CN101978963B

CN101978963B - 一种番荔枝内酯类提取物、其制备方法及其在抗癌及减缓癌性疼痛方面的用途

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Publication number: CN101978963B
Application number: CN2010105055604A
Authority: CN
Inventors: 杨正强; 周显勇; 王琪; 袁胜伟
Original assignee: GUANGDONG ZHENGXIN BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUANGDONG ZHENGXIN BIO-TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2010-10-13
Filing date: 2010-10-13
Publication date: 2012-08-22
Anticipated expiration: 2030-10-13
Also published as: CN101978963A

Abstract

本发明提供一种由番荔枝(Annona squamosa L.)种子、叶及树皮中提取的番荔枝内酯类提取物、其制备方法及以该番荔枝内酯类提取物为有效成分的外用制剂以及该外用制剂在抗癌及减缓癌性疼痛方面的医药用途。本发明提供的番荔枝内酯类提取物的制备方法的流程简单，采用常用、廉价和低毒的试剂，对环境污染很小，对人体健康相对安全，生产所需费用成本较低，而整个制备方法过程简单并易于实施，能有效缩短生产周期，可以实现规模化的生产。包含本发明的番荔枝内酯类提取物为有效成分的外用贴剂使用简单，对抗癌性疼痛方面有突出的疗效，且无副作用。

Description

一种番荔枝内酯类提取物、其制备方法及其在抗癌及减缓癌性疼痛方面的用途

技术领域

本发明属于医疗领域，具体涉及一种番荔枝内酯类提取物、其制备方法及其在抗癌及减缓癌性疼痛方面的用途。

背景技术

番荔枝科(Annonaceae)是在热带及亚热带地区生长的植物种群，原产于热带美洲，现全球热带地区均有栽培。我国主要在海南、广东、台湾、福建、广西、云南等地有栽培，而又尤以广东汕头、东莞等地的品质最佳。该科植物的树叶、果实种子、茎皮和树皮均含有多种生物活性成分，如生物碱、萜类、黄酮类、番荔枝内酯类等。其中研究最为广泛的是番荔枝内酯(annonaceousacetogenins)，于1982年由美国科学家从番荔枝科植物中首次发现的一类新型天然产物。番荔枝内酯具有较为广泛的生理活性，又以抗肿瘤活性和细胞毒性作用最为典型，番荔枝内酯是一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的类似长链脂肪酸的天然化合物，其具有的四氢呋喃环结构是抗癌活性的基本结构骨架，γ-内酯环则是抗癌所必须的活性结构，番荔枝内酯类成分在抗恶性肿瘤的应用已经得到全世界的公认。迄今为止已经发现350多种番荔枝内酯类同系物，尤以布拉他辛(bullatacin)及史可莫辛(squamocin)的活性最强，两者占番荔枝内酯类总质量分数60％或以上。但由于该类物质的化学结构和性质相似、生物活性不同，给分离纯化带来较大难度。目前多数研究和利用都只限于布拉他辛(bullatacin)及史可莫辛(squamocin)。对番荔枝的研究，目前还多限于从其种子中提取有效活性成分，而对番荔枝的树叶及树皮、茎皮中的有效化学成分的医药用途研究很少。

目前，针对癌症患者的疼痛问题的解决方案主要有注射度冷丁、服用吗啡类药品等，这些药品长期服用会产生依赖性，甚至可能上瘾，中断用药可能产生强烈的戒断综合征，同时还会伴随恶心、呕吐、头晕等副作用。因此在治疗癌症患者的疼痛方面的应用研究相对重视不够，存在巨大的研究价值。

有关番荔枝研究的专利申请如用总内酯(CN1224016A)、提取物(CN1739586)、布拉他辛(CN1460473)和番荔辛即史可莫辛(CN1544423)制备抗肿瘤或抗艾滋病药物，存在各自相应的缺点。总内酯和提取物存在成分过于复杂，药物的质量难于控制，不利于制剂要求；布拉他辛和番荔辛则只选其中单一成分，不仅造成另外一种高活性成分的丢失，也不利于分离纯化，造成所需的生产成本非常高昂，难以实现规模生产。此外，几乎所有公布专利的研究都只单一从种子中提取活性成分。

