CN102274284A - 土肉桂叶萃取物及其制备方法和在治疗血脂异常中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了土肉桂叶萃取物及其制备方法和在治疗血脂异常中的用途。所述萃取物的制备方法包括下列步骤：将土肉桂叶粉碎后用水煎煮；将煎煮液过滤，将滤液干燥，即得。本发明还公开了一种包含前述萃取物的治疗血脂异常的医药组合物。

Description

土肉桂叶萃取物及其制备方法和在治疗血脂异常中的用途

技术领域

本发明涉及一种中药萃取物，尤其涉及土肉桂叶萃取物及其制备方法，本发明还涉及该萃取物在治疗血脂异常中的用途，属于土肉桂叶萃取物领域。

背景技术

血脂异常(dyslipidemia)是指血液中脂质含量异常的现象，常见的情况通常为高血脂症(hyperlipidemia)，是指血液中脂质含量过高的现象，而通常具有动脉粥状硬化脂蛋白表现型(atherogenic lipoprotein phenotype)和血脂三连症(lipid triad)，即，血液中低密度脂蛋白(LDL)含量提高、三酸甘油脂(TG)含量提高以及高密度脂蛋白(HDL)含量降低的征状的特征。血脂异常(尤其是高血脂症)是一种常见的文明病，同时，患有血脂异常的患者也是罹患心脏病、高血压和糖尿病等心血管疾病的高危险群。在合成药物所产生的副作用以及抗生素抗药性越来越被重视的今天，寻求以天然化合物为活性成份的替代药物成为学术研究的主轴，因此，开发效果优异且低副作用的治疗血脂异常的药物，确有其必要。

土肉桂(Cinnamomum osmophloeum Kaneh.)是一种台湾特有的阔叶植物。目前有许多研究指出土肉桂的精油(essential oil)具有抗细菌、白蚁、壁虱、霉菌和真菌的生物活性。此外，亦有研究指出，土肉桂的精油以及其所含的主要化合物-cinnamaldehyde，在小鼠的实验中展现了显著的抑制黄嘌呤氧化酶活性(xanthine oxidase inhibitory activity)和抗高尿酸血症(anti-hyperuricemia)的功效。然而，目前尚未有任何研究指出土肉桂于治疗血脂异常的运用。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种土肉桂叶萃取物，可作为医药组合物的天然活性成份。

本发明的另一目的是提供一种医药组合物，其是以前述萃取物作为活性成份，以达到治疗血脂异常的目的。

为达上述目的，本发明提供一种具有抗血脂异常的活性的萃取物，其由土肉桂叶以热水萃取而得。

较佳地，前述萃取物的制备方法包括下列步骤：将土肉桂叶粉碎后用水煎煮；将煎煮液过滤，将滤液干燥，即得。

较佳地，为提高萃取效率，将土肉桂叶粉碎成粉末状；接着，将前述粉碎的叶片以清水沸煮，较佳地，是以蒸馏水沸煮；较佳地，前述煎煮的温度无须特别限制，只要能使前述叶片于前述蒸馏水滚沸的状态下萃取即可；更明确地，于95～100℃间沸煮30～40分钟。

本发明提供一种用以治疗血脂异常的医药组合物，

医药组合物包括：治疗上有效量的土肉桂叶萃取物以及药学上可接受的载体或辅料。

较佳地，所述医药组合物包含1～1.5wt％的土肉桂叶萃取物，以及99～98.5wt％的医药可接受的载体。

较佳地，所述载体可以为淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纤维素或羧甲基纤维素。

较佳地，所述医药组合物进一步包含医药可接受的添加剂，所述添加剂可以为胺基酸、维生素或矿物质。

较佳地，所述医药组合物可按常规制剂方法制备成临床上可接受的适宜制剂，例如，可以是锭剂、胶囊、皮肤贴剂、悬浮剂、粉末、鼻吸剂、喷剂或注射剂。

综上所述，本发明关于一种以土肉桂叶萃取物作为活性成份的医药组合物，该医药组合物具有治疗血脂异常的效果，更明确地，具有降低低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇和三酸甘油脂的活性。

本发明所述的「治疗」是指对一具有肝炎之对象以本发明的医药组合物处理；更明确地，系指对一具有酒精性肝炎对象，对一具有肝炎的个体以本发明的医药组合物处理，目的在于治愈、减缓、减轻、治疗、预防、改善疾病症状。本发明所述的「活性成份」，是指本发明的医药组合物中实际产生前述治疗效果的成份。本发明所述的「有效量」是指单独或并用其它药物的本发明医药组合物可提供所述治疗用量。

