CN102670656B - 一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法 - Google Patents

一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法，它是由干蟾皮经加工制成的药物活性成分与药物可接受的载体按一定的配比经加工制成的，该药物载体是由羧甲基纤维素钠、淀粉组成。本发明与现有技术相比：本发明采用60％乙醇回流提取，提高了有效成分吲哚类生物碱和蟾毒内酯的含量，增强了疗效，降低了药物的毒副作用，使得患者服用疗效显著，且更加安全方便。

Description

一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法，属于制药技术领域。
技术背景
干蟾皮的水溶性成分吲哚类生物碱具有调节免疫，抑制HBV、DNA的复制，具有较强的抗病毒作用，对乙型肝炎有很好的治疗作用。干蟾皮中的脂溶性成分蟾毒内酯类具有显著的抗肿瘤作用，2009年1月14日中国专利公报公开了由本申请人申报的名称为“一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药制剂及其制备方法”，公开号为CN 101342194A的专利申请，发明所述中药制剂的制备方法主要为：采用85％乙醇提取后药渣再水提，分别离心。本发明人发现“采用85％乙醇提取后药渣再水提，分别离心”虽可以提取出一些干蟾皮中脂溶性成分蟾毒内酯和水溶性成分吲哚类生物碱，除去杂质，但是发明人发现按其工艺提取出的有效成份少，工艺提取率较低，制成的制剂疗效不够理想，且有一些毒副作用。发明人经过3年的潜心研究，终于发现将乙醇提取由浓度85％改成用60％乙醇提取后药渣再水提，分别离心；所制得的制剂，其临床药效学实验效果显著提高，毒副作用显著降低，患者更易接受。
发明内容
本发明的目的在于针对本领域现有技术所存在的缺陷，通过发掘祖国丰富的中医药资源，结合大量的临床药效学研究，提供一种疗效更为显著，且对人体毒副作用很小的一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊及其制备方法。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
本发明中药肠溶胶囊的配方组成为：
干蟾皮3500g；
本发明中药肠溶胶囊的制备方法为：
取干蟾皮3500g，剪碎，洗净，加60％乙醇回流提取二次，第一次加6倍量乙醇，先浸泡2小时，再回流提取1小时，第二次加4倍量乙醇，回流提取30分钟，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液回收乙醇至无醇味，得清膏备用；取醇提药渣，加水煎煮二次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，第二次加6倍量水，煎煮45分钟，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液浓缩至相对密度为1.08～1.12的清膏，与上述清膏合并，喷雾干燥成细粉，即得药物活性成分，再与羧甲基纤维素钠50g、淀粉150g混匀，制成颗粒，装入肠溶胶囊，即得本发明肠溶胶囊。
针对现有技术的不足，发明人经过3年的潜心研究，终于发现将2009年1月14日中国专利公报公开了由本申请人申报的名称为“一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药制剂及其制备方法”，公开号为CN 101342194A的专利申请的工艺改为：干蟾皮85％乙醇提取改成用60％乙醇提取后药渣再水提，分别离心；所制得的制剂，脂溶性成分蟾毒内酯和水溶性成分吲哚类生物碱的含量显著提高，其临床药效学实验效果显著提高，毒副作用显著降低，患者更易接受。克服了现有技术提取出的有效成份少，工艺提取率较低，制成的制剂疗效不够理想，毒副作用较明显的缺陷。
主要药效学实验
实验目的：通过对本发明肠溶胶囊和原发明肠溶胶囊的抗肿瘤、镇痛、保肝和增强免疫力等药理实验研究，将本发明肠溶胶囊和原发明肠溶胶囊进行对比，观察其药理作用的强弱。
试验方法：本发明肠溶胶囊和原发明肠溶胶囊对小鼠移植性肉瘤的影响；对小鼠移植性肝癌H22的影响；对醋酸所致小鼠扭体反应的影响；对小鼠热板致痛的影响；对四氯化碳引起的肝功能损伤的影响；对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响；对小鼠血清溶血素形成的影响。
实验结果：本发明肠溶胶囊和原发明肠溶胶囊能明显抑制小鼠移植S180肉瘤细胞的生长；可显著抑制小鼠移植性肝癌H22的生长；对醋酸所致小鼠扭体具有明显的抑制作用；可延长热板致痛小鼠的痛阈值；明显抑制四氯化碳引起大鼠血清SGPT和SGOT的升高，对肝损伤具有保护作用；能显著提高小鼠巨噬细胞的吞噬功能；具有显著增加小鼠血清溶血素含量的作用。
结论：本发明肠溶胶囊比原发明肠溶胶囊的抗肿瘤、镇痛、保肝和增强免疫力等药理作用强，因此，本发明肠溶胶囊比原发明肠溶胶囊解毒、消肿、止痛血的功能强。
一、对小鼠移植性肉瘤的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药21d，每日1次，给药后第8d无菌操作，给每只小鼠右腋下常规接种S180肉瘤细胞悬液0.2ml(含5×107细胞)，于接种后24h继续给药，第21d给药1h后，脱椎处死小鼠，剥取S180瘤体，精密称重并计算抑瘤率。实验结果：见表1
