性是新血管类型的变性，其中不完整的血管在视网膜下异常生长，并且开始渗漏。渗漏的结果是视网膜的感光细胞发生永久性损伤，最终引起这些细胞死亡，从而出现盲点。与视力丧失可以是轻微的干性黄斑变性不同，湿性黄斑变性中发生的视力丧失可能十分严重。实际上有报告指出，虽然仅10％的AMD患者患有湿性黄斑变性，但是患有严重视力丧失的66％的AMD患者可直接归因于由湿性黄斑变性引起的视力丧失。

不幸的是，仅有有限的成功确定该病病因的案例。而且，黄斑变性的治疗也只有有限的成功案例。迄今为止，干性黄斑变性的治疗尚未通过FDA的批准，而营养干预被用来预防湿性黄斑变性的进程。此外，湿性黄斑变性的治疗只限于玻璃体内注射抗血管生成性质的化合物。

因此，需要用于预防、治疗或改善黄斑变性的方法。

本文引用的任何参考文献不应解释为承认这类参考文献可作为本申请的“现有技术”而获得。

发明概述

本文提供之前未知晓的用于预防、治疗或改善各种形式的黄斑变性的方法以及之前未知晓的用于治疗脉络膜新血管形成的方法，该方法进而用于治疗黄斑变性。

从广义上讲，本发明提供用于治疗、预防或改善患者的脉络膜新血管形成的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

本发明还提供用于治疗、改善或预防患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

另外，本发明提供用于治疗、预防或改善患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

本发明还提供治疗或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，所述方法提高患者的I型免疫应答，并且I型应答的提高治疗、改善或预防患者的脉络膜新血管形成。

在另一个实施方案中，本发明提供治疗或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的湿性黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，使得与给予化合物之前的患者的I型免疫应答相比，患者的I型免疫应答提高，并且I型应答的提高治疗、改善或预防患者的脉络膜新血管形成，其中所述化合物选自：

(a)磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-4-基甲基}酯乙酸盐

(b)2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇

(c)2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺

(d)2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐

(e)2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺

(f)4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺

2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺公开于2009年10月8日申请的美国临时申请61/249,963，通过引用全部结合到本文中。另外，其它2-(3-氟-苯基)-4甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺公开于已公布的PCT申请WO2009/114373，通过引用全部结合到本文中。

本发明另还提供预防或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，使得与给予化合物之前的患者的I型免疫应答相比，患者的I型免疫应答提高，并且I型应答的提高改善或预防患者的脉络膜新血管形成，其中所述化合物选自：

(a)磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐；

(b)2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇；

(c)2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺；

(d)2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐；

(e)2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺；和

(f)4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺。

无疑，本发明的方法容易应用于治疗任何类型的黄斑变性，包括但绝不限于干性黄斑变性、湿性黄斑变性和年龄相关性黄斑变性。

此外，多种类型的化合物已用于本发明的方法。容易用于本发明方法的这些类型的实例为例如(a)syk多激酶抑制剂、hPGDS抑制剂和DP拮抗剂。

PCT公布的专利申请WO 2003035065中明确阐述了用于本发明方法的syk多激酶抑制剂，所述专利申请通过全部引用结合到本文中。用于本发明方法的syk多激酶抑制剂的具体实例为例如磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐和2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇。用于本发明方法的syk多激酶抑制剂的其它实例阐述于美国专利7,449,458，所述专利通过引用全部结合到本文中。

hPGDS抑制剂也容易应用于本发明的方法。用于本文的具体hPGDS抑制剂为例如2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺、2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺和4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺。此外，容易用于本发明的另外的hPGDS抑制剂公开于美国专利申请12/062,641和12/570,355，所述申请通过引用全部结合到本文中。

此外，DP拮抗剂例如2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐，也容易应用于本发明的方法。

此外，在本发明的方法中，将本文所述的化合物给予患有黄斑变性的患者调节患者的免疫细胞的活性。在本发明的方法中可以调节多种类型的免疫细胞的活性。这类免疫细胞的实例包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞和选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞。无疑，在本发明的方法中可调节这些细胞的组合的活性。

此外，本发明的方法还可用于治疗或改善脉络膜新血管形成，这进而也治疗或改善患者的湿性黄斑变性。

参照下面的附图和发明详述可更好地理解本发明方法的各个方面。

附图简述

图1图示与溶媒治疗的相比时，用化合物治疗时脉络膜新血管斑块厚度减小且面积缩小。“化合物I”为2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇。“化合物II”为2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺。

图2图示与溶媒治疗的相比时，用化合物治疗时脉络膜新血管斑块厚度减小且面积缩小。“化合物I”为2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇。“化合物III”为磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐。“化合物IV”为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐。

图3图示与溶媒治疗的相比时，用化合物治疗时脉络膜新血管斑块的面积和体积减小。对于本图，“化合物I”为2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇；“化合物III”为磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-4-基甲基}酯乙酸盐；“化合物IV”为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐。

图4图示在大鼠激光诱发性黄斑变性模型中DP拮抗剂2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐(对于本图为“化合物V”)对脉络膜新血管形成的斑块体积的作用的分析结果。吲哚美辛用作阳性对照。

图5图示在大鼠激光诱发性黄斑变性模型中hPGDS抑制剂4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺(对于本图为“化合物VI”)对脉络膜新血管形成的斑块体积的作用的分析结果。吲哚美辛用作阳性对照。

图6A图示hPGDS抑制剂2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-二唑-3-基]-苄基酰胺(对于本图为“化合物VII”)对大鼠激光诱发性脉络膜新血管形成的作用的结果：第一剂量反应研究。在第1-7天，每天两次口服给予2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-二唑-3-基]-苄基酰胺。多西环素用作阳性对昭

图6B图示hPGDS抑制剂2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺(对于本图为“化合物VII”)对大鼠激光诱发性脉络膜新血管形成的作用的结果：第二剂量反应研究。在第1-7天，每天两次口服给予2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺。CELEBREX用作阳性对照。

图6C图示hPGDS抑制剂2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺(对于本图为“化合物VII”)对大鼠脉络膜新血管形成的作用的结果：一天一次给药。在本实验中，Brown Norway大鼠在第0天接受激光凝固，在第1-7天，每天一次(q.d.)或每天两次(b.i.d.)口服给予2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺。CELEBREX用作阳性对照

发明详述

本发明是基于新的和有用的发现，即为了增强I型免疫应答，在包括淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞、NK细胞、NKT细胞、肥大细胞和树突细胞在内的这些细胞类型的活性从先天免疫应答转变成适应性免疫应答期间，改变或调节参与支配免疫应答是偏向I型免疫应答还是偏向II型免疫应答的免疫细胞，将会调节脉络膜新血管形成(CNV)这种湿性形式的年龄相关性黄斑变性(AMD)的标志的发生和发展。因此给予调节免疫细胞活性的化合物从而提高I型免疫应答的活性可容易地用于治疗黄斑变性的方法。

因此广义上看，本发明提供用于预防、治疗或改善患者的脉络膜新血管形成的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

