CN102311731B - 增强化学发光的试剂、方法和化学发光液 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种1，2‑二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的增强试剂以及使用该增强试剂增强化学发光作用的方法，该增强试剂含有式I的多烷基类季铵盐。本发明还公开了以1，2‑二氧杂环丁烷化合物为底物的化学发光液及其试剂盒，含有1，2‑二氧杂环丁烷化合物和式I的多烷基类季铵盐。

Description

增强化学发光的试剂、方法和化学发光液

技术领域

本发明涉及化学发光免疫分析。更具体地讲，本发明涉及含有增强剂的化学发光液，制备方法及试剂盒；增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的试剂和方法，制备方法及试剂盒。

背景技术

化学发光免疫分析是世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是继酶免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术。它具有灵敏度高、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点，是目前免疫定量分析最理想的方法。

在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、1，2-二氧杂环丁烷化合物(1，2-dioxetanecompound)。其中异鲁米诺和吖啶酯作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应。鲁米诺和1，2-二氧杂环丁烷化合物依靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应。1，2-二氧杂环丁烷化合物是最新的超灵敏的碱性磷酸酶底物，在适宜的缓冲液中，随着碱性磷酸酶的催化水解作用，1，2-二氧杂环丁烷化合物分解发出强度很高的光信号，信号可持续20个小时以上，是理想的化学发光物质。国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物，1，2-二氧杂环丁烷化合物为底物的试剂盒，与之相匹配的有DPC、Beckman、BioMerieux、Olympus全自动化学发光系统。

1，2-二氧杂环丁烷化合物中的CSPD，CDP，CDP-Star，BZPD及其发光液，多数为国外公司Tropix，Lumigen等的专利产品，价格昂贵，大大限制了该项技术在国内的应用。国内能够提供的1，2-二氧杂环丁烷化合物——3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(AMPPD)，其发光信号强度大大弱于上述国外产品。

AMPPD的分子结构中存在一个-O-O-键很弱的四元杂环和一个磷酸根基团。磷酸根基团维持着整个分子结构的稳定。在通常情况下，这种化合物很稳定，5℃下保存的固体AMPPD几乎不分解。当有碱性磷酸酶催化作用时，AMPPD发生磷酸根基团水解，形成一个不稳定的中间体。这个中间体随即自行分解，-O-O-四元环释放出大量能量，激发化学发光反应，发射光子。

1989年，Schaap报道了利用十六烷基三甲基溴化铵和5-(N-十四酰)-氨基荧光素对1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学发光增强的技术(Clin.Chem.，35)。在美国专利US4959182和US5004565及中国专利CN89106249.1中，Schaap描述了在十六烷基三甲基溴化铵形成的胶束条件下，1，2-二氧杂环丁烷化合物进行化学和酶触发而导致的化学发光增强。

美国专利US5145772公开了聚乙烯苄基二甲基苄基氯化铵(BDMQ)、血清白蛋白等大分子物质对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效应。美国专利US5547836公开了聚乙烯苄基三甲基氯化铵(TMQ)及聚乙烯苄基三丁基氯化铵(TBQ)可作为1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂。

美国专利US5393469公开了聚合季膦盐对酶催化1，2-二氧杂环丁烷化合物所产生的发光增强作用。

美国专利US5650099及中国专利CN1208399A公开了依靠双阳离子表面活性剂——三辛膦甲基-4-三丁基膦甲基苯二氯化物和荧光物——荧光素、羟基芘磺酸对1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强效应。

中国专利CN1719254A公开了一种以CSPD为底物，氯化十六烷三甲基铵、肉蔻酰甘油磷酸二钠、牛血清白蛋白、十八烷氨基荧光素为增强剂的化学发光液。

上述专利中公开的1，2-二氧杂环丁烷化合物的发光增强剂所使用的聚合物和长链烷基荧光物，价格昂贵，不易购买。

因此，本领域需要开发更经济的化学发光液和增强1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的试剂和方法。

发明内容

本发明一方面提供了一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂和试剂盒，该增强试剂或试剂盒含有至少一种具有通式I结构的多烷基类季铵盐，

其中

R₁和R₂各自独立选自C_1-28的烷基；

R₃和R₄各自独立选自C_1-12的烷基、苯基C_1-6烷基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基，或