发明内容

本发明是的目的在于提供一种由番荔枝(Annona squamosa L.)种子、叶及树皮中提取番荔枝内酯类提取物、其制备方法及以该番荔枝内酯类提取物为有效成分的外用制剂以及该外用制剂在抗癌及减缓癌性疼痛方面的医药用途。

本发明的技术方案依次是：

一种番荔枝内酯类提取物，其特征在于：包括占其总质量分数60％或以上的抗癌成分和抗癌性疼痛成分，其抗癌成分是由一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的长链脂肪酸的天然化合物布拉他辛(Bullatacin；分子式：C₃₇H₆₆O₇；分子结构式：I)和史可莫辛(squamocin；分子式：C₃₇H₆₆O₇；分子结构式：II)所组成；其抗癌性疼痛成分是由生物碱类及黄酮类所组成。所述生物碱类包括异紫堇定碱(isocorydine；分子式：C₂₀H₂₃NO₄；分子结构式：III)和海罂粟碱(glaucine；分子式：C₂₁H₂₅NO₄；分子结构式：IV)；所述黄酮类为金丝桃甙(hyperoside；分子式：C₂₁H₂₀O₁₂；分子结构式：V)；

I：

上述番荔枝内酯类提取物是通过以下方法制备获得的：

一种番荔枝内酯类提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按照番荔枝种子、叶子及树皮的为重量比为6∶2∶2的比例取原料；

(2)将步骤(1)的原料混合后粉碎成粗粉，用90％～95％有机溶剂酒精浸泡提取，并浓缩回收酒精得酒精提取物；

(3)将步骤(2)的酒精提取物用适量的石油醚和水的混合物进行萃取，石油醚和水的体积比为1∶1，弃掉水层得萃取液；

(4)将步骤(3)的萃取液再用80％～85％酒精进行反萃取，并浓缩回收酒精获得番荔枝粗提物；

(5)在步骤(4)的番荔枝粗提物中加入柱层析硅胶进行拌样，柱层析中的拌样硅胶与番荔枝粗提物的质量比为1.5∶1～3.5∶1，并采用干柱法进行装柱，干柱法装柱硅胶与番荔枝粗提物的质量比为2.5∶1～4.5∶1；采用石油醚∶丙酮的比例为94～87∶6～13的石油醚-丙酮混合液作洗脱剂，通过柱层析的方法对柱子进行洗脱分离组分，收集并回收混合洗脱液，对浓缩后的馏分进行放置干燥并结晶，得到番荔枝内酯类提取物；所述番荔枝内酯类提取物包括占其总质量分数60％或以上的抗癌成分和抗癌性疼痛成分，其抗癌成分是由一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的长链脂肪酸的天然化合物布拉他辛和史可莫辛所组成；其抗癌性疼痛成分是由生物碱类及黄酮类所组成。所述生物碱类包括异紫堇定碱和海罂粟碱；所述黄酮类为金丝桃甙。

本发明还提供一种外用制剂，其特征在于：所述外用帖剂的有效成分是包括占其总质量分数60％或以上的抗癌成分和抗癌性疼痛成分的番荔枝内酯类提取物，其抗癌成分是由一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的长链脂肪酸的天然化合物布拉他辛和史可莫辛所组成；其抗癌性疼痛成分是由生物碱类及黄酮类所组成。所述生物碱类包括异紫堇定碱和海罂粟碱；所述黄酮类为金丝桃甙。

本发明还提供上述外用制剂在抗癌性疼痛方面的用途。

本发明提供的番荔枝内酯类提取物的制备方法的流程简单，采用常用、廉价和低毒的试剂，对环境污染很小，对人体健康相对安全，生产所需费用成本较低，而整个制备方法过程简单并易于实施，能有效缩短生产周期，可以实现规模化的生产。包含本发明的番荔枝内酯类提取物为有效成分的外用贴剂使用简单，对抗癌性疼痛方面有突出的疗效，且无副作用。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行详细的描述。

