CN101316587A

CN101316587A - 取代的吡唑化合物

Info

Publication number: CN101316587A
Application number: CNA2006800446567A
Authority: CN
Inventors: 晓-义·肖; 迪尼什·V·帕特尔; 约翰·S·沃德; 马克·R·布雷; 格雷戈里·E·阿戈斯东; 安东尼·M·特雷斯顿
Original assignee: Miikana Therapeutics Inc
Current assignee: Miikana Therapeutics Inc
Priority date: 2005-09-30
Filing date: 2006-09-29
Publication date: 2008-12-03
Anticipated expiration: 2026-09-29
Also published as: UA96427C2; ZA200802786B; CN101316587B

Abstract

本发明公开了一种蛋白激酶抑制剂，包含该抑制剂的组合物及其使用方法。具体而言，本发明公开了Aurora－A(Aurora－2)蛋白激酶抑制剂。而且，还公开了治疗与蛋白激酶相关的疾病的方法，尤其是与Aurora－2相关的疾病，例如癌症。

Description

取代的吡唑化合物

相关应用的引用

本申请要求2005年9月30日提交的美国临时申请60/722,217、2005年10月31日提交的美国临时申请60/732,340、2005年11月4日提交的美国临时申请60/733,868的优先权，通过引用的方式将其全部并入本文。

技术领域

本发明涉及蛋白激酶抑制剂、包括该抑制剂的组合物、以及它们的使用方法。具体而言，本发明涉及Aurora-A(Aurora-2)蛋白激酶抑制剂。本发明还涉及与蛋白激酶相关的疾病的药物组合物和治疗方法，特别是与Aurora-A相关的疾病，例如癌症。

背景技术

近年来对酶结构以及其它与目标疾病相关的生物分子的了解有助于寻找新的治疗药物。一直受到关注且被广泛研究的一类重要的酶是蛋白激酶。

蛋白激酶通过使磷酰基从核苷三磷酸转移到信号通路中参予的蛋白受体而介导细胞内信号转导。细胞外和其它刺激通过许多激酶和通路引起细胞内的各种细胞响应。该刺激的实例包括环境和化学胁迫信号(例如渗透压休克(osmotic shock)、热休克(heat shock)、紫外线辐射、细菌内毒素、H₂O₂)、细胞因子(例如白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))和生长因子(例如粒巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))以及成纤维细胞生长因子(FGF)。细胞外的刺激可引起一个或多个涉及细胞生长、迁移、分化、荷尔蒙分泌、转录因子活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白质合成的控制以及细胞周期调节的细胞响应。

许多疾病都与由蛋白激酶介导的事件引发的异常细胞的响应相关。这些疾病包括自身免疫疾病、炎症性疾病、神经系统疾病或神经变性疾病(neurological and neurodegenerative diseases)、癌症、心血管疾病、敏感症、哮喘、阿尔茨海默病或与激素相关的疾病。因此，药物化学界一直以来为寻求有效作为治疗剂的蛋白激酶抑制剂而付出很大的努力。

在人类中，有三种高度相关的Aurora激酶，其均为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(见Andrews，P.D.等人，Curr.Opin.Cell.Biol.2003，15，672-683；Carmena，M.，Earnshaw，W.C.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.2003，4，842-854；Brown，J.R.等人，BMC Evol.Biol.2004，4，39，Andrews，P.D.，Oncogene2005，24，5005-5015)。尽管Aurora A、B和C的序列具有关联性，这些激酶的定位和功能是截然不同的。结果，各激酶的过量表达或激活能够与不同的疾病状况相关，包括增生性疾病，例如癌症。

家族成员在有丝分裂过程中展示不同的亚细胞定位，且由来自有丝分裂的蛋白酶体进行降解(Graham等人(2002)J.Biol.Chem.277：42419-22)。经常发现激酶与其它蛋白，包括细胞骨架结构进行复合。

Aurora激酶具有保守的C端催化区域和被观察到变化较大的N端。Aurora-A(Aurora-2)的独特性在于其激酶的核苷酸结合区具有两个赖氨酸残基(Warner et al.(2003)Molecular Cancer Therapeutics 2：589-95)。

在引起有丝分裂前期的G₂/M期转换过程中观察到最高的Aurora-A多肽含量和最大的Aurora-A活性，同时多肽向有丝分裂的纺锤体极集中(Graham等人(2002)J.Biol.Chem.277：42419-22；Saka等人(2002)J.Biol.Chem.277：48714-23)。Aurora-A表现为可调控染色体复制过程的异常表达，该异常表达与非整倍性和侵袭性临床表型(尤其是实体瘤)相关。这些观察以及其它的实验数据提出Aurora-A扰乱调控染色体分离的信号级联放大(Sen等人(2002)J.Nat.Cancer.Inst.94：1320-29)。

Aurora-A还在减数分裂中作用，可能用于分离同源染色体和在纺缍体旋转中作用。将Aurora-A的抗体注射至爪蟾卵母细胞可避免第一极体的释放并导致减数分裂一期的停滞(Castro等人(2003)J.Biol.Chem.2236-41)。爪蟾蛋白样蛋白，Eg5，已知为Aurora-2的底物(Castro等人(2003)J.Biol.Chem.2236-41)。

另外，生物体外研究显示Aurora-A合并至染色质和磷酸化组蛋白H3，也许是组蛋白H2B中(Scrittori等人(2001)J.Biol.Chem.276：30002-10)。H3磷酸化，例如在丝氨酸10上的H3磷酸化，在染色体组装时，表现为真核细胞分裂中的一个保守过程。抑制H3磷酸化可导致染色体凝集、异常分离和在有丝分裂和减数分裂过程中染色体的损失。(Scrittori等人(2001)J.Biol.Chem.276：30002-10)。

因此，组蛋白磷酸化的新兴模型类似于组蛋白乙酰化，其中部分多余的酶活性与组蛋白的改性相关，但不同的酶可以在不同的细胞中作用。例如，某些酶可以将大量组蛋白改性，而其它酶可以以靶向形式对组蛋白进行改性，即在已组装的染色质中以序列特异性方式或区域特异性方式进行改性(见例如，Scrittori等人(2001)J. Biol.Chem.276：30002-10)。在此模型中，Aurora-A表现为参与已组装或组装中的染色质中的靶组蛋白改性的激酶。

Aurora激酶家族的其它成员也是与有丝分裂和减数分裂相关的。如Aurora-A一样，Aurora-B表现为参予在不同的可调控细胞周期的蛋白磷酸化事件中。有别于Aurora-A，Aurora-B从前期到中期-后期转换定位于内着丝粒染色质，于末期重新定位于纺锤体中区的微管，并随后发现其在整个胞质分裂期间遍布于中间体(midbody)(见Andrews，P.D.，Oncogene2005，24，5005-5015，loc.cit.)。Aurora-B的作用是确保精确的染色体分离和适当的胞质分裂。Aurora-B表现为与存活素相关，存活素为与内着丝粒相关且在有丝分裂期间进行相当程度的伸展的多肽。存活素表现为涉及抑制细胞凋亡和控制细胞周期。有趣的是，在巨核细胞核核内有丝分裂期间Aurora-B和存活素两者均不定位(delocalized)，导致巨核细胞多倍体的产生，所述巨核细胞核核内有丝分裂为略过了其晚后期(late anaphase)和胞质分裂的过程(Zhang等人(2004)Blood 1003：3717-26)。在例如癌症的增生性疾病中如此作用的抑制剂会导致停滞和细胞死亡，使该抑制剂有助于癌症化疗。

在目前家族的已知成员中，Aurora-C(Aurora-3)是其中研究最少的。Aurora-3在后期至末期(或甚至在胞质分裂期间)定位于中心体，且在睾丸中高度表达(Brown等人(2004)BMC Evolutionary Biology 4：39)。

如前文所述，Aurora激酶在某些类型的癌症中过度表达，所述癌症包括结肠癌、乳腺癌和其它实体瘤癌症。编码Aurora B和Aurora A激酶的基因易于在某些类型的癌症中扩增，而编码Aurora C激酶的基因则保留在有待进行重排和缺失的染色体区域中。Aurora A经发现与多种恶性肿瘤相关，包括原发性结肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌、神经母细胞瘤以及其它实体瘤癌症。(Warner等人(2003)Molecular Cancer Therapeutics 2：589-95)。

对于Aurora A抑制剂已有说明。例如，Harrington等人((2004)Nat.Med.10：262-67)说明了VX-680，VX-680是一种小分子抑制剂，其会阻滞细胞周期进程并诱导体内异种移植模型中某些肿瘤类型中的细胞凋亡。美国专利6,653,301号(于2003年11月25日授予Bebbington等人)也说明了吡唑Aurora A激酶抑制剂。

Hauf等人((2003)J.Cell.Biol.161：281-294)指出了作为Aurora B抑制剂的吲哚酮(Hesperadin)(其导致细胞与单向(monooriented)染色体进入后期)具有两个附着于来自一极的纺锤体的姊妹动粒(称为合成吸附(syntelicattachment)的情形)。

Ditchfield等人((2003)J.Cell.Biol.161：267-280)说明了ZM4477439((4-(4-(N-苯甲酰氨基)苯胺基)-6-甲氧基-7-(3-(1-吗啉基)丙氧基)喹唑啉)的Aurora激酶抑制剂，其会干扰染色体排列、分离和胞质分裂。

因此，激酶抑制剂，尤其是Aurora激酶抑制剂对治疗某些病症包括癌症是特别令人关注的，能够表现出该种抑制的化合物尤其具有价值。

发明概述

本发明提供了用于治疗由激酶介导的疾病的化合物及其药学可接受的衍生物或药物前体，组合物及方法。这些疾病包括原发性、续发性和转移性癌症，如恶性黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、结肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、肺癌、肾脏癌、胰腺癌、肾癌、CNS、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌和神经母细胞瘤。

这些化合物为下述式I化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体：

式I

其中

R^x和R^y独立地选自由-T-R³和-L-Z-R³组成的组；

Q′选自由-CR⁶″＝CR⁶″-和

组成的组，其中所述-CR⁶″＝CR⁶″-可以是顺式双键或反式双键或是它们的混合物；

R¹是-T-(环D)；

环D是5～7元单环或8～10元双环，其选自由芳基、杂芳基、杂环和碳环组成的组，所述杂芳基或杂环基具有1～4个杂原子环原子，其选自由氮、氧和硫组成的组，其中环D中各可被取代的碳环原子独立被羰基、-T-R⁵或-V-Z-R⁵取代，环D中各可被取代的氮环原子独立被-R⁴取代；

T是价键(valence bond)或-(C(R⁶′)₂)-A-；

A是价键或C₁-C₃亚烷基链，其中所述C₁-C₃亚烷基链的亚甲基单元任选被-O-、-S-、-N(R⁴)-、-CO-、-CONH-、-NHCO-、-SO₂-、-SO₂NH-、-NHSO₂-、-CO₂-、-OC(O)-、-OC(O)NH-或-NHCO₂-替代；

Z是C_1-4亚烷基链；

L选自由如下组成的组-O-、-S-、-SO-、-SO₂-、-N(R⁶)SO₂-、-SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-N(R⁶)CO-、-N(R⁶)C(O)O-、-N(R⁶)CON(R⁶)-、-N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)N(R⁶)-、-C(O)N(R⁶)-、-OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-和-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-；

R²和R²′独立地选自由-R和-T-W-R⁶组成的组，或者R²和R²′与它们中间插入的(intervening)原子连接一起形成稠合的5～8元的不饱和或部分不饱和的环，其具有0～3个杂原子环原子，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组，其中由R²和R²′形成的所述稠环的各可被取代的碳环原子独立被卤素、羰基、-CN、-NO₂、R⁷或-V-R⁶取代，且由R²和R²′形成的所述的环的各可被取代的氮环原子独立被R⁴取代；

R³选自由如下组成的组：-R、卤素、-OR、-C(＝O)R、-CO₂R、-COCOR、-COCH₂COR、-NO₂、-CN、-S(O)R、-S(O)₂R、-SR、-N(R⁴)₂、-CON(R⁷)₂、-SO₂N(R⁷)₂、-OC(＝O)R、-N(R⁷)COR、-N(R⁷)CO₂(C_1-6脂肪族基团)、-N(R⁴)N(R⁴)₂、-C＝NN(R⁴)₂、-C＝N-OR、-N(R⁷)CON(R⁷)₂、-N(R⁷)SO₂N(R⁷)₂、-N(R⁴)SO₂R和-OC(＝O)N(R)₂；

R各自独立为氢或任选取代的基团，其选自如下组成的组：C_1-6脂肪族基团、C_6-10芳基、具有5～10个环原子的杂芳基环，和具有5～10个环原子的杂环(heterocyclyl ring)；

R⁴各独立地选自如下组成的组：-R⁷、-COR⁷、-CO₂(任选取代的C_1-6脂肪族基团)、-CON(R⁷)₂和-SO₂R⁷；

R⁵各独立地选自如下组成的组：-R、卤素、-OR、-C(＝O)R、-CO₂R、-COCOR、-NO₂、-CN、-S(O)R、-SO₂R、-SR、-N(R⁴)₂、-CON(R⁴)₂、-SO₂N(R⁴)₂、-OC(＝O)R、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)CO₂(任选取代的C_1-6脂肪族基团)、-N(R⁴)N(R⁴)₂、-C＝NN(R⁴)₂、-C＝N-OR、-N(R⁴)CON(R⁴)₂、-N(R⁴)SO₂N(R⁴)₂、-N(R⁴)SO₂R和-OC(＝O)N(R⁴)₂；

V选自如下组成的组：-O-、-S-、-SO-、-SO₂-、-N(R⁶)SO₂-、-SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-N(R⁶)CO-、-N(R⁶)C(O)O-、-N(R⁶)CON(R⁶)-、-N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)N(R⁶)-、-C(O)N(R⁶)-、-OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂S-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-和-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-；

W选自如下组成的组：-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂S-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-C(R⁶)OC(O)-、-C(R⁶)OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)CO-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-和-CON(R⁶)-；

R⁶各独立地选自氢和任选取代的C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一氮原子上的两个R⁶基团与氮原子连接一起形成3～6元的杂环或杂芳基环；

R⁶′各独立地选自氢和C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一碳原子上的两个R⁶′基团连接一起形成3～8元的碳环；

R⁶″各独立地选自氢、C_1-4脂肪族基团、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基组成的组，或者在相邻的碳原子上的两个R⁶″基团连接一起形成5～7元的碳环；且

R⁷各独立地选自由氢和任选取代的C_1-6脂肪族基团组成的组，或者在同一氮原子上的两个R⁷基团与氮原子连接一起形成5～8元的杂环或杂芳基环。

发明详述

除非另作说明，本文将使用如下定义。“任选取代的”与“取代的或未取代的”或“(未)取代的”可交替地使用。除非另作说明，任选取代的基团可以在基团的可取代的位置上具有取代基，且各取代之间相互独立。

“乙酰氨基”意指-NHC(＝O)CH₃基团。

“脂肪族基团”意指直链、支链或环状C₁-C₁₂烃，其为完全饱和或含有一个或多个不饱和的非芳香族单元。例如，合适的脂肪族基团包括取代的或未取代的直链、支链或环状烷基、烯基、炔基及其混合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。单独使用或作为较大基团的一部分使用的术语“烷基”、“烷氧基”、“羟基烷基”、“烷氧基烷基”和“烷氧基羰基”包括含有1～12个碳原子的直链和支链。单独使用或作为较大基团的一部分使用的术语“烯基”和“炔基”包括含有2～12个碳原子的直链和支链。单独使用或作为较大基团的一部分使用的术语“环烷基”包括环状的C₃～C₁₂烃，其为完全饱和或含有一个或多个不饱和单元，但其并非芳香族的。

“氨基”意指NH₂基团。

“烷基氨基”意指其中的一个氢原子被烷基取代的氨基。

“二烷基氨基”意指其中的氢原子被烷基取代的氨基，其中该烷基可以是相同或不同的。

“卤代烷基”、“卤代烯基”和“卤代烷氧基”意指被一个或多个(视乎情况)卤原子取代的烷基、烯基和烷氧基。

“卤素”意指F、Cl、Br或I。

“杂原子”意指氮、氧或硫，且包括氮和硫的任何氧化形式和氮的季铵化形式。而且，“氮”包括杂环中可被取代的氮。与例来说，在具有0～3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和的环中，所述氮可以是N(如3，4-二氢-2H-吡咯基中的N)、NH(如吡咯烷基中的NH)或NR⁺(如N-取代的吡咯烷基中的NR⁺)。

本文所用的术语“碳环(carbocycle，carbocyclyl，carbocyclo或carbocyclic)”意指3～14元的脂肪族环体系。“碳环”(不论是饱和或部分饱和的)还意指任选取代的环。“碳环”还包括与一个或多个芳香环或非芳香环稠合的脂肪族环，例如十氢萘基或四氢萘基，其中连接基团或连接点在脂肪族环上。

如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中单独使用或作为较大基团使用的“芳基”意指6～14元的芳香环，例如苯基、苄基、苯乙基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。“芳基”还意指任选取代的环。“芳基”与“芳基环”可交替地使用。“芳基”还包括稠合的多环芳香环体系，其中的芳香环与一个或多个环稠合。实例包括1-萘基、2-萘基、1-蒽基和2-蒽基。包括在如本文所用的“芳基”的范围的还有其中芳香环与一个或多个非芳香环稠合的基团，例如茚满基、菲啶基或四氢萘基，其中连接基团或连接点在芳香环上。

本文所用的“杂环”(heterocycle，heterocyclyl)或“杂环基”(heterocyclic)包括4～14元，优选5～10元的非芳香环体系，其中环中的一个或多个，优选1～4个碳原子各自被杂原子取代。杂环的实例包括3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代的)-2-羰基-苯并咪唑-3-基、2-四氢呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢吡喃基、3-四氢吡喃基、4-四氢吡喃基、[1，3]-二氧戊环基、[1，3]-二硫戊环基、[1，3]-二噁烷基、2-四氢苯硫基、3-四氢苯硫基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫代吗啉基、3-硫代吗啉基、4-硫代吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、羰基咪唑(diazolonyl)、N-取代的羰基咪唑(diazolonyl)、1-苯二甲酰亚氨基(1-phthalimidinyl)、苯并吡喃烷基(benzoxanyl)、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并呋喃烷基(benzoxolanyl)，苯并硫戊环基(benzothiolanyl)和苯并硫己环基(benzothianyl)。包括在如本文所用的“杂环基”的范围的还有其中含杂原子的非芳香环与一个或多个芳香环或非芳香环稠合的基团，例如吲哚啉基、色原烷基、菲啶基或四氢喹啉基，其中连接基团或连接点在含杂原子的非芳香环上。“杂环”或“杂环基”(不论是饱和或部分饱和的)还意指任选取代的环。

如“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”中单独使用或作为较大基团使用的“杂芳基”意指5～14元的杂芳香环基团。杂芳基环的实例包括2-呋喃基、3-呋喃基、3-呋咱基(3-furazanyl)、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁二唑啉基、5-噁二唑啉基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、1-吡唑基、2-吡唑基、3-吡唑基、2-吡啶、3-吡啶、4-吡啶、2-嘧啶、4-嘧啶、5-嘧啶、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲唑基、异吲哚基、吖啶基和苯并异噁唑基。包括在如本文所用的“杂芳基”的范围的还有其中的杂原子环与一个或多个芳香环或非芳香环稠合的基团，其中连接基团或连接点在杂芳香环上。实例包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[3，4-d]嘧啶基。“杂芳基”还意指任意取代的环。“杂芳基”与“杂芳基环”或“杂芳香基”可交替使用。