R₃和R₄各自独立选自选自的聚氧乙烯单位，其中n选自5-10的整数；

X^-为负离子。

本发明另一方面还提供了一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂的制备方法，将本发明公开的增强试剂的组分溶解在水中。

本发明还提供了一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的方法，包括在含1，2-二氧杂环丁烷化合物溶液中添加本发明公开的增强试剂或试剂盒。

本发明又一方面提供了一种化学发光液和试剂盒，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物和本发明公开的增强试剂。

本方面还一方面提供了具有通式I结构的多烷基类季铵盐在制备化学发光液中的应用。

本发明所公开的化学发光增强试剂和方法，组分简单，简便易行，对1，2-二氧杂环丁烷化合物的增强发光效果明显。本发明公开的化学发光液，发光信号大大增强，且发光信号稳定，持续时间长，具有与进口产品相似的发光效果，可应用于化学发光免疫检测和DNA探针检测，生物膜蛋白印迹的发光分析，可广泛应用于临床诊断、科学研究、环境卫生检测、法医鉴定等领域。

附图说明

图1显示的是实施例18的化学发光液的发光反应时间曲线。图中横坐标表示反应时间，纵坐标表示相对发光强度。

图2显示的是实施例19中，未添加增强剂、添加增强剂的发光液和商品发光液发光信号的比较。图中横坐标表示反应时间，纵坐标表示相对发光强度。

图3显示的是实施例20中，未添加增强剂、添加增强剂的发光液和商品发光液发光信号的比较。图中横坐标表示反应时间，纵坐标表示相对发光强度。

图4显示的是实施例21中，未添加增强剂、添加增强剂的发光液和商品发光液发光信号的比较。图中横坐标表示反应时间，纵坐标表示相对发光强度。

具体实施方式

本发明的其它方面和优点在阅读以下描述和具体实施方案后将变得显而易见。

定义

除另有说明外，本文中使用的术语具有以下含义。

本文中使用的术语“烷基”，无论是单独使用还是与其他基团结合使用，指包含1-18、优选1-12、更优选1-8、最优选1-6个碳原子的直链烷基和支链烷基。如提及单个烷基如“正丙基”，则只特指直链烷基，如提及单个支链烷基如“异丙基”，则只特指支链烷基。例如，“C_1-6烷基”包括C_1-4烷基、C_1-3烷基、甲基、乙基、正丙基、异丙基和叔丁基。类似的规则也适用于本说明书中使用的其它基团。

本文中使用的术语“芳基”是指任选取代的碳环芳香基，优选为在环部分包含6-12个碳原子的单环或双环基团，例如苯基、联苯基、萘基、取代的苯基、取代的联苯基或取代的萘基。苯基和取代的苯基是更优选的芳基。

本文中使用的术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。

本文中使用的术语“烷氧基”是指与基团-O-结合的上述定义的“烷基”，其中所述“烷基”包含1-18、优选1-12、更优选1-8、最优选1-6个碳原子，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等。

本文中使用的术语“苄基”是指-CH₂-Ph基团。当用“任选取代”修饰苄基时，指该苄基可以未取代的形式存在，或者可被合适的取代基在任何合适的位置取代。合适的取代基包括但不限于卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基等，只要最终形成的化合物具有本发明期望的性质。优选苄基由卤素、羟基、巯基、氰基、硝基或氨基任选取代。

本文中使用的术语“可溶性盐”是指在水中可溶解的盐，包括但不限于卤化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐等。

化学发光作用的增强试剂

本发明一方面提供了一种1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用增强试剂，含有至少一种具有通式I结构的多烷基类季铵盐，

其中

R₁和R₂各自独立选自C_1-28的烷基；R₃和R₄各自独立选自C_1-12的烷基、苯基C_1-6烷基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基，或R₃和R₄各自独立选自选自的聚氧乙烯单位，其中n选自5-10的整数；X^-为负离子。

化学发光是化学物质在特定化学反应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中激发单态分子形成，分子被激发后回到基态，其中部分的能量以发光形式释放出来。因此，任何一个化学发光反应包括两个过程：激发和发光过程。一些激发态分子能量也会通过系间串跃和系内串跃而消失。