此外，本发明提供用于治疗、改善或预防患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

本说明书和随附的权利要求书全文中使用的各种术语和短语的定义如下。

本文使用的术语“免疫系统”是指例如在脊椎动物中参与引起生理后果(例如炎症)的免疫细胞的直接或间接作用的系统。

本文使用的术语“I型免疫应答”是指这样免疫应答，即优先激活T淋巴细胞的Th1和Tc1应答及特征是释放促炎介质的巨噬细胞的典型活化(称为M1活化)，以及与体液免疫应答相反，使免疫应答偏向更多细胞介导的免疫应答。

本文使用的术语“II型免疫应答”是指这样的免疫应答，即优先激活T淋巴细胞的Th2和Tc2应答及作为促血管生成、伤口愈合或其它修复导向性结果的巨噬细胞的替代性活化(称为M2活化)以及产生抗体。

本文使用的短语“与给予化合物之前患者的I型应答相比提高I型应答”是指提高免疫应答，提高IFNγ、IL-12、IL-23、TNFα、IL-1β、CCL9、CCL10、CCL11等促炎介质的释放和减少诸如IL-10、CCL19、CCL21等介质的释放。

本文使用的术语“免疫细胞”是指作为免疫系统的组成部分且来源于造血细胞谱系的细胞。这些细胞对I型免疫应答产生影响。

本文使用的术语“syk多激酶抑制剂”是指通过同时抑制syk激酶以及若干其它激酶而具有治疗效果的化合物；所述化合物不是特异性抑制作为分子靶标的唯一一种激酶，而是主要抑制syk激酶连同其它激酶。

本文使用的术语“hPGDS抑制剂”是指抑制造血型前列腺素D2合酶的功能的化合物。该合酶催化PGH2转化为PGD₂，PGD₂进而从被认为是变态反应和炎症反应的介质的肥大细胞中释放出来。

本文使用的术语“DP拮抗剂”是指抑制前列腺素D₂、DP1或DP的受体的功能的化合物。

本文使用的术语“脉络膜新血管形成”是指不完全的新血管系统形成，自突出到脉胳膜基底层(Bruch’s membrane)与视网膜色素上皮(RPE)细胞之间的视网膜下空间的脉络膜区室开始。

本文使用的术语“有效量”是指足够减轻宿主黄斑变性症状或体症的临床明显缺陷至少约15％、优选至少50％、更优选至少90％、最优选防止宿主黄斑变性症状或体症的临床明显缺陷的量。或者，有效量足以引起患者的临床显著病况(即黄斑变性)的改善。

本文使用的不定冠词是指一或更多。

本文使用的“患者”是指按照本发明的方法进行治疗的受治疗者。无疑，患者可以是人、灵长类动物、犬、猫、牛、马、鼠等。

如上所述，本发明涉及治疗、预防或改善黄斑变性的方法，其中将化合物给予患有黄斑变性的患者。在一个具体的实施方案中，化合物是给予患者的药物组合物的组分。这类药物组合物可用于注射给药，或者用于口服、经肺、经鼻或其它给药形式。一般而言，本发明所包括的是包含有效量的应用于本发明方法中的化合物与药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、辅助剂和/或载体的药物组合物。这类组合物包括各种缓冲成分(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的稀释剂；添加剂，例如去污剂和增溶剂(例如吐温80、聚山梨酯80)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠)、防腐剂(例如Thimersol、苯甲醇)和填充物质(例如乳糖、甘露醇)；将原料掺入聚合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸等)的颗粒制剂或掺入脂质体中。还可使用透明质酸。这类组合物可影响应用于本发明方法的化合物的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。参见例如Remington′s PharmaceuticalSciences，第18版(1990，Mack Publishing Co.，Easton，PA 18042)，第1435-1712页，该文献通过引用结合到本文中。组合物可制成液体形式，或者可呈干粉，例如冻干形式。

口服递送

用于本文的包括口服固体剂型，一般可参见Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，1990(Mack Publishing Co.Easton PA18042)，第89章，该文献通过引用结合到本文中。固体剂型包括片剂、胶囊剂、丸剂、锭剂或糖锭剂、扁囊剂或小丸剂。同样，可采用脂质体囊化或类蛋白质囊化配制应用于本发明方法中的化合物(例如美国专利第4,925,673号报告的类蛋白质微球)。可采用脂质体囊化，脂质体可用不同的聚合物衍生化(例如美国专利第5,013,556号)。有关用于治疗药的可能的固体剂型的描述可参见Marshall，K.载于：ModernPharmaceutics，G.S.Banker和C.T.Rhodes主编，第10章，1979。一般而言，制剂可包括应用于本发明方法的化合物和保护免受胃部环境影响并在肠中释放化合物的惰性成分。

还特别包括应用于本发明方法中的化合物的口服剂型。此外，最好该剂型的总体稳定性提高，从而延长化合物在机体内的循环时间。

释放部位可以是胃、小肠(十二指肠、空肠或回肠)或大肠。本领域技术人员可获得在胃中不溶解，但是仍将在十二指肠或肠的其它部位释放应用于本发明方法中的化合物的制剂。优选这种释放将通过保护蛋白质或化合物在胃部环境以外(例如在肠中)释放，来避免胃部环境的有害作用。

为了确保充分耐受胃部环境，需要在至少pH 5.0的环境下不被渗透的包衣材料。最常见的用作肠溶包衣的惰性成分的实例为醋酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、HPMCP50、HPMCP 55、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯(PVAP)、Eudragit L30D、AQUATERIC、醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、EUDRAGIT L、EUDRAGIT S和虫胶。这些包衣材料可用作混合薄膜。

包衣材料或包衣材料的混合物还可用于并非为了免受胃部作用的片剂中。这可包括糖衣或使片剂更易于吞咽的包衣材料。胶囊剂可由用于递送无水药物(即粉剂)的硬质外壳(例如明胶)组成；对于液体形式，可使用软质明胶外壳。扁囊剂的外壳材料可为黏稠淀粉或其它可食性纸。对于丸剂、糖锭剂、模制片或模印片(tablet triturate)，可采用湿法成块技术(moist massing technique)。

应用于本发明方法中的化合物还可包括在粒径约为1mm的颗粒剂或小丸剂形式的微细多颗粒的制剂中。用于胶囊给药的化合物的制剂还可为粉剂、轻轻压缩的栓塞，甚至为片剂。治疗药可通过压缩制备。此外，化合物可呈晶体或非晶体形式。

着色剂和矫味剂也都包括在内。例如，可配制化合物(例如通过脂质体囊化或微球囊化)，然后进一步包含在食用产品(例如含有着色剂和调味剂的冷冻饮料)中。

可以用惰性材料稀释或增加化合物的体积。这些稀释剂可包括碳水化合物，尤其是甘露醇、α-乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可用作填充剂，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些市售可获得的稀释剂为Fast-Flo、Emdex、STA-Rx 1500、Emcompress和Avicell。