1、番荔枝内酯类提取物的制备

实施例1：取经洗净并干燥的番荔枝种子、叶子、树皮，按照番荔枝种子∶叶子∶树皮的重量比为6∶2∶2的比例配制原料，共8.0kg，将混合后的原料粉碎并过40目筛，按原料与酒精重量比为2∶3的比例加入95％酒精12kg，浸泡提取48小时，反复3次浸泡提取，减压浓缩回收酒精并合并浓缩液得酒精提取物；酒精提取物中加入石油醚和水各1000ml充分振摇，静置分层后弃掉水层得石油醚萃取液；萃取液中加入80％酒精进行反萃取，反复反萃取5次，每次加80％酒精1000ml，静置分层后，收集酒精层反萃取液共计5700ml，减压浓缩并除去80％酒精后，得番荔枝粗提物242g；番荔枝粗提物加入363g柱层析硅胶(200～300目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用605g柱层析硅胶(200～300目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为94∶6、91∶9、89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合洗脱剂，洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝有效药物成分粗品121g；番荔枝有效药物成分粗品加入181.5g柱层析硅胶(100～200目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用302.5g柱层析硅胶(100～200目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合的洗脱剂洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，放置干燥并结晶得到本发明的番荔枝内酯类提取物精品。在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝内酯类提取物精品48g。薄层层析采用硅胶板检查，硅胶板的粘合剂为CMC，吸附剂为硅胶H，并以石油醚-丙酮(按体积比3∶1)为展开剂，用碘化铋钾为显色剂喷雾显色。

实施例2：取经洗净并干燥的番荔枝种子、叶子、树皮按照番荔枝种子∶叶子∶树皮的重量比为6∶2∶2的比例配制原料，共8.0kg，粉碎并60目过筛，按原料与酒精重量比为2∶3的比例加入95％酒精12kg，浸泡提取56小时，反复3次浸泡提取，减压浓缩回收酒精并合并浓缩液得酒精提取物；酒精提取物中加入石油醚和水各1000ml充分振摇，静置分层后弃掉水层得石油醚萃取液；萃取液中加入80％酒精进行反萃取，反复反萃取5次，每次加80％酒精1000ml，静置分层后，收集酒精层反萃取液共计6000ml，减压浓缩并除去80％酒精后，得番荔枝粗提物256g；番荔枝粗提物加入640g柱层析硅胶(200～300目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用896g柱层析硅胶(200～300目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为94∶6、91∶9、89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合洗脱剂洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝有效药物成分粗品138g；番荔枝有效药物成分粗品加入345g柱层析硅胶(100～200目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用483g柱层析硅胶(100～200目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合洗脱剂洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，放置干燥并结晶得到番荔枝内置类药物精品。在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝内酯类提取物精品42g。薄层层析采用硅胶板检查，硅胶板的粘合剂为CMC，吸附剂为硅胶H，并以石油醚-丙酮(按体积比3∶1)为展开剂，用碘化铋钾为显色剂喷雾显色。

实施例3：取经洗净并干燥的番荔枝种子、叶子、树皮，按照番荔枝种子∶叶子∶树皮的重量比为6∶2∶2的比例配制原料，共8.0kg，粉碎并80目过筛，按原料与酒精重量比为2∶3的比例加入90％酒精12kg，浸泡提取72小时，反复3次浸泡提取，减压浓缩回收酒精并合并浓缩液得酒精提取物；酒精提取物中加入石油醚和水各1000ml充分振摇，静置分层后弃掉水层得石油醚萃取液；萃取液中加入80％酒精进行反萃取，反复反萃取5次，每次加80％酒精1000ml，静置分层后，收集酒精层反萃取液共计5800ml，减压浓缩并除去80％酒精后，得番荔枝粗提物258g；番荔枝粗提物加入903g柱层析硅胶(200～300目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用1161g柱层析硅胶(200～300目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为94∶6、91∶9、89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合洗脱剂洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝有效药物成分粗品136g；番荔枝有效药物成分粗品加入476g柱层析硅胶(100～200目)充分搅拌均匀后晾干，备用；用612g柱层析硅胶(100～200目)干法装柱，再加入已经制备好的拌样硅胶，依次用石油醚∶丙酮的比分别为89∶11、87∶13的石油醚-丙酮混合洗脱剂洗脱，收集馏分并浓缩除去洗脱剂，放置干燥并结晶得到番荔枝内置类药物精品。在薄层层析对照法的指导下合并活性成分，得到番荔枝内酯类提取物精品35g。薄层层析采用硅胶板检查，硅胶板的粘合剂为CMC，吸附剂为硅胶H，并以石油醚-丙酮(按体积比3∶1)为展开剂，用碘化铋钾为显色剂喷雾显色。