1，2-二氧杂环丁烷化合物是本领域公知的一类发生化学发光反应的底物，其具有本领域公知的结构和范围。具体地说，其结构如下：

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂烷基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基。

常用的1，2-二氧杂环丁烷化合物，如3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(AMPPD)、3-(2′-(5′-氯)螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯-1，2-二氧杂环丁烷(CSPD)、3-(2′-(5′-氯)螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基-4″-氯)苯-1，2-二氧杂环丁烷(CDP-Star)等。

AMPPD能有效地被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成AMPPD的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态至基态时，产生光辐射，最大波长为477nm。碱性磷酸酶催化的AMPPD的化学发光在15min达到峰值，15～60min内光信号强度维持一致，变化很小，即使在12h后仍能测定得出正确结果。AMPPD使用浓度范围为0.0001～0.01mol/L。

本领域技术人员能够理解，因裂解基团不同，可以采用不同的酶激活1，2-二氧杂环丁烷化合物，例如半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶等。此外，还可以用化学法裂解Y，激活1，2-二氧杂环丁烷化合物，释放光。

在化学发光免疫分析中，人们希望化学键能尽可能转化为光能，产生的化学发光信号强度大而稳定。化学发光反应的效率取决于生成荧光和磷光的量子效率。提高化学发光信号强度的措施包括：提高发光底物分子的量子产率，提高酶活力，稳定激发态的发光分子等。

本发明实施方案的增强试剂至少含有一种具有通式I结构的多烷基类季铵盐，属阳离子型表面活性剂，易溶于水，稳定性好。可用于本发明的表面活性剂具有以下通式：

R₁和R₂各自独立选自C_1-28的烷基；

R₃和R₄各自独立选自C_1-12的烷基、苯基C_1-6烷基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基，或

R₃和R₄各自独立选自的聚氧乙烯单位，其中n选自5-10的整数；

X^-为负离子。

优选的，R₁和R₂为相同的烷基，或R₁，R₂，R₃为相同的烷基。

优选的，当R₃选自C_1-8烷基时，R₄选自C_1-12的烷基、苯基C_1-6烷基，优选R₄为C_1-8烷基或苄基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基。

优选的，当R₃和R₄选自的聚氧乙烯单位时，R₃和R₄中的n取值相同。

X^-优选为卤素离子，ClO₄ ^-、PF₆ ^-、CF₃SO₃ ^-、BF₄ ^-、乙酸根或对甲苯磺酸根负离子。

具体的化合物选自：

双十二烷基二甲基氯化铵

双十八烷基二甲基氯化铵

双十八烷基一甲基苄基氯化铵

甲基三辛基氯化铵

双十二烷基聚氧乙烯醚氯化铵

双十八烷基聚氧乙烯醚氯化铵

虽然不希望受理论约束，但用于本发明实施方案的这些表面活性剂在溶液中能够形成胶束，胶束内部形成非水微环境。在非水环境下，化学发光的反应效率和量子产率能够提高。同时，由于该种表面活性剂的作用，荧光分子与化学发光底物分子被拉近，化学发光启动后，随之产生光能量转移。荧光分子的量子产率是远远高于化学发光分子的，因此光信号得以增强。所述多烷基类季铵盐的用量通常为0.1g/L～10g/L，优选1g/L～10g/L。

本发明实施方案的增强试剂还可以包括荧光剂，例如荧光素钠，罗丹明B，罗丹明6G等。荧光剂接受发光物的光信号后发出另外一种荧光，由于荧光素量子产率远远高于化学发光物，间接提高了化学发光物的量子产率。以荧光素钠为例——9-(邻羧基苯基)-6-羟基-3H-呫吨-3-酮二钠盐，荧光素钠是一种水溶性的荧光剂，其激发波长和发射波长分别为494nm和518nm。荧光素钠的量子产率可以高达0.97。同样，罗丹明系列荧光剂，其荧光量子产率也很高。所述荧光剂的用量为0.1mg/L～1g/L。