芳基(包括芳烷基、芳烷氧基和芳氧基烷基等)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳基烷氧基等)可含有一个或多个取代基。在芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基中的任何不饱和碳原子上的取代基的合适实例包括卤素、-R⁰、-OR⁰、-SR⁰、1，2-亚甲基二氧基、1，2-乙烯基二氧基、保护的OH(如酰氧基)、苯基(Ph)、取代的Ph、-O(Ph)、取代的-O(Ph)、-CH₂(Ph)、取代的-CH₂(Ph)、-CH₂CH₂(Ph)、取代的-CH₂CH₂(Ph)、-NO₂、-CN、-N(R⁰)₂、-NR⁰C(O)R⁰、-NR⁰C(O)N(R⁰)₂、-NR⁰CO₂R⁰、-NR⁰NR⁰C(O)R⁰、-NR⁰NR⁰C(O)N(R⁰)₂、-NR⁰NR⁰C₂R⁰、-C(O)C(O)R⁰、-C(O)CH₂C(O)R⁰、-CO₂R⁰、-C(O)R⁰、-C(O)N(R⁰)₂、-OC(O)N(R⁰)₂、-S(O)₂R⁰、-SO₂N(R⁰)₂、-S(O)R⁰、-NR⁰SO₂N(R⁰)₂、-NR⁰SO₂R⁰、-C(＝S)N(R⁰)₂、-C(＝NH)-N(R⁰)₂、-(CH₂)_yNHC(O)R⁰和-(CH₂)_yNHC(O)CH(V-R⁰)(R⁰)；其中R⁰各独立地选自氢、取代的或未取代的脂肪族基团、未取代的杂芳基环或杂环、苯基(Ph)、取代的Ph、-O(Ph)、取代的-O(Ph)、-CH₂(Ph)或取代的-CH₂(Ph)；y是0～6；且V是连接基团。在脂肪族基团或R⁰苯环上的取代基的实例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基和卤代烷基。

脂肪族基团或非芳香族杂环或稠合的芳基或杂芳基可含有一个或多个取代基。在脂肪族基团或非芳香族杂环或稠合的芳基或杂芳基中的任何饱和碳原子上的取代基的合适实例包括上述对芳基或杂芳基的不饱和碳原子所列举的，以及如下的：＝O、＝S、＝NNHR^*、＝NN(R^*)₂、＝N-、＝NNHC(O)R^*、＝NNHCO₂(烷基)、＝NNHSO₂(烷基)或＝NR^*，其中R^*各独立地选自氢、未取代的脂肪族基团或取代的脂肪族基团。脂肪族基团上的取代基的实例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基和卤代烷基。

非芳香族杂环中的氮原子上的合适的取代基包括-R⁺、-N(R⁺)₂、-C(O)R⁺、-CO₂R⁺、-C(O)C(O)R⁺、-C(O)CH₂C(O)R⁺、-SO₂R⁺、-SO₂N(R⁺)₂、-C(＝S)N(R⁺)₂、-C(＝NH)-N(R⁺)₂和-NR⁺SO₂R⁺；其中R⁺各独立地选自氢、脂肪族基团、未取代的脂肪族基团、苯基(Ph)、取代的Ph、-O(Ph)、取代的-O(Ph)、-CH₂(Ph)、取代的-CH₂(Ph)或未取代的杂芳基或杂环。在脂肪族基团或苯环上的取代基的实例包括氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氨基羰基、卤素、烷基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基氨基羰基氧基、二烷基氨基羰基氧基、烷氧基、硝基、氰基、羧基、羧基、烷氧基羰基、烷基羰基、羟基、卤代烷氧基和卤代烷基。

术语“连接基团(linker group或linker)”意指连接化合物的两部分的有机基团。连接基团一般由原子(如氧或硫等)、单元(如-NH-、-CH₂-、-C(O)-、-C(O)NH-等)或原子链(如亚烷基链等)组成。连接基团的分子量一般为约14～200，优选14～96，长度约为6个原子。连接基团的实例包括饱和或不饱和C_1-6亚烷基链，其为任选取代的，且其中链中的一个或两个饱和碳任选被-C(O)-、-C(O)C(O)-、-CONH-、-CONHNH-、-CO₂-、-OC(O)-、-NHCO₂-、-O-、-NHCONH-、-OC(O)NH-、-NHNH-、-NHCO-、-S-、-SO-、-SO₂-、-NH-、-SO₂NH-或-NHSO₂-取代。

术语“亚烷基链”意指任选取代的直链或支链碳链，其可以是完全饱和的或具有一个或多个不饱和单元。任选取代基如上述对脂肪族基团所描述的。

取代基或其变体(variables)的结合只有在该结合使最终获得一个稳定的或者化学可行(feasible)的化合物才是可取的。稳定的化合物或者化学可行的化合物是指化学结构在没有水或其它化学活性条件存在下于温度为40℃或以下的黑暗环境下保存至少一星期基本没有变化的化合物。

应当理解，在本文中定义的所有取代的基团中，通过用该取代基上的进一步的取代基定义该取代基所得的聚合物(例如具有取代基本身被取代的苯基取代的作为取代基的取代的苯基的取代的苯基)并不包括在本文的范围内。在此情况中，这些取代基的最大数目为3。例如，用取代的苯基取代的苯基限定为-取代的苯基-(取代的苯基)-(取代的苯基)。

除非另有说明，本文所示出的结构还包括所有该结构的立体化学形式；即各不对称中心的R和S构型。因此，本发明化合物的单一的立体化学异构体以及对映异构体和非对映异构体的混合物也包括在本发明的范围内。除非另有说明，本文所示出的结构还包括仅仅是一个或多个富集的同位素原子不同的化合物。例如，本发明的范围包括具有目前的结构，但是用氘或氚代替氢，或用¹³C-或¹⁴C-富集的碳代替碳的化合物。

式I的化合物或其盐可制成组合物。在一个优选的实施方式中，组合物是药物组合物。在一个实施方式中，该组合物包括其量有效抑制生物样品或患者中的蛋白激酶的蛋白激酶抑制剂。本发明的化合物及其药学可接受的组合物可进行配制使对患者给药，其包括其量有效治疗或预防激酶介导的病症的蛋白激酶抑制剂、和药学可接受的载体、佐剂或媒介。

本发明的另一方面涉及治疗或预防激酶介导的疾病的方法。在一个实施方式中，该疾病为Aurora A介导的疾病，该方法包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药学可接受的组合物。

本文所用的术语“Aurora A介导的疾病”或“Aurora A介导的病症”意指Aurora A在其中并扮演重要角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“Aurora A介导的疾病”或“Aurora A介导的病症”还意指通过用Aurora A抑制剂的治疗减轻疾病或病症。该病症包括癌症。

术语“癌症”包括，但不限于，实体瘤和血源性肿瘤，并包括，但不限于以下癌症：乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌，精原细胞癌、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及胆通道癌、肾脏癌、骨髓病变、淋巴腺样病变、霍奇金淋巴瘤(Hodgkin′s)、毛细胞白血病(hairy cells)、口腔癌和咽(口部)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌(pharynx)、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和白血病。

术语“癌症”包括原发性癌症、治疗续发性癌症和转移性癌症。

本发明的一个方面涉及有效治疗癌症的化合物和组合物。

本发明的另一个方面涉及以下列癌症的治疗：乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌，精原细胞癌、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及胆通道癌、肾脏癌、骨髓病变、淋巴腺样病变、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、口腔癌和咽(口部)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和白血病。

本发明的另一方面涉及治疗癌症的方法，其包括向癌症患者施予一种或多种本文所述的化合物。

血管新生的特征在于内皮细胞的增生使形成新的血管(一般称为新生血管形成)。抑制内皮细胞的有丝分裂可抑制血管新生。本发明的另一方面因此涉及抑制不良的有丝分裂，包括不良的血管新生。哺乳动物的疾病的特征在于如本文所述的不良的细胞有丝分裂，包括，但不限于内皮细胞的过度或异常刺激(例如动脉粥样硬化)、实体瘤和瘤转移、良性瘤，例如血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼(trachomas)和脓性肉芽肿、血管功能障碍、伤口愈合异常、炎症和免疫系统疾病、白塞病、痛风或痛风性关节炎、不正常的血管新生引起的类风湿关节炎、如牛皮癣的皮肤病、糖尿病视网膜病变和其它眼部血管新生疾病(如早产儿视网膜病变)(晶体后纤维膜增生症))、黄斑变性(macular degeneration)，角膜移植后排斥、新生血管性青光眼或奥斯特韦伯综合症(Osler Weber syndrome，奥-韦-朗疾病)。

其它不良的血管新生涉及正常的程序，包括排卵和囊胚的着床。上述的组合物可通过减少或预防胚胎着床所需的子宫的血管新生而作为生育控制剂使用。因此，上述组合物可用于阻碍排卵和囊胚的着床或阻碍月经(包括闭经)。

与不良的有丝分裂有关的疾病(包括新血管形成)能够根据本发明得到治疗。这些疾病包括，但不限于，眼部新血管形成疾病、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植后排斥、新生血管性青光眼和晶体后纤维膜增生症、流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏症、隐形眼镜超戴症、特应性角膜炎、上角膜缘角膜炎、翼状胬肉角膜炎干燥、干燥综合征(syndrome)、酒糟鼻、泡性角膜炎、梅毒、分枝杆菌感染、脂质变性(lipid degeneration)、化学烧伤、细菌性溃疡，真菌性溃疡、单纯疱疹病毒感染、带状疱疹感染、原虫感染、卡波西氏肉瘤、蚕蚀性角膜溃疡，Terrien’s角膜边缘变性、边缘皮肤角化、外伤(trauma)、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多动脉炎、Wegener’s肉芽肿、巩膜炎、Steven-Johnson疾病、类天疱疮、放射状角巩膜切开(radial keratotomy)和角膜移植排斥(corneal graph rejection)。

与不良的有丝分裂有关的疾病(包括新血管形成)能够根据本发明得到治疗。这些疾病包括，但不限于，镰状细胞贫血症、结节病、弹力纤维性假黄瘤、帕哲病、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞性疾病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、莱姆病、系统性红斑狼疮、Eales’病、白塞病、感染引起的视网膜炎或脉络膜炎、假定眼组织胞浆菌病、Best’s病、近视、视盘小凹、斯特格病变(Stargart’s desease)、睫状体平坦部炎、慢性视网膜脱离、超高粘度综合征、弓形体病和激光后并发症。其它疾病包括，但不限于，与虹膜红变有关的疾病(虹膜的新血管形成和与房角(angle)相关的疾病)，以及由纤维血管或纤维组织的异常增生引起的疾病，包括所有增生性玻璃体视网膜病变形式，不论其是否与糖尿病相关。

本发明的另一方面涉及炎症疾病的治疗，其包括但不限于，内皮细胞的过度或异常刺激(例如动脉粥样硬化)、实体瘤和瘤转移、良性瘤，例如血管瘤、听神经瘤、神经纤维瘤、沙眼和脓性肉芽肿、血管功能障碍、伤口愈合异常、炎症和免疫系统疾病、白塞病、痛风或痛风性关节炎、不正常的血管新生引起的类风湿关节炎、如牛皮癣的皮肤病、糖尿病视网膜病变和其它眼部血管新生疾病(如早产儿视网膜病变)(晶体后纤维膜增生症))、黄斑变性，角膜移植后排斥、新生血管性青光眼或奥斯特韦伯综合症(奥-韦-朗疾病)。其它不良的血管新生涉及正常的程序，包括排卵和囊胚的着床。因此，上述组合物可用于阻碍排卵和囊胚的着床或阻碍月经(包括闭经)。

本发明的另一方面涉及抑制Aurora A在生物样品中的活性的方法，其包括使生物样品与式I的Aurora A抑制剂或其组合物接触。

本发明的另一方面涉及抑制Aurora A在患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

在本发明的另一方面中，式I的化合物作为抑制剂对于Aurora A(相对于Aurora B)是更有效的。

本发明的另一方面涉及用GSK-3抑制剂治疗或预防由GSK-3介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“GSK-3介导的疾病”或“GSK-3介导的病症”意指GSK-3在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症或病况。这些疾病或病症包括但不限于糖尿病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏病、与艾滋病相关的痴呆症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(AML)、多发性硬化(MS)、精神分裂症、心肌肥大症、再灌注/缺血和秃发。

本发明的一个方面涉及使患者提高其糖原的合成和/或降低其血糖水平的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。此方法对于糖尿病患者尤其有效。另一方法涉及抑制过度磷酸化的Tau蛋白的生成，其有效停止或减慢阿尔茨海默病的进程。另一方法涉及抑制β-连环蛋白的过度磷酸化，其有效治疗精神分裂症。

本发明的另一方面涉及抑制GSK-3在生物样品中的活性的方法，其包括使生物样品与式I的GSK-3抑制剂接触。

本发明的另一方面涉及抑制GSK-3在患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用CDK-2抑制剂治疗或预防由CDK-2介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“CDK-2介导的疾病”或“CDK-2介导的病症”意指CDK-2在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“CDK-2介导的疾病”或“CDK-2介导的病症”还意指通过用CDK-2抑制剂的治疗减轻疾病或病症。该病症包括但不限于癌症、阿尔茨海默氏病、再狭窄、血管新生、肾小球肾炎、巨细胞病毒、HIV、疱疹、牛皮癣、动脉粥样硬化、脱发症和自身免疫疾病，如类风湿性关节炎，如在以下文献中描述的：Fischer，P.M.和Lane，D.P.，Current Medicinal Chemistry，7，1213-1245(2000)；Mani，S.，Wang，C.，Wu，K.，Francis，R.和Pestell，R.，Exp.Opin.Invest.Drugs，9，1849(2000)；Fry，D.W.和Garrett，M.D.，Current Opinion in Oncologic，Endocrine&Metabolic Investigational Drugs，2，40-59(2000)。

本发明的另一方面涉及抑制CDK-2在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用ERK-2抑制剂治疗或预防由ERK-2介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“ERK-2介导的疾病”或“ERK-2介导的病症”意指ERK-2在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“ERK-2介导的疾病”或“ERK-2介导的病症”还意指通过用ERK-2抑制剂的治疗减轻疾病或病症。该病症包括但不限于癌症、中风、糖尿病、肝脏肿大、包括心脏扩大症的心血管疾病、阿尔茨海默氏病、囊性纤维性变、病毒性疾病、自身免疫疾病、动脉粥样硬化、再狭窄、牛皮癣、过敏性疾病(包括哮喘，炎症)、神经系统紊乱和与激素有关的疾病。各种疾病中的ERK-2蛋白激酶及其类似物在例如下列文献中有说明：Bokemeyer等人，1996，Kidney Int.49，1187；Anderson等人，1990，Nature 343，651；Crews等人，1992，Science 258，478；Bjorbaek等人，1995，J.Biol.Chem.270，18848；Rouse等人，1994，Cell 78，1027；Raingeaud等人，1996，Mol.Cell Biol.16，1247；Raingeaud等人，1996；Chen等人，1993 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90，10952；Oliver等人，1995，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.210，162；Moodie等人，1993，Science 260，1658；Frey和Mulder，1997，Cancer Res.57，628；Sivaraman等人，1997，J Clin.Invest.99，1478；Whelchel等人，1997，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.16，589。

本发明的一个方面涉及抑制ERK-2在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用AKT抑制剂治疗或预防由AKT介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“AKT介导的疾病”或“AKT介导的病症”意指AKT在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“AKT介导的疾病”或“AKT介导的病症”还意指通过用AKT抑制剂的治疗减轻疾病或病症。AKT介导的疾病或病症包括但不限于增生性疾病、癌症和神经变性疾病。AKT(也称为蛋白激酶B)与其它各种疾病的相关性在例如下列文献中有说明：Khwaja，A.，Nature，pp.33-34，1990；Zang，Q.Y.等人，Oncogene，192000；Kazuhiko，N.等人，The Journal of Neuroscience，202000。

本发明的一个方面涉及抑制AKT在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用Src抑制剂治疗或预防由Src介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“Src介导的疾病”或“Src介导的病症”意指Src在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“Src介导的疾病”或“Src介导的病症”还意指通过用Src抑制剂的治疗减轻疾病或病症。该病症包括但不限于高血钙症、骨质疏松症、骨关节炎、癌症、骨转移对症治疗和帕哲病。各种疾病中的Src蛋白激酶B及其类似物在例如下列文献中有说明：Soriano，Cell，69，551(1992)；Soriano等人，Cell，64，693(1991)；Takayanagi，J.Clin.Invest.，104，137(1999)；Boschelli，Drugs of theFuture 2000，25(7)，717，(2000)；Talamonti，J.Clin.Invest.，91，53(1993)；Lutz，Biochem.Biophys.Res.243，503(1998)；Rosen，J.Biol.Chem.，261，13754(1986)；Bolen，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，2251(1987)；Masaki，Hepatology，27，1257(1998)；Biscardi，Adv.Cancer Res.，76，61(1999)；Iynch，Leukemia，7，1416(1993)；Wiener，Clin.Cancer Res.，5，2164(1999)；Staley，Cell Growth Diff.，8，269(1997)。

本发明的另一方面涉及抑制Src在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用Lck抑制剂治疗或预防由Lck介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“Lck介导的疾病”或“Lck介导的病症”意指Lck在其中扮演重要的角色的任何疾病或其它有害的病症。术语“Lck介导的疾病”或“Lck介导的病症”还意指通过用Lck抑制剂的治疗减轻疾病或病症。Lck介导的疾病或病症包括但不限于自身免疫疾病如移植物排斥、敏感症、类风湿关节炎和白血病。Lck与其它各种疾病的相关性在例如Molina等人，Nature，357，161(1992)中有说明。

本发明的另一方面涉及抑制Lck在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用Abl抑制剂治疗或预防由Abl介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“Abl介导的疾病”或“Abl介导的病症”意指Abl在其中扮演重要的角色的任何病况或其它有害的病症。术语“Abl介导的疾病”或“Abl介导的病症”还意指通过用Abl抑制剂的治疗减轻疾病或病症。Abl介导的疾病或病症包括但不限于白血病，尤其是慢性粒细胞白血病。Abl与其它各种疾病的相关性在例如Druker等人，N.Engl.J.Med.2001，344，1038-1042中有说明。

本发明的另一方面涉及抑制Abl在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用cKit抑制剂治疗或预防由cKit介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“cKit介导的疾病”或“cKit介导的病症”意指cKit在其中扮演重要的角色的任何病况或其它有害的病症。术语“cKit介导的疾病”或“cKit介导的病症”还意指通过用cKit抑制剂的治疗减轻疾病或病症。cKit介导的疾病或病症包括但不限于肥大细胞增生病/肥大细胞白血病、胃肠道间质瘤、鼻型自然杀伤/T细胞淋巴瘤、精原细胞瘤/无性细胞瘤、甲状腺癌、小型细胞肺癌、恶性黑色素瘤、腺样囊性癌、卵巢癌、急性髓系细胞白血病、间变性大细胞淋巴瘤、血管肉瘤、子宫内膜癌、儿童T-细胞ALL/淋巴瘤，乳腺癌和前列腺癌。cKit与其它各种疾病的相关性在例如Heinrich等人，J.Clinical Oncology 2002，20，1692-1703中有说明。