表1小鼠对接种S180瘤体的影响
Figure BSA00000722009500031
Figure BSA00000722009500032
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组能明显抑制小鼠移植S180肉瘤细胞的生长，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组抗肿瘤的作用强。
二、对小鼠移植性肝癌H22的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药21d，每日1次，给药后第8d无菌操作，于每只小鼠的右腋皮下注射肝癌H22细胞悬液0.2ml(含6×107细胞)。于接种后24h继续给药，第21d给药1h后，处死小鼠称重，仔细剥离瘤体，精密称重并计算抑瘤率。实验结果：见表2
表2对小鼠移植性肝癌H22的影响
Figure BSA00000722009500033
Figure BSA00000722009500034
Figure BSA00000722009500041
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组可显著抑制小鼠移植性肝癌H22的生长，与对照组相比有极显著性的差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组抗肝癌的作用强。
三、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，每鼠均腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/只，记录15min内小鼠扭体次数，并计算各组镇痛百分率。实验结果：见表3
表3对醋酸所致小鼠扭体反应的影响
Figure BSA00000722009500043
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组对醋酸所致小鼠扭体具有明显的抑制作用，与对照组比较有极显著性差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组的镇痛作用强。
四、对小鼠热板致痛的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，雌性，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐
水配置，灌胃给药。
实验方法
将电热板仪调至(55±0.5)℃，对体重为18～22g的昆明种雌性小鼠进行筛选，记录小鼠投入热板至出现舔后足的时间作为该小鼠的痛阈值，筛选痛阈值在30s内的雌性小鼠50只，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，将小鼠放在电热板仪内，记录给药后出现舔后足的时间，用药后的痛阈值减去用药前痛阈值作为差值。实验结果：见表4
表4对小鼠热板致痛的影响
Figure BSA00000722009500051
Figure BSA00000722009500052
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组均可延长热板致痛小鼠的痛阈值，与对照组比较有极显著性差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组镇痛的作用强。
五、对四氯化碳引起的肝功能损伤的影响
实验材料
1、动物：SD系大白鼠，体重150～180g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
SD系大白鼠60只，雌雄各半，体重150～180g，随机分成6组，每组10只。空白对照组与四氯化碳中毒对照组灌胃等体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药0.8、1.6、3.2g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药3.2g生药/kg。连续给药10d，每天一次，第10d灌胃15％四氯化碳麻油液0.2ml/100mg(空白对照除外)。24h后处死小鼠，取血离心，取血清按赖氏法测定血清谷丙转氨酸(SGPT)与谷草转氨酶(SGOT)的活性。实验结果：见表5
表5对四氯化碳引起的肝功能的损伤的影响
Figure BSA00000722009500053
Figure BSA00000722009500061
与四氯化碳中毒组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组能明显抑制四氯化碳引起大鼠血清SGPT和SGOT的升高，对肝损伤具有明显保护的作用，与对照组比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组对肝损伤的保护作用强。
六、对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药7d，每日1次，末次给药1h后，每鼠腹腔注射5％鸡红细胞混悬液0.4ml，4h后处死小鼠，测腹腔巨噬细胞的吞噬指数。实验结果：见表6
表6对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
Figure BSA00000722009500062
Figure BSA00000722009500063
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组能显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能，有较好的量效关系，随着剂量的加大，小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数显著提高，与对照组相比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组的免疫作用强。
七、对小鼠血清溶血素形成的影响
实验材料
1、动物：昆明种小鼠，体重18～22g。
2、药物：原发明肠溶胶囊；本发明肠溶胶囊大、中、小三个剂量组。药物在实验前用生理盐水配置，灌胃给药。
实验方法
昆明种小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分成5组，每组10只。对照组灌胃同体积的生理盐水；本发明肠溶胶囊组分别灌胃给药1.5、3、6g生药/kg；原发明肠溶胶囊组灌胃给药6g生药/kg。连续给药7d，每日1次，于给药第1d每鼠腹腔注射5％鸡红细胞混悬液0.2ml进行免疫。免疫后第7d，末次给药后1h，摘眼球取血，离心，取血清用生理盐水稀释100倍。取血清1ml与5％鸡红细胞混悬液0.5ml混合，在0℃冰箱中加10％补体0.5ml，在37℃恒温箱中保温30min，在0℃冰箱中终止反应，离心，取上清夜1ml与3ml都氏试剂反应，于752型分光光度计560nm处比色，测出溶血素吸光度值。实验结果：见表7
表7对小鼠血清溶血素形成的影响
Figure BSA00000722009500071
与对照组相比＊＊P＜0.01；与原发明肠溶胶囊组比△P＜0.05。
结果表明：本发明肠溶胶囊组和原发明肠溶胶囊组具有显著增加小鼠血清溶血素含量的作用，与对照组比有极显著性差异(P＜0.01)；本发明肠溶胶囊大剂量组与原发明肠溶胶囊组相比较有显著性差异(P＜0.05)。可见，本发明肠溶胶囊组比原发明肠溶胶囊组提高机体免疫的作用强。
毒理实验：
急性毒性实验结果表明：将本发明肠溶胶囊最大浓度、最大容积灌胃给药，在24h内连续给药3次，每次间隔4h，累积药物总量达125g生药/kg，相当于人临床拟用量的298倍。给药后7d内，小鼠活动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，其平均体重均随试验时间的延长而增加。第8d处死后解剖每只小鼠肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、胃、肠等均未发现颜色及形态异常，未能测出LD50。表明本发明肠溶胶囊无急性毒性反应。
长期毒性实验结果表明：本发明肠溶胶囊组分为低、中、高剂量分别为8、16、32g生药/kg/d，相当于临床剂量的19.0、38.1、76.2倍，灌胃给药12周后，本发明肠溶胶囊对动物的一般状况、血液学指标、血液生化指标均无明显的影响，系统解剖、脏器系数及组织病理学检查也未发现异常病理改变。停药2周也未见明显改变。本发明肠溶胶囊在长期毒性试验中，未发现明显毒性反应和延迟毒性反应。可见，本发明肠溶胶囊无毒性反应，长期用药安全可靠。
具体实施方式：
1、取干蟾皮3500g，剪碎，洗净，加60％乙醇回流提取二次，第一次加6倍量乙醇，先浸泡2小时，再回流提取1小时，第二次加4倍量乙醇，回流提取30分钟，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液回收乙醇至无醇味，得清膏备用；取醇提药渣，加水煎煮二次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，第二次加6倍量水，煎煮45分钟，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液浓缩至相对密度为1.08～1.12的清膏，与上述清膏合并，喷雾干燥成细粉，即得药物活性成分，再与羧甲基纤维素钠50g、淀粉150g混匀，制成颗粒，装入肠溶胶囊，即得本发明肠溶胶囊。

Claims (1)

1.一种治疗中晚期肿瘤、慢性乙肝的中药肠溶胶囊，其特征在于所述中药肠溶胶囊的配方组成为：干蟾皮3500g；
制备方法为：取干蟾皮3500g，剪碎，洗净，加60％乙醇回流提取二次，第一次加6倍量乙醇，先浸泡2小时，再回流提取1小时，第二次加4倍量乙醇，回流提取30分钟，合并提取液，滤过，药渣备用，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液回收乙醇至无醇味，得清膏备用；取醇提药渣，加水煎煮二次，第一次加8倍量水，煎煮1小时，第二次加6倍量水，煎煮45分钟，合并煎液，滤过，滤液以4000r/min转速离心30min，取上清液浓缩至相对密度为1.08～1.12的清膏，与上述清膏合并，喷雾干燥成细粉，即得药物活性成分，再与羧甲基纤维素钠50g、淀粉150g混匀，制成颗粒，装入肠溶胶囊，即得。
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