可将崩解剂包括在应用于本发明方法中的化合物的制剂中成为固体剂型。用作崩解剂的材料包括但不限于淀粉，包括市售基于淀粉的崩解剂Explotab。还可使用羟基乙酸淀粉钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超微支链淀粉(ultramylopectin)、藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和皂土。崩解剂的另一种形式是不溶性阳离子交换树脂。粉状树胶可用作崩解剂和粘合剂，且这些可包括诸如琼脂、刺梧桐树胶或西黄蓍胶等粉状树胶。藻酸及其钠盐也可用作崩解剂。

可以使用粘合剂将含有应用于本发明方法中的化合物的药物组合物保持在一起形成硬质片剂，并包括来自天然产物的材料，例如阿拉伯树胶、西黄蓍胶、淀粉和明胶。其它粘合剂包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)均可用于醇溶液中以制成颗粒药物。

抗磨剂也可包括在应用于本发明方法中的化合物的制剂中以防止在配制期间粘结。润滑剂可用作化合物与模壁之间的层，这些可包括但不限于硬脂酸(包括其镁盐和钙盐)、聚四氟乙烯(PTFE)、液状石蜡、植物油和蜡。还可使用可溶性润滑剂，例如十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸镁、各种分子量的聚乙二醇、Carbowax 4000和6000。

可以加入在配制期间改进化合物的流动特性并且在压制期间有助于重新配置的助流剂。这类助流剂可包括例如淀粉、滑石粉、热解硅石和水合硅铝酸盐。

为了有助于将应用于本发明方法中的化合物溶于水性环境，可加入作为润湿剂的表面活性剂。表面活性剂可包括阴离子去污剂，例如十二烷基硫酸钠、多库酯钠和二辛基磺酸钠。可以使用阳离子去污剂，阳离子去污剂可包括苯扎氯铵或苄索氯铵。可作为表面活性剂包括在制剂中的可能的非离子去污剂为聚桂醇400、硬脂酸聚烃氧(40)酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60、甘油单硬脂酸酯、聚山梨酯40、60、65和80、蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素和羧甲基纤维素。这些表面活性剂可单独或作为这类化合物的混合物存在于应用于本发明方法中的化合物的制剂中。

可能促进应用于本发明方法中的化合物吸收的添加剂为例如油酸、亚油酸和亚麻酸等脂肪酸。

可取的是控释口服制剂。可将应用于本发明方法中的化合物掺入允许通过扩散或沥滤机制释放的惰性基质(例如树胶)中。还可将缓慢变性基质掺入制剂中。一些肠溶包衣也具有延时释放的效果。

应用于本发明方法中的化合物的另一种控释形式是通过以Oros治疗系统(Alza Corp.)为基础的方法，即将化合物封入半透性膜中，该膜由于渗透作用允许水经单个小孔进入并将化合物排除。

其它包衣材料可以用于制剂。这些包括可用于包衣锅的各种糖。应用于本发明方法中的化合物也可以薄膜衣片剂提供，用于这种情况的材料被分成2组。第一组是非肠溶材料，包括甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮和聚乙二醇。第二组由肠溶材料组成，其通常为苯二甲酸的酯。

可以使用混合材料以提供最适的薄膜包衣。薄膜包衣可在包衣锅或流化床中进行，或者通过压制包衣材料进行。

经肺递送。本文还包括经肺递送应用于本发明方法中的化合物。将化合物递送至哺乳动物肺部，同时吸入并透过肺上皮层直到血流。有关的其它报告包括Adjei等，1990，Pharmaceutical Research，7：565-569；Adjei等，1990，International Journal of Pharmaceutics，63：135-144(醋酸亮丙立德)；Braquet等，1989，Journal of Cardiovascular Pharmacology，13(增刊5)：143-146(内皮素-1)；Hubbard等，1989，Annals of InternalMedicine，第III卷，第206-212页(a1-抗胰蛋白酶)；Smith等，1989，J.Clin.Invest.84：1145-1146(a-1-蛋白酶)；Oswein等，1990，″Aerosolization of Proteins″，Proceedings of Symposium on RespiratoryDrug Delivery II，Keystone，Colorado，March，(重组人生长激素)；Debs等，1988，J.Immunol.140：3482-3488(干扰素-g和肿瘤坏死因子α)和Platz等，美国专利第5,284,656号(粒细胞集落刺激因子)。用于经肺递送药物实现全身作用的方法和组合物参见1995年9月19日授予Wong等人专利权的美国专利第5,451,569号。

用于实施本发明的方法所包括的为多种机械装置，被设计来用于经肺递送应用于本发明方法中的化合物，包括但不限于雾化器、计量吸入器和粉末吸入器，所有这些都为本领域技术人员所掌握。

适于实施本发明的市售可获得的装置的某些具体实例为由Mallinckrodt，Inc.，St.Louis，Missouri制造的ULTRAVENT雾化器；由Marquest Medical Products，Englewood，Colorado制造的ACORN II雾化器；由Glaxo Inc.，Research Triangle Park，North Carolina制造的VENTOLIN计量吸入器；由Fisons Corp.，Bedford，Massachusetts制造的SPINHALER粉末吸入器；以及由sanofi-aventis制备的ULTRAHALER等等。

所有这类装置都需要使用适于分配应用于本发明方法中的化合物的制剂。通常，各种制剂对所采用的装置类型都是特定的，除了治疗有益的常规稀释剂、辅助剂和/或载体以外，还可包括合适推进材料的使用。同样，还包括使用脂质体、微囊剂或微球剂、包涵体复合物或其它类型的载体。

适用于喷射式雾化器或超声波雾化器的制剂通常可包含溶于水的应用于本发明方法中的化合物，浓度为约0.1-25mg化合物/mL溶液。该制剂还可包括缓冲剂和单糖(例如用于稳定和调节渗透压)。雾化器制剂还可含有表面活性剂以减少或防止由在形成气溶胶时溶液雾化而引起的表面诱导的化合物聚集。

用于计量吸入器装置的制剂一般可包含微细粉剂，该粉剂中含有应用于本发明方法中的化合物，其悬浮于表面活性剂辅助的抛射剂中。抛射剂可以是用于该目的的任何常用的材料，例如氯氟烃、氢氯氟烷、氢氟烷或烃，包括三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2-四氟乙烷或其组合。本文应用的其它抛射剂为具有通式C_xH_yF_z的氢氟烷烃，其中x为1-3的整数，y+z＝2x+2，y和z两者至少为1。应用于本文的具体的氢氟烷烃为CF₃CFH₂、CH₃CHF₂和CF₃CHFCF₃。抛射混合物的蒸气压一般应在对于气雾剂抛射剂适合和允许的范围内。可按适当比例将一种或多种氢氟烷烃和/或其它一些合适的蒸气压改性剂混合以改变蒸气压。