本发明的另一方面涉及抑制cKit在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用Flt3抑制剂治疗或预防由Flt3介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“Flt3介导的疾病”或“Flt3介导的病症”意指Flt3在其中扮演重要的角色的任何病况或其它有害的病症。术语“Flt3介导的疾病”或“Flt3介导的病症”还意指通过用Flt3抑制剂的治疗减轻疾病或病症。Flt3介导的疾病或病症包括但不限于急性髓系细胞白血病、混合系白血病和急性淋巴细胞白血病。Flt3与其它各种疾病的相关性在例如Sternberg和Licht，Curr.Opin Hematol.2004，12，7-13中有说明。

本发明的另一方面涉及抑制Flt3在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

本发明的另一方面涉及用KDR抑制剂治疗或预防由KDR介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本文所用的术语“KDR介导的疾病”或“KDR介导的病症”意指KDR在其中扮演重要的角色的任何病况或其它有害的病症。术语“KDR介导的疾病”或“KDR介导的病症”还意指通过用KDR抑制剂的治疗减轻疾病或病症。KDR介导的疾病或病症包括但不限于肺癌、乳腺癌、胃肠道癌、肾脏癌、膀胱癌、卵巢癌和子宫内膜癌、颅内肿瘤包括多形性胶质母细胞瘤、散发性毛细血管性血管母细胞瘤、恶性血液病包括T细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)和早幼粒细胞白血病、年龄相关性黄斑变性、疱疹性眼部疾病、类风湿关节炎、脑缺血和子宫内膜异位症。KDR与其它各种疾病的相关性在例如Ferrara，Endocrine Reviews 2004，25，581-611中有说明。

本发明的另一方面涉及抑制KDR在生物样品或患者中的活性的方法，其包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

术语“患者”意指人类和兽类。

本文所用的术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；适用于体外测试的酶制剂；取自哺乳动物的活组织检查材料或其提取物；和血液、唾液、尿、粪便、精液、眼泪或其它体液或它们的提取物。

抑制蛋白激酶(例如Aurora A)的有效量是指对蛋白激酶产生可检测到的抑制的量(与不存在抑制剂的情况下的酶活性相比)。可使用任何方法对该抑制进行测量，例如下述的生物学检测实施例。

术语“药学可接受载体、佐剂或媒介”意指可与本发明的化合物一起施予患者的无毒性的载体、佐剂或媒介，且其不会破坏本发明的化合物的药理活性。

在这些药物组合物中可以使用的药学可接受载体一般为本领域已知的。它们包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物性脂肪酸偏甘油酯混合物、水、溶剂、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素衍生物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、油、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛脂。药学可接受媒介可包含多于一种赋形剂的混合物，其可以选择组分和比例以优化该配分的理想特征，所述特征包括但不限于保存限期、稳定性、载药量、投递位置、溶出度、自乳化性、控释速率及释放位置，和代谢性。

本发明的组合物可以通过口服、肠胃外、吸入、外用、直肠、鼻内、口腔、阴道、透皮或经由植入药盒给药。本文所用的术语“肠胃外”包括皮下注射、静脉注射、肌肉内注射、关节内注射、滑膜内注射、胸骨内注射、鞘内、肝内、病灶内(intralesional)及颅内注射或输液技术。该组合物优选通过口服、皮下、腹腔内或静脉给药。

可以通过本领域已知的各种技术制备配方。配制技术的实例在公开的文献中以及在如Rong Liu于2000年编著的“Water-insoluble drugformulation”(Interpharm印)文中有记载。

本发明的组合物的无菌可注射形式(sterile injectable forms)可以是水性悬浮液或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂进行配制。无菌可注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或无菌可注射悬浮液，例如作为1，3-丁二醇的溶液。可使用的可接受媒介和溶剂中是水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油(fixed oil)是常规使用的溶剂或助悬介质。为此，可以使用的任何低刺激性的不挥发性油包括合成的单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物，尤其是其聚氧乙烯化的形式，如天然的药学可接受的油(如橄揽油或蓖麻油)般可用于注射剂的制备。这些油溶液或悬浮液还可以包含长链醇稀释剂或分散剂如羧甲基纤维素或在药学可接受剂型包括乳液和悬浮液的配制中常用的类似的分散剂。也可以在配制中使用其它常用的表面活性剂如Tweens、Spans和其它药学可接受的固体、液体或其它剂型形式的制造中常用的表面活性乳化剂或生物利用度增强剂。

本发明的药物组合物可以通过本领域已知的技术制备，且可通过以任何的口服可接受剂型进行口服给药，所述口服可接受剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服用的片剂中，常用的载体包括但不限于纤维素、乳糖或玉米淀粉。一般还加入润滑剂如硬脂酸镁。对于口服用的胶囊形式，有效的稀释剂或载体包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服剂型需要水性悬浮液或溶液时，活性成分与乳化剂和助悬浮剂混合。如需要，还可加入一些增甜剂、调味剂或着色剂。

另外，对于直肠给药，本发明的药物组合物可以栓剂形式进行给药。它们可以通过使用本领域已知的技术制备，例如通过将试剂与合适的非刺激性赋形剂混合，该赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此，其可在直肠内融化以释出药物。该材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药物组合物可以外用给药，尤其是当治疗目标包括外用给药可到达到的区域或器官，包括眼疾、皮肤病、气道(airways)或下肠道。可通过本领域已知的技术容易地配制适用于上述各区域或器官的外用配方。例如，下肠道的外用给药可以通过直肠栓剂配方(见上文)或在合适的灌肠剂配方实现。还可以使用外用透皮贴剂(topically-transdermalpatches)。

对于外用或透皮给药，通过本领域已知的技术将药物组合物配制成合适的软膏剂或基质(base)，其含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于本发明化合物的外用给药的载体在本领域是公知的，且包括但不限于矿物油、石蜡油、白凡士林(white petrolatum)、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另外，该药物组合物可配制成合适的洗液(lotion)或乳膏剂(cream)，其含有悬浮或溶解在一种或多种药学可接受载体中的活性组分。合适的载体包括，但不限于矿物油、失水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、十六烷醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

对于眼用的，通过本领域已知的技术可将药物组合物配制成等渗的、pH调节的无菌盐水的微米级或纳米级尺寸的悬浮液，或优选配制成等渗的、pH调节的无菌盐水的溶液，它们含有或不含有防腐剂(如氯化苄烷铵)。另外，对于眼用的，可将药物组合物配制成软膏剂(如蜡膏)。

本发明的药物组合物还可通过鼻腔喷雾剂或吸入进行给药。该组合物可根据药物制剂领域中已知的技术制备，且可将其制备成盐水悬浮液或盐水溶液，任选采用苄醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂以提高生物利用度、氟碳化合物、和/或其它常规的增溶剂或分散剂。

本发明可用于治疗人类或动物中的炎症或免疫介导性疾病，其中所述炎症或免疫介导性疾病包括但不限于类风湿关节炎、骨关节炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn’s disease)、蚕蚀性角膜溃疡、关节炎、肉样瘤病、炎症或免疫介导性肠道疾病，系统性红斑狼疮，Wegener’s综合征、Steven-Johnson疾病、白塞氏病、类天疱疮、莱姆病、哮喘或获得性免疫缺损综合症。

本发明可用于治疗人类或动物中的感染性疾病，其中所述传染病包括但不限于梅毒、细菌性感染、分枝杆菌感染、细菌性溃疡、真菌性溃疡、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、原虫感染、巴尔通体感染或弓形体病。

本发明可用于治疗人类或动物中的血病或血管疾病，其中所述血病或血管疾病包括但不限于静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞性疾病、多动脉炎、动脉粥样硬化、奥-韦-朗疾病、镰状细胞性贫血、白血病、急性或慢性骨髓瘤病、血管瘤、遗传性出血性毛细血管扩张症、骨髓病、贫血、血凝结障碍或淋巴结肿大、肝肿大或脾脏肿大。本发明也可以用于治疗慢性骨髓瘤病，其中所述疾病包括但不限于多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征。

本发明可用于治疗人类或动物中的皮肤病症，其中所述皮肤病症包括但不限于伤口愈合异常、酒糟鼻、皮肤化学烧伤、皮炎或牛皮癣。

此外，本发明可用于治疗各种绝经后综合症、骨质疏松症、心血管疾病、心肌血管新生、斑块内新生血管(plaque neovascularization)、血友病性关节、血管纤维瘤、伤口肉芽形成、肠道粘连、硬皮病、增生性瘢痕，即瘢痕疙瘩。它们还有效治疗导致血管新生病作为病理后果的疾病，如猫抓病、和幽门螺杆菌溃疡。

本发明还可用于治疗阿尔茨海默氏病以降低中风的发病率，且还作为目前的雌激素替代治疗的另一选择。本发明的化合物可经由雌激素和非雌激素生化途径使用。

此外，本发明的化合物可用于治疗子宫内膜异位。子宫内膜异位为子宫内膜细胞的异常生长，位于子宫内的子宫内膜细胞为每月月经过程中脱落的细胞。方向不定的子宫内膜细胞可以是在小腹中如盲肠(cul-de-sac)，直肠阴道隔、胃、输卵管、卵巢和膀胱等区域。在月经期间，正常的子宫内层脱落，并经由阴道排出，但移植的子宫内膜组织有没有办法离开身体；取而代之的是子宫内膜组和细胞附着于其原有位置并在此生长。结果导致内出血、发炎和结疤。子宫内膜结疤导致的其中一个严重的后果是不育。子宫内膜生长一般并非恶性或癌性的。在其它并发症中，该生长可中断并将子宫内膜异位扩散至小膜的新区域。子宫内膜异位渐进性疾病。该生长或病变首先观察到的是明显的水泡，然后其演变成红色病变，并最终在7至10年进展成黑色病变。

另外，可通过本领域技术人员已知的方法配制本发明的化合物以提高该化合物的生物利用度。本发明的化合物的配制方法及配方的实例在Rong Liu于2000年编著的“Water-insoluble drug formulation”(CRC PressLLC)文中有记载，通过引用的方式将其全部内容并入本文。

作为本发明一部分的配方包括纳米配方，其通过受控的沉淀法和在美国专利申请10/392,403号(公开号：2004/0033267)中公开的方法制得，在此通过引用的方式并入该专利的全部内容。本领域已知的纳米颗粒常用的赋形剂包括水、表面活性剂如含糖聚合物(改性的纤维素)和洗涤剂，以及任选的防腐剂如苯甲烷铵盐，苯甲酸或其盐，或对羟苯甲酸。

通过形成纳米颗料，本发明的组合物具有提高的生物利用度。优选地，本发明的化合物的颗粒通过光散射法、显微镜方法或其它本领域技术人员已知的合适的方法的测定的有效平均粒径为小于约2微米，小于约1900nm、小于约1800nm、小于约1700nm、小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于约1300nm、小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小于约900nm、小于约800nm、小于约700nm、小于约600nm、小于约500nm、小于约400nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于约150nm、小于约100nm、小于约75nm或小于约50nm。可以将纳米制剂制成上述多种制剂形式，包括例如外用或透皮给药用的悬浮液或乳膏剂或软膏剂、栓剂或口服给药用的悬浮液或粉末或片剂或胶囊或粒剂、无菌可注射制剂用的悬浮液，和聚合物制剂。

可以将构成本发明的化合物制成生物可降解或非生物可降解的聚合物以获得缓释化合物。可以植入该聚合物使药物得以经由胃肠道递送至整个身体或者可以将具有构成本发明的化合物的聚合物植入肿瘤的附近。受控递送药物中的聚合物的综述例如可参见“Biodegradable Polymersas Drug Delivery Systems，Chasin M and Langer R(eds)，New York，MarcelDekker，1990，通过引用的方式将其全部内容并入本文。另一综述可参见“Handbook of Biodegradable Polymers”，D.Weseman，J.Kost and A.Domb，Taylor & Francis，1998，通过引用的方式将其全部内容并入本文。

“药学可接受的衍生物或药物前体”意指向受者进行给药时，能够直接或间接提供本发明的化合物或其无法被抑制的活性代谢物或残余物的本发明的化合物的任何药学可接受的盐、酯、酰胺、或酯盐或酰胺盐或本发明的化合物的其它衍生物。特别合适的衍生物或药物前体是向患者施用本发明的化合物时该化合物能够提高本发明的化合物的生物利用度(例如使口服给药用的化合物更容易被血液吸收)，或相对于母体物质(parent species)能够增强母体化合物至生物室(compartment)(例如脑或淋巴系统)的递送的衍生物或药物前体。

本发明的化合物的药学可接受的药物前体包括但不限于本发明的化合物的下列衍生物：酯、氨基酸酯、氨基酸酰胺、磷酸酯、金属盐、磺酸酯、氨基甲酸酯和酰胺。

本发明的化合物的药学可接受的盐包括衍生自药学可接受的无机和有机酸和碱的盐。合适的酸盐的实例包括醋酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天门冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐(glucoheptanoate)、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双(羟萘酸)盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其它本身并非药学可接受的酸如草酸可用于制备作为中间产物的盐，其用于获得本发明的化合物及其药学可接受的酸加成盐。

衍生自合适的碱的盐包括碱金属(如钠和钾)盐、碱土金属(如镁)盐、铵盐和N⁺(C_1-4烷基)₄盐。本发明还预视了本发明化合物的任何碱性含氮基团的季铵化作用。可通过该季铵化作用获得水溶性或油溶性或可分散的产品。

可与载体材料混合以制造单剂量形式(single dosage form)的蛋白激酶抑制剂的量随不同的患者和具体的给药模式而不同。优选地，组合物应该配制成能够向接受这些组合物的患者施予0.01～100mg/kg体重/天的抑制剂的剂量。

应当理解，任何具体的患者的特定剂量和治疗方案将会取决于各种不同的因素，包括所用的特定化合物的活性、年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄率、药物组合和医生的诊断以及待治疗的具体疾病的严重程度。抑制剂的量亦取决于组合物中的具有化合物。

根据待治疗或预防的具体蛋白激酶介导的病症、一般用于治疗或预防该病症所施用的附加治疗剂可以与本发明的抑制剂一起施用。例如，在癌症治疗中，其它蛋白激酶抑制剂、化疗剂、抗血管新生剂、抗恶心剂、集落刺激因子，或其他抗增性剂可与本发明的化合物混合以治疗本领域已知的癌症。上述药物包括但不限于贝伐单抗(bevacizumab)、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟脲嘧啶、拓扑替康(topotencan)、紫杉烷类，干扰素和铂衍生物。

可与本发明的抑制剂混合的药物的其它实例还包括但不限于治疗糖尿病的药物，如胰岛素或胰岛素类似物、可注射的或吸入形式的药剂、格列酮类、α葡萄糖苷酶抑制剂、缩二胍、胰岛素增敏剂和磺酰脲；抗炎剂，如皮质类固醇、TNF阻滞剂、IL-1RA、咪唑硫嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺胺吡啶；免疫调节剂和免疫抑制剂，如环孢霉素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、咪唑硫嘌呤和柳氮磺胺吡啶；神经营养因子，如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥药、离子通道阻滞剂、利鲁唑和抗帕金森病药物；治疗心血管疾病的药物，如β阻滞剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻滞剂和他汀类药物；治疗肝病的药物，如皮质类固醇、消胆胺、干扰素和抗病毒药物；治疗血管疾病的药物，如皮质类固醇、抗白血药物和生长因子；治疗性抗体，如贝伐单抗；和治疗免疫缺陷疾病的药物，如γ-球蛋白。

上述附加的药物可以与包含蛋白激酶抑制剂的组合物分开给药，或作为多剂量方案的一部分。另选地，上述药物可以作为本发明的单剂量形式的一部分，与蛋白激酶抑制剂混合组成单一组合物。

本发明的化合物可以另选的互变异构体形式存在，例如如下所示的互变异构体。除非另有说明，任何互变异构体的表示形式意指包括任何其它互变异构体。

在一个实施方式中，本发明提供式I的化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体，

式I

其中：

R^x和R^y独立地选自由-T-R³和-L-Z-R³组成的组；

Q′选自由-CR⁶″＝CR⁶″-和

R¹是-T-(环D)；

环D是5～7元单环或8～10元双环，其选自由芳基、杂芳基、杂环基和碳环组成的组，所述杂芳基或杂环基具有1～4个杂原子，其选自由氮、氧和硫组成的组，其中环D中各可被取代的碳独立被羰基、-T-R⁵或-V-Z-R⁵取代，环D中各可被取代的氮独立被-R⁴取代；

T是价键或-(C(R⁶′)₂)-A-；

A是价键或C₁-C₃亚烷基链，其中所述C₁-C₃亚烷基链的亚甲基单元任选被-O-、-S-、-N(R⁴)-、-CO-、-CONH-、-NHCO-、-SO₂-、-SO₂NH-、-NHSO₂-、-CO₂-、-OC(O)-、-OC(O)NH-或-NHCO₂-代替；

Z是C_1-4亚烷基链；

R²和R²′独立地选自由-R和-T-W-R⁶组成的组，或者R²和R²′与其中的原子连接一起形成稠合的5～8元的不饱和或部分不饱和的环，其具有0～3个杂原子，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组，其中由R²和R²′形成的所述稠环上的各可被取代的碳独立被卤素、羰基、-CN、-NO₂、R⁷或-V-R⁶取代，且由R²和R²′形成的所述的环上的各可被取代的氮独立被R⁴取代；

R各自独立为氢或任选取代的基团，其选自由如下组成的组：C_1-6脂肪族基团、C_6-10芳基、具有5～10个环原子的杂芳基环，和具有5～10个环原子的杂环；

R⁴各独立地选自由如下组成的组：-R⁷、-COR⁷、-CO₂(任选取代的C_1-6脂肪族基团)、-CON(R⁷)₂和-SO₂R⁷；

R⁵各独立地选自由如下组成的组：-R、卤素、-OR、-C(＝O)R、-CO₂R、-COCOR、-NO₂、-CN、-S(O)R、-SO₂R、-SR、-N(R⁴)₂、-CON(R⁴)₂、-SO₂N(R⁴)₂、-OC(＝O)R、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)CO₂(任选取代的C_1-6脂肪族基团)、-N(R⁴)N(R⁴)₂、-C＝NN(R⁴)₂、-C＝N-OR、-N(R⁴)CON(R⁴)₂、-N(R⁴)SO₂N(R⁴)₂、-N(R⁴)SO₂R和-OC(＝O)N(R⁴)₂；

V选自由如下组成的组：-O-、-S-、-SO-、-SO₂-、-N(R⁶)SO₂-、-SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-N(R⁶)CO-、-N(R⁶)C(O)O-、-N(R⁶)CON(R⁶)-、-N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)N(R⁶)-、-C(O)N(R⁶)-、-OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂S-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-和-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-；

W选自由如下组成的组：-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂S-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-C(R⁶)OC(O)-、-C(R⁶)OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)CO-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-和-CON(R⁶)-；

R⁶各独立地选自由氢和任选取代的C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一氮原子上的两个R⁶基团与氮原子连接一起形成5～6元的杂环或杂芳基环；

R⁶′各独立地选自由氢和C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一碳原子上的两个R⁶′基团连接一起形成3～6元的碳环；