本发明所述的「药学上可接受的载体」可选用所属领域所习知且不影响本发明医药组合物的活性成份的效果的载体，例如，但不限于：淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纤维素或羧甲基纤维素。本发明的医药组合物可进一步添加医药可接受之添加剂，以额外补充使用本发明个体的营养，包括，但不限于：胺基酸、维生素或矿物质；其中维生素包括，但不限于：维生素B群、维生素C、维生素E或其组合。本发明医药组合物可为锭剂、胶囊、皮肤贴剂、悬浮剂、粉末、鼻吸剂、喷剂或注射剂，而不须加以限制。本发明的医药组合物原则上可以任何习知方式投药，较佳的投药途径为口服投药。本发明的医药组合物的剂量取决于待处理患者的年龄、健康状况、疗程及/或症状程度而定。

于一实施例中，本发明土肉桂叶萃取物是指土肉桂叶热水萃取物，其制备方法包含以下步骤：首先，提供土肉桂的叶片，将前述叶片干燥后，进一步粉碎该叶片，该叶片粉碎后的大小并无限制，较佳地，将该叶片粉碎为粉末状，以提高萃取效率。接着，将前述粉碎的叶片以清水沸煮，较佳地，是以蒸馏水沸煮；较佳地，前述沸煮的温度无须特别限制，只要能使前述叶片于前述蒸馏水滚沸的状态下萃取即可；更明确地，系于95～100度之间沸煮30～40分钟以获得一粗萃液。

然后过滤前述粗萃液以获得一滤出液。前述过滤的方法系采用所属领域习知的过滤方法，而无须加以限制，较佳地，前述过滤的方法包括，但不限于：纱布过滤、离心、滤杯或静置沉淀。最后，干燥前述滤出液以得本发明土肉桂叶热水萃取物。前述干燥是采用所属领域习知的干燥方法，而无须加以限制，较佳地，前述干燥的方法包括，但不限于：冷冻干燥(lyophilization)、风干干燥(air-dry)、减压干燥或喷雾干燥。

附图说明

图1显示本发明土肉桂叶萃取物于小鼠实验中影响HDL-C和LDL-C含量的功效。

图2显示本发明土肉桂叶萃取物于小鼠实验中影响HDL-C/LDL-C比例的功效。

图3本发明土肉桂叶萃取物的主要成份；图(A)系为HPLC图谱以显示土肉桂叶萃取物的主要成份；图(B)显示第二A图的两个主要成份的回归曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1本发明土肉桂叶热水萃取物的制备

首先取得950克的经风干干燥(air-dried)且粉碎为粉末状(powdered)的土肉桂叶，将前述土肉桂叶粉末以15公升的蒸馏水沸煮1个小时以得到一粗萃液(crude extract)。收集前述粗萃液并以纱布(cheesecloth)过滤。将过滤所得滤出液(filtrate)以冷冻干燥(lyophilization)后得到150克的本发明土肉桂叶热水萃取物(hot-water extract)。本实施例的产率约为16％(w/dry weight of leaves)。

实验例1动物模式(animal model)的实验设计

40只体重为100～120克的黄金仓鼠(Golden Syrian hamster)是以独立塑料笼饲养，并维持12小时的日夜周期(light/dark cycle)、60％的湿度(humidity)和25℃的室温。在进行实验之前，使实验用仓鼠于饲料和水无限量供应的恒常实验室条件下饲养4个星期以适应环境。实验前，将仓鼠随机分配为5个组别(8只/组)，并记录其体重。然后，请参下表一的实验设计，将前述5个组别以正常饮食和高胆固醇饮食(0.2％胆固醇)饲养4个星期后，再依据实验设计喂食实施例1的土肉桂叶热水萃取物或吉非贝齐(gemfibrozil，一种习知的降胆固醇药物)5至10个星期后，以2％的吸入式麻醉剂(isoflurane inhalation)麻醉并牺牲。接着采集血液样本(眶窦(orbital sinus)和心脏穿刺(cardiac puncture))以供后续分析总胆固醇(totalcholesterol，TC)、三酸甘油脂(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cholesterol，LDL-C)。