合适的表面活性剂包括三油酸山梨坦和大豆卵磷脂。油酸也可用作表面活性剂。此外，化合物可呈晶体或非晶体形式。

用于从粉末吸入器装置中分配的制剂可包含应用于本发明方法中的化合物的微细干粉剂，还可包括填充剂，例如乳糖、山梨醇、蔗糖或甘露醇，其量有利于使粉剂从装置中分配出来，例如占制剂重量的50-90％。应最有利地将化合物制备成平均粒径小于10mm(或微米)、最优选0.5-5mm的颗粒形式，以便最有效地递送至肺部远端。

经鼻递送。还包括经鼻递送应用于本发明方法中的化合物。经鼻递送允许在将治疗药品给予鼻后，药品无需在肺部沉积，化合物便可直接通过进入血流。经鼻递送的制剂包括具有葡聚糖或环糊精(cyclodextran)的制剂。

经皮递送。本领域已知经皮给予药物的各种方法，例如通过透皮贴剂。透皮贴剂参见例如1995年4月18日授予Rolando等人专利权的美国专利第5,407,713号；1004年10月4日授予Fallon等人专利权的美国专利第5,352,456号；1994年8月9日授予D′Angelo等人专利权的美国专利第5,332,213号；1994年8月9日授予Sibalis专利权的美国专利第5,336,168号；1994年3月1日授予Farhadieh等人专利权的美国专利第5,290,561号；1993年10月19日授予Tucker等人专利权的美国专利第5,254,346号；1992年11月17授予Berger等人专利权的美国专利第5,164,189号；1992年11月17日授予Sibalis专利权的美国专利第5,163,899号；1992年2月18日授予Sibalis专利权的美国专利第5,088,977和5,087,240号；1991年4月16日授予Benecke等人专利权的的美国专利第5,008,110号；以及1990年5月1日授予Sibalis专利权的美国专利第4,921,475号。

不难理解，使用皮肤渗透促进剂有利于经皮给药途径，例如美国专利第5,164,189号(同上)、美国专利第5,008,110号(同上)和1989年11月7日授予Aruga等人专利权的美国专利第4,879,119号中披露的促进剂，各专利的内容均通过引用全部结合到本文中。

局部眼部递送

适于局部给药的组合物是本领域已知的(参见例如美国专利申请2005/0059639)。在各种实施方案中，应用于本发明方法中的化合物的组合物可包含在溶液、混悬液或两者中含有化合物的液体。本文使用的液体组合物包括凝胶。优选液体组合物是含水的。或者，组合物可呈软膏剂的形式。在一个优选的实施方案中，组合物是原位可胶凝含水组合物，更优选原位可胶凝水溶液。这类组合物可包含胶凝剂，其浓度在与眼或眼外泪液接触时有效地促进胶凝。本发明的含水组合物具有与眼相容的pH和重量摩尔渗透压浓度。

应用于本发明方法中的化合物的局部应用(滴入眼内)可避免大部分的全身副作用，但对于疗效，必需将一种或多种化合物以足够的水平通过角膜主动转运达到适当的接受部位。

通常，给予应用于本发明方法中的化合物包括用常规的药用载体(例如卡波普)制备软膏剂(例如矿脂)或凝胶剂，并局部给予凝胶剂组合物。对于滴眼剂组合物，组合物中化合物的量应为约0.25％重量-约5％重量，优选约0.5％重量-约2.0％重量。重点不在于剂量，而是量有效用于治疗、预防或改善黄斑变性而又不至于太强以引起眼部刺激或副作用。一般而言，本文规定范围内的量是令人满意的。此外，本领域普通技术人员可采用常规实验室技术容易地确定适当的范围。

滴眼剂组合物的载体可以为缓冲至pH约4-约8的等渗眼用治疗载体，通常可含有少量的常用润湿剂和抗细菌剂。优选的pH范围为约6.8-约7.8，并且含有足够的氯化钠或等渗的等同物。所包括的抗细菌剂的范围占组合物的约0.004％(W/V)-约0.02％(W/V)。

可将应用于本发明方法中的化合物掺入各种眼用凝胶剂中以递送至眼部。为了形成无菌眼用软膏剂，可将化合物与合适溶媒(例如矿物油、液体羊毛脂或白矿脂)中的防腐剂混合。可按照已公布的类似眼用制品的制剂，将应用于本发明方法中的化合物悬浮于由carbopol-940(一种可获自B.F.Goodrich Company的羧基乙烯基聚合)的混合制品制备的亲水基料中，制备无菌眼用凝胶剂。还可掺入防腐剂和张度剂。

筋膜下递送

还可采用筋膜下递送应用于本发明方法中的化合物来治疗、预防或改善黄斑变性。这类递送的一个具体实例参见美国专利6,413,245，该专利公开了将药剂递送至人眼的方法和装置。该方法包括将所述装置在眼缘后某一点上插入眼球筋膜下和巩膜上的步骤，并在巩膜外表面上注射药剂形成贮药库。该装置包括套管，套管具有远侧部、近侧部及将远侧部与近侧部分隔开的曲部。远侧部的曲率半径大致等于眼球的曲率半径。远侧部在曲部上相对于近侧部的正切的角度往往不大于约56度。本领域已知的其它筋膜下递送方法和装置也容易应用用本文中。

玻璃体内递送

组合物可包含用于结膜下给药的眼用贮库制剂，其含有应用于本发明方法中的化合物。可将包含化合物的微粒包埋在生物相容性的药学上可接受的聚合物或脂质包胶剂中。贮库制剂可适于在一段长的时间内释放全部或几乎全部化合物。聚合物或脂质基质如果存在的话，可适于充分降解，以便在全部或几乎全部化合物释放后从给药部位转运。贮库制剂可以为液体制剂，包含药学上可接受的聚合物和已溶解或已分散的活性剂。注射时，聚合物通过例如胶凝或沉淀在注射部位形成药库。组合物可包含可插入眼内合适位置(例如眼与眼睑之间或在结膜囊中)的固体制品，该制品在该位置上释放出化合物。适于以这类方式植入眼内的固体部件一般包含聚合物，并且可是生物蚀解的或非生物蚀解的。

治疗方法、药物制备方法

如上所述，本发明提供用于治疗、预防或改善黄斑变性的方法。

剂量。在本发明的方法中，正如所进行的进一步研究一样，信息将揭示有关预防、治疗、预防或改善各种患者的黄斑变性的剂量水平，并且考虑治疗背景、患者的年龄和一般健康状况，普通技术人员仅仅采用常规实验室技术便能够确定适当的剂量。

与其它化合物一起给予。无疑，应用于本发明方法的治疗、预防或改善黄斑变性的化合物可与一种或多种用于治疗可能与黄斑变性有关的其它临床症状(例如脉络膜血管生成)的药物组合物共同给予。用于治疗湿性年龄相关性黄斑变性的抗血管生成药(例如LUCENTIS和AVASTIN)可与应用于本发明方法中的化合物联用，使得可以延长LUCENTIS或AVASTIN的玻璃体内的注射间隔。

参照以本发明的实例提供的下列非限制性实施例，可更好地理解本发明。提供下列实施例，以便更全面地说明本发明的优选实施方案。然而，不得以任何方式将实施例解释为限制本发明的大的范围。