R⁶″各独立地选自由氢、C_1-4脂肪族基团、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基组成的组，或者在相邻的碳原子上的两个R⁶″基团连接一起形成5～7元的碳环或杂环，或者其中的一个R⁶″与环D上的一个取代基一起形成稠合的双环碳环或杂环；且

在一个实施方式中，本发明提供式Ia的化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体，

其中R²、R²′、R^x、R^y和R¹如式I所定义；Q^a是顺式或反式-CR⁶″CR⁶″-或它们的混合物；R⁶″各独立地选自由氢、甲基、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基。

在一些实施方式中，本发明提供式Ia的化合物，其中Q^a是反式-CR⁶″＝CR⁶″-。

在另一实施方式中，本发明提供式Ib的化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体，

其中R²、R²′、R^x、R^y和R¹如式I所定义，且Q^b是

式I、Ia、Ib、II、IIa和IIb的化合物中R^x基团优选包括氢、烷基、氨基、硝基、烷基氨基或二烷基氨基、乙酰氨基或C_1-4脂肪族基团如甲基、乙基环丙基或异丙基，且最优选氢和氨基。

式I、Ia、Ib、II、IIa和IIb的化合物中R^y基团优选包括-T-R³或-L-Z-R³，其中T是价键或烷基(长为1-6个碳原子，支链或直链)或烯基(长为1-6个碳原子，支链或直链)，L为-O-、-S-、-C(R)₂O-、-CO-、C(O)N(R⁶)-或-N(R⁴)-，且R³为-R、-N(R⁴)₂或OR。优选的R^y基团包括5～6元杂芳基或非芳香杂环，如2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、羟基哌啶基、N-4-羟基哌啶基、O-(4-哌啶基)、哌嗪基、烷基哌嗪基或4-甲基哌嗪基、N-乙酰哌嗪基、N-烷基甲酰胺基哌嗪基、N-二(甲基砜)哌嗪基、噻吩、呋喃、四氢呋喃、环[2.2.1]庚烯基；C_1-6脂肪族基团，如甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基；烷氧基烷基氨基；烷氧基烷基，如甲氧基甲基或甲氧基乙基；氨基、烷基氨基或二烷基氨基，如乙基氨基或二甲基氨基；烷基氨基烷氧基或二烷基氨基烷氧基，如二甲基氨基丙氧基；乙酰氨基；烷氧羰基；烷基氨基羰基和二烷基氨基羰基；和任选取代的苯基，如苯基或卤代苯基。对于胺氮，该N可以是自由碱形式，药学可接受的盐或季铵盐。本发明预视R³可通过杂原子或任何具有可供环连接的氢的环原子与L或T连接。

R²可与R²′一起形成稠环，由此得到含有吡唑环的双环体系。优选的稠环包括苯并环、吡啶并环、嘧啶并环、部分不饱和6元碳环，其中所述稠环为任选取代的。还预视了稠合的5元环，其包括但不限于吡咯、四氢呋喃、四氢噻吩、咪唑烷和吡唑烷。这些化合物以下列具有含吡唑的双环体系的式I化合物作为例子，但也适用于式Ia和Ib的化合物：

R²/R²′稠环上的取代基优选包括一个或多个下列基团：卤素、-N(R⁴)₂、-C_1-3烷基、-C_1-3卤代烷基、-NO₂、-O(C_1-3烷基)、-CO₂(C_1-3烷基)、-CN、-SO₂(C_1-3烷基)、-SO₂NH₂、-OC(O)NH₂、-NH₂SO₂(C_1-3烷基)、-NHC(O)(C_1-3烷基)、-C(O)NH₂和-CO(C_1-3烷基)，其中(C_1-3烷基)最优选为甲基。

当吡唑烷体系为单环，优选的R²基团包括氢、C_1-4脂肪族基团、烷氧羰基、(未)取代的苯基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基羰基、单烷基氨基羰基或二烷基氨基羰基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、苯基氨基羰基和(N-杂环基)羰基。这些优选的R²取代基的实例包括甲基、环丙基、乙基、异丙基、丙基、叔丁基、环戊基、苯基、CO₂H、CO₂CH₃、CH₂OH、CH₂OCH₃、CH₂CH₂CH₂OH、CH₂CH₂CH₂OCH₃、CH₂CH₂CH₂OCH₂Ph、CH₂CH₂CH₂NH₂、CH₂CH₂CH₂NHCOOC(CH₃)₃、CONHCH(CH₃)₂、CONHCH₂CH＝CH₂、CONHCH₂CH₂OCH₃、CONHCH₂Ph、CONH(环己基)、CON(Et)₂、CON(CH₃)CH₂Ph、CONH(n-C₃H₇)、CON(Et)CH₂CH₂CH₃、CONHCH₂CH(CH₃)₂、CON(n-C₃H₇)₂、CO(3-甲氧基甲基吡咯烷-1-基)、CONH(3-甲苯基)、CONH(4-甲苯基)、CONHCH₃、CO(吗啉-1-基)、CO(4-甲基哌嗪-1-基)、CONHCH₂CH₂OH、CONH₂和CO(哌嗪-1-基)。优选的R²′基团为氢。

当式I、Ia或Ib的环D为单环时，优选的环D基团包括苯基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基和吡嗪基，它们为任选取代的。

当式I、Ia或Ib的环D为双环时，优选的任选取代的双环环D基团包括萘基、四氢萘基、茚满基、苯并咪唑基、喹啉基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]苯硫基、吲唑基、苯并噻唑基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹噁唑啉基(quinoxazolinyl)、1，8-萘啶基和异喹啉基。

在式I、Ia或Ib的环D上，优选的T-R⁵或V-Z-R⁵取代基包括卤素、-CN、-NO₂、-N(R⁴)₂、任选取代的C_1-6脂肪族基团、-OR、-C(O)R、-CO₂R、-ONH(R⁴)、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)CO₂R、-SO₂N(R⁴)₂、-N(R⁴)SO₂R、-N(R⁶)COCH₂N(R⁴)₂、-N(R⁶)COCH₂CH₂N(R⁴)₂和-N(R⁶)COCH₂CH₂CH₂N(R⁴)₂，其中R选自氢、C_1-6脂肪族基团、苯基、5～6元杂芳基环或5～6元杂环。更优选的R⁵取代基包括-Cl、-Br、-F、-CN、-CF₃、-COOH、-CONHMe、CONHEt、-NH₂、-NHAc、-NHSO₂Me、-NHSO₂Et、-NHSO₂(n-丙基)、NHSO₂(异丙基)、-NHCOEt、-NHCOCH₂NHCH₃、-NHCOCH₂N(CO₂t-Bu)CH₃、-NHCOCH₂N(CH₃)₂、-NHCOCH₂CH₂N(CH₃)₂、-NHCOCH₂CH₂CH₂N(CH₃)₂、-NHCO(环丙基)、-NHCO(异丙基)、-NHCOCH₂(吗啉-4-基)、-HCOCH₂CH₂(吗啉_-4-基)、-HCO-CH₂CH₂CH₂(吗啉-4-基)、-HCO₂(叔丁基)、-NH(C_1-4脂肪族基团)如-NHMe、-N(C_1-4脂肪族基团)₂如-NMe₂、OH、-O(C_1-4脂肪族基团)如-OMe、C_1-4脂肪族基团如甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基和-CO₂(C_1-4脂肪族基团)。

优选的式I化合物具有1、2、3、4、5个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^x为氢、硝基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基、乙酰氨基或C_1-4脂肪族基团；

(b)R^y为-T-R³或-L-Z-R³，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-且R³为-R、-N(R⁴)₂、-OR或-CO₂R；

(c)R¹为-T-(环D)，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-；

(d)环D为任选取代的5～7元单环或8～10元双环芳基或杂芳基环；

(e)R²为-R或-T-W-R⁶且R²′为氢，或R²与R²′一起形成任选取代的苯并环；且

(f)R⁶″各独立为氢、C_1-4脂肪族基团、卤素、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

更优选的式I化合物具有1、2、3、4、5、6个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^y为-T-R³或-L-Z-R³，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-且R³为-R、-OR、-N(R⁴)₂或-CO₂R，其中R为氢、C_1-6脂肪族基团、5～6元杂环基、6-元芳基或5～6元杂芳基；

(b)R¹为-T-(环D)，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-；

(c)环D为任选取代的5～6元单环或8～10元双环芳基或杂芳基环；

(d)R²为-R且R²′为氢，其中-R独立为氢或任选取代的基团，其选自由如下组成的组：C_1-6脂肪族基团、C_6-10芳基、具有5～10个环原子的杂芳基环和具有5～10个环原子的杂环；

(e)L为-O-、-S-、-N(R⁴)-或-C(O)N(R⁶)-；

(f)Q′为反式-CR⁶″＝CR⁶″-或

且

(g)R⁶″各独立为氢、甲基、卤素、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

再更优选的式I化合物具有1、2、3、4、5个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^x为氢、甲基、乙基、丙基、环丙基、异丙基、氨基、二甲基氨基、甲基氨基、硝基或乙酰氨基；

(b)R^y选自2-吡啶基、4-吡啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、羟基哌啶基、N-4-羟基哌啶基、O-(4-哌啶基)、哌嗪基、烷基哌嗪基、4-烷基哌嗪基、甲基、乙基、环丙基、异丙基、叔丁基、烷氧基烷基氨基、烷氧基烷基、烷基氨基或二烷基氨基、烷基氨基烷氧基或二烷基氨基烷氧基、乙酰氨基、任选取代的苯基、甲氧基甲基、-CO₂R和-C(O)N(R⁶)ZR；

(c)R¹为-T-(环D)，其中T为价键且环D为5～6元芳环或杂芳基环，其中环D为任选取代的，取代基为选自如下基团中的1～2个：卤素、CF₃、-CN、-NO₂、-N(R⁴)₂、任选取代的C_1-6脂肪族基团、-OR、-CO₂R、-CONH(R⁴)、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)SO₂R、-N(R⁴)COCH₂N(R⁶)₂、-N(R⁴)COCH₂CH₂N(R⁶)₂和-N(R⁴)COCH₂CH₂CH₂N(R⁶)₂；

(d)R²为氢或取代的或未取的C_1-6脂肪族基团；

(e)Q′为顺式-CR⁶″＝CR⁶″-或

且

(f)R⁶″各独立为氢、甲基、氯或氟。

特别更优选的式I化合物具有1、2、3、4、5个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^x为氢或氨基；

(b)R^y选自2-吡啶基、4-吡啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、羟基哌啶基、N-4-羟基哌啶基、O-(4-哌啶基)、哌嗪基、烷基哌嗪基、4-烷基哌嗪基、烷氧基烷基氨基、烷氧基烷基、烷基氨基或二烷基氨基、烷基氨基烷氧基或二烷基氨基烷氧基、任选取代的苯基、-CO₂R和-C(O)NHZR；

(c)R¹为-T-(环D)，其中T为价键且环D为5～6元芳环或杂芳基环，其中环D为任选取代的，取代基为选自如下基团中的1～2个：卤素、-CN、CF₃、-NO₂、-N(R⁴)₂、任选取代的C_1-6脂肪族基团、-OR、-CO₂R、-CONH(R⁴)、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)SO₂R、-N(R⁴)COCH₂N(R⁶)₂、-N(R⁴)COCH₂CH₂N(R⁶)₂和-N(R⁴)COCH₂CH₂CH₂N(R⁶)₂；

(d)R²为氢或取代的或未取的C_1-6脂肪族基团，且L为-O-、-S-、-NH-或-C(O)NH-；

(e)Q′为反式-CR⁶″＝CR⁶″-；且

(f)R⁶″各独立为氢或氟。

优选的式Ia或Ib化合物具有1、2、3、4、5个或全部选自如下组成的组的特征：

(c)R¹为-T-(环D)，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-；

(d)环D为5～7元单环或8～10元双环芳基或杂芳基环；

更优选的式Ia或Ib化合物具有1、2、3、4、5个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^y为-T-R³或-L-Z-R³，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-且R³为-R、-OR、-N(R⁴)₂或-CO₂R，其中R为氢、C_1-6脂肪族基团、5～6元杂环基、6元芳基或5～6元杂芳基；

(b)R¹为-T-(环D)，其中T为价键或-(C(R⁶′)₂)-；

(e)L为-O-、-S-、-N(R⁴)-或-C(O)N(R⁶)-；且

(f)R⁶″各独立为氢、甲基、卤素、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。

再更优选的式Ia或Ib化合物具有1、2、3、4个或全部选自如下组成的组的特征：

(d)R²为氢或取代的或未取的C_1-6脂肪族基团；且

(e)R⁶″各独立为氢、甲基、氯或氟。

特别更优选的式Ia或Ib化合物具有1、2、3、4个或全部选自如下组成的组的特征：

(a)R^x为氢或氨基；

(d)R²为氢或取代的或未取的C_1-6脂肪族基团，且L为-O-、-S-、-NH-或-C(O)NH-；且

(e)R⁶″各独立为氢或氟。

在另一实施方式中，本发明提供式II的化合物及其药学可接受的衍生物或药物前体：

其中

R^x为氢、硝基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基、乙酰氨基或C_1-4脂肪族基团；

R^y为2-吡啶基、4-吡啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、4-烷基哌嗪基、烷氧基烷基氨基、烷氧基烷基、烷基氨基或二烷基氨基、烷基氨基烷氧基或二烷基氨基烷氧基、任选取代的苯基、-CO₂R或-C(O)NHZR，其中，R为氢、C_1-6脂肪族基团、5～6元杂环基、苯基、或5～6元杂芳基且Z为C₁-C₄亚烷基链；

Q′为-CR⁶″＝CR⁶″-或其中所述-CR⁶″＝CR⁶″-可以是顺式双键或反式双键；且R⁶″各独立为氢、甲基、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基；且

R¹是任选取代的苯基，取代基为选自如下基团中的1～2个：卤素、-CN、CF₃、-NO₂、-N(R⁴)₂、任选取代的C_1-6脂肪族基团、-OR、-CO₂R、-CONH(R⁴)、-N(R⁴)COR、-N(R⁴)SO₂R、-N(R⁴)COCH₂N(R⁶)₂、-N(R⁴)COCH₂CH₂N(R⁶)₂和-N(R⁴)COCH₂CH₂CH₂N(R⁶)₂，其中R、R⁴和R⁶如式I所定义。

在一些实施方式中，本发明提供式I或式II的化合物，其中Q′为反式-CH＝CH-。在其它实施方式中，Q′为

在式I或式II的化合物的其它实施方式中，R^x为氢。

在还有一些其它的实施方式中，R^y选自2-吡啶基、4-吡啶基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、羟基哌啶基、N-4-羟基哌啶基、O-(4-哌啶基)、哌嗪基、烷基哌嗪基、4-烷基哌嗪基、烷氧基烷基氨基、烷氧基烷基、烷基氨基或二烷基氨基、烷基氨基烷氧基或二烷基氨基烷氧基、任选取代的苯基、-CO₂R和-C(O)NHZR。

在其它实施方式中，R^y为4-烷基哌嗪基。在其它实施方式中，R^y为4-甲基哌嗪基。

在其它实施方式中，R^y为羟基哌啶基在其它实施方式中，R^y为N-4-羟基哌啶基或O-(4-哌啶基)。

在一个实施方式中，本发明提供式IIa的化合物及其药学可接受的衍生物或药物前体：

其中R^x、R^y和R¹如式II所定义；Q^a是顺式或反式-CR⁶″＝CR⁶″-或它们的混合物；R⁶″各独立地选自氢、甲基、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基。

在式IIa的化合物的一些实施方式中，Q^a是顺式-CR⁶″＝CR⁶″-。

在其它实施方式中，Q^a是反式-CR⁶″＝CR⁶″-。

在一个实施方式中，本发明提供式IIa的化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体：

其中R^x、R^y和R¹如式II所定义且Q^b为

在一些实施方式中，本发明提供式I、Ia、Ib、II、IIa或IIb化合物，其中R¹选自如下的组：

贯穿取代基一侧的线表示该取代基能够与任何环原子上的连接基团连接，该环原子具有可供取代的氢原子。

在式I、Ia、Ib、II、IIa或IIb化合物的一些实施方式中，R^x为氢。

在式I、Ia、Ib、II、IIa或IIb化合物的一些实施方式中，R^y为4-甲基哌嗪基。

在式I、Ia、Ib、II、IIa或IIb化合物的一些实施方式中，R^y为N-(4-羟基哌啶)-基或O-(4-哌啶基)。

在式I、Ia、Ib、II、IIa或IIb化合物的其它实施方式中，R¹为苯基。

在其它的实施方式中，本发明提供表1所示的化合物，或其药学可接受盐、衍生物或药物前体。

表1

在一个实施方式中，本发明提供含有式I化合物的组合物和药学可接受载体。在该些实施方式中，该组合物用于治疗或预防由蛋白激酶介导的疾病。

在另一实施方式中，本发明涉及治疗或预防由蛋白激酶介导的疾病的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

在上述方法和组合物的一些方面中，疾病是由Aurora A、Aurora B、CDK-2、ERK-2、AKT、Src、Lck、Abl、cKit、Flt3或KDR介导的。在另一方面中，疾病是由Aurora A、Src、Lck、Abl、cKit、Flt3或KDR介导的。

本发明的另一方面涉及抑制Aurora A在患者体内的活性，方法包括向患者施予式I化合物或包含该化合物的药物组合物。

本发明的另一方面涉及用GSK-3抑制剂治疗或预防由GSK-3介导的疾病，方法包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。

本发明的一个方面涉及使患者提高其糖原的合成和/或降低其血糖水平的方法，其包括向患者施予治疗有效量的式I化合物或其药物组合物。此方法对于糖尿病患者尤其有效。另一方法涉及抑制过度磷酸化的Tau蛋白的生成，其有效中断或减慢阿尔茨海默病的进程。另一方法涉及抑制β-连环蛋白的过度磷酸化，其有效治疗精神分裂症。

本发明的另一方面涉及抑制Src在患者中的活性，方法包括向患者施予式I的化合物或包括所述化合物的组合物。

另一方法涉及抑制Aurora A、GSK-3或Src活性在生物样品中的活性，方法包括使生物样品与有效量的式I的Aurora A、GSK-3或Src抑制剂，或其药物组合物接触，所述有效量有效抑制Aurora A、GSK-3或Src。

上述针对Aurora A、GSK-3或Src抑制的各种方法或减轻疾病的治疗优选用上述的优选的式I化合物进行。

本发明还涉及如下所述和实施例中的本发明化合物的制备工艺，以及该工艺中有效的合成中间产物。

方案1

在本发明的另一方面中，式1-K的优选实施方式能够如方案1所示般合成，其中可变的取代基如上述所定义的，其实例示于表1，-Ar为如上述所定义的任选取代的芳基或杂芳基，其实例示于表1。羟基嘧啶1-A溶解在约1～20体积的三氟乙酸中，并在约-20～30℃下用约1～5当量硝酸处理约30分钟～24小时。在约20～120℃下用约1～20当量任选取代的芳香族或杂芳香族醛1-C和约1～20当量有机碱(优选哌啶)处理所得的硝基嘧啶1-B约30分钟～24小时，以获得乙烯基嘧啶1-D。在约0～200℃下用约2～20当量三氯氧磷和约2～5当量三级有机碱(优选二乙基苯胺)处理乙烯基嘧啶1-D约30分钟～24小时以获得二氯嘧啶1-E。在约0～65℃下用约1～10当量三级有机碱(例如但不限于三乙胺)和约1当量氨基吡唑1-F处理在合适的溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中的二氯嘧啶1-E约30分钟～24小时以获得氨基嘧啶1-G。随后，在约0～65℃下用约1～10当量三级有机碱(例如但不限于三乙胺)和约1～5当量仲胺或伯胺1-H处理在合适的溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中的1-G约30分钟～24小时以获得二氨基嘧啶1-J。二氨基嘧啶1-J溶解在合适的溶剂(例如但不限于甲醇)中，并在约0～65℃下加入约2～10当量合适的化学还原剂(例如但不限于二氯化锡或三氯化钛)稀盐酸溶液反应约30分钟～24小时，以获得三氨基嘧啶1-K。