本发明实施方案的增强试剂还可以包含有缓冲剂，以维持反应体系pH。缓冲剂包括碳酸盐缓冲液、二乙醇胺缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等。当化学发光物因磷酸根基团被裂解而触发发光时，优选使用2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲体系，例如使用碱性磷酸酶催化磷酸基团被裂解的反应过程中，2-氨基-2-甲基-1-丙醇可以作为磷酸转移作用中的磷酸基受体，提高酶催化效力。对于碱性磷酸酶体系而言，最适合的反应pH范围在9～10。缓冲剂的使用量通常在10-500mM。

本发明实施方案的增强试剂还可以包括镁离子，所述镁离子来自含镁离子的可溶性盐，例如硫酸镁、乙酸镁、氯化镁以及其他各种在溶液状态可以解离出镁离子的盐。当1，2-二氧杂环丁烷化合物含有磷酸根基团时，碱性磷酸酶水解磷酸基，导致化学发光的产生。此时添加镁离子，可激活碱性磷酸酶，提高碱性磷酸酶催化水解反应的效率。所述镁离子用量为0.001～0.01mol/L。

本发明实施方案的增强试剂还可以包括防腐剂，以有助于试剂的防腐和长期保存。对于防腐剂的种类没有特殊的要求，市场上常见的防腐剂如Proclin300、叠氮钠、凯松、庆大霉素。这些添加剂的浓度以不影响化学发光反应及碱性磷酸酶活性为宜。

将上述实施方案的增强试剂中的各组分，溶解于纯水中，任选调节pH值，定容，即可制备得到本发明实施方案的化学发光液。根据激活底物所需条件不同，调配化学发光液的pH值。例如用碱性磷酸酶激活化学发光液中的底物，优选将增强试剂的pH值调节到9～10。

本发明实施方案中的增强试剂可以制成试剂盒，将上述增强试剂中的各组分分别单独包装，或将其中几个组分混合后包装，成为多包装体系，也可以将各组分混合后包装成为单一包装体系。

增强化学发光作用的方法

本发明还公开了一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的方法，包括在含1，2-二氧杂环丁烷化合物的溶液中添加本发明的增强化学发光的试剂或试剂盒。

化学发光液及其制备方法和试剂盒

本发明还公开了一种化学发光液，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物和本发明公开的增强试剂。

将化学发光底物——1，2-二氧杂环丁烷化合物，溶解于本发明公开的增强试剂中，即可得到本发明公开的化学发光液。

本发明公开的化学发光液可以制成试剂盒，将化学发光液各组分分别单独包装，或将其中几个组分混合后包装，成为多包装体系，也可以将各组分混合后包装成为单一包装体系。试剂盒中，因诊断项目不同还可以包括相应的酶试剂、酶标试剂、固相抗体或指导操作者使用的说明书。

多烷基类季铵盐在制备化学发光液中的应用

本发明公开了具有通式I结构的多烷基类季铵盐在制备化学发光液中的应用。我们发现本发明所述的多烷基类季铵盐对于化学发光物1，2-二氧杂环丁烷化合物有很好的增强化学发光的效果，其配制的化学发光液与进口的产品类似。而且，这类化合物原料丰富，成本低廉，适合化学发光液的大规模生产应用。

实施例

以下将通过具体实施例对本发明作出进一步的描述。所述实施例仅对本发明作出示例性说明，并非对本发明作出任何意义上的限定。

除非特殊说明，本发明实施例所用的化学试剂，均为分析纯，购自Sigma-aldrich公司。所用的化学发光检测仪为中国北京滨松光子技术股份有限公司滨松BHP9507化学发光检测仪。

实施例1～17

用超纯水配制含有以下组分的基础发光液：

2-氨基-2-甲基-1-丙醇200mM

AMPPD0.5mM

MgCl₂5mM

Proclin3000.5g/L

用盐酸调节pH值pH为9.5

称取适量的除AMPPD之外的组分，溶解在超纯水中，调节pH值，定容，加入AMPPD溶解，得到各组分终浓度如上表的基础发光液。在基础发光液中加入各增强剂组分配制实施例1～17的化学发光液(见表1)。

以50ul1ng/mL碱性磷酸酶溶液为样品，分别加入100uL各实施例化学发光液，在化学发光检测仪上测量化学发光信号，计算各发光液信号值与基础发光液信号值的增强倍数。由表1结果可知，只使用多烷基类季铵盐能起到增强发光物的化学发光作用，但效果与单独使用荧光剂接近(实施例2-9)，而多烷基类季铵盐和荧光剂的有很好的协同作用，AMPPD的发光信号大大增强(实施例10～17)。

