CN101559092B - 一种杜仲提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种杜仲提取物在制备具有镇静催眠作用的组合物中的应用,还公开了杜仲提取物在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥组合物中的应用,该杜仲提取物是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水连续提取而成。本发明从植物杜仲中提取得到杜仲提取物,并对其进行在镇静催眠领域应用的研究,结果表明:杜仲提取物具有显著的镇静催眠作用和抗惊厥作用,其中杜仲乙酸乙酯提取物和杜仲正丁醇提取物的效果明显,是研制开发具有催眠镇静作用的新型保健食品和新药的天然活性物质,可用于治疗失眠、焦虑或者惊厥等神经系统疾病,且无副作用和精神依赖性。
Description
技术领域
本发明涉及一种杜仲提取物的应用。
背景技术
失眠是临床多发疾病,病因复杂,易反复发作。目前国内外治疗常用的西医西药镇静催眠药都有一定的副作用和依赖性。中医药的镇静催眠作用成为近年来研究的一个热点。
杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.),落叶乔木,属松科松属植物;小枝光滑,黄褐色或较淡,具片状髓,皮、枝及叶均含胶质;单叶互生,椭圆形或卵形,先端渐尖,基部广楔形,边缘有锯齿,幼叶上面疏被柔毛,下面毛较密,老叶上面光滑,下面叶脉处疏被毛;花单性,雌雄异株,与叶同时开放,或先叶开放,生于一年生枝基部苞片的腋内,有花柄,无花被;雄花有雄蕊6~10枚,雌花有一裸露而延长的子房,子房1室,顶端有2叉状花柱;翅果卵状长椭圆形而扁,先端下凹,内有种子1粒;花期4~5月;果期9月。
杜仲是我国名贵的滋补中药材,现代医学证明杜仲具有调节血压、降低血糖、调节血脂、抗菌消炎、抑制肿瘤细胞生长、滋阴补肾、强壮筋骨、延缓衰老等多种功效。经过广泛系统研究证明,杜仲含有三萜类化合物,黄酮类化合物,木质素类化合物,生物碱及多糖类成分。
近年来,已有研究表明杜仲皮及其籽、叶、花都有镇静催眠作用,但杜仲中的具体活性成分和作用机理还不清楚,到目前为止尚未见到有杜仲功能成分有效部位药物提取及其在镇静催眠领域应用的信息。
发明内容
本发明的目的是提供一种杜仲提取物在制备具有镇静、催眠作用及用于失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用。
为了实现以上目的,本发明所采用的技术方案为:
杜仲提取物在制备具有镇静作用的组合物中的应用。
杜仲提取物在制备具有催眠作用的组合物中的应用。
杜仲提取物在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用。
所述的组合物包括药物组合物,食品组合物或者保健品组合物。
所述的药物组合物的组成包括杜仲提取物和药物可接受的载体,其中杜仲提取物为药物活性成分,其在药物制剂组合物中占重量百分比为1~99%。
所述的杜仲提取物是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中提取而成。
所述的杜仲提取物为杜仲连续提取物,该杜仲连续提取物包括从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中依次分别经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水连续提取而成的杜仲石油醚提取物、杜仲乙酸乙酯提取物、杜仲正丁醇提取物、杜仲乙醇提取物和杜仲水提取物。
所述的杜仲连续提取物的优选活性部位为杜仲乙酸乙酯提取物和/或杜仲正丁醇提取物。
本发明的杜仲连续提取物采用如下方法制备:
①杜仲石油醚提取物的制备:
将杜仲叶、皮、雄花或者杜仲全株粉碎,用10倍体积的石油醚浸泡萃取48小时,布氏漏斗抽滤,收集滤液;55~65℃减压蒸馏回收溶剂,滤渣再次用石油醚浸泡重复萃取4~5次,直至提取液颜色近无色;将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩,得到深墨绿色油状的杜仲石油醚提取物。
②杜仲乙酸乙酯提取物的制备:
将石油醚提取后的杜仲材料低温真空干燥,再用10倍体积的乙酸乙酯浸泡萃取24小时,布氏漏斗抽滤,收集滤液;35~40℃减压蒸馏回收溶剂,滤渣再次用回收的乙酸乙酯浸泡重复萃取4~5次,直至提取液颜色近无色;将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩,得棕黑色的杜仲乙酸乙酯提取物。
③杜仲正丁醇提取物的制备:
将乙酸乙酯提取后的杜仲材料低温真空干燥,再用10倍体积的正丁醇浸泡萃取24小时,布氏漏斗抽滤,收集滤液;75~80℃减压蒸馏回收溶剂,滤渣再次用回收的正丁醇浸泡重复萃取4~5次,直至提取液颜色近无色;将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩,得到杜仲正丁醇提取物。
④杜仲乙醇提取物的制备:
将正丁醇提取后的杜仲材料低温真空干燥,再用10倍体积的乙醇浸泡萃取24小时,布氏漏斗抽滤,收集滤液;40~50℃减压蒸馏回收溶剂,滤渣再次用回收的乙醇浸泡重复萃取4~5次,直至提取液颜色近无色;将多次提取后抽滤得到的滤液减压蒸馏浓缩,得到杜仲乙醇提取物。
⑤杜仲水提取物的制备:
将乙醇提取后的杜仲材料低温真空干燥,在用10倍体积的去离子水浸泡24小时,布氏漏斗抽滤,收集滤液;滤渣再次用去离子水浸泡重复萃取4~5次;将多次提取后抽滤得到的滤液45~55℃减压蒸馏浓缩,得到杜仲水提取物。
本发明从植物杜仲中经提取得到杜仲提取物,并对其进行在镇静催眠领域应用的研究,结果表明:杜仲提取物具有显著的镇静催眠作用和抗惊厥作用,其中杜仲乙酸乙酯提取物和杜仲正丁醇提取物的效果明显,为研制开发具有催眠镇静作用的新型保健食品和新药的天然活性物质。可以制成具有镇静催眠作用的药物原料及常规的药用剂型,如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂或者其它在药剂学上可接受的任何剂型,可用于治疗神经性疾病如失眠、焦虑或者惊厥,且无副作用和精神依赖性;还可以作为添加剂,添加到各种饮料和食品中,制成具有镇静催眠作用的饮品、食品或者保健品。
本发明的优点在于,提供了从植物杜仲中分离得到的杜仲提取物。其原料来源于中国丰富的特有药用植物——杜仲,采用的提取分离工艺简单易行,质量可控,而且杜仲提取物的镇静作用显著,效果明显,对从中药中寻找新的镇静催眠药物有促进作用,对杜仲资源的综合利用和杜仲产业的发展壮大具有重要意义。
具体实施方式
实施例1杜仲连续提取物的催眠镇静活性研究:
1、材料与方法
1.1主要材料与试剂
杜仲:取自XX市XX县的杜仲种植基地;戊巴比妥钠,Sigma公司上海分装产品;尼可刹米、0.9%氯化钠溶液、地西泮,上海试一化学试剂有限公司。
1.2主要仪器与设备
GJ-1型光电计数仪,天津医疗器械修配厂。
1.3试验动物
昆明种小白鼠,普通级,20~30g(雄性),河南科技大学动物实验中心提供。
2、试验方法
2.1对小鼠自主活动的影响:
动物分组:实验前将小鼠放入GJ-1型光电计数仪的活动箱内,开动记录仪记录5min内活动次数,选择自主活动数150次左右的正常小鼠。然后根据自主活动次数将小鼠随机分配到各实验组,实验前各组小鼠的自主活动数无显著性差异。