在本发明的另一方面中，如方案2所示制备式2-F的优选实施方式，其中可变的取代基如上述所定义的，其实例示于表1。在约0～60℃下，将合适溶剂中(例如但不限于二噁烷)中的约1～5当量氨基吡唑2-B溶液加入二氯嘧啶2-A和合适溶剂(例如但不限于二噁烷)中的约1～10当量合适的有机碱(优选2，6-二甲基吡啶)溶液中反应约15分钟～24小时以获得氯嘧啶2-C。在约20～150℃下，使氯嘧啶2-C与约1～5当量无机碱(例如但不限于碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯)、约1～5当量任选取代的顺式乙烯基硼酸或反式芳基或杂芳基乙烯基硼酸2-D和合适溶剂(例如但不限于甲苯或四氢呋喃)中的约0.01～1当量钯催化剂(例如但不限于四(三苯基膦)钯)反应约30分钟～24小时以获得乙烯基嘧啶2-E。用约2～20当量化学还原剂(例如但不限于锌粉和甲酸铵、二氯化锡或三氯化钛)处理合适溶剂(例如但不限于二甲亚砜、醋酸或乙腈)中的乙烯基嘧啶2-E溶液以获得氨基嘧啶2-F。氨基嘧啶2-F可以是顺式或反式的，其取决于反应过程中使用的芳基乙烯基硼酸或杂芳基乙烯基硼酸分别是顺式或是反式异构体。

方案2

在本发明的另一方面中，如方案2所示制备式2-H的优选实施方式，其中在约0～150℃下，用约1～100当量醇2-G和约0.1～5当量四异丙氧基钛或氰化钾处理氨基嘧啶2-F(或在合适的溶剂中的氨基嘧啶2-F)约1～48小时。

在本发明的另一方面中，如方案2所示制备式2-K的优选实施方式，其中在约0～30℃下，用合适溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中的约1～20当量胺2-J和约1～20当量三甲基铝处理氨基嘧啶2-F约1～48小时。

方案3

在本发明的另一方面中，如方案3所示制备式3-E的优选实施方式，其中可变的取代基如上述所定义的。在约0～60℃下，将合适溶剂中(例如但不限于二噁烷)中的约1～5当量氨基吡唑3-B溶液加入合适溶剂中(例如但不限于二噁烷)中的二氯嘧啶3-A和约1～10当量合适的有机碱(优选2，6-二甲基吡啶)溶液中反应15分钟～24小时以获得氯嘧啶3-C。在约20～150℃下，使氯嘧啶3-C与约1～5当量无机碱(例如但不限于碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯)、约1～5当量任选取代的顺式或反式芳基乙烯基硼酸或杂芳基乙烯基硼酸3-D和合适溶剂(例如但不限于甲苯或四氢呋喃)中的约0.01～1当量钯催化剂(例如但不限于四(三苯基膦)钯)反应30分钟～24小时以获得乙烯基嘧啶3-E。乙烯基嘧啶3-E可以是顺式或反式的，其取决于反应过程中使用的芳基乙烯基硼酸或杂芳基乙烯基硼酸分别是顺式或是反式异构体。

方案4

在本发明的另一方面中，如方案4所示制备式4-H的优选实施方式，其中可变的取代基如上述所定义的。其实例示于表1。在约0～30℃下，用约2～10当量氧化剂(例如但不限于3-氯过氧苯甲酸(mCPBA))处理合适溶剂(例如但不限于二氯甲烷)中的硫代甲基嘧啶4-A约30分钟～24小时以获得磺酰基嘧啶4-B。在约-50～30℃下，用约1～5当量任选取代的芳基乙炔基卤化镁或杂芳基乙炔基卤化镁4-C处理合适溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中的磺酰基嘧啶4-B约1～24小时以获得炔丙基嘧啶4-D。在约0～140℃下，用约1～2当量氨基吡唑4-E、约1～5当量碘化钠和约1～5当量三级有机碱(例如但不限于二异丙基乙胺)处理合适溶剂(例如但不限于二甲基乙酰胺)中的炔丙基嘧啶4-D约1～24小时以获得单氯嘧啶4-F。在约20～110℃下，用约1～5当量仲胺或伯胺4-G、约0.01～1当量4-二甲基氨基吡啶和约1～5当量三级有机碱(例如但不限于二异丙基乙胺)处理合适溶剂(例如但不限于二噁烷)中的单氯嘧啶4-F约1～24小时以获得氨基嘧啶4-H。

在本发明的另一方面中，如方案4所示制备式4-J的优选实施方式，其中在约-10～30℃下，用约0.8～1.1当量氢化铝锂处理合适溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中的氨基嘧啶4-H约1～24小时以获得反式苯乙烯基嘧啶4-J。

在本发明的另一方面中，如方案4所示制备式4-K的优选实施方式，其中用约0.1～1当量林德拉催化剂和约0.1～2当量喹啉和约1大气压的氢气处理合适溶剂(例如但不限于乙酸乙酯或甲醇)中的氨基嘧啶4-H以获得顺式苯乙烯基嘧啶4-K。

方案5

在本发明的另一方面中，如方案5所示制备式5-D和5-E的优选实施方式，其中可变的取代基如上述所定义的。其实例示于表1。在约-50～30℃下，用约1～2当量任选取代的顺式或反式2-芳基乙烯基卤化镁或2-杂芳基乙烯基卤化镁5-A处理合适溶剂(例如但不限于四氢呋喃)中的磺酰基嘧啶4-B约30分钟～24小时以获得二氯嘧啶5-B。在约20～140℃下，用约1～2当量氨基吡唑4-E、约1～5当量碘化钠和约1～5当量三级有机碱(例如但不限于二异丙基乙胺)处理合适溶剂(例如但不限于二甲基乙酰胺)中的二氯嘧啶5-B约1～24小时以获得单氯嘧啶5-C。在约20～110℃下，用约1～5当量仲胺或伯胺4-G、约0.05～1当量4-二甲基氨基吡啶和约1～5当量三级有机碱(例如但不限于二异丙基乙胺)处理合适溶剂(例如但不限于二噁烷)中的单氯嘧啶5-C约1～72小时以获得苯乙烯基嘧啶5-D或5-E，其取决于反应过程中使用的乙烯基卤化镁5-A分别是顺式或是反式异构体。

方案6

在本发明的另一方面中，如方案6所示制备式6-G的优选实施方式，其中可变的取代基如上述所定义的，且其实例示于附图中。选择的6-G的实例示于表1。

方案6中的R-X-H例如可以选自如下结构：

方案6中“Ar”表示的结构例如可以选自如下结构，其中贯穿取代基一侧的线表示该“Ar”取代基能够与任何环原子上的连接烯基团或炔基团连接，该环原子具有可供取代的氢原子：

方案6中任选取代的氨基吡唑或稠合的氨基吡唑例如可以选自如下结构：

方案6中的产物6-G能够通过选择具有如上所述的Ar取代基的腈或选自上述图中示出的实例制得。这些腈为市售的或能够通过本领域技术人员已知的反应制得，包括例如通过使用例如但不限于维蒂希反应或相关反应如Peterson烯化反应将合适的醛转换成丙烯腈而制得。一般而言，通过选择合适的如下物质可制得所需的产物：从例如基于上述说明或选自上图中示出的Pz-NH2的实例选择合适的Pz-NH2，从例如基于上述说明或选自上图中示出的R-X-H的实例选择R-X-H。可制得的产物的实例在表1示出。本发明还包括分子6-G，方案6中示出的两个偶合反应的试剂均选自Pz-NH2。

一般将腈6-A、Ar-CR⁶”＝CR⁶”-CN或Ar-CC-CN溶解在1～100体积的溶剂(例如无水甲苯和无水乙醇混合物)中。一般将溶液冷却至0℃～-70℃，并向其通入干燥的HCl气1～24小时，其后停止(closed)该反应，并在-20℃～室温的温度下搅拌1～72小时。处理反应混合物后得到能够作为HCl盐分离的O-乙基亚胺化的6-B或炔基类似物。将6-B或炔基类似物溶解在例如包括但不限于乙醇的溶剂中，并将其冷却到室温～-20℃，加入干燥的氨的醇(例如，甲醇或乙醇或它们的混合物)溶液。该干燥的氨溶液为可市售的或能够通过向适当的溶剂通入氨气而新鲜地制得。一般在0℃～50℃搅拌该混合物1～24小时。处理该混合物得到6-C或炔基类似物。

将6-C或炔基类似物溶解在1～10当量溶剂(包括但不限于甲醇)中。一般在0℃～50℃向溶液加入丙二酸酯衍生物(包括但不限于丙二酸二乙酯)(一般为0.75～5摩尔当量)。将混合物冷却到-20℃～室温，且在1～120分钟期间慢慢加入碱(例如包括但不限于NaOCH₃(一般为2～10当量)。加热所得溶液到适于该选择的溶剂的温度，加热或回流1～24小时。处理该混合物得到6-D或炔基类似物。

向过量的氯化剂(包括但不限于POCl₃)缓慢地逐渐加入6-D或炔基类似物。本领域技术人员能够任选地使用氯化剂(例如POCl₃)作为溶剂以及反应物，或能够使用氯化剂作为反应物，以及可以任选地选择溶剂(例如但不限于乙腈)。本领域技术人员能够使用碱，其包括例如但不限于Hunig’s碱(二异丙基乙胺)或其它胺碱，以提高反应的有效性。一般在75℃～130℃下搅拌该混合物1～24小时。处理该反应混合物并进行纯化得到6-E或炔基类似物。

6-E或炔基类似物随后与所需的取代基偶合。如方案所示，如果所选的取代基例如是选自附图的Pz-NH2和R-X-H，Pz-NH2能够首先进行偶合，随后经过6-F与R-X-H进行偶合，或R-X-H能够首先进行偶合，随后经过6-H与Pz-NH2进行偶合。如果需要的产物具有两个选自Pz-NH2的取代基，使用下述合适的反应条件。

为了偶合Pz-NH2，向溶剂(包括例如但不限于无水DMA，约1～100当量)中的6-E或6-H或炔基类似物加入0.5～5当量选自本发明所述的氨基吡唑，以及任选的试剂(包括例如NaI或催化剂)、和任选的碱(包括但不限于DIPEA)。在50℃～90℃的温度下搅拌该混合物2～36小时。分别对该混合物进行处理和纯化得到6-F或6-G，或炔基类似物。

为了偶合R-X-H，将6-E或6-F或炔基类似物溶解在所需的R-X-H中，并在50℃～110℃下加热0.25～12小时。任选地，溶剂可选自包括但不限于无水DMA，且任选包括但不限于DIPEA或TEA的碱，任选包括但不限于NaI或的催化剂的试剂能够促使反应的进行。分别对该混合物进行处理和纯化得到目标化合物6-H或6-G，或炔基类似物。

可以使用其它的方案6的偶合方法以提高某些RXH反应的有效性或选择性，例如，加入碱(包括但不限于TEA或DIPEA)，以及例如用碘或溴代替一个或两个氯原子，又例如使用催化剂(包括但不限于重金属催化剂，如钯络化物或Cu(I))。这些方法对本领域技术人员来说是已知的，且例如在诸如Gomtsyan等人(J.Med.Chem.2002 45，3639)和US 5,453,414等公开文献中有报导，通过参考的方式将上述文献的全部内容并入本文。其它的修饰可以通过本领域技术人员已知的偶合反应(包括但不限于Suzuki、Stille、Grignard和Buchwald)得到实现。任选地，可以加入和除去本领域技术人员已知的合适的保护基团以促使反应的进行。其它偶合反应的实例可查阅包括“Strategic Applications of Named Reactions inOrganic Synthesis”(L.Kurti and B.Czako，Elesier Acedemic Press，NewYork，NY，2005)等文献。保护基团的实例可查阅包括“Protective Groups inOrganic Synthesis-Third Edition”(T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience，New York，NY，1999)等文献。

通过参考以下实施例可更容易了解本发明，所述实施例仅用作例示，而本发明并不限于此。

具体实施方式

实施例

实施例中使用以下简称：

ATP：三磷酸腺苷

Brij-35：聚氧乙烯十二烷基醚

℃：摄氏度

DMEM：达尔伯克改良伊格尔培养基(Dulbecco′s Modified Eagle′sMedium)

DMSO：二甲亚砜

DTT：二硫苏糖醇

g：克

HEPES：4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸

hplc：高效液相色谱法

IC₅₀值：引起所测量的活性降低50％的抑制剂浓度

mg：毫克

mL：毫升

mmol：毫摩尔

MS：质谱

m/z：质量与电荷的比

Pz：任选改性的或取代的或稠合的吡唑环体系

Rf：比移值(组分的迁移距离与溶剂的迁移距离之比)

SRB：硫基碱性蕊香红B

TCA：三氯乙酸

THF：四氢呋喃

tlc：薄层色谱

br宽峰

s单峰

d双峰

t三重峰

q四重峰

dd双双峰

J偶合常数

实施例1

2-甲基-5-硝基嘧啶-4，6-二醇

将粉末状4，6-二羟基-2-甲基嘧啶(9g，71mmol)溶解在三氟乙酸(54mL)中。用冰水冷却反应混合物，期间于30分钟内逐滴加入硝酸(4.3mL)。在滴加期间，内部温度保持低于15℃。完成滴加后，撤去冷却，反应搅拌过夜。向反应混合物加入水(50mL)，过滤由此所得的固体，真空下将其干燥，获得2-甲基-5-硝基嘧啶-4，6-二醇(5.8g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.97(br，2H)，2.32(s，3H)。MS(m/z)172(M+1)。

实施例2

5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二醇

用哌啶(21.3mL，215.3mmol)处理2-甲基-5-硝基嘧啶-4，6-二醇(4.7g，27.5mmol)和苯甲醛(42mL，414mmol)的混合物。在90℃加热反应混合物两个小时。然后在温度升高到120℃下加热30min。反应混合物冷却至室温后，依次加入甲醇(10mL)和乙醚(200mL)。通过过滤收集所得的固体，用5％盐酸水溶液将其洗涤，得到5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二醇(4.5g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.15(d，1H，J＝16.4Hz)，7.15(m，2H)，7.54(m，3H)，6.81(d，1H，J＝16.4Hz)。MS(m/z)260(M+1)。

实施例3

4，6-二氯-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶

用三氯氧磷(10mL，106.6mmol)处理5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二醇(2.4g，9.63mmol)，随后滴加二乙基苯胺(4mL，25.1mmol；滴加期间观察到轻微的放热)。慢慢地加热该反应混合物至200℃。1.5小时后，冷却该反应，然后将其倒入碾碎的冰块中并搅拌。通过过滤收集所得的固体，干燥后得到4，6-二氯-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶(1.6g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.15(d，1H，J＝16.4Hz)，7.89(m，2H)，7.47(m，3H)，7.37(d，1H，J＝16.4Hz)。MS(m/z)296(M+1)。

实施例4

6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

向4，6-二氯-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶(200mg，0.676mmol)的THF(5mL)溶液加入三乙胺(204mg，2.03mmol)，搅拌该反应混合物15分钟。向该反应混合物滴加3-氨基-5-甲基吡唑(66mg，0.68mmol)的THF(3mL)溶液。1小时后，向该反应混合物滴加N-甲基哌嗪(74mg，0.74mmol)的THF(3mL)溶液。在室温下搅拌该反应混合物1小时，随后加入水(10mL)。搅拌15分钟后，加入乙酸乙酯(50mL)。分离有机层，将其干燥，在减压下蒸走溶剂。残余物用氯仿和己烷研磨，获得6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺(80mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.35(br，1H)，10.52(br，1H)，7.95(d，1H，J＝16Hz)，7.83(d，2H，J＝6.8Hz)，7.5(m，3H)，7.11(d，1H，J＝16Hz)，6.8(s，1H)，3.65(br，4H)，2.5(br，4H)，2.36(s，3H)，2.29(s，3H)。MS(m/z)421(M+1)。

以实施例4相同的方式制备实施例5～9，不同的是用合适的胺替代N-甲基哌嗪。

实施例5

N，N’-双(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二胺

用3-氨基-5-甲基吡唑替代N-甲基哌嗪得到N，N’-双(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二胺，产率为44％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.41(br，2H)，11.35(br，2H)，7.92(d，1H，J＝16Hz)，7.79(d，1H，J＝6.8Hz)，7.76(m，3H)，7.16(d，1H，J＝16Hz)，6.80(s，2H)，2.31(s，6H)。MS(m/z)418(M+1)。

实施例6

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吗啉-4-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

用吗啉替代N-甲基哌嗪，通过制备型高效液相色谱法得到产率为15％的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吗啉-4-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ10.56(br，1H)，7.88(d，1H，J＝16Hz)，7.65(d，2H，J＝6.8Hz)，7.40(m，3H)，7.06(d，1H，J＝16Hz)，6.38(s，1H)，3.83(m，4H)，3.69(m，4H)，2.37(s，3H)。MS(m/z)408(M+1)。

实施例7

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌嗪-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

用哌嗪替代N-甲基哌嗪，通过制备型高效液相色谱法得到产率为17％的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌嗪-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺。¹H NMR(400MHz，CDCl³)：δ10.58(br，1H)，7.87(d，1H，J＝16Hz)，7.62(m，2H)，7.38(m，3H)，6.96(d，1H，J＝16Hz)，6.37(s，1H)，3.74(m，4H)，3.58(m，4H)，2.36(s，3H)。MS(m/z)407(M+1)。

实施例8

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌啶-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

用哌啶替代N-甲基哌嗪，通过制备型高效液相色谱法得到产率为16％的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌啶-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ10.58(br，1H)，7.87(d，1H，J＝16Hz)，7.62(m，2H)，7.38(m，3H)，6.95(d，1H，J＝16Hz)，6.35(s，1H)，3.58(m，4H)，2.36(s，3H)，1.4-1.9(m，6H)。MS(m/z)406(M+1)。

实施例9

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吡咯烷-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

用吡咯烷替代N-甲基哌嗪，通过制备型色谱法得到产率为14％的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吡咯烷-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ10.5(br，1H)，7.9(d，1H，J＝16Hz)，7.65(m，2H)，7.39(m，3H)，7.13(d，1H，J＝16Hz)，6.29(s，1H)，2.5-3.5(m，4H)，2.37(s，3H)，2.02(m，4H)。MS(m/z)392(M+1)。