本发明提出的上述番荔枝内酯类提取物的制备时程序简单，成本低，适于工业化生产。对于每个实施例，对所获得的番荔枝内酯类提取物的成分进行数据分析，得到番荔枝内酯类提取物中包括的作为抗癌成分的布拉他辛和史可莫辛以及作为抗癌性疼痛成分的生物碱类(异紫堇定碱、海罂粟碱)及黄酮类(金丝桃甙)占番荔枝内酯类提取物总质量分数分别为70％，64％，62％，。上述实施例1的方法在实际提取中最为多用，相比之下，实施例1的方法，可以省用硅胶，节省费用。从提取得到的药物含量来看，随硅胶比例增大时所得药物的含量有所降低，也说明在专利保护的所用硅胶比例范围内，实例1的方法硅胶用量少，所得药物含量较高。

2、外用制剂

本发明分别以上述实施例1-3获得的番荔枝内酯类提取物为有效成分，制备外用制剂，其制备方法可采用常用的外用制剂的制备方法，值得的外用制剂包括但不限于喷雾剂、软膏剂、乳剂、凝胶剂或水凝胶贴剂、酊剂、涂膜剂、透皮缓释贴剂或透皮控释贴剂。

1)上述番荔枝内酯类提取物凝胶剂的制备的具体实施例如下：

配方：本发明的番荔枝内酯类提取物10.5g

卡波姆940 30g

甘油120g

PBS 3500ml

三乙醇胺39.6g

维生素E 180mg

海藻糖450mg

卵磷脂20g

乙醇30ml

制备方法：

(1.)A液：首先称取处方量的甘油溶解于处方量2000ml的PBS中，将粉碎好的处方量的卡波姆加入搅拌中的溶液，继续搅拌过夜(根据卡波姆溶胀情况可适当延长搅拌时间)。待卡波姆完全溶胀后加入处方量的三乙醇胺，搅拌均匀即得，备用；

(2.)B液：称取处方量的维生素和E海藻糖溶解于处方量1500ml的PBS中；将处方量的卵磷脂、番荔枝内酯类提取物搅拌溶解于处方量的乙醇中；再将乙醇溶液加入磁力搅拌下的PBS溶液中，搅拌24h即得，备用。

(3.)将A液和B液混合均匀即得番荔枝内酯类提取物的凝胶剂，规格为3mg/ml。

2)番荔枝内酯类提取物水凝胶贴剂的制备的具体实施例如下：

处方：本发明的番荔枝内酯类提取物2g

卡波姆940 10g

乙醇50g

甘油50g

聚山梨酯80 2g

羟苯乙酯1g

氢氧化钠4g

蒸馏水加至900g

制备方法：将卡波姆与聚山梨酯80及300ml蒸馏水混合，氢氧化钠溶于100ml水后加入上液搅匀；将番荔枝内酯类提取物溶于乙醇，加入羟苯乙酯、甘油混合并逐渐搅匀；将以上两液混合并加入蒸馏水至全量，搅拌并进行炼合，然后用展延材料进行展延并切片即得透明凝胶贴剂。