实验分组:昆明种小鼠70只,随机分为7组,每组10只:(1)阴性对照组;(2)阳性对照地西泮组;(3)杜仲石油醚提取物组;(4)杜仲乙酸乙酯提取物组;(5)杜仲正丁醇提取物组;(6)杜仲乙醇提取物组;(7)杜仲水提取物组。各组小鼠分别放入GJ-1型光电计数仪的活动箱内,然后开动记录仪记录5min内活动次数。阴性对照组灌胃给予生理盐水,阳性对照组按照5mg/kg的体积腹腔注射给予0.30%地西泮。杜仲各提取物组灌胃量均为20g/kg.Bw,根据小鼠体重灌胃给予,每日2次,连续3天,于末次给药30min后,测定小鼠自主活动次数。同时对小鼠状态进行观察,记录小鼠镇静率、30min内的入睡百分率。其中以小鼠静卧15秒以上为药物有镇静效果,以翻正反射消失1min以上者为入睡。
2.2对阈下剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响:
戊巴比妥钠阈剂量实验:取40只小鼠,随机分四组,每组10只分别腹腔注射戊巴比妥钠,剂量分别为:25mg/kg.Bw、30mg/kg.Bw、35mg/kg.Bw、40mg/kg.Bw,记录小鼠的30min内的入睡率。
阈下剂量实验:取70只小鼠,随机均分为7组,分组和给药剂量同2.1。每天2次,给药3天,各组均于末次给药60min后按照小鼠体重注射阈下剂量戊巴比妥钠(25mg/kg.Bw),记录30min内的入睡百分率、睡眠潜伏期和睡眠时间。以翻正反射消失1min以上者为入睡,以注射戊巴比妥钠到翻正反射消失为睡眠潜伏期,以翻正反射消失到翻正反射恢复为睡眠时间。
2.3对阈上剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响:
方法同2.2试验,区别在于:末次给药60min后,各组小鼠腹腔注射阈上剂量的戊巴比妥钠(40mg/kg.Bw),记录入睡百分率、睡眠潜伏期和睡眠时间。
2.4抗惊厥作用:
方法同2.2试验,区别在于:末次给药后60min按照小鼠体重注射各组小鼠均按照腹腔注射1.25%尼可刹米0.1ml/10g;阳性对照组,灌胃给予地西泮,剂量5mg/kg。60min后腹腔注射1.25%尼可刹米溶液0.1ml/10g;阴性对照组,灌胃给予生理盐水,60min后腹腔注射1.25%尼可刹米0.1ml/10g;给药后观察2小时,记录小鼠惊厥潜伏期和惊厥小鼠的数量(以小鼠出现全身强直性惊厥为指标)。
2.5统计学分析:
采用统计学软件SPSS 11.0进行数据的统计学分析,杜仲连续提取物组组间及与对照组的差异显著性分析采用成对样本t检验。
3、结果与分析
3.1杜仲连续提取物对小鼠自主活动的影响:
表1杜仲连续提取物对小鼠自主活动的影响
图中:与阴性对照组比较*为P<0.05,**为P<0.01,与阳性对照组比较△为P<0.05,△△为P<0.01,下同。
如表1所示,阳性对照地西泮能够使全部小鼠自主活动减少,镇静率为100%,但不能导致小鼠翻正反射消失,入睡率为0%。与地西泮相比,杜仲各提取物具有更好的镇静催眠效果。杜仲石油醚提取物、杜仲乙酸乙酯提取物、杜仲正丁醇提取物、杜仲乙醇提取物和杜仲水提取物均对小鼠具有显著的直接镇静催眠作用。其中杜仲石油醚提取物、杜仲乙醇提取物、杜仲乙酸乙酯提取物和杜仲正丁醇提取物的直接镇静效果较强,都能达到100%的镇静率,同时能够导致小鼠翻正反射消失,进入深度睡眠。
与阴性对照组正常小鼠相比,地西泮组能够使小鼠自主活动次数显著减少,P=0.022,具有显著的镇静效果。杜仲乙酸乙酯提取物组的P=0.027、杜仲正丁醇提取物组的P=0.011、杜仲乙醇提取物组的P=0.011和杜仲水提取物组的P=0.023均使小鼠自主活动次数显著减少,表现出显著的镇静效果。同时杜仲石油醚提取物和杜仲乙醇提取物对小鼠中枢神经系统抑制作用极强,易出现麻醉、麻痹及急性毒性作用,因此在后的对阈下剂量、阈上剂量戊巴比妥钠镇静作用的影响及抗惊厥试验中,不再对杜仲石油醚提取物和杜仲乙醇提取物进行相关试验,并在试验方法中删去相应的试验分组。
3.2杜仲连续提取物对阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响:
戊巴比妥钠阈剂量确定试验中,不同剂量(25mg/kg.Bw、30mg/kg.Bw、35mg/kg.Bw、40mg/kg.Bw),小鼠30min内的入睡率分别为10%、50%、90%、100%,根据实验结果,确定戊巴比妥钠阈下剂量为25mg/kg,阈上剂量为40mg/kg.Bw。
表2杜仲连续提取物对阈下剂量戊巴比妥钠作用后小鼠睡眠的影响
如表2所示:杜仲乙酸乙酯提取物、杜仲正丁醇提取物以及杜仲水提取物均能够显著增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠的入睡率,增强戊巴比妥钠的镇静催眠作用,与戊巴比妥钠具有非常好的协同作用。其中杜仲正丁醇提取物组的入睡率较高,而且睡眠时间较长,与阈下剂量戊巴比妥钠的协同作用最佳。
3.3杜仲连续提取物对阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用的影响:
表3杜仲连续提取物对阈上剂量戊巴比妥钠对小鼠睡眠的影响
如表3所示:杜仲各提取物均能够缩短阈上剂量戊巴比妥钠对小鼠的睡眠潜伏期,并且能够明显延长其睡眠时间,能够显著增强阈上剂量的戊巴比妥钠对小鼠的镇静催眠作用。杜仲乙酸乙酯提取物组能极显著的缩短小鼠入睡潜伏期。杜仲乙酸乙酯提取物组的P=1.76×10-5、杜仲水提取物组的P=5.85×10-5和杜仲正丁醇提取物组的P=0.0084,均能极显著的延长小鼠的睡眠时间,极显著的增强戊巴比妥钠的催眠作用(p<0.01)。乙酸乙酯组提取物同戊巴比妥有更好的协同作用,能更有效的缩短小鼠入睡潜伏期。
3.4杜仲连续提取物抗惊厥作用实验:
表4杜仲连续提取物对小鼠惊厥的影响
如表4所示:杜仲乙酸乙酯提取物能有效的降低尼可刹米对小鼠的惊厥率,杜仲正丁醇提取物也能非常有效的降低惊厥率。杜仲乙酸乙酯提取物和杜仲水提取物均能够极显著的推迟小鼠惊厥的出现,有效的延长惊厥潜伏期。杜仲正丁醇提取物也能够表现出显著的效果,推迟小鼠惊厥出现。
试验结果显示,杜仲的杜仲乙酸乙酯提取物、杜仲正丁醇提取物以及杜仲水提取物均有一定的抗惊厥作用,其中杜仲乙酸乙酯组提取物的效果显著优于其它两组。
综合上述4个试验的结果表明,本发明提出的杜仲连续提取物能够显著抑制小鼠的自主活动,与戊巴比妥钠良好的协同作用,具有显著的镇静、催眠和抗惊厥的作用。杜仲乙酸乙酯提取物和杜仲正丁醇提取物的药效较强,是杜仲镇静催眠作用的主要部位。
实施例2保健药茶的制备:
取杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物3克,加入50千克茶叶(从红茶、绿茶和花茶中选择一种),混合均匀,转入粉碎机使物料的颗粒度15-30目,添加复合甜味剂47千克,调匀后装入专用纸质泡袋,外套铝塑复合袋,封口,每袋5-8克,制成袋泡镇静催眠保健茶。
实施例3保健冲剂的制备:
取杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,与适量果汁粉剂、糖等辅剂混合,过12目筛,75℃烘干,封装成袋,制成具有镇静催眠作用的各种冲剂,每袋含杜仲提取物100毫克。
实施例4口服液的制备:
取杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,加蒸馏水溶解并稀释至500毫升,加入0.05%(W/V)苯甲酸,亦可加入适量调味剂,分装于5毫升或10毫升的小瓶中,压盖,即得。每瓶含杜仲提取物50-100毫克,用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。
实施例5口服药剂的制备:
取杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物加淀粉800克、糖粉200克、滑石粉20克,硬脂酸镁1wt%,拌匀干燥60-80℃,制成颗粒,胶丸或片剂1000粒,每粒含杜仲提取物100毫克,用于治疗失眠、焦虑、惊厥等神经性疾病。
实施例6胶囊剂的制备:
取提取分离得到的杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,加入药用辅料淀粉和糊精适量,混匀,加70%(W/V)乙醇做润湿剂,制粒,烘干,整粒,加入硬脂酸镁或滑石粉作润滑剂,混匀,装入胶囊,制成每粒含杜仲提取物150毫克的胶囊剂,用于治疗失眠,焦虑,惊厥等神经性疾病。
实施例7注射剂的制备:
取提取分离得到的杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,加注射用水900毫升、苯甲醇20毫升,用10磅压力半小时热处理,冷冻24小时后,过滤,再加吐温-8010毫升、用注射用水将总溶液加至1000毫升,搅匀、过滤,澄明,灌封,流通蒸气100℃,1小时灭菌,制成每250毫升含杜仲提取物300毫克的静脉注射液,用于治疗失眠,焦虑,惊厥等神经性疾病。
实施例8滴丸的制备:
取聚乙二醇6000(PEG6000)50克,加热到100℃熔融,加入提取分离得到的杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,搅拌制备均匀的熔融液,恒温条件下将熔融液倾至滴丸机贮液缸中,滴液至液体石蜡中,冷却成形,洗去液体石蜡,干燥,即得。每粒滴丸重约30mg,含杜仲提取物2.5毫克,用于治疗失眠,焦虑,惊厥等神经性疾病。
实施例9分散片的制备:
取提取分离得到的杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,加入磷酸二氢钙20克,乳糖5克,甘露醇15克,交联聚乙吡咯烷酮10克,硬脂酸镁0.3克,分别过80目筛,混匀,用70%(W/V)乙醇制软材,20目筛制粒,干燥,14目筛整粒,压片,片重约600毫克,每片含杜仲提取物50毫克,用于治疗失眠,焦虑,惊厥等神经性疾病。
实施例10口嚼片制备:
取提取分离得到的杜仲乙酸乙酯提取物或杜仲正丁醇提取物,加入磷酸二氢钙5克,乳糖5克,甘露醇15克,硬脂酸镁0.3克,分别过80目筛,混匀,用70%(W/V)乙醇制软材,20目筛制粒,干燥,14目筛整粒,压片,片重约300毫克,每片含杜仲提取物50毫克,用于治疗失眠,焦虑,惊厥等神经性疾病。
Claims (6)
1. 杜仲提取物在制备具有催眠作用的组合物中的应用,所述的杜仲提取物是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和/或杜仲全株中提取而成。
2.杜仲提取物在制备用于治疗失眠、焦虑或者惊厥的组合物中的应用,所述的杜仲提取物是从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和/或杜仲全株中提取而成。
3.根据权利要求1或2或所述的应用,其特征在于:所述的组合物包括药物组合物,食品组合物或者保健品组合物。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于:所述的药物组合物的组成包括杜仲提取物和药物可接受的载体,其中杜仲提取物为药物活性成分,其在药物组合物中占重量百分比为1~99%。
5.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于:所述的杜仲提取物为杜仲连续提取物,该杜仲连续提取物包括从杜仲皮、杜仲叶、杜仲雄花和\或杜仲全株中依次分别经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水连续提取而成的杜仲石油醚提取物、杜仲乙酸乙酯提取物、杜仲正丁醇提取物、杜仲乙醇提取物和杜仲水提取物。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述的杜仲连续提取物的优选活性部位为杜仲乙酸乙酯提取物和/或杜仲正丁醇提取物。
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