实施例10

6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺

将二水合二氯化锡(600mg，4.43mmol)的浓盐酸(1mL，9.04mmol)溶液冷却至低于10℃。向反应混合物滴加6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺(实施例4，400mg，0.95mmol)的甲醇(20mL)溶液。将反应冷却至室温，然后在60℃加热3小时。用TLC监测反应进程。在真空下将反应混合物的体积缩减至原来体积的1/3。用乙酸乙酯(40mL)稀释残余物，向反应混合物加入1N NaOH(20mL)。分离有机层，将其干燥，在减压下蒸走溶剂。残余物用乙酸乙酯和己烷研磨，获得6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺(200mg)，其为黄色固体。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.94(br，1H)，7.70(d，1H，J＝16Hz)，7.59(m，2H)7.38(m，2H)，7.29(m，1H)，7.05(d，1H，J＝16Hz)，6.36(br，1H)，3.44(br，2H)，3.3(br，4H)，2.59(br，4H)，2.36(s，3H)，2.33(s，3H)。MS(m/z)391(M+1)。

以实施例10相同的方式用合适的原料制备实施例11～15。

实施例11

N，N’-双(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5，6-三胺

从实施例5的N，N’-双(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，6-二胺制得N，N’-双(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5，6-三胺，产率为43％。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.86(br，2H)，8.41(br，2H)，7.2-7.8(m，6H)，7.0-7.1(br，1H)，6.5(br，1H)，2.11(s，6H)。MS(m/z)388(M+1)。

实施例12

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(吗啉-4-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺

从实施例6的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吗啉-4-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺制得N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(吗啉-4-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺，通过制备型高效液相色谱法得到的产率为21％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ11.35(br，1H)，7.58(m，2H)，7.42(m，4H)，6.74(d，1H，J＝16Hz)，5.82(s，1H)，3.67(m，4H)，3.27(m，4H)，2.17(s，3H)。MS(m/z)378(M+1)。

实施例13

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(哌嗪-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺

从实施例7的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌嗪-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺制得N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(哌嗪-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺，通过制备型高效液相色谱法得到的产率为17％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ11.3(br，1H)，7.31-7.63(m，6H)，6.82(d，1H，J＝16Hz)，5.85(s，1H)，3.28(m，4H)，2.22(s，3H)，1.65(m，4H)。MS(m/z)377(M+1)。

实施例14

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(哌啶-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺

从实施例8的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(哌啶-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺制得N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(哌啶-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺，其产率为18％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.73(d，1H，J＝16Hz)，7.62(d，2H，J＝7.2Hz)，7.39(t，2H，J＝7.2Hz)，7.32(m，1H)，7.09(d，1H，J＝16Hz)，6.3(s，1H)，3.29(br，2H)，3.22(br，4H)，2.36(s，3H)，1.4-1.9(m，6H)。MS(m/z)376(M+1)。

实施例15

N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(吡咯烷-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺

从实施例9的N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-5-硝基-6-(吡咯烷-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺制得N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-6-(吡咯烷-1-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4，5-二胺，产率为20％。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.88(br，1H)，7.71(d，1H，J＝16Hz)，7.59(d，2H，J＝7.2Hz)，7.39(t，2H，J＝7.2Hz)，7.29(m，1H)，7.00(d，1H，J＝16Hz)，5.95(s，1H)，3.73(m，4H)，2.67(br，2H)，2.30(s，3H)，1.97(m，4H)。MS(m/z)362(M+1)。

实施例16

2-氯-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-5-硝基嘧啶-4-羧酸乙酯

在室温下，向市售的2，6-二氯-5-硝基嘧啶-4-羧酸乙酯(MatrixScientific，1.00g，3.76mmol，1.0当量)和2，6-二甲基吡啶(0.65mL，5.60mmol，1.5当量)的无水1，4-二噁烷(5mL)溶液滴加5-甲基-3-氨基吡唑(0.38g，3.95mmol，1.05当量)的无水1，4-二噁烷(5mL)溶液。在室温下搅拌该溶液30min，用乙烯乙酯(100mL)稀释，用1N盐酸(50mL×3)和盐水(50mL×1)洗涤，用Na₂SO₄干燥，将其浓缩至干燥，得到实施例16的浅棕色固体(1.16g，95％)：R_f 0.55(60％乙酸乙酯/己烷)；MS m/z 327，calcd 327(C₁₁H₁₁ClN₆O₄+H)。

实施例17

6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-5-硝基-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-羧酸乙酯

在氮气气氛下，向含有实施例16的产物(100mg，0.31mmol，1.0当量)、反式-2-苯基乙烯基硼酸(69mg，0.46mmol，1.5当量)和四(三苯基膦)钯(0)(18mg，0.015mmol，0.05当量)的玻璃容器加入无水甲苯(3mL)。向该悬浮液通入氮气2～3分钟以脱气。在快速搅拌下于70℃加热该悬浮液8小时，冷却至室温，用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(50mL ×3)萃取。合并该提取液，在减压下将其浓缩。用硅胶快速柱色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，获得实施例17的化合物(62mg，51％)，其为橙色固体：R_f 0.40(60％乙酸乙酯/己烷)；MS m/z 395，calcd 395(C₁₉H₁₈N₆O₄+H)。

实施例18

5-氨基-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-羧酸乙酯

向实施例16的化合物(0.40g，1.02mmol，1当量)的二甲亚砜(5mL)和乙腈(20mL)溶液加入锌粉(0.66g，10.09mmol，10当量)，随后加入甲酸铵(0.63g，10.00mmol，10当量)。在室温下搅拌该溶液30分钟。用硅藻土过滤该固体，在减压下浓缩滤液获得粗产物，用柱色谱法(5％甲醇/氯仿)纯化该粗产物，获得实施例18的化合物(70mg，19％)，其为黄色固体：R_f0.55(10％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.19(br s，1H)，9.60(br s，1H)，7.63(d，J＝7.5Hz，12H)，7.53(d，J＝15.9Hz，1H)，7.35-7.45(m，2H)，7.26-7.34(m，1H)，7.07(d，J＝16.0Hz，1H)，7.04(br s，2H)，6.75(s，1H)，4.38(q，J＝7.8Hz，2H)，2.32(s，3H)，1.34(t，J＝7.8Hz，3H)；MS m/z365，calcd 365(C₁₉H₂₀N₆O₂+H)。

以实施例17相同的方式用合适的乙烯基硼酸代替合成工序中的反式-2-苯基乙烯基硼酸制备实施例19～23。

实施例19

5-氨基-2-[(E)-2-(4-氯苯基)乙烯基]-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]嘧啶-4-羧酸乙酯

用反式-2-(4-氯苯基)乙烯基硼酸代替反式-2-苯基乙烯基硼酸，得到浅黄色固体(14mg)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.12(br s，1H)，9.52(s，1H)，7.69(d，J＝8.3Hz，1H)，7.49(d，J＝16.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.3Hz，2H)，7.09(d，J＝16.0Hz，1H)，7.04(s，2H)，6.75(s，1H)，4.34(q，J＝7.0Hz，2H)，2.32(s，3H)，1.34(t，J＝7.0Hz，3H)；MS m/z 399，calcd 399(C₁₉H₁₉ClN₆O₂+H)。

实施例20

5-氨基-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-2-{(E)-2-[4-(三氟甲基)苯基]乙烯基}嘧啶-4-羧酸乙酯

用反式-2-(4-(三氟甲基)苯基)乙烯基硼酸代替反式-2-苯基乙烯基硼酸，得到浅黄色固体(60mg)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ10.20(br s，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，2H)，7.77(d，J＝8.0Hz，2H)，7.66(d，J＝16.0Hz，1H)，7.41-7.37(m，3H)，6.76(s，1H)，4.40(q，J＝6.9Hz，2H)，2.34(s，3H)，1.37(t，J＝6.9Hz，3H)；MS m/z433，calcd 433(C₂₀H₁₉F₃N₆O₂+H)。

实施例21

5-氨基-2-[(E)-2-(4-(甲基苯基)乙烯基)-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]嘧啶-4-羧酸乙酯

用反式-2-(4-甲基苯基)乙烯基硼酸代替反式-2-苯基乙烯基硼酸，得到浅黄色固体(22mg)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.13(br s，1H)，9.49(s，1H)，7.55-7.48(m，3H)，7.21(d，J＝7.9Hz，2H)，7.02-7.00(m.3H)，6.78(s，1H)，4.34(q，J＝7.1Hz，2H)，2.33(s，6H)，1.34(t，J＝7.1Hz，3H)；MSm/z379，calcd 379(C₂₀H₂₂N₆O₂+H)。

实施例22

5-氨基-2-[(E)-2-(3-(氟苯基)乙烯基)-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]嘧啶-4-羧酸乙酯

用反式-2-(3-氟苯基)乙烯基硼酸代替反式-2-苯基乙烯基硼酸，得到浅黄色固体(13mg)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.11(br s，1H)，9.51(s，1H)，7.56-7.38(m，4H)，7.14-7.04(m，4H)，6.76(s，1H)，4.33(q，J＝7.1Hz，2H)，2.31(s，3H)，1.32(t，J＝7.1Hz，3H)；MSm/z383，calcd383(C₁₉H₁₉FN₆O₂+H)。

实施例23

5-氨基-2-[(E)-2-(4-(甲氧苯基)乙烯基)-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]嘧啶-4-羧酸乙酯

用反式-2-(4-甲氧苯基)乙烯基硼酸代替反式-2-苯基乙烯基硼酸，得到浅黄色固体(76mg)：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ7.70(d，J＝15.7Hz，1H)，7.59(d，J＝8.7Hz，2H)，7.22(d，J＝15.7Hz，1H)，7.02(d，J＝8.7Hz，2H)，6.48(br s，4H)，4.42(q，J＝7.1Hz，2H)，3.79(s，3H)，2.32(s，3H)，1.35(t，J＝7.1Hz，3H)；MSm/z395，calcd 395(C₂₀H₂₂N₆O₃+H)。

实施例24

1-甲基哌啶-4-基5-氨基-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-羧酸酯

向实施例18的化合物(4.5g，12.3mmol，1当量)与4-羟基-N-甲基哌啶(40mL)的混合物慢慢加入异丙氧基钛(1mL)。将反应加热回流过夜。蒸走过量的醇，用柱色谱法(3％甲醇/二氯甲烷)将其纯化，获得实施例24的化合物(1.55g，29％)，其为黄色固体：¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.11(s，1H)，9.49(s，1H)，7.64-7.62(m，2H)，7.53(d，J＝16.0Hz，1H)，7.40-7.27(m，3H)，7.05-6.98(m，3H)，6.76(s，1H)，4.88(m，1H)，2.73-2.49(m，2H)，2.30(s，3H)，2.15(m，5H)，1.97-1.93(m，2H)，1.77-1.69(m，2H)；MS m/z 434，calcd 434(C₂₃H₂₇N₇O₂+H)。

实施例25

N-(2-吗啉-4-基乙基)-5-氨基-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-羧酰胺

在0℃下，在约一个小时内向干燥的二氯甲烷中的实施例18(2.5g，6.9mmol，1当量)和2-吗啉-4-基乙胺(1.8g，13.7mmol，2当量)的混合物滴加三甲基铝(28mL，54.8mmol，8当量)。反应回升至室温并搅拌4小时。小心地用1.5N盐酸(20mL)淬灭反应。收集所得固体，用柱色谱法(4％甲醇/二氯甲烷)将其纯化，获得实施例25的化合物(1.1g，36％)，其为黄色固体：¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ12.08(s，1H)，9.34(s，1H)，8.75(s，1H)，7.64-7.60(m，3H)，7.42-7.39(m，2H)，7.30(m，1H)，7.14(s，2H)，7.02(d，J＝16.0Hz，1H)，6.77(s，1H)，3.61-3.59(m，4H)，3.41-3.38(m，2H)，2.53-2.49(m，6H)，2.29(s，3H)；MS m/z 449，clcad 449(C₂₃H₂₈N₈O₂+H)。

实施例26

6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-羧酸甲酯

用市售的2，4-二氯嘧啶-6-羧酸甲酯替代用于制备实施例17的反应工序中使用的2，6-二氯-5-硝基嘧啶-4-羧酸乙酯，获得实施例26的浅黄色固体(30mg)：¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.30(br s，1H)，7.85(d，J＝16.0Hz，1H)，7.65-7.75(m，2H)，7.33-7.48(m，4H)，7.19(d，J＝16.0Hz，1H)，6.40(br s，1H)，3.89(s，3H)，2.27(s，3H)；MS m/z 336，calcd 336(C₁₈H₁₇N₅O₂+H)。

实施例27

4，6-二氯-2-(甲基磺酰基)嘧啶

将市售的4，6-二氯-2-甲基硫代嘧啶(Aldrich，21.0g，107.0mmol，1当量)溶解在二氯甲烷中，用冰浴将其冷却。向其逐渐加入过氧化3-氯苯甲酰(60.0g，77％wt，268.0mmol，2.5当量)。在室温下搅拌所得的白色悬浮液4小时，用1M硫代硫酸钠/饱和的碳酸氢钠(1∶1，v/v，200mL×3)和饱和的碳酸氢钠(100mL×3)和盐水(100mL×1)洗涤。干燥有机溶液，减压下将其浓缩。高真空下干燥过夜后，得到白色固体的实施例27的化合物：(22.0g，91％)：R_f 0.20(20％乙酸乙酯/己烷)；MS m/z 227，calcd 227(C₅H₄Cl₂N₂O₂S+H)。

实施例28

4，6-二氯-2-(苯基乙炔基)嘧啶

将实施例27(4.54g，20.00mmol，1当量)溶解在无水四氢呋喃(50mL)中，将其冷却至-20℃。剧烈搅拌下，滴加苯乙炔基溴化镁(22.00mL，浓度为1.0M的四氢呋喃溶液，22.00mmol，1.1当量)。该溶液在-20℃～室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯(300mL)稀释，将其添加到1N盐酸(200mL)中。剧烈地搅拌该混合物5分钟。收集有机层，再用乙酸乙酯(100mL ×2)萃取水相。用Na₂SO₄干燥合并的有机溶液，减压下将其浓缩，高真空下干燥过夜，获得白色固体的实施例28的化合物(5.00g，定量)：R_f 0.75(20％乙酸乙酯/己烷)；MS m/z 249，calcd 249(C₁₂H₆N₂Cl₂+H)。

实施例29

6-氯-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-(2-苯乙炔基]嘧啶-4-胺将实施例28(5.00g，20.00mmol，1当量)溶解在无水二甲基乙酰胺(20mL)中。向其加入5-甲基-2-氨基吡唑(2.14g，22.00mmol，1.1当量)、碘化钠(3.60g，24.00mmol，1.2当量)和二-异丙基乙胺(4.18mL，24.00mmol，1.2当量)。在90℃加热该溶液过夜，冷却至室温，用乙酸乙酯(200mL)稀释，用饱和的碳酸氢钠(200mL×3)洗涤，减压下将其干燥并浓缩。用硅胶柱色谱法(0～4％甲醇/二氯甲烷)纯化所得的粗产物，获得实施例29(5.51g，89％)，其为黄色固体：R_f 0.40(5％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.13(br s，1H)，10.39(s，1H)，7.63(d，J＝7.5Hz，2H)，7.7.40-7.60(m，4H)，5.95(br s，1H)，2.22(s，3H)；MS m/z 310，calcd 310(C₁₆H₁₂ClN₅+H)。

实施例30

6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-(苯乙炔基)嘧啶-4-胺

将实施例29的化合物(2.80g，9.04mmol，1当量)溶解在无水1，4-二噁烷(10mL)中。向其加入N-甲基哌嗪(1.10mL，9.92mmol，1.1当量)、4-二甲基氨基吡啶(0.055g，0.45mmol，0.05当量)和二-异丙基乙胺(1.89mL，10.85mmol，1.2当量)。在100℃搅拌该溶液2小时，冷却至室温，减压下将其浓缩。用硅胶柱色谱法(0～10％甲醇/二氯甲烷)纯化所得的残余物，获得实施例30的化合物(3.00g，89％)，其为浅黄色固体：R_f 0.10(5％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.90(br s，1H)，9.43(s，1H)，7.57(d，J＝7.5Hz，2H)，7.40-7.50(m，3H)，6.80(br s，1H)，5.82(s，1H)，3.51(br s，4H)，2.43(br s，4H)，2.27(s，3H)，2.18(s，3H)；MS m/z 374，calcd 374(C₂₁H₂₃N₇+H)。

实施例31

6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯乙烯基]嘧啶-4-胺

将实施例30的化合物(2.54g，6.80mmol，1当量)溶解在无水四氢呋喃(50mL)中，用冰浴将其冷却。快速搅拌下，滴加氢化铝锂(5.61mL，浓度为1.0M的四氢呋喃溶液，5.61mmol，0.83当量)。该溶液在0℃～室温下搅拌12小时。将反应冷却至0℃，用甲醇(5mL)慢慢将其淬灭。向反应混合物加入饱和的酒石酸钾钠(500mL)。在室温下快速地搅拌所得的悬浮液，直至获得澄清的溶液。然后用乙酸乙酯(100mL×5)萃取该溶液。将合并的萃取物干燥，在减压下将其浓缩。用硅胶快速柱色谱法(0～8％甲醇/二氯甲烷)将其纯化，获得实施例31的化合物(1.55g，61％)，其为白色固体：R_f 0.30(10％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.80(br s，1H)，9.08(s，1H)，7.72(d，J＝15.9Hz，1H)，7.63(d，J＝7.2Hz，2H)，7.28-7.45(m，3H)，6.92(d，J＝15.9Hz，1H)，6.62(br s，1H)，5.95(s，1H)，3.56(br s，4H)，2.45(br s，4H)，2.26(s，3H)，2.20(s，3H)；MS m/z 376，calcd 376(C₂₁H₂₅N₇+H)。

实施例31也如下所述通过方案6制得。

实施例32

6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(Z)-2-苯乙烯基]嘧啶-4-胺

将实施例30的化合物(38mg，0.10mmol)溶解在乙酸乙酯/甲醇(2∶1，v/v，1.5mL)中。向其加入喹啉(0.04mL)和林德拉催化剂(20mg)。用氢气将该悬浮液脱气，在氢气气氛(1atm)下快速地搅拌过夜。用小型的硅藻土滤走催化剂。浓缩滤液，用制备型硅胶薄层色谱纯化残余物(10％甲醇/二氯甲烷)，获得实施例32，其为白色固体(32mg，85％)：R_f 0.45(10％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ11.78(br s，1H)，9.19(s，1H)，7.38(d，J＝7.2Hz，2H)，7.15-7.30(m，3H)，6.77(d，J＝12.5Hz，1H)，6.50(br s，1H)，6.36(d，J＝12.5Hz，1H)，5.74(s，1H)，3.35-3.50(m，4H)，2.65-2.80(m，4H)，2.56(s，3H)，2.13(s，3H)；LRMS m/z 376，calcd 376(C₂₁H₂₅N₇+H)。