实施例1

50只雄性Brown Norway(品系BN/RijHsd)大鼠(褐家鼠(Rattusnorvegicus))，4-7周龄(各为50-124g)，购自Harlan(Indianapolis，IN)，接收时状态良好。对动物进行检疫，并适应新环境三(3)天。在检疫期间，至少一天一次观察动物临床体症的异常。任意将50只动物分派到研究组，并指定永久标识号。

当分派到研究组时，给每只动物称重，并用不褪色墨水，以唯一永久标识号在尾部打上标记。在整个生命期内都摆放显示动物永久标识号和研究号的笼子标记卡。

动物管理

设置控制装置以保持动物室的温度和相对湿度分别为64-79℉和30-70％。每天监测并记录这些环境参数。在动物室内提供12小时光期和12小时暗期。采用荧光灯源，每天0700时左右开灯，1900时左右关灯。在整个适应期和生命期内任意喂食LABDIET

5001啮齿动物日粮(Purina Mills，Inc.，St.Louis，MO)。由测试设备(Testing Facility)保持批号记录和分析证明。没有已知的合理预计存在于日粮中的已知能够干扰研究目的或研究实施的污染物。通过托架给水系统向动物任意提供来自城市给水的淡水。定期监测给水中的氯含量和细菌污染。单独或相容成对地将动物关养在啮齿动物专用室内的塑料“鞋柜”笼中。动物关养与管理的一般程序按照Testing Facility SOP进行，并符合有关研究动物利用的所有规程，包括补充动物福利法(AnimalWelfare Act)(21 USC 2131以及下列等)的美国农业部法规(9CFR第1章)和实验动物管理和使用全国研究理事会指引的建议(NationalResearch Council’s Guide for Care and Use of Laboratory Animals)(National Academy Press，1996)。

激光手术

按照公共机构动物管理与使用委员会(Institutional Animal Careand Use Committee)批准的研究计划进行研究。

采用具有附属Kowa PortSlit，SC14；Keeler Fison间接眼检镜(透镜30屈光度)的视网膜激光装置对视网膜(每只大鼠的双眼)发射激光。使大鼠短暂麻醉，把眼睛张开，需要时用盖玻片把角膜压平。各视网膜用186mW发射激光，光点尺寸为75μm，持续时间为0.1秒钟，在(约)9、12和3时的位置上实施，外科医生根据可行性确定每只眼的视神经圆盘直径为2-3。通过在光凝固的部位直接发生的气泡形成鉴定脉胳膜基底层的破裂。使大鼠短暂麻醉，给予荧光素(fluoroscein)以观察手术后和尸检前的视网膜血管系统。使用用于啮齿动物的Kowa视网膜照相机拍摄视网膜的代表性照片。在紧接激光手术后且临尸检前拍摄照片以确保存在血管损伤。

给药剂量

研究期间一周两次在溶媒中配制2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇A和2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺。溶媒由0.5％甲基纤维素、0.2％吐温20的无菌水溶液组成用于注射，一周配制一次。将2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺试验品以0.6、2和6mg/mL在溶媒中复溶；将2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺对照品以2mg/mL复溶。在每次给药间隔期间将全部溶液冷冻保存于2-8℃，在每次给予剂量前混匀。

以5mL/kg经一天两次口管饲法给予动物，临照射激光前开始，并继续14天。每周根据最新体重重新计算剂量体积。注意在前后两天内给动物照射激光，但是在一天内一起处死以利于尸体解剖处理。因此，第一组群(1-3组)的动物在第14天上午接受额外(第29次)剂量，以便在给予最终剂量2-4小时内进行最终的放血和处死。

临床观察

每天记录各动物在整个生命期(检疫/适应和治疗)的临床观察结果，包括发病率、死亡率和毒性作用或药理作用的明显体症。记录临床异常的任何及全部体症。

体重

在给药前、在一周时以及尸体解剖时记录体重。

眼底照相术

在第0天、在照射激光时或照射后不久、在第13或14天、在处死前对眼底拍照。在每个时间点上，在拍照前几分钟，给每只动物静脉内(IV)注射0.1mL 10％的荧光素染料溶液，使视网膜血管系统显现。每只眼用散瞳药扩瞳后，用Kowa小动物眼底照相机拍照。眼底照相术的目的是证实在照射激光后以及在尸检前存在损伤。从研究中剔除任何不存在损伤的动物并更换。

尸体解剖

在眼底照相术后以及最终放血后，动物用SOP处死。将每只动物右眼收集到10％NBF中，左眼收集到冷冻OCT盒(frozen OCT block)中。

组织病理学

在处理用于组织病理学分析的NBF固定的右眼后，如下进行切片：将每只固定眼按矢状定向，然后通过包括视网膜-视神经区在内的眼中心部分，切取10-15片逐层切片。由于可将4-6片切片放在一片载玻片上，因此每眼通常有4-5片载玻片。查找至少一个损伤，优选两个或更多个损伤。

直观、定量和半定量地对载玻片进行评价。统计视网膜上生长的新血管的核。评价通常包括4-6片代表性视网膜切片的大约6高倍视野的计数。将数据录入电子数据表，应用Excel

(Office 2000；Microsoft，Redmond，WA)计算平均值和标准差。

将剩余眼(左眼)冷冻保存以备免疫组织化学评价免疫细胞浸润。

统计分析

应用Excel的单因素方差分析(ANOVA)函数(OFFICE 2000；Microsoft，Redmond，WA)分析体重。P值≤0.05被视为有统计显著性。

实施例2

测试系统

35只雄性和35只雌性Brown Norway大鼠(褐家鼠；品系BN/MCW)，6-7周龄，购自Charles River Laboratories(Portage，MI)。使动物适应七(7)天。在适应期间，至少一天一次观察动物临床体症的异常，动物临床表现正常，便放出用于研究。给全部70只动物称重，将30只雄性和30只雌性随机分派到研究组，并指定永久标识号。在分派研究组时，给每只动物称重，并用不褪色墨水，以唯一永久标识号在尾部打上标记。在整个生命期内都摆放显示动物永久标识号和研究号的笼子标记卡。

动物管理

设置控制装置以保持动物室的温度和相对湿度分别为64-79℉和30-70％。每天监测并记录这些环境参数。在动物室内提供12小时光期和12小时暗期。采用荧光灯源，每天0700时左右开灯，1900时左右关灯。在整个适应期和生命期任意喂食LABDIET 5001啮齿动物日粮(Purina Mills，Inc.，St.Louis，MO)。由测试设备保持批号记录和分析证明。没有已知的合理预计存在于日粮中已知能够干扰研究目的或研究实施的污染物。通过托架给水系统向动物任意提供来自城市给水的淡水。定期监测给水的氯含量和细菌污染。单独或相容成对地将动物关养在啮齿动物专用室内的塑料“鞋柜”笼中。动物关养与管理的一般程序按照Testing Facility SOP进行，并符合有关研究动物利用的所有规程，包括补充动物福利法(21 USC 2131以及下列等)的美国农业部法规(9CFR第1章)和实验动物管理和使用全国研究理事会指引的建议(National Academy Press，1996)。