表1实施例1～17化学发光液组成及AMPPD化学发光作用的增强倍数

实施例18

参照实施例1的方法，以超纯水配制含有以下组分的化学发光液：

2-氨基-2-甲基-1-丙醇200mM

AMPPD0.5mM

MgCl₂5mM

甲基三辛基氯化铵5g/L

荧光素钠5mg/L

Proclin3000.5g/L

用盐酸调节pH值pH为9.5

以50ul1ng/mL碱性磷酸酶溶液为样品，加入100uL本实施例的化学发光液，在化学发光检测仪上测量化学发光信号，作出发光反应的时间曲线。结果如图1所示，本发明公开的化学发光液发光信号稳定，持续时间长。

实施例19(AMPPD+增强剂)

参照实施例1的方法，以超纯水配制含有以下组分的化学发光液：

2-氨基-2-甲基-1-丙醇200mM

AMPPD0.5mM

MgCl₂5mM

甲基三辛基氯化铵5g/L

荧光素钠5mg/L

Proclin3000.5g/L

用盐酸调节pH值pH为9.5

以20ul1ng/mL碱性磷酸酶溶液为样品，加入100uL发光液，在化学发光检测仪上测量化学发光信号，与商品发光液AccessSubstrate(Beckman)发光信号进行对比。结果如图2所示，在本发明增强剂作用下，AMPPD的发光信号大大增强，增强发光液性能接近AccessSubstrate(Beckman)。

实施例20(CSPD+增强剂)

参照实施例1的方法，以超纯水配制含有以下组分的化学发光液：

2-氨基-2甲基-1-丙醇200mM

CSPD0.25mM

MgCl₂5mM

甲基三辛基氯化铵5g/L

荧光素钠5mg/L

Proclin3000.5g/L

用盐酸调节pH值pH为9.5

以20ul1ng/mL碱性磷酸酶溶液为样品，加入100uL发光液，在化学发光检测仪上测量化学发光信号，与商品发光液CSPD&Sapphire-II(Tropix)发光信号进行对比。结果如图3所示，在本发明增强剂作用下，CSPD的发光信号大大增强，增强发光液性能接近CSPD&Sapphire-II(Tropix)。

实施例21(CDP-Star+增强剂)

参照实施例1的方法，以超纯水配制含有以下组分的化学发光液：

2-氨基-2甲基-1-丙醇200mM

CDP-Star0.25mM

MgCl₂5mM

甲基三辛基氯化铵5g/L

荧光素钠5mg/L

Proclin3000.5g/L

用盐酸调节pH值pH为9.5

以20ul1ng/mL碱性磷酸酶溶液为样品，加入100uL发光液，在化学发光检测仪上测量化学发光信号，与商品发光液CSPD&Sapphire-II(Tropix)发光信号进行对比。结果如图4所示，在本发明增强剂作用下，CDP-Star的发光信号大大增强，增强发光液性能接近CSPD&Sapphire-II(Tropix)。

从以上实施例可见，多烷基类季铵盐对1，2-二氧杂环丁烷化合物有很好的增强化学发光的效果，与荧光剂一起使用，还可以获得出人意料的协同增强效果，含有多烷基类季铵盐的化学发光液能产生很好的发光信号，提高诊断试剂盒的检测灵敏度。

本文中的所有数据、图像、仪器、试剂和步骤应理解为说明性而非限制性的。虽然已结合上述具体实施方案描述了本发明，许多修改和其它变化对于本领域技术人员是显而易见的。所有这种修改和其它变化也落入本发明的精神和范围内。

Claims (16)

1.一种2-二氧杂环丁烷化合物发光作用的增强试剂，其特征在于：所述1，2-二氧杂环丁烷化合物结构如下：

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳基、环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基；和所述增强试剂含有至少一种具有通式I结构的多烷基类季铵盐

其中

R₁和R₂各自独立选自C_8-28的烷基；

R₃和R₄各自独立选自C_1-8的烷基或苄基，或R₃和R₄各自独立选自的聚氧乙烯单位，其中n为5；

或者

R₁和R₂各自独立选自C_14-28的烷基，R₃和R₄选自C_1-8的烷基或苯基C_1-6烷基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基；