3、外用制剂的医疗用途

本发明的医药用途采用外用制剂的给药方式，克服口服药物的首过效应和静脉注射的安全性，对正常细胞损伤小，无恶心、脱发等毒副作用，用药安全性大大提高。而目前所使用的肿瘤药物绝大多数都对身体脏器官有损伤，常伴有恶心、呕吐和脱发的毒副作用。本发明的医药用途解决了目前所使用的抗肿瘤药物经口服或静脉给药产生巨大毒副作用的缺点。下面，以外用贴剂(上述番荔枝内酯类提取物水凝胶贴剂)和凝胶剂的实际药理实验为例，说明本发明的番荔枝内酯类提取物的医疗用途。

A.本发明番荔枝内酯类提取物的动物镇痛药理实验：

动物模型的建立及分组：Bal/c裸鼠20只，雌性，右侧背部皮下接种人乳腺癌细胞Bcap-37 5*10⁵，2周后，相应部位出现瘤块，体重范围在22±1g，取18只，查随机数表随机分三组，分别使用本发明的番荔枝内酯类有效药物贴片组、凝胶组、芬太尼组和未给药组。实验组为凝胶和贴片组，未加任何处理的为空白组；阳性组为芬太尼组番荔枝内酯不同剂型为凝胶和贴片。给药时，将2cmx2cm的贴片，2贴贴于瘤体周边背部；芬太尼贴片2cmx2cm，2贴贴于瘤体周边背部。不同时间点分别为给药后30min、2h、4h和24h检测。检测方法为温水浴测尾法。

动物痛阈检测：

在小鼠活动状态良好时期，安静时段进行痛阈检测。

温水浴测尾法：

将小鼠放在水浴锅桌面安静10min，轻轻舒动尾巴放入48℃恒温水浴中，尾尖至水面3cm。记录从放入开始到出现鼠尾运动的时间，为痛阈。

机械性痛觉测试：

实验前准备：在实验的时间段，将小鼠放在测试箱中安静30min，实验前三天每天一次，以适应操作环境。

实验过程：将小鼠放在测试箱中安静30min，取不同克数纤维痛针刺激小鼠足底中部，以出现抬足或舔足行为为阳性，五次试验中三次阳性的最小克数为该鼠的耐受克数(每次刺激间隔大于5s，每次刺激力度相同，以纤维针弯曲度相同为准)。

结果评价：通过比较各组耐受克数，反应药物镇痛效果。

小鼠痛阈检测：

1)温水浴热刺激：

①短期给药不同时间点镇痛效果观察，得到如图1的各组小鼠不同时间点耐痛时间的比较结果如下表1所示。

表1不同时间点各组镇痛效果简表

组别	凝胶组	贴片组	芬太尼组	空白组
					30min	+	±	±	-
2h	+++	+++	+++	-
					4h	+++	+++	+++	-
24h	++	+	+++	-

注：±：镇痛趋势；+：较弱的镇痛效果；++：中等强度的镇痛效果；+++：较强的镇痛效果；-：没有镇痛效果。

由图1可以看出：通过与未给药组和芬太尼组的对照，实验中观察到30min时，凝胶组呈现较弱的镇痛作用，贴片组有微弱的镇痛趋势；2h时观察到各处理组确切的镇痛作用；4小时镇痛效果显著；24小时仍然有效。表明番荔枝内酯的贴片和凝胶两种剂型都可以提高痛阈，作用效果略弱于芬太尼，有一定的镇痛作用，持续时间可达24h；凝胶组和贴片组二者镇痛作用无显著差别，其中凝胶组起效相对较快。

②长时程定期给药镇痛作用观察。番荔枝内酯不同剂型为凝胶和贴片；早期、中期和晚期阶段分别指给药的第1，2、3，4和5，6三个阶段；实验组为凝胶和贴片组，未加任何处理的为空白组；阳性组为芬太尼组；检测方法为温水浴测尾法。得到如图2的持续给药对不同阶段荷瘤小鼠镇痛作用观察的比较结果：