激光手术和眼科分析

按照公共机构动物管理与使用委员会批准的研究计划进行研究。

采用改进的裂隙灯激光传输系统，对双眼视网膜进行了激光手术。采用IRIDEX Diovet二极管激光器，发射810nm波长的光。170mW激光传送至75um光点达0.075秒钟。将3个激光损伤靶定在约9、12和3时的位置上，每只眼视的神经圆盘直径为2-3。使激光条件最优化以在脉胳膜基底层上产生表示膜破裂的强烈气泡。外科医生按需要使用盖玻片压平角膜以助于对准/瞄准激光。

临手术前(第1天)和尸检前(第13天)，通过肌内注射0.15mL/大鼠的氯胺酮/赛拉嗪混合物使大鼠短暂麻醉。这个剂量水平相当于约60mg/kg氯胺酮和约8mg/kg赛拉嗪的剂量，给予约30分钟的麻醉，进行发射激光及手术后拍照(第1天)以及最终拍照(在尸体解剖时)。在这两天内，临拍照前静脉内给予荧光素(0.1mL的10％溶液)，以供观察视网膜血管系统。采用Kowa小动物眼底照相机拍摄视网膜的代表性照片。拍摄照片以确保在紧接激光手术后和临尸检前存在血管损伤，以供评价激光手术后14天的病灶大小。如果任何动物第1天未出现激光后损伤，则从研究中剔除并更换。在该研究中，无出于此原因的更换。

化合物制备

将2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇、磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐和2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐分别重新悬浮于由0.5％甲基纤维素、0.2％吐温20的无菌水溶液组成的溶媒中。由下列组分配制溶媒：甲基纤维素：SpectrumChemical Mfg.Corp.目录ME136(批次NI0534；有效期至2008年12月)；吐温20：Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)目录X251-07(批次X22H09；有效期至2010年12月)；以及注射用无菌水USP级。将各组分保存在受控室温下；将下列制剂(一次，在研究开始时)、溶媒冷冻保存于2-8℃。

给药剂量

在第0天制备一批溶媒(0.5％甲基纤维素、0.2％吐温20的无菌水溶液)，用于所有随后的试验品制剂。在整个研究中，将溶媒冷冻保存于2-8℃下。每个研究日中，每天两次给予动物，上午一次，下午一次，给药间隔约6小时。

临床观察

至少一天一次记录每个动物在整个生命期(检疫/适应和治疗)内的临床观察结果，包括发病率、死亡率和毒性作用或药理作用的明显体症。记录临床异常的任何和全部体症。

体重

在给药前、在一周时以及在尸体解剖时记录体重。

尸体解剖

对在研究期内死亡的动物进行肉眼尸检以确定可能的死因。在眼底照相术和最终采血后第13天处死其余(存活的)动物。将每只动物的右眼收集到改良的Davidson溶液中(用于组织病理学评价)，将左眼冷冻在OCT包埋化合物中[用于可能的免疫组织化学检查(IHC)]。

组织病理学

在对用于组织病理学检查的改良的Davidson固定的右眼进行处理后，如下进行切片：将每只固定的眼按矢状定向，然后通过包括视网膜-视神经区在内的眼中心部分，切取片10-15片逐层切片。由于可将4-6片切片放在一片载玻片上，因此每眼通常有能够使病理学者观察每只动物至少两个损伤的4-5片载玻片。

用十字线目镜在400x放大倍数下以水平和横向定位测量损伤。选择三片切片用于测量。选择估计最接近激光损伤部位的损伤和紧接这个部位前后的切片用于测量。将数据录入Excel电子数据表。计算每组的平均宽度和长度与组平均值和标准差。以每只动物每个部位的三角形计算每个损伤的面积。因为在主要损伤之上和之下进行了测量，所以还计算了体积估计值。

统计分析

应用EXCEL的单因素方差分析(ANOVA)函数(OFFICE 2000；Microsoft，Redmond，WA)分析了体重。P值≤0.05被视为有统计显著性。

实施例3

在本实施例中，大鼠激光诱发性黄斑变性模型中DP拮抗剂2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐(化合物)对脉络膜新血管形成的斑块体积的作用。与上述实施例一样，在本实施例中采用褐色挪威大鼠(褐家鼠)。大鼠在第0天接受激光凝固。大鼠4-7周龄(每只50-124g)，购自Harlan(Indianapolis，IN)，收到时状态良好。对动物进行检疫并适应三(3)天。在第1-14天每天两次口服给予化合物。同样一天给予两次吲哚美辛(阳性对照)。在第14天处死大鼠，并在第14天测量脉络膜新血管(CNV)体积。

图4图示将化合物给予模拟黄斑变性的模型非常有效地限制脉络膜新血管形成的体积。

实施例4

在本实施例中，用大鼠激光诱发性黄斑变性模型进行了相同的实验以确定hPDGS抑制剂4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺是否可限制脉络膜新血管形成的斑块体积。

具体地讲，在第1天至第14天每天两次口服给予大鼠hPDGS抑制剂4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺(化合物)。在第0天，使用激光在褐色挪威大鼠眼内诱发脉络膜新血管形成。同样将吲哚美辛给予对照组，即从第1天到第14天每天两次给予。

14天后处死大鼠，测量眼中脉络膜新血管形成的斑块体积。图5中所示结果表明，与对照相比，化合物的确在受试大鼠中有效限制脉络膜新血管形成的斑块体积。

图5图示将化合物给予模拟黄斑变性的模型非常有效地限制脉络膜新血管形成的斑块体积。

实施例5

在本实施例中，采用大鼠激光诱发性黄斑变性模型，评价了hPGDS拮抗剂2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺的作用。具体地讲，在第1天至第7天每天两次口服给予大鼠2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺。每天一次口服给予阳性对照多西环素。在第7天测量脉络膜新血管(CNV)体积。

试验品

将化合物保存在受控室温下。将化合物悬浮于溶媒(0.5％甲基纤维素、0.2％吐温80)中。

溶媒和阳性对照品

阴性对照品为试验品的溶媒，由0.5％甲基纤维素、0.2％吐温80的蒸馏水溶液组成。由以下组分配制溶媒：甲基纤维素，SigmaChemical.(St Louis，MO)，目录号M-0262(批次017k0087)；吐温80，Acros Organics(Geel，Belgium)，目录号278632500(批次A0265286)；以及去离子水(内部)，将组分保存在受控室温下；之前制剂、溶媒于2-8℃冷冻。使用Retsch混合磨MM301型(Retsch Industries(Newtown，PA))，用2.0mm yttria stab zir oxide beads(Fox industries(Fairfield NJ)，批次#12974)的以15次振动/秒振荡10分钟，将试验材料悬浮于溶媒中来制备试验品。将试验品保存在玻璃瓶中。对照品为Sigma-Aldrich多西环素(St Louis，MO，目录号D9891，批次18K0709)。将多西环素(3mg/ml)溶于与试验品相同的溶媒中(0.5％甲基纤维素、0.2％吐温80)。在配制后，将所有试验材料保存在玻璃瓶中，避光保护，当不给药时便冷冻保存在2-8℃下。将多西环素保存在褐色玻璃瓶中。