实施例33

4，6-二氯-2-[(E)-2-苯乙烯基]嘧啶

在氮气气氛下，向快速搅拌下的Rieke Mg(4.81g，200mmol，1.5当量)的四氢呋喃悬浮液滴加β-溴苯乙烯(顺式和反式的混合物，29.00g，160mmol，1.2当量)的四氢呋喃溶液，其中滴加速度为使反应温度在整个滴加过程中维持在40-60℃的速度。完成滴加后，在室温下搅拌所得的深红色溶液30分钟，在45分钟内通过双头针(double-ended needle)将其慢慢地加入冷却(-20℃)下的实施例27(30.00g，132mmol，1当量)的四氢呋喃溶液中。该反应在-20℃～室温下搅拌4小时，冷却至-20℃，滴加1N盐酸(200mL)将其淬灭。于室温下减压浓缩该混合物，用乙酸乙酯萃取(500mL)。分离乙酸乙酯层，用1N盐酸(200mL×3)洗涤，将其干燥，在减压下将其浓缩。用硅胶快速柱色谱法纯化该粗产物(0～2％乙酸乙酯/己烷)，获得实施例33的化合物(14.20g，～9∶1反式/顺式，43％)，其为浅黄色固体(32mg，85％)：R_f 0.60(5％乙酸乙酯/己烷)；MS m/z 251，calcd 251(C₁₂H₈-Cl₂N₂+H)。

实施例33也如下所述通过方案6制得。

实施例34

6-氯-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯乙烯基]嘧啶-4-胺

将实施例33(14.20g，56.55mmol，1当量)溶解在无水二甲基乙酰胺(100mL)中。向其加入5-甲基-3-氨基吡唑(6.60g，68.00mmol，1.2当量)、碘化钠(12.70g，84.73mmol，1.5当量)和二异丙基乙胺(14.76mL，84.73mmol，1.5当量)。在90℃下搅拌该溶液12小时，冷却至室温，用乙酸乙酯(500mL)稀释，用水(500mL×1)、饱和的碳酸氢钠(200mL×3)和盐水(100mL×1)洗涤，将其干燥，减压下将其浓缩。快速旋转下将所得半固体悬浮在小量的二氯甲烷(15mL)中，通过过滤收集微细的沉淀物，用二氯甲烷/己烷(1∶1，v/v，10mL×4)洗涤，高真空下将其干燥过夜，获得实施例3的化合物4(8.75g，50％，仅得到反式产物)，其为白色固体：R_f 0.75(10％甲醇/二氯甲烷)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.20(s，1H)，10.16(s，1H)，7.83(d，J＝12.0Hz，1H)，7.73(d，J＝5.1Hz，2H)，7.36-7.48(m，4H)，7.07(d，J＝12.0Hz，1H)，5.78(s，1H)，2.24(s，3H)；MS m/z 312，calcd 312(C₁₆H₁₄ClN₅+H)。

实施例34也如下所述通过方案6制得。

实施例35

将实施例34的化合物(7.79g，25.00mmol，1当量)溶解在1，4-二噁烷(15mL)中。向其加入N-甲基哌嗪(4.16mL，37.50mmol，1.5当量)、4-二甲氨基吡啶(0.15g，1.25mmol，0.05当量)和二异丙基乙胺(6.97mL，40.00mmol，1.6当量)。在100℃下搅拌该溶液48小时，冷却至室温，减压下将其浓缩。用硅胶快速柱色谱法(0～8％甲醇/二氯甲烷)纯化该残余物，获得实施例31(3.56g，38％)，其为浅黄色固体。实施例35的化合物也如下所述通过方案6合成。所有的分析数据都与上述通过另一途径制得的实施例31的化合物相同。

实施例36

4-[(E)-2-(3，5-二羟基-4-硝基苯基)乙烯基]苯甲酸甲酯

向实施例1的化合物(2g，11.69mmol)加入4-甲酰基-苯甲酸甲酯(7.69g，46.76mmol)，随后加入哌啶(10mL，93.52mmol)。在90℃下加热该反应混合物4小时。然后将其冷却至室温，向其加入甲醇(10mL)，然后加入乙醚(100mL)。过滤所得固体，用5％盐酸洗涤，获得实施例36的化合物(2.0g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.3(br，1H)，8.0-8.2(m，3H)，7.4(d，2H，J＝8Hz)，6.9(d，1H，J＝16.4Hz)，3.88(s，3H)。

实施例36A

4-[(E)-2-(3，5-二氯-4-硝基苯基)乙烯基]苯甲酸甲酯用三氯氧磷(21mL，229mmol)处理实施例36的化合物(6g，19.8mmol)，随后逐滴加入二乙基苯胺(9.5mL，59.6mmol)。在80℃下加热该反应混合物过夜。然后将其倒入碾碎的冰块中，收集所得到的固体，并将其干燥。用柱色谱法(10％乙酸乙酯/己烷)纯化该化合物，获得实施例36A(1.7g)。¹H NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.0-8.2(m，3H)，7.70(m，2H)，7.47(d，2H，J＝8Hz)，7.22(d，1H，J＝16.4Hz)，3.95(s，3H)。

实施例37

4-((E)-2-{4-氯-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-5-硝基嘧啶-2-基}乙烯基)苯甲酸甲酯

在氮气气氛下，于室温(30℃)下向实施例36A的化合物(1.55g，4.39mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液加入三乙胺(1.1mL，7.9mmol)。15分钟后，向反应混合物滴加5-氨基-2-甲基-吡唑(426mg，4.39mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液。5小时后，将反应混合物蒸发至干燥。用乙酸乙酯和己烷研磨所得固体，获得实施例37(1.8g)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ12.1(br，1H)，9.75(br，1H)，8.08(m，3H)，7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，7.13(d，1H，J＝16Hz)，6.66(s，1H)，3.94(s，3H)，2.17(s，3H)。MS(m/z)415(M+1)。

实施例38

4-((E)-2-{4-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-5-硝基嘧啶-2-基}乙烯基)苯甲酸甲酯

在氮气气氛下，于室温(30℃)下向实施例37的化合物(2.0g，4.83mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液加入三乙胺(1.0mL，7.3mmol)。15分钟后，向反应混合物滴加N-甲基哌嗪(483mg，4.83mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液。30分钟后，将反应混合物蒸发至干燥。用乙酸乙酯和己烷研磨所得固体，获得实施例38(2.2g)。用制备型HPLC纯化500mg粗产物，得到纯实施例38的化合物(150mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ10.53(br，1H)，10.00(br，1H)，7.9-8.1(m，5H)，7.4(m，1H，J＝16Hz)，6.75(s，1H)，3.88(s，3H)，3.0-3.2(m，4H)，2.9(m，4H)，2.3(s，3H)，2.09(s，3H)。MS(m/z)479(M+1)。

实施例39

4-((E)-2-{5-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-6-[(3-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基]-5-硝基嘧啶-2-基}乙烯基)苯甲酸甲酯

将二水合二氯化锡(1.0g，4.4mmol)溶解在浓盐酸(1mL，9.04mmol)中。搅拌该反应混合物10分钟，然后冷却到＜10℃。向反应混合物滴加实施例38(250mg，0.52mmol)的甲醇溶液(20mL)。撤走冷却，并搅拌该反应混合物过夜。蒸发干燥该反应混合物，使其体积缩减至1/3，用乙酸乙酯(40mL)将其稀释。向反应混合物加入1N NaOH(20mL)。分离有机层，将其干燥，在减压下蒸走溶剂。用制备型HPLC纯化30mg粗固体产物，得到实施例39的化合物(30mg)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.89(br，1H)，8.93(br，1H)，7.96(d，2H，J＝8Hz)，7.77(d，2H，J＝8Hz)，7.57(d，1H，J＝16Hz)，7.24(br，1H)，7.17(d，1H，J＝16Hz)，7.11(br，1H)，6.99(br，1H)，6.58(s，1H)，3.88(s，3H)，3.1-3.8(m，8H)，2.88(s，3H)，2.31(s，3H)。MS(m/z)449(M+1)。

通过方案6制备的实施例31

通过方案6合成6-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-4-胺

根据上述对方案6的具体说明，将市售的肉桂腈(70g)溶解在干燥的甲苯(1.19L)和无水乙醇(287ml，0.91mol，9eq)中。将由此获得的清晰溶液冷却至-5℃，慢慢地通入干燥的HCl气体2小时，之后封闭反应，在0℃下搅拌15小时，处理该反应混合物，得到O-乙基亚胺化的HCl盐(100gm)；¹HNMR(200MHz，DMSO-D₆)：11.63(2H，bs)，7.98(1H，d，J＝16.2Hz)，7.73-7.32(5H，m)，7.01(1H，d，J＝16.2Hz)，4.46(2H，q)，1.41(3H，t，J＝5.2Hz)。将O-乙基亚胺化的HCl盐(100g)的乙醇(500ml)溶液冷却至0℃，加入干燥的氨甲醇溶液(204ml，7N，0.30mol)。在室温下搅拌该混合物12小时。处理该混合物，得到中间产物-1(80g，89％)；¹H-NMR(200MHz，DMSO-D₆)：9.32(2H，bs)，8.84(2H，bs)，7.97(1H，d，J＝16.2Hz)，7.62-7.44(5H，m)，6.81(1H，d，J＝16.2Hz)；M+147(100％，m/z)。

在室温下，向中间产物-1(80g)的甲醇(80ml)溶液加入丙二酸二甲酯(80ml，1.1eq)。在0℃下冷却该混合物，于10分钟内慢慢地加入NaOCH₃(44g，4.4eq)。将该浅黄白色溶液加热至90℃，并回流4小时，处理该混合物，得到中间产物-2(70g，60％)；¹H-NMR(200MHz，DMSO-D₆)：11.62(2H，bs)，7.87(1H，d，J＝16.2Hz)，7.60-7.41(5H，m)，6.85(1H，d，J＝16.2Hz)，5.22(1H，s)；M+215(100％，m/z)。

向中间产物-2(70g)缓慢地逐渐加入600mL POCl₃。在100℃下搅拌该混合物4-6小时。在60℃的温度和减压下浓缩该反应混合物至干燥。处理该混合物，得到中间产物-3(70g，85％)；¹H-NMR(200MHz，DMSO-D₆)：7.96(1H，d，J＝16.2Hz)，7.80(2H，m)，7.45-7.21(5H，m)；M+250.9，252.9(100％，m/z)。

向中间产物-3(70g，0.2278mole)的无水DMA(400ml)加入5-甲基-3-o氨基吡唑(32.50g，0.334mol)、NaI(62.33g，0.418mole)和DIPEA(54g，1.48mol)，在90℃下搅拌该混合物12小时。处理该混合物，用色谱法将其纯化得到化合物-4(50g，57％)；¹H-NMR(200MHz，DMSO-D₆)：12.12(1H，s)，10.18(1H，s)，7.83(1H，d，J＝16.2Hz)，7.71(3H，m)，7.45-7.33(3H，m)，7.12(1H，d，J＝16.2Hz)，6.22(1H，bs)，2.21(3H，s)；M+312(100％，m/z)。

将中间产物-4(50g)溶解在N-甲基哌嗪(150ml)中，在110℃下将其加热1小时。将其处理，进行结晶得到目标的实施例(25g，41.4％)；¹H-NMR(200MHz，DMSO-D₆)：11.92(1H，s)，9.18(1H，s)，7.76(1H，d，J＝16.2Hz)，7.62(2H，m)，7.41-7.35(3H，m)，6.91(1H，d，J＝16.2Hz)，6.61(1H，bs)，6.01(1H，bs)，3.57(4H，m)，2.41(4H，m)，2.22(3H，s)，2.20(3H，s)；HPLC(98.1％纯的，RT 24.36min，梯度，0.1％TFA/乙腈，和0.1％TFA/水，HypersilBDS C-18，4.6×150mm，5.0u)。

实施例49

2-(4-氯苯乙烯基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料3-(4-氯苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和1-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例49。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例50

2(3，5-二甲氧基苯乙烯基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料3-(3，5-二甲氧基苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和1-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例50。由1H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例60

2((E)-2-(呋喃-2-基)乙烯基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料3-(呋喃-2-基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和1-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例60。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例64

N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-吗啉-2-苯乙烯基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和吗啉，根据上述提供的通用方案合成实施例64。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例66

N⁴-(2-(二甲基氨)乙基)-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和N¹，N¹-二甲基乙烷-1，2-二胺，根据上述提供的通用方案合成实施例66。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例67

N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(哌啶-1-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和哌啶，根据上述提供的通用方案合成实施例67。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例69

6-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和(2-二甲基)氨基乙醇，根据上述提供的通用方案合成实施例69。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例71

N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基磺酰基哌嗪-1-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和4-甲基磺酰基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例71。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例76

N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(吡咯烷-1-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和吡咯烷，根据上述提供的通用方案合成实施例76。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例77

N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁶-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和2-(4’-甲基哌嗪-1’-基)-氨基乙烷，根据上述提供的通用方案合成实施例77。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例82

N⁴-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-N⁶-苯基-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和苯胺，根据上述提供的通用方案合成实施例82。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例83

N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯-6-硫代吗啉基嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和硫代吗啉，根据上述提供的通用方案合成实施例83。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例86

N⁴-(4-氟苯基)-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和4-氟苯胺，根据上述提供的通用方案合成实施例86。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例87

N⁴-(2-(二甲基氨基)-N⁴-甲基-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和N¹，N¹，N²-三甲基乙烷-1，2-二胺，根据上述提供的通用方案合成实施例87。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例99

N⁴-(四氢-2H-吡喃-4-基)-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和四氢-2H-吡喃-4-胺，根据上述提供的通用方案合成实施例99。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例101

1-(6-(5-甲基-1H-吡唑-3-基氨基)-2-苯乙烯基嘧啶-4-基)哌啶-4-醇

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和O-保护的哌啶-4-醇，根据上述提供的通用方案合成实施例101。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例103

2-(4-溴苯乙烯基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料3-(4-溴苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和4-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例103。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例160

2-(4-甲氧基苯乙烯基)-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-6-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺

通过方案6使用合适的原料3-(4-甲氧基苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和4-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例160。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例161

通过方案6使用合适的原料3-(4-甲氧基苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和4-甲基哌嗪，根据上述提供的通用方案合成实施例161。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例162

通过方案6使用合适的原料3-(4-甲氧基苯基)丙烯腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和(呋喃-2-基)甲胺，根据上述提供的通用方案合成实施例162。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例163

N⁴-(2-甲氧基乙基)-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和2-甲氧基乙胺，根据上述提供的通用方案合成实施例163。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

实施例164

N⁴-((四氢呋喃-2-基)甲基)-N⁶-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-苯乙烯基嘧啶-4，6-二胺

通过方案6使用合适的原料肉桂腈、5-甲基-1H-吡唑-3-胺和(四氢呋喃-2-基)甲胺，根据上述提供的通用方案合成实施例164。由¹H-NMR确定目标产物的结构。在此附上其¹H-NMR。

生物测试

生物测试实施例1

Aurora A(Aurora 2)的抑制检测

使用PanVera Z’-Lyte激酶检测试剂盒-Ser/Thr 1肽(Invitrogen，Carlsbad，CA)，测试化合物抗重组Aurora-A(Upstate，Lake Placid，NY)的效力。在激酶检测缓冲液(50mM HEPES，pH 7.5，10mM MgCl₂，5mMEGTA，0.05％Brij-35，2mM DTT)中进行该检测。待测化合物最初溶解于DMSO，以100X为最高测试浓度，然后连续稀释到在激酶检测缓冲液中4X的测试浓度。接着，根据制造商的说明书，加入Aurora-A(最终浓度200-500ng/mL)、Z’-Lyte Ser/Thr 1肽(最终浓度2μM)和ATP(最终浓度10μM)。以20μL的最终体积在96孔白色聚苯乙烯检测板(Corning，Corning，NY)的一半区域中进行检测。使反应在黑暗中于室温进行1小时，此时根据制造商的说明书加入显影试剂和终止试剂。在SpectraFluor Plusplate reader(Tecan，Durham，NC)上测量香豆素(Ex.400nm，Em.465nm)和荧光素(Ex.400nm，Em.565nm)的荧光值。确定发射比(香豆素/荧光素)，用于计算每孔的磷酸化百分比。含有底物但不含激酶的孔和含有磷酸肽对照的孔分别用于设定0％和100％磷酸化值。通常，在没有抑制剂的孔中，20-40％的底物被磷酸化。相对的Aurora-A活性对抑制剂浓度的剂量-反应曲线用Grafit(Erithacus Software，Horley，Surrey，UK)绘制。

表2显示通过浓度为100μM的本发明化合物抑制Aurora A的代表数据。

表2

实施例编号	100μM浓度下对Aurora A的抑制％
实施例编号	100μM浓度下对Aurora A的抑制％	4	91
10	100	4	91
10	100	11	98
12	100	11	98
12	100	13	93
14	98	13	93
14	98	15	100
17	62	15	100
17	62	18	100
19	99	18	100
19	99	20	77
21	100	20	77
21	100	22	97
23	99	22	97
23	99	24	100
25	100	24	100
25	100	26	99
30	100	26	99
30	100	31	100
32	100	31	100
32	100	34	99
37	80	34	99
37	80	38	99
39	100	38	99
39	100	49	100
50	100	49	100
50	100	60	100
64	100	60	100
64	100	66	100
67	100	66	100
67	100	69	100
71	100	69	100
71	100	77	100
82	100	77	100
82	100	83	100

86	100
86	100	99	100
100	100	99	100
100	100	103	100
160	100	103	100
160	100	161	100
162	100	161	100
162	100	163	100
164	100	163	100
164	100	169	95
170	100	169	95
170	100	171	89
172	99	171	89
172	99	173	100

生物测试实施例2

Aurora-B(Aurora 1)的抑制检测

Aurora-B激酶的抑制检测与Aurora-A激酶(见上)的抑制检测方式类似，但有以下修改。以浓度为2.5μg/mL的Aurora-B激酶(BPSBiosciences，San Diego，CA)作为酶。ATP的浓度为50μM，使激酶反应进行16小时。将原钒酸钠(20μM)加入缓冲液以抑制污染磷酸酶。

表3显示通过浓度为100μM的本发明化合物抑制Aurora B的代表数据。

表3

实施例编号	100μM浓度下对Aurora B的抑制％
实施例编号	100μM浓度下对Aurora B的抑制％	10	97
18	100	10	97
18	100	26	95
30	97	26	95
30	97	31	100
32	99	31	100
32	99	60	99
100	100	60	99
100	100	163	100
164	100	163	100

生物测试实施例3

Abl激酶的抑制检测

使用N-端His₆-标签的重组人类Abl，残基27-端(Upstate USA Inc，706Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对Abl激酶活性的抑制。通过培养上述的Abl激酶(5-10mU)、pH 7.0的8mM MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、0.2mM EDTA(乙二胺四乙酸)、50μM氨基酸序列EAIYAAPFAKKK(Upstate USA Inc.，Charlottesville，Virginia)和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL 3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在P30 filtermat(PerkinElmer，Wellesley，MA)上，干燥和闪烁计数(scintillation counting)前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对Abl活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对Abl产生约77％的抑制。

生物测试实施例4

cKit激酶的抑制检测

使用N-端GST-标签的重组人类cKit，残基544-端(Upstate USA Inc，706Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对cKit激酶活性的抑制。通过培养上述的cKit激酶(5-10mU)、pH 7.0的8mM MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、0.2mM EDTA(乙二胺四乙酸)、10mM MnCl₂、0.1mg/mL多聚谷氨酸-酪氨酸4∶1和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL 3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在Filtermat A上，干燥和闪烁计数前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对cKit活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对cKit产生约86％的抑制。

生物测试实施例5

Src激酶的抑制检测

使用N-端His-标签的重组人类Src(Upstate USA Inc，706 Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对Src激酶活性的抑制。通过培养上述的Src激酶(5-10mU)、pH 7.0的8mM MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、0.2mM EDTA(乙二胺四乙酸)、250μM氨基酸序列KVEKIGEGTYGVVYK(Upstate USA Inc，706 Forest Street，Charlottesville，Virginia)和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL 3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在P30 filtermat(PerkinElmer，Wellesley，MA)上，干燥和闪烁计数前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对Src活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对Src产生约95％的抑制。

