CN102247329B

CN102247329B - 5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102247329B
Application number: CN201010182555.4A
Authority: CN
Inventors: 周荣光
Original assignee: Kunming Pharmaceutical Corp
Current assignee: KPC Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2010-05-19
Filing date: 2010-05-19
Publication date: 2014-02-05
Anticipated expiration: 2030-05-19
Also published as: CN102247329A

Abstract

本发明涉及医药领域，公开了一种5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂，其质量百分比组成为：5，6，7，4′-四羟基黄酮5～70％，药用碱0.1～25％，余量为水溶性药用辅料。本发明所述5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂水溶性优良，产品稳定性好，保质期在二年以上，生物利用度高。本发明还提供所述粉针剂的制备方法，所述制备方法具有操作简单、工艺条件易控制的特点，适合于大批量规模化生产。

Description

5,6,7,4′-四羟基黄酮粉针剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种用于5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂及其制备方法。

背景技术

心脑血管疾病是当今世界上死亡率最高的疾病，每年夺去近7000万人以上的生命，占全球死亡总数1/4左右，并使成千上万的患者致残。随着社会高速发展，以及饮食结构的改变和环境污染的恶化，心脑血管疾病发病率呈加速趋势，年龄明显趋于中青年化，给社会和家庭带来极大损失和痛苦。心脑血管疾病已严重威胁着人类的健康与生命，尤其是在中国的大中城市里，心脑血管疾病死亡率已占人口死因的50％以上，脑卒中死亡率更是高得惊人，我国脑卒中幸存者约有500万人以上，其中75％以上已有不同程度丧失劳动力。

灯盏细辛(Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz)属菊科短亭飞蓬类植物，具有活血化瘀、散寒解表、舒经活络等功效，临床常用于治疗心脑血管疾病。5，6，7，4′-四羟基黄酮又名野黄芩素，为灯盏细辛的黄酮有效成分之一。5，6，7，4′-四羟基黄酮既可通过植物提取方式从灯盏细辛等植物中获得，也可通过人工化学方式合成而得。

研究表明，5，6，7，4′-四羟基黄酮具有增加脑、冠状血管血流量，降低血管阻力，抗血小板、红细胞凝聚，降低血液粘稠度等作用。有人对5，6，7，4′-四羟基黄酮在动物体内的药代及动力学进行了研究，认为动物口服5，6，7，4′-四羟基黄酮后的代谢产物为灯盏花乙素，其药动学行为呈非线性，与灯盏花乙素相比，其相对生物利用度为301.8％。

然而，由于5，6，7，4′-四羟基黄酮难溶于水，因此，很难将其开发为水溶性的注射剂，这极大地制约了5，6，7，4′-四羟基黄酮的临床应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种质量稳定、安全性高的5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂，所述粉针剂以质量百分比计包含：5，6，7，4′-四羟基黄酮5～70