试验系统

六十(60)只雄性BN大鼠(褐家鼠；品系Brown Norway)约8周龄，购自Harlan(Livermore，CA)。

动物的使用

本研究遵行sanofi-aventis集团对研究动物使用的政策。

接收与适应

接收六十只动物，动物状态良好。使动物适应最少5天。在适应期，观察动物临床体征的任何异常。所有动物都处于良好状态。

剂量组群

向作为两个独立组群的动物给药并进行激光凝固。

鉴定

随机选择动物，使用不褪色墨水，以唯一的永久标识号在每只动物尾部打上标记。在整个生命期内都摆放显示动物永久标识号和研究号的笼子标记卡。

动物关养条件

在符合USDA实验动物福利法的NIH实验动物福利与使用指南概述的条件下，在充分认可的AAALAC设施中关养动物。每笼关养3只动物。在动物室内提供12小时光期和12小时暗期。任意给动物饲喂Harlan Global Teklad Diet 2016和过滤水。

动物的最终选择

在第一天头一半动物(n＝30)(组群A)接受激光凝固，另一半(n＝30)(组群B)在第二天接受激光凝固。在因照射激光期间意外死亡或激光传送差(即意外的视网膜血管击中和出血)引起的需要更换动物的情况下，以每组12只动物开始研究。未发生意外死亡。如果照射激光期间特定组未出错，则随机抓取大鼠。

激光凝固

在第0天上午，即第一次给药后的当天，把动物转移到激光传输处理室。采用改进的裂隙灯激光传输系统，仅在每只动物左眼视网膜上进行激光手术。

手术过程如下。

以40/0.25mg/kg(依照Testing Facility SOP)通过腹膜内(IP)注射氯胺酮/美托咪定使大鼠麻醉。通过局部(经眼)给予1％托吡卡胺(MYDRACIL，Alcon Labs)，对每只眼扩瞳。

将动物放置在改进的裂隙灯激光传送系统前。使用置于系统中的VOLK接触镜观测眼底。在3个部位上，在大约12、3和9点钟的位置上处理左眼眼底，尽外科医生的全力，每只眼视神经的2圆盘直径。这可利用配有改进的裂隙灯传送系统(Carl Zeiss Slit Lamp)的绿色氩激光器(Coherent Novus 2000；514-nm波长)进行。使每个处理部位(以0.5秒脉冲持续时间传送200mW，光点尺寸为100μm)最优化，以在视网膜下方产生表示脉胳膜基底层破裂的强烈气泡。

手术后，以0.25mg/kg给动物肌内(IM)注射ANTISEDAN用以使麻醉逆转。将一滴GENTEAL(Novartis)眼膏点入照射激光的眼部以减轻目涩。监测动物直到从麻醉中完全复原，并放回其动物室。

剂量给予

在研究前制备两批溶媒(0.5％甲基纤维素、0.2％吐温80)，用于所有随后的试验品制剂。在整个研究中，将溶媒在2-8℃下冷冻。制备两批试验品。在第-1天制备一批，用于从第-1天到第3天给予动物，在第4天制备的第2批用于所有随后的给药。每天两次即清早和下午经口管饲法喂给动物，研究每天给药的间隔约为8-9小时。在研究的第-1、4和7天给动物称重，这些重量用来确定给药体积。

药代动力学分析

在第7天，在上午具体时间点即0.5、1和4小时(每组3只动物)，大鼠接受最终给药，将动物放入CO₂室直到停止呼吸后，进行最终的心穿刺术。紧接采血后，收获眼睛。将照射激光的左眼放入10％福尔马林溶液中用于平铺封片，将右眼放入预称量的玻璃小瓶中，并在干冰上冷冻。将血液收集到BD肝素化Microtainer管中以获得血浆。将样品离心，将所得血浆在干冰上冷冻。然后对样品进行分析。

尸体剖检

在相应的第7天处死组群A和B的动物。从每只动物中收集照射激光的左眼、右眼到10％福尔马林溶液用于解剖和平铺封片。收集右眼并冷冻用于PK分析。

平铺封片、荧光显微法和3D图像建模

在相应的第7天，从福尔马林溶液中取出激光照射的左眼，处理后平铺封片。使用解剖显微镜对眼进行显微解剖。摘除前部和晶状体得到前眼杯。轻轻将组织彼此拉开，仔细地将神经视网膜从RPE/脉络膜区中分离出来。通过3-6个均匀相间的径向切割，使RPE/脉络膜区和神经视网膜呈“花状”。将组织平铺，分别用封固剂(VectashieldHardSet)和盖玻片封在载玻片上。将载玻片于4℃避光保存直到荧光分析。

采用配有APOTOME和AXIOVISION软件的ZeissAXIOIMAGEr，根据荧光(FITC)和3D建模测量损伤体积。分析了所有RPE/脉络膜载玻片的荧光。全部分析由操作者以盲法进行。对于大部分载玻片，鉴定出2-3个损伤。对于少部分载玻片，只鉴定出1个损伤或根本无损伤。如果组织显示极低的荧光(灌注差)，则将样品从分析中剔除。在RPE/脉络膜平铺片中鉴定出激光损伤。以20x放大倍数暴露150msec来进行激光损伤的成像。采用3D图像分析所必需的提供去模糊光学切片的APOTOME，获得图像作为Z-stack。采用AXIOVISION 3D测量工具测定体积，将数据输入Excel。

图6A、图6B和图6C中所示结果表明，2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-二唑-3-基]-苄基酰胺在限制CNV体积方面确实有效。

结论

上述实施例的结果清楚表明，上述化合物的类型影响大鼠激光诱发性黄斑变性功能的改善。这些结果结合上文引述的参考资料表明，通过改变肥大细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞和树突细胞的功能，PGD2和DP以及通过Syk多激酶抑制剂阻断肥大细胞脱粒改变免疫细胞对于II型免疫应答的活性。因此在免疫系统中，上述化合物的类型可引起I型免疫应答提高。因此，本文论述和公开的化合物显然可在治疗、预防或改善黄斑变性中提供益处。只通过在化合物暴露的足够时间内，受治疗者的上文提及的可容性介质中的血液浓度，便可评价上述化合物类型的作用。

在第一组研究中，以3、10和30mpk的剂量测定2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b)吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇，以10mpk测定2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺(hPGDS抑制剂)。大鼠用3、10和30mpk的2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇经口治疗分别导致CNV斑点厚度减少11.3％、36.6％和32.2％。另外，用10mpk的2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺经口治疗导致CNV斑点厚度减少40.7％，见图1。这比阳性对照、玻璃体内注射曲安奈德(现行治疗标准之一)更好，这导致CNV斑点厚度减少25.9％。