X^-为负离子；

所述增强试剂还含有荧光剂，所述荧光剂选自荧光素钠或罗丹明6G。

2.根据权利要求1所述的增强试剂，其特征在于：通式I结构中的R₁和R₂为相同的烷基，或R₁，R₂，R₃为相同的烷基。

3.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：在通式I结构中，当R₃选自C_1-8烷基时，R₄为C_1-8烷基或苄基。

4.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：通式I结构中的X^-选自卤素离子，ClO₄ ^-、PF₆ ^-、CF₃SO₃ ^-、BF₄ ^-、乙酸根或对甲苯磺酸根负离子。

5.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：所述多烷基类季铵盐选自双十二烷基二甲基氯化铵，双十八烷基二甲基氯化铵，双十八烷基一甲基苄基氯化铵，双十二烷基聚氧乙烯醚氯化铵、双十八烷基聚氧乙烯醚氯化铵及其组合。

6.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：所述多烷基类季铵盐的浓度为0.1g/L～10g/L。

7.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：所述多烷基类季铵盐的浓度为1g/L～10g/L。

8.根据权利要求1或2所述的增强试剂，其特征在于：所述增强试剂还含有2-氨基-2-甲基-1-丙醇或镁离子或两者。

9.一种1，2-二氧杂环丁烷化合物发光作用增强试剂的制备方法，其特征在于：将权利要求1-8所述任一种增强试剂的组分溶解在水中。

10.一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1-8所述任一种增强试剂，所述增强试剂组分任选单独包装或混合包装。

11.一种增强1，2-二氧杂环丁烷化合物化学发光作用的方法，其特征在于：包括在含1，2-二氧杂环丁烷化合物溶液中添加权利要求1-8所述的任一种增强试剂或权利要求10所述的试剂盒，所述1，2-二氧杂环丁烷化合物结构如下：

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳基、环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基。

12.一种化学发光液，含有1，2-二氧杂环丁烷化合物，其特征在于：所述1，2-二氧杂环丁烷化合物结构如下：

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳基、环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基；和

所述化学发光液还包括权利要求1-8所述的任一种增强试剂。

13.一种化学发光液的制备方法，其特征在于：将权利要求12的化学发光液的组分溶解在水中。

14.一种化学发光试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括权利要求12的化学发光液，所述发光液中的组分任选单独包装或混合包装。

15.具有通式I结构的多烷基类季铵盐在制备含有1，2-二氧杂环丁烷化合物的化学发光液中的应用，

其中

R₁和R₂各自独立选自C_8-28的烷基；

R₃和R₄各自独立选自C_1-8的烷基或苄基，或R₃和R₄各自独立选自的聚氧乙烯单位，其中n为5；

或者

R₁和R₂各自独立选自C_14-28的烷基，R₃和R₄选自C_1-8的烷基或苯基C_1-6烷基，其中苯基有选自以下取代基任选取代：卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、烷基、烷氧基、卤代烷基、氨基、烷基氨基、酰胺基；

X^-为负离子；

所述含有1，2-二氧杂环丁烷化合物的结构式为

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳基、环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基；

所述化学发光液还含有荧光剂，所述荧光剂选自荧光素钠或罗丹明6G。

16.甲基三辛基氯化铵在制备含有1，2-二氧杂环丁烷化合物的化学发光液中的应用，所述含有1，2-二氧杂环丁烷化合物的结构式为

式中R₁选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、杂芳基、环烷基、烷基醚烷基、烷基醚芳基、烷基醚卤代烷基、烷基链烯基、烷基链炔基、卤代烷基、烷基醇、烷基腈、烷基胺、烷基酸、卤代烷基醇、卤代烷基腈、卤代烷基胺、卤代烷基酸；X是氢或苯环上的取代基；Y是氢、烷基、乙酸基、叔丁基二甲基甲硅烷基、酶可裂解基团、抗体可裂解基团；Z是氢或金刚烷环上的取代基；

所述化学发液还含有荧光剂，所述荧光剂选自荧光素钠或罗丹明6G。