在实验的早期、中期和晚期阶段，即小鼠肿瘤生长过程中，通过热刺激实验观察到含有本发明的番荔枝内酯类提取物的贴片能提高痛阈，类似芬太尼，有一定的镇痛作用。

2)机械痛针刺激实验结果：

如图3所示的各组耐痛克数比较结果。番荔枝内酯不同剂型为凝胶和贴片；健侧和患侧分别为肿瘤对侧和同侧；实验组为凝胶和贴片组，未加任何处理的为空白组；阳性组为芬太尼组；检测方法为痛针刺激法。通过不同克数纤维针刺激足底中部，观察到番荔枝内酯的贴片和凝胶两种剂型都能有效提高小鼠耐痛克数，有确切的镇痛效果；此外实验分别检测了健侧和患侧，两侧体现的耐痛克数无明显差异，但都观察到处理因素的镇痛作用。

结论：本发明的番荔枝内酯的凝胶和贴片均能有效抑制肿瘤疼痛。

B.本发明番荔枝内酯类提取物的人体抗癌镇痛药理实验：

1)资料与方法

(1.1)一般资料：随机选取从2009-2月至9月住院中晚期肿瘤患者70例，其中男40例，女30例；年龄53-～84岁，平均70岁。原发肿瘤：肺癌35例(其中骨转移8例)，肝癌8例，胃癌15(其中骨转移5例)，乳腺癌骨转移3例，鼻咽癌骨转移2例，肠癌7例(其中骨转移1例)。疼痛类型：内脏疼痛7例，骨痛6例。根据WHO数字分级法分为轻、中、重度疼痛。其中2例未予止痛治疗史，其余患者均经过非阿片和阿片类止痛药治疗。肿瘤治疗史：手术+化疗10例，手术+放疗+化疗10例，放疗+化疗10例，单独放疗15例，单独化疗15例，未行抗肿瘤治疗10例。

(1.2)用药方法：分别采用上述含有本发明的本发明的番荔枝内酯类有效药物的贴片，每日2-4贴，每贴间隔6-12小时，观察30天，入选60例患者，分2组，A组：轻度、中度疼痛(采用NRS疼痛评分，1-6分)共38例，其中1-3分20例，仅以本发明的外用贴剂治疗；4-6分18例，各同时口服止痛药治疗包括非甾体类抗炎药，弱阿片类药物；B组：重度疼痛(NRS疼痛评分7-10分)共22例，其中7-8分20例，9-10分2例，以口服吗啡类药物止痛为主(吗啡缓释片10-60mg，口服q12h)，配合贴剂使用，每4天用数字分级法自测疼痛强度及药物副作用。

(1.3)疗效观察：

(1.3.1)疼痛程度的分级标准：采用NRS数字评估法，即疼痛强度用0一10数字疼痛强度分级法；0为无痛；1-3为轻度疼痛；4--6为中度疼痛；7-10为重度疼痛；10为剧痛。

(1.3.2)疼痛缓解度：采用0-4度分级标准即I度为未缓解；II度为轻度缓解(缓解约1/4)；III度为中度缓解(缓解约1/2)；IV度为明显缓解(疼痛缓解约3/4以上)；V度为完全缓解(疼痛消失)。

(1.3.3)生活质量评分：依照1990年WHO中国癌症疼痛会议上修订草案标准：患者的食欲、睡眠、日常生活、精神状态、情绪、与人交往、生活兴趣等各项指标总分共60分。较差：＜20分；差：21-30分；一般：31-40分；较好：41一50分；良好：51-60分。

(1.3.4)疗效判断标准：主要研究治疗癌性疼痛的近期疗效，按照止痛疗效评定有效率，总有效率＝CR(完全缓解)+PR(部分缓解)。WHO分级法：CR，治疗后完全无痛，无需止痛药；PR，疼痛较给药前明显减轻，睡眠基本不受干扰，能正常生活。或者VRS分级法：CR，疼痛完全消失，疼痛分级达0级；PR，疼痛明显减轻，疼痛时间缩短，间隔时间延长，疼痛程度可降低I～II级。不良反应主要观察肝肾功，血尿常规，血压，心率等的变化及头晕，恶心，呕吐，便秘等症状。