生物测试实施例6

Flt3激酶的抑制检测

使用N-端GST-标签的重组人类Flt3，残基564-端(Upstate USA Inc，706 Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对Flt3激酶活性的抑制。通过培养上述的Flt3激酶(5-10mU)、pH 7.0的8mM MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、0.2mM EDTA(乙二胺四乙酸)、50μM氨基酸序列EAIYAAPFAKKK(Upstate USA Inc，706Forest Street，Charlottesville，Virginia)和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在P30 filtermat(PerkinElmer，Wellesley，MA)上，干燥和闪烁计数前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对Flt3活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对Flt3产生约96％的抑制。

生物测试实施例7

KDR激酶的抑制检测

使用N-端His₆-标签的重组人类KDR，残基790-端(Upstate USA Inc，706Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对KDR激酶活性的抑制。通过培养上述的KDR激酶(5-10mU)、pH 7.0的8mM MOPS(3-(N-吗啉)丙磺酸)、0.2mM EDTA(乙二胺四乙酸)、0.33mg/mL髓鞘碱性蛋白(Upstate USA Inc，706Forest Street，Charlottesville，Virginia)和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL 3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在P30filtermat(PerkinElmer，Wellesley，MA)上，干燥和闪烁计数前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对KDR活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对KDR产生约94％的抑制。

生物测试实施例8

Lck激酶的抑制检测

使用重组人类全长N-端His-标签的Lck，残基790-端(Upstate USAInc，706 Forest Street，Charlottesville，Virginia)检测化合物对Lck激酶活性的抑制。通过培养上述的Lck激酶(5-10mU)、pH 7.0的50mM Tris-、0.1mM EGTA(乙二醇双[2-氨基乙醚]四乙酸)、0.1mM Na₃VO₄、0.1％β-巯基乙醇、0.1mg/mL聚谷氨酸-酪氨酸4∶1和10mM乙酸镁和[γ-³³P-ATP](比活性约500cpm/pmol，所需浓度)的溶液对梯度稀释的化合物(最终体积为25μL)进行检测。通过加入乙酸镁和[γ-³³P-ATP]的混合物引发反应。在室温下培养40分钟后，加入5μL 3％磷酸溶液以终止该反应。将反应的10μL等分试样点在Filtermat A上，干燥和闪烁计数前使其在75mM磷酸中洗涤3次(每次5分钟)，且在甲醇中洗涤1次。通过与不含抑制剂的检测比较，确定对Lck活性的抑制。在这些条件下，浓度为1μM的实施例31的化合物对Lck产生约98％的抑制。

生物测试实施例9

激酶的选择性检测

检测化合物对一系列浓度为1μM的不同的激酶的活性的抑制。视乎情况和需要，使用N-端或C-端具有His-或GST-标签的全长的酶或催化活性片断(Invitrogen，Carlsbad，CA)。首先用100％DMSO中将待测试化合物稀释到100X测试浓度。然后用激酶检测缓冲液将此100X浓度稀释到4X实验浓度(50mM HEPES pH 7.5，0.01％Brij-35，10mM MgCl₂，1mM EGTA)，然后向低体积的NBS的384-孔板(Corning，Corning，NY)加入2.5μL上述溶液。然后，视乎情况和需要，加入5μL的2X肽/激酶混合物(Invitrogen，Carlsbad，CA)(列举在表3)，然后，通过加入2.5μL激酶缓冲液中的ATP(4X实验浓度)引发反应。在ATP浓度相当于表观K_m时测定对各激酶的抑制，或者如果没有达到表观K_m，则在ATP浓度为100μM时测定对各激酶的抑制。表4显示在此条件下实施例10和实施例31获得的抑制百分比值。

表4

	1M浓度下的抑制百分比(实施例10)	1M浓度下的抑制百分比(实施例31)	肽底物
	1M浓度下的抑制百分比(实施例10)	1M浓度下的抑制百分比(实施例31)	肽底物	ABL1	54	81	Tyr 2
ABL1E255K	53	74	Tyr 2	ABL1	54	81	Tyr 2
ABL1E255K	53	74	Tyr 2	ABL1G250E	60	85	Tyr 2
ABL1T315I	79	91	Tyr 2	ABL1G250E	60	85	Tyr 2
ABL1T315I	79	91	Tyr 2	ABL1Y253F	57	80	Tyr 2
ABL2(Arg)	32	74	Tyr 2	ABL1Y253F	57	80	Tyr 2
ABL2(Arg)	32	74	Tyr 2	AKT1(PKB alpha)	9	5	Ser/Thr 6
AURKB(Aurora B)	37	75	Ser/Thr 1	AKT1(PKB alpha)	9	5	Ser/Thr 6
AURKB(Aurora B)	37	75	Ser/Thr 1	BLK	67	90	Tyr 1
BMX	19	61	Tyr 1	BLK	67	90	Tyr 1

BTK	28	63	Tyr1
BTK	28	63	Tyr1	CDK2/cyclin A	8	8	Ser/Thr 12
CSF1R(FMS)	80	97	Tyr1	CDK2/cyclin A	8	8	Ser/Thr 12
CSF1R(FMS)	80	97	Tyr1	DAPK3(ZIPK)	93	68	Ser/Thr 13
EPHA1	52	77	Tyr 2	DAPK3(ZIPK)	93	68	Ser/Thr 13
EPHA1	52	77	Tyr 2	EPHB1	32	61	Tyr 1
FGFR1	46	77	Tyr 4	EPHB1	32	61	Tyr 1
FGFR1	46	77	Tyr 4	FGFR2	53	86	Tyr 4
FLT1(VEGFR1)	25	53	Tyr 4	FGFR2	53	86	Tyr 4
FLT1(VEGFR1)	25	53	Tyr 4	FLT3	93	98	Tyr 2
FLT3D835Y	80	98	Tyr 2	FLT3	93	98	Tyr 2
FLT3D835Y	80	98	Tyr 2	FLT4(VEGFR3)	87	97	Tyr 4
FYN	50	89	Tyr 2	FLT4(VEGFR3)	87	97	Tyr 4
FYN	50	89	Tyr 2	GSK3A(GSK3α)	38	36	Ser/Thr 9
GSK3B(GSK3β)	26	28	Ser/Thr 9	GSK3A(GSK3α)	38	36	Ser/Thr 9
GSK3B(GSK3β)	26	28	Ser/Thr 9	IRAK4	14	63	Ser/Thr 7
JAK2	61	91	Tyr 4	IRAK4	14	63	Ser/Thr 7
JAK2	61	91	Tyr 4	KDR(VEGFR2)	88	96	Tyr 1
KIT	39	75	Tyr 6	KDR(VEGFR2)	88	96	Tyr 1
KIT	39	75	Tyr 6	KIT T670I	44	79	Tyr 6
LCK	81	94	Tyr 2	KIT T670I	44	79	Tyr 6
LCK	81	94	Tyr 2	LYN A	63	84	Tyr 2
MAP2K1(MEK1)	23	3	Ser/Thr 3	LYN A	63	84	Tyr 2
MAP2K1(MEK1)	23	3	Ser/Thr 3	NTRK1(TRKA)	92	96	Tyr 1
PDGFRA(PDGFRalpha)	58	83	Tyr 4	NTRK1(TRKA)	92	96	Tyr 1
PDGFRA(PDGFRalpha)	58	83	Tyr 4	PDGFRA D842V	9	24	Tyr 4
PDGFRA T674I	65	88	Tyr 4	PDGFRA D842V	9	24	Tyr 4
PDGFRA T674I	65	88	Tyr 4	PTK2(FAK)	81	94	Tyr 1
RET	95	98	Tyr 2	PTK2(FAK)	81	94	Tyr 1
RET	95	98	Tyr 2	ROS1	54	65	Tyr1
SRC	85	96	Tyr 2	ROS1	54	65	Tyr1
SRC	85	96	Tyr 2	STK6(Aurora A)	83	96	Ser/Thr 1
SYK	88	86	Tyr 2	STK6(Aurora A)	83	96	Ser/Thr 1
SYK	88	86	Tyr 2	TBK1	73	80	Ser/Thr 5
YES1	80	88	Tyr 2	TBK1	73	80	Ser/Thr 5

生物测试实施例10

全细胞的细胞毒性

检测：磺酰罗丹明B(sulforhodamine B)

参考：发展的治疗程序NCI/NIH

http://dtp.nci.nih.gov/brancehes/btb/ivclsp.html

将得自人肿瘤的细胞系，HCT116或MCF7(ATCC)，种在96孔板中的含有10％胎牛血清和2mM L-谷酰胺的DMEM中，密度为每孔500个HCT116细胞或1,000个MCF7细胞，在加入实验化合物之前，于37℃、5％CO₂培养24小时。根据指示复制板的稀释系列加入化合物，细胞与化合物在培养基中培养96小时。在加入化合物时，将另外一个板固定于10％TCA中，得到时间零点处，即加入药物时的细胞群落数。在96小时培养后，小心地吸出培养基，然后每孔加入50μl冰冷却的10％TCA，使细胞原位固定，然后在4℃培养60分钟。用自来水冲洗培养板5次，并使其风干5分钟。每孔加入50μl 0.4％(w/v)的磺酰罗丹明B于乙酸中的1％(v/v)溶液，细胞在室温培养30分钟。染色后，用1％乙酸清洗培养板4次以除去任何未结合的染料，然后风干5分钟。用每孔100ul pH10.5的10mM Tris溶解着色物，并放置在轨道式旋转器(orbital rotator)上5分钟。在570nm处读取吸光率。使用从时间零点板(Tz)和稀释系列板(C)读取的吸光率计算生长的百分比，该稀释系列板(C)包括在没有化合物的培养基中生长的细胞柱作为对照(C)，使用下式计算：

[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100为Ti＞/＝Tz的浓度

[(Ti-Tz)/Tz]×100为Ti＜Tz的浓度。

对于每个实验试剂，计算三个剂量反应参数。从[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100＝50计算50％(GI50)的生长抑制，其是用药物培养时，导致对照细胞中净蛋白增长减少50％(通过SRB染色测量)的药物浓度。导致全生长抑制(TGI)的药物浓度从Ti＝Tz计算出。表示治疗后细胞净损失的LC50(导致与开始时相比，药物治疗终点时测量的蛋白减少50％的药物浓度)是从[(Ti-Tz)/Tz]×100＝-50计算出。如果达到活性水平，计算这三个参数中的每个；但是，如果没有达到效果或超过效果，参数值表示为大于或小于最大或最小测量浓度。

表5显示通过浓度为100μM的本发明化合物抑制HCT-116细胞生长的代表值。

表5

实施例编号	100μM浓度下对HCT-116细胞生长的抑制％
实施例编号	100μM浓度下对HCT-116细胞生长的抑制％	4	87
10	99	4	87
10	99	11	99
12	99	11	99
12	99	15	91
17	93	15	91
17	93	18	80
19	96	18	80
19	96	20	97
21	93	20	97
21	93	22	85
23	91	22	85
23	91	24	99
25	95	24	99
25	95	26	98
30	99	26	98
30	99	31	99
32	87	31	99
32	87	34	98
39	97	34	98
39	97	49	75
50	98	49	75
50	98	60	98
64	98	60	98
64	98	66	98
67	98	66	98
67	98	69	99
71	98	69	99
71	98	77	99
82	98	77	99
82	98	83	98
86	98	83	98
86	98	99	98
100	96	99	98
100	96	103	84
160	97	103	84
160	97	161	93
162	98	161	93
162	98	163	98
164	96	163	98
164	96	170	99
172	99	170	99
172	99	173	98

Claims

1.下述式I的化合物或其药学可接受的衍生物或药物前体：

式I

其中

R^x和R^y独立地选自由-T-R³和-L-Z-R³组成的组；

Q′选自由-CR⁶″＝CR⁶″-和组成的组，其中所述-CR⁶″＝CR⁶″-是顺式双键或反式双键或是它们的混合物；

R¹是-T-(环D)；

环D是5～7元单环或8～10元双环，其选自由芳基、杂芳基、杂环基和碳环组成的组，所述杂芳基或杂环基具有1～4个杂原子环原子，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组，其中环D中各可被取代的碳环原子独立地被羰基、-T-R⁵或-V-Z-R⁵取代，环D中各可被取代的氮环原子独立地被-R⁴取代；

T是价键或-(C(R⁶′)₂)-A-；

Z是C_1-4亚烷基链；

L选自如下组成的组：-O-、-S-、-SO-、-SO₂-、-N(R⁶)SO₂-、-SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)-、-CO-、-CO₂-、-N(R⁶)CO-、-N(R⁶)C(O)O-、-N(R⁶)CON(R⁶)-、-N(R⁶)SO₂N(R⁶)-、-N(R⁶)N(R⁶)-、-C(O)N(R⁶)-、-OC(O)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂O-、-C(R⁶)₂-、-C(R⁶)₂SO-、-C(R⁶)₂SO₂-、-C(R⁶)₂SO₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)C(O)O-、-C(R⁶)＝NN(R⁶)-、-C(R⁶)＝N-O-、-C(R⁶)₂N(R⁶)N(R⁶)-、-C(R⁶)₂N(R⁶)SO₂N(R⁶)-和-C(R⁶)₂N(R⁶)CON(R⁶)-；

R²和R²′独立地选自由-R和-T-W-R⁶组成的组，或者R²和R²′与它们中间插入的原子连接一起形成稠合的5～8元的不饱和或部分不饱和的环，其环原子具有0～3个杂原子，所述杂原子选自由氮、氧和硫组成的组，其中由R²和R²′形成的所述稠环的各可被取代的碳环原子独立被卤素、羰基、-CN、-NO₂、R⁷或-V-R⁶取代，且由R²和R²′形成的所述的环的各可被取代的氮环原子独立被R⁴取代；

R³选自如下组成的组：-R、卤素、-OR、-C(＝O)R、-CO₂R、-COCOR、-COCH₂COR、-NO₂、-CN、-S(O)R、-S(O)₂R、-SR、-N(R⁴)₂、-CON(R⁷)₂、-SO₂N(R⁷)₂、-OC(＝O)R、-N(R⁷)COR、-N(R⁷)CO₂(C_1-6脂肪族基团)、-N(R⁴)N(R⁴)₂、-C＝NN(R⁴)₂、-C＝N-OR、-N(R⁷)CON(R⁷)₂、-N(R⁷)SO₂N(R⁷)₂、-N(R⁴)SO₂R和-OC(＝O)N(R)₂；

R各自独立为氢或任选取代的基团，所述基团选自如下组成的组：C_1-6脂肪族基团、C_6-10芳基、具有5～10个环原子的杂芳基环和具有5～10个环原子的杂环；

R⁶各独立地选自由氢和任选取代的C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一氮原子上的两个R⁶基团与氮原子连接一起形成3～6元的杂环或杂芳基环；

R⁶′各独立地选自由氢和C_1-4脂肪族基团组成的组，或者在同一碳原子上的两个R⁶′基团连接一起形成3～8元的碳环；

R⁶″各独立地选自由氢、C_1-4脂肪族基团、卤素、任选取代的芳基和任选取代的杂芳基组成的组，或者在相邻的碳原子上的两个R⁶″基团连接一起形成5～7元的碳环；且

2.选自下式的组合物及其生物学可接受的盐：

实施例结构实施例结构

3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物包括平均粒径小于约2微米的颗粒。

4.根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物被合并到生物可降解或非生物可降解的聚合物中。

5.根据权利要求2所述的组合物，其包括选自权利要求2的化合物和添加剂。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述添加剂选自抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、液体载体、溶质、悬浮剂、增稠剂、调味剂、明胶、甘油、粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂、分散剂，生物可降解的聚合物，或它们的任意组合。

7.一种治疗或预防患者的疾病的方法，其包括向所述患者施予有效量的选自权利要求1所述的化合物组的化合物，其中所述疾病为自身免疫疾病、炎症性疾病、神经系统疾病或神经变性疾病、癌症、心血管疾病、过敏症、哮喘或与激素相关的疾病。

8.一种治疗癌症患者的方法，其包括向癌症患者施予其量有效治疗癌症的选自权利要求1所述的化合物组的化合物。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述癌症为实体瘤、血源性肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食道癌、喉癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌，精原细胞癌、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及胆通道癌、肾脏癌、骨髓病变、淋巴腺样病变、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、口腔癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌，或白血病。

10.一种治疗不良的新生血管形成相关性疾病患者的方法，其包括向所述患者施予有效量的选自权利要求1所述的化合物组的化合物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述不良的新生血管形成相关性疾病包括眼内新生血管疾病、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植后排斥、新生血管性青光眼和晶体后纤维膜增生症、流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏症、隐形眼镜超戴症、特应性角膜炎、上角膜缘角膜炎、翼状胬肉角膜炎干燥、干燥综合征、酒糟鼻、泡性角膜炎、梅毒、分枝杆菌感染、脂质变性、化学烧伤、细菌性溃疡，真菌性溃疡、单纯疱疹病毒感染、带状疱疹感染、原虫感染、卡波西氏肉瘤、蚕蚀性角膜溃疡，Terrien’s角膜边缘变性、边缘皮肤角化、外伤、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多动脉炎、Wegener’s肉芽肿、巩膜炎、Steven-Johnson疾病、类天疱疮、放射状角巩膜切开或角膜移植排斥、镰状细胞贫血症、结节病、弹力纤维性假黄瘤、帕哲病、静脉阻塞、动脉阻塞、颈动脉阻塞性疾病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、莱姆病、系统性红斑狼疮、Eales’病、白塞病、感染引起的视网膜炎或脉络膜炎、假定眼组织胞浆菌病、Best’s病、近视、视盘小凹、斯特格病变、睫状体平坦部炎、慢性视网膜脱离、超高粘度综合征、弓形体病或激光后并发症。

12.一种治疗炎症相关性炎症性疾病患者的方法，其包括向所述患者施予有效量的选自权利要求1所述的化合物组的化合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述炎症性疾病为内皮细胞的过度或异常表达、动脉粥样硬化、血管功能障碍、伤口愈合异常、炎症和免疫系统疾病、白塞病、痛风或痛风性关节炎、不正常的血管新生引起的类风湿关节炎、皮肤病、牛皮癣、糖尿病视网膜病变，早产儿视网膜病变、晶体后纤维膜增生症、黄斑变性，角膜移植排斥、新生血管性青光眼或奥斯特韦伯综合症。

14.一种治疗GSK-3诱发疾病患者的方法，其包括向所述患者施予有效量的选自权利要求1所述的化合物组的化合物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述GSK-3诱发疾病为糖尿病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏病、与艾滋病相关的痴呆症、肌萎缩性脊髓侧索硬化(AML)、多发性硬化(MS)、精神分裂症、心肌肥大症、再灌注/缺血、或秃发。

16.根据权利要求7所述的方法，其中所述化合物以以下形式施用：片剂、胶囊、糖锭、扁囊剂、溶液、悬浮液、乳液、粉剂、气雾剂、栓剂、喷剂、锭剂、软膏，乳膏、糊剂、泡沫、凝胶、棉塞、阴道药栓、颗粒、大药丸、洗口药或透皮贴剂。