在第二组研究中，以1.25、6和30mpk剂量，经口一天两次测定2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇。另外，用相同方案，以30mpk和12.5mpk分别测定磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]嗪-4-基甲基}酯乙酸盐和2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐。虽然我们仍需要从组织载玻片中计算了CNV斑点厚度，但是荧光血管造影照片的初步数据表明所有所测试的化合物都有显著功效。照片和图例见图2和图3。

所采集的数据清楚表明，在大鼠LIMD模型中评价的这些化合物表明，通过组织学分析以及视网膜荧光血管造影术，以脉络膜新血管斑块形成的厚度测定的CNV形成显著减少。

数据证实，化合物的这些类型容易应用于治疗湿性AMD。此外，这些化合物显然可用于本发明的新的方法，以治疗湿性AMD并抑制AMD从干性形式(地图样萎缩)向湿性形式发展。数据还表明，诸如类胰蛋白酶β抑制剂或其它关键的肥大细胞抑制剂等化合物可有益于AMD的治疗。应用于本发明方法中的这类类胰蛋白酶β抑制剂的实例为4-(5-氨基甲基-2-氟-苯基)-哌啶-1-基]-[7-氟-1-(2-甲氧基-乙基)-4-三氟甲氧基-1H-吲哚-3-基]-甲酮(见下)，

类胰蛋白酶β抑制剂的其它实例披露于美国专利6,977,283和PCT公开申请WO 2005/097780中，所述文献通过引用全部结合到本文中。另外，DP拮抗剂的数据表明，改变NK、NKT细胞以及树突细胞的活化可为治疗AMD的有效方法。

本发明并不通过本文描述的具体实施方案来限制范围。从上面的说明书和附图来看，除本文描述的实施方案以外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言的确是显而易见的。这类修改也都落入随附权利要求书的范围。

Claims (34)

1.一种用于预防、治疗或改善患者的脉络膜新血管形成的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中所述免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

2.权利要求1的方法，其中所述化合物选自：

(a)syk多激酶抑制剂；

(b)hPGDS抑制剂；和

(c)DP拮抗剂。

3.权利要求2的方法，其中所述syk多激酶抑制剂选自磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐

和2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇

4.权利要求2的方法，其中所述hPGDS抑制剂选自2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺

2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基-苄基酰胺

4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺

5.权利要求2的方法，其中所述DP拮抗剂为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述化合物调节患者的免疫细胞的活性。

7.权利要求6的方法，其中所述免疫细胞是天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述预防、治疗或改善脉络膜新血管形成还预防、治疗或改善患者的湿性黄斑变性。

9.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述预防、治疗或改善脉络膜新血管形成还预防、治疗或改善患者的年龄相关性黄斑变性。

10.一种用于治疗、改善或预防患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中所述免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

11.权利要求10的方法，其中所述患者的黄斑变性是年龄相关性黄斑变性。

12.权利要求10或11的方法，其中所述化合物调节患者的免疫细胞的活性。

13.权利要求12的方法，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合。

14.权利要求10-13中任一项的方法，其中所述化合物选自：

(a)syk多激酶抑制剂；

(b)hPGDS抑制剂；和

(c)DP拮抗剂。

15.权利要求14的方法，其中所述syk多激酶抑制剂为磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐

16.权利要求14的方法，其中所述hPGDS抑制剂选自：2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺

2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺

4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺

17.权利要求14的方法，其中所述DP拮抗剂为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐

18.一种预防、治疗或改善患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者免疫系统的化合物，其中所述免疫系统具有I型免疫应答和II型免疫应答，使得与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，给予患者化合物将提高患者的I型免疫应答。

19.权利要求18的方法，其中所述患者的黄斑变性是年龄相关性黄斑变性。

20.权利要求18或19的方法，其中所述给予化合物还预防、治疗或改善患者的脉络膜新血管形成。

21.权利要求18-20中任一项的方法，其中所述化合物调节患者的免疫细胞的活性。

22.权利要求21的方法，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合。

23.权利要求18-22中任一项的方法，其中所述化合物选自：

(a)syk多激酶抑制剂；

(b)hPGDS抑制剂；和

(c)DP拮抗剂。

24.权利要求23的方法，其中所述syk多激酶抑制剂为磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐

25.权利要求23的方法，其中所述hPGDS抑制剂选自：

2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺

2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺

4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺

26.权利要求23的方法，其中所述DP拮抗剂为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐

27.一种治疗、预防或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，与给予化合物前患者的I型免疫应答相比，所述方法提高患者的I型免疫应答，且I型应答的提高治疗、改善或预防患者的脉络膜新血管形成。

28.权利要求27的方法，其中所述黄斑变性是年龄相关性黄斑变性。

29.权利要求27或28的方法，其中所述化合物选自：

(a)syk多激酶抑制剂；

(b)hPGDS抑制剂；和

(c)DP拮抗剂。

30.权利要求29的方法，其中所述syk多激酶抑制剂选自：

磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐和2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇。

31.权利要求29的方法，其中所述hPGDS抑制剂选自：

2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺；

2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基)-1，2，4-二唑-3-基]-苄基酰胺；和

4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺。

32.权利要求29的方法，其中所述DP拮抗剂为2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐。

33.一种预防、治疗或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的湿性黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，使得与给予化合物前的I型免疫应答相比，患者的I型免疫应答提高，且I型应答的提高改善或预防患者的脉络膜新血管形成，其中所述化合物选自：

(a)磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐；

(b)2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇；

(c)2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺；

(d)2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐；

(e)2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺；和

(f)4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺。

34.一种预防、治疗或改善免疫系统为具有I型免疫应答和II型免疫应答的患者的黄斑变性的方法，所述方法包括给予患者有效量的调节患者的免疫细胞活性的化合物，其中所述免疫细胞包括天然杀伤细胞(NK细胞)、天然杀伤T细胞(NKT细胞)、肥大细胞、树突细胞、选自嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜中性粒细胞的粒细胞或其任何组合，使得与给予化合物前的I型免疫应答相比，患者的I型免疫应答提高，且I型应答的提高治疗、改善或预防患者的脉络膜新血管形成，其中所述化合物选自：

(a)磷酸一-{6-[5-氟-2-(3，4，5-三甲氧基-苯氨基)-嘧啶-4-基氨基]-2，2-二甲基-3-氧代-2，3-二氢-吡啶并[3，2-b][1，4]

嗪-4-基甲基}酯乙酸盐；

(b)2-[4-(7-乙基-5H-吡咯并[2，3-b]吡嗪-6-基)-苯基]-丙-2-醇；

(c)2-(3-氟-苯基)-4-甲基-嘧啶-5-甲酸吲哚-1-基酰胺；

(d)2-(3-{6-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-甲氧基-嘧啶-4-基}-苯基)-2-甲基-丙酸磷酸盐；

(e)2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸3-[5-(1-羟基-1-甲基-乙基-)-1，2，4-

二唑-3-基]-苄基酰胺；和

(f)4-甲基-2-吡啶-2-基-嘧啶-5-甲酸(5-氟-3-甲基-吲哚-1-基)-酰胺。

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