2)结果如表2所示：

表2.本发明的外用贴片剂的临床疗效观察

A与B组比较P＜0.05

3.药物毒副作用，结果如表3：

表3.观察10名患者用药后的副反应结果

相关性：1＝无关；2＝很小；3＝可能；4＝很可能；5＝肯定

严重度：0＝无；1＝可疑或极轻；2＝轻度：症状轻微；3＝中度：日常生活受影响；4＝重度：患者无法耐受；

所观察10患者均未见皮肤过敏，消化道副反应等。

结论：可将本发明的上述外用制剂用于治疗恶性肿瘤及肿瘤引起的癌性疼痛的用途。可见，本发明提出的番荔枝内酯类提取物不仅具有抑制肿瘤细胞的生长繁殖而具有抗癌作用，而且具有拮抗由肿瘤引起的癌性疼痛作用，起到标本兼治的作用效果。

本发明的贴片剂是由采用上述方法制备提取到的番荔枝内酯类提取物及其他辅料组成的亲水性高分子凝胶，延展于透气性极强的无纺布上，表面覆盖聚乙烯薄膜的水凝胶透皮贴剂。经皮给药为降低番荔枝内酯药物毒性的有效方式，其优点表现为：无肝脏的“首过效应”，维持恒定的血药浓度，增强了治疗效果，延长作用时间，减少用药次数，改善患者用药顺应性。本研究中未见严重不良反应，治疗期间肝肾功能等多项临床检查均未见异常，证明番荔枝内酯类提取物采的外用给药方式在临床应用中具有良好的安全性。

癌痛疗效观察发现对轻度疼痛控制，即疼痛NRS评分在1-3分，单用贴剂亦能获得良好止痛效果，有效率达到100％(20/20)，同时患者能获得治疗信心及良好生活质量；针对中度癌痛NRS评分在4-6分，贴剂配合口服止痛药亦能有效控制疼痛，不用增加止痛药用量，有效率达到88.9％(16/18)，病人生活质量有明显改善；轻和中度疼痛的总有效率达到94.7％，因此番荔枝内酯类提取物对轻和中度癌痛具有较好的镇痛效果。

上述仅对本发明中的几种具体实施例加以说明，但并不能作为本发明的保护范围，凡是依据本发明中的设计精神所作出的等效变化或修饰，均应认为落入本发明的保护范围。

Claims

1.番荔枝内酯类提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)按照番荔枝种子、叶子及树皮的重量比为6∶2∶2的比例取原料；

在步骤(4)的番荔枝粗提物中加入柱层析硅胶进行拌样，柱层析中的拌样硅胶与番荔枝粗提物的质量比为1.5∶1～3.5∶1，并采用干柱法进行装柱，干柱法装柱硅胶与番荔枝粗提物的质量比为2.5∶1～4.5∶1；采用石油醚∶丙酮的比例为94～87∶6～13的石油醚-丙酮混合液作洗脱剂，通过柱层析的方法对柱子进行洗脱分离组分，收集并回收混合洗脱液，对浓缩后的馏分进行放置干燥并结晶，得到番荔枝内酯类提取物；所述番荔枝内酯类提取物包括占其总质量分数60％或以上的抗癌成分和抗癌性疼痛成分，其抗癌成分是由一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的长链脂肪酸的天然化合物布拉他辛和史可莫辛所组成；其抗癌性疼痛成分是由生物碱类及黄酮类所组成；所述生物碱类包括异紫堇定碱和海罂粟碱；所述黄酮类为金丝桃甙

。

2.以权利要求1的方法制得的番荔枝内酯类提取物为有效成分的一种外用制剂，其特征在于：所述外用制剂的有效成分是包括占其总质量分数60％或以上的抗癌成分和抗癌性疼痛成分的，其抗癌成分是由一类具有α、β-不饱和γ-内酯环和1～3个四氢呋喃环结构的长链脂肪酸的天然化合物布拉他辛和史可莫辛所组成；其抗癌性疼痛成分是由生物碱类及黄酮类所组成；所述生物碱类包括异紫堇定碱和海罂粟碱；所述黄酮类为金丝桃甙。

3.权利要求2的外用制剂在制备抗癌性疼痛药物中的用途。