CN102293124A - 一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，菌种分离培养包括以下步骤：（1）配制加富PDA培养基；（2）白色耳片获取；（3）分离培养，所述的菌种鉴定包括拮抗鉴定和出耳鉴定两种方法。本发明能够快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定，具有简便、实用等优点。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌领域，特别是一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法。
背景技术
木耳是一种味道鲜美，营养丰富，可素可荤的食用菌，不仅能为中国菜肴大添风采，而且能养血驻颜，令人肌肤红润，容光焕发，可防治缺铁性贫血，还具有其他药用功效。毛木耳生长过程中会出现一种白色变异菌种，而现有技术不能很好地鉴定此菌种且不能使此菌种稳定遗传下去。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种简便、快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现：一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养及鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤：
（1）配制加富PDA培养基：培养基按以下组分及重量比配制：马铃薯15～25，麦麸5～7，葡萄糖1～3，琼脂1～3，水90～110；
（2）白色耳片获取：从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
（3）分离培养：将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22～28℃，菌丝体生长长度达到2～3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冷藏装置内4～6℃下保藏；
所述的菌种鉴定包括以下拮抗鉴定步骤：
拮抗鉴定：将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2～3cm，在25～28℃条件下培养8～10天，再在光照强度300～500Lx环境下培养5～7天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤：
（1）培养基配制与菌种培养：培养基按以下组分及重量比配制：棉籽壳28~35，麸皮2~5，水60~70，菌种培养方法是：将装有上述培养基的培养器经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在22～25℃下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
（2）出耳鉴定：将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20～25℃，空气相对湿度为90～95％，光照强度100～300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
所述的冷藏装置包括冰箱；所述的培养器为750mL的玻璃瓶或折径为17cm、长度为33cm的塑料袋。
本发明的有益效果是：能够快速、准确地对白色毛木耳变异菌株的菌种进行分离培养及鉴定，具有简便、实用等特点。
本发明生物材料样品保藏单位名称为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为：2011年04月08日，保藏编号为：CGMCCNo.4715，分类命名为：毛木耳 Auricularia Polytricha。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述：
实施例1：
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤：
（1）配制加富PDA培养基：培养基按以下组分及重量比配制：马铃薯15，麦麸5，葡萄糖1，琼脂1，水110；
（2）白色耳片获取：从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
（3）分离培养：将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22℃，菌丝体生长长度达到2cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内4℃下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤：
拮抗鉴定：将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2cm，在25℃条件下培养8天，再在光照强度300Lx环境下培养5天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤：
（1）培养基配制与菌种培养：培养基按以下组分及重量比配制：棉籽壳28，麸皮2，水70，菌种培养方法是：用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在22℃下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
（2）出耳鉴定：将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20℃，空气相对湿度为90％，光照强度100Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
实施例2：
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤：
（1）配制加富PDA培养基：培养基按以下组分及重量比配制：马铃薯20，麦麸6，葡萄糖2，琼脂2，水100；
（2）白色耳片获取：从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
（3）分离培养：将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为28℃，菌丝体生长长度达到3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内6℃下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤：
拮抗鉴定：将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距3cm，在28℃条件下培养10天，再在光照强度500Lx环境下培养7天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤：
（1）培养基配制与菌种培养：培养基按以下组分及重量比配制：棉籽壳35，麸皮5，水60，菌种培养方法是：用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在25℃下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
（2）出耳鉴定：将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度25℃，空气相对湿度为95％，光照强度300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
实施例3：
一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤：
（1）配制加富PDA培养基：培养基按以下组分及重量比配制：马铃薯25，麦麸7，葡萄糖3，琼脂3，水90；
（2）白色耳片获取：从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
（3）分离培养：将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为25℃，菌丝体生长长度达到2.5cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冰箱内5℃下保藏；
所述的菌种鉴定包括一个拮抗鉴定步骤：
拮抗鉴定：将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2.5cm，在27℃条件下培养9天，再在光照强度400Lx环境下培养6天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤：
（1）培养基配制与菌种培养：培养基按以下组分及重量比配制：棉籽壳31.5，麸皮3.5，水65，菌种培养方法是：用750mL玻璃瓶或者折径为17cm、长度为33cm的塑料袋作为培养器装培养基，经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在24℃下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
（2）出耳鉴定：将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度23℃，空气相对湿度为93％，光照强度200Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
Claims (5)
1.一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于：它包括菌种分离培养和菌种鉴定两个步骤，其中，所述的菌种分离培养包括以下步骤：
（1）配制加富PDA培养基：培养基按以下组分及重量比配制：马铃薯15～25，麦麸5～7，葡萄糖1～3，琼脂1～3，水90～110；
（2）白色耳片获取：从栽培的毛木耳“琥珀木耳”品种中挑选白色耳片；
（3）分离培养：将挑选出的白色耳片去除表皮，并切取耳片内部组织块放在加富PDA培养基上培养，培养温度为22～28℃，菌丝体生长长度达到2～3cm时，选择无杂菌感染的菌种进行扩大培养，取前端菌丝体进行培养，菌丝生长满培养基后即为菌种，编号为APW2010，并将其放入冷藏装置内4～6℃下保藏；
所述的菌种鉴定包括以下拮抗鉴定步骤：
拮抗鉴定：将APW2010与“琥珀木耳”菌种同时接种在PDA平板培养基上，相距2～3cm，在25～28℃条件下培养8～10天，再在光照强度300～500Lx环境下培养5～7天，与“琥珀木耳”菌种接触部位出现隆起拮抗线的菌种即可判为白色变异菌种。
2.根据权利要求1所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于：所述的菌种鉴定还包括以下出耳鉴定步骤：
（1）培养基配制与菌种培养：培养基按以下组分及重量比配制：棉籽壳28~35，麸皮2~5，水60~70，菌种培养方法是：将装有上述培养基的培养器经高压灭菌或者常压灭菌后，接种培养，在22～25℃下培养，菌丝生长满培养基后，进行出耳鉴定；
（2）出耳鉴定：将菌种瓶或者菌种袋的口上覆盖物去除，温度20～25℃，空气相对湿度为90～95％，光照强度100～300Lx，耳片仍为白色的菌种即可判为白色变异菌种。
3.根据权利要求1所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于：所述的冷藏装置包括冰箱。
4.根据权利要求2所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于：所述的培养器为750mL的玻璃瓶。
5.根据权利要求2所述的一种白色毛木耳变异菌株的菌种分离培养与鉴定方法，其特征在于：所述的培养器为折径为17cm、长度为33cm的塑料袋。
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