表一：小鼠实验的实验设计

前述土肉桂叶热水萃取物和吉非贝齐系依据实验设计的剂量，溶于含有0.5％Tween 80的1ml的水中，再以口服的方式让实验小鼠食用。

实验例2本发明土肉桂萃取物的毒性分析

本发明以小鼠模式(mouse model)试验土肉桂叶萃取物于治疗血脂异常的功效，因此，本实验例是监测实验小鼠的体重变化、肝功能和肾功能以分析本发明土肉桂叶萃取物对活体动物的生理是否有不良影响；其中，前述体重变化的侦测一来可以确认土肉桂叶萃取物对活体动物生理是否有不良影响，二来并可标准化后续动物实验，以确认体重是否为土肉桂叶萃取物影响小鼠生理变因之一。

[体重变化]

请参下表二为实验小鼠的体重变化

表二实验小鼠的体重变化

＊表中周数代表喂食本发明土肉桂叶萃取物或吉非贝齐后的周数。

＊每组的实验个数为8只实验小鼠(n＝8)，各组所得数据经计算标准差后，若该组数据与其它组别之数据的差异具统计意义(p＜0.05)，则以不同的上标符号表示。

实验显示，小鼠的体重依摄食量自然地增加，在各组别之间并无显著的差异(表中标示的上标符号都相同)。此外，实验小鼠也都呈现健康的外观和行动能力。

[肝功能和肾功能]

接着，观察服用实施例1的土肉桂叶萃取物是否会造成实验小鼠的肝功能或肾功能异常；其中，观察小鼠血清中麸胺酸草醋酸转胺酶(glutamateoxaloacetate transaminase，GOT)和麸胺酸丙酮酸转胺脢(glutamic pyruvictransaminase，GPT)的含量以判断小鼠的肝功能；观察小鼠血清中肌酸酐(creatinine)和血尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)的含量以判断小鼠的肾功能。请参下表三，实验小鼠于喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐10周后，血清中GOT、GPT、肌酸酐和BUN的变化。

表三：实验小鼠血清中GOT、GPT、肌酸酐和BUN的变化

＊每组的实验个数为8只实验小鼠(n＝8)，各组所得数据经计算标准差后，若该组数据与其它组别之数据的差异具统计意义(p＜0.05)，则以不同的上标符号表示。

根据上表三的数据可知，血脂异常的小鼠(以HChol组为例)的血清中的GOT、GPT和BUN值都较正常的小鼠来得高(control)，显示血脂异常会造成肝功能和肾功能异常。此外，喂食本发明土肉桂叶萃取物并未显著地造成小鼠血清中GOT、GPT、肌酸酐和BUN的变化。

实验例3本发明土肉桂萃取物于治疗血脂异常的活性

本实验是以前述小鼠模式检测土肉桂叶萃取物于治疗血脂异常的活性，其中以总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酸甘油脂(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cholesterol，LDL-C)为衡量前述治疗血脂异常的活性的指标。

[胆固醇和三酸甘油脂]

请参下表四为实验小鼠于引发血脂异常，且喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐后第0周、第5周和第10周时，血液中胆固醇和三酸甘油脂的含量变化。

表四：实验小鼠血液中胆固醇(mg/dL)和三酸甘油脂(mg/dL)的变化

＊表中周数代表喂食本发明土肉桂叶萃取物或吉非贝齐后的周数。

＊每组的实验个数为8只实验小鼠(n＝8)，各组所得数据经计算标准差后，若该组数据与其它组别之数据的差异具统计意义(p＜0.05)，则以不同的上标符号表示。

根据上表四的实验数据，首先比较0周时，喂食高胆固醇饮食老鼠(以HChol为例)和正常饮食的老鼠(control)的胆固醇和三酸甘油脂含量可知，高胆固醇饮食的老鼠(HChol)的血液中含有非常高的胆固醇和三酸甘油脂，显示本发明实验设计确实促使实验小鼠具有血脂异常的现象。

重要的是，喂食实施例1的土肉桂叶萃取物的组别，不论是100mg/kg/day(HChol-CO 100)或500mg/kg/day(HCol-CO500)的剂量，皆促使胆固醇和三酸甘油脂显著地下降。该胆固醇和三酸甘油脂下降的幅度在第10周的数据中更为明显。此结果显示本发明土肉桂叶萃取物具有促使胆固醇和三酸甘油脂下降的活性，其效果大约等同于已知的降胆固醇药物-吉非贝齐。

[高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇]

请参图1(图中，若该组数据与其它组别的数据的差异具统计意义(p＜0.05)，则以不同的英文符号表示)，其系显示前述小鼠模式中的小鼠，经喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐后，第10周的高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量。根据图中数据可知，相较于正常饮食的小鼠(control)，高胆固醇饮食的小鼠(以HChol为例)皆含有较高的高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，而喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐，可促使低密度脂蛋白胆固醇的含量降低。需注意的是，喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐皆不会促使高密度脂蛋白胆固醇的含量降低。请参图2(图中，若该组数据与其它组别之数据的差异具统计意义(p＜0.05)，则以不同的英文符号表示)，显示喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐造成实验小鼠体内高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的比例变化(LDL/HDL)，其结果显示喂食实施例1的土肉桂叶萃取物或吉非贝齐后，小鼠体内的LDL/HDL的比例已回复至与正常饮食的小鼠相同。综合此结果可知，本发明土肉桂叶萃取物具有促使低密度脂蛋白胆固醇(坏胆固醇)下降的活性，而不影响高密度脂蛋白胆固醇(好胆固醇)的含量。

实验例4肉桂叶萃取物的主要成份

最后以高效能液态层析(high-performance liquid chromatography，HPLC)分析本发明土肉桂叶萃取物的主要成份；前述HPLC系依据习知的实验方法进行，简单地说，其实验参数如下：

·系统：装设500μl fixed loop和紫外线侦测器的Agilent 1100(Agilent，Germany)。

·固定相：Luna C18管柱(10.0mm×250mm，5μm孔隙，Phenomnex Co.，USA)。

·流动相：纯水(溶剂A)和乙睛(acetonitrile，溶剂B)。

·梯度：先以79％的溶剂A进行5分钟，在于10分钟内以一梯度逐渐降低溶剂A的浓度至77％，接着在第20分钟的时候转而使用溶剂B，并持续进行5分钟。

·流动相流速：2.0mL/min。

·侦测波长：254nm。

根据HPLC的结果，请参图3(A)，本发明土肉桂叶萃取物含有两个主要的成份，其滞留时间(retention time)分别为12.5分钟(成份1)和14分钟(成份2)。接着，由光谱分析(IR(PerkinElmer Spectrum 100 FT-IRspectrometry)、UV(Bio-Tek μQuant MQX200 ELISA reader)、NMR(1H-NMR，13C-NMR，Varian Utility Inova-600 MHz spectrometer)、HREIMS(Thermo/Finnigan Quest MAT 95XL Mass Spectrometer)确定该两个主要成份分别为Kaempferol-O-β-D-apiofuranosyl-(1→2)-α-L-arabinofuranosyl-7-O-α-L-rthamno-pyranoside(成份1)和Kaempferitrin(成份2)。最后，请参图3(B)(Ⅰ为成份1；Ⅱ为成份2，依据HPLC图谱，并计算该两个主要成份的回归曲线(linear regressingcurve)，以估算出第二图(A)中的两个主要波峰(即，成份1和成份2)的面积分别表示的含量为8.20％(成份1)和6.98％(成份2)。

Claims (10)

1.土肉桂叶萃取物在制备治疗血脂异常药物中的用途。

2.按照权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的土肉桂叶萃取物的制备方法包括：将土肉桂叶以热水萃取而得。

3.按照权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的萃取包括：将土肉桂叶粉碎后用水煎煮；将煎煮液过滤，将滤液干燥，即得。

4.按照权利要求3所述的用途，其特征在于：将土肉桂叶粉碎成粉末状。

5.按照权利要求2所述的用途，其特征在于：将土肉桂叶以蒸馏水萃取而得。

6.按照权利要求2所述的用途，其特征在于：将土肉桂叶以95～100℃热水煎煮30～40分钟。

7.一种治疗血脂异常的医药组合物，包括：治疗上有效量的土肉桂叶萃取物以及药学上可接受的载体。

8.按照权利要求7所述的医药组合物，其特征在于，各组分的用量是：土肉桂叶萃取物1～1.5wt％，药学上可接受的载体99～98.5wt％。

9.按照权利要求7所述的医药组合物，其特征在于：进一步包含医药可接受的添加剂；优选的，所述添加剂为胺基酸、维生素或矿物质。

10.按照权利要求7所述的医药组合物，其特征在于：所述医药组合物按常规制剂方法制备成临床上可接受的适宜制剂；优选为锭剂、胶囊、皮肤贴剂、悬浮剂、粉末、鼻吸剂、喷剂或注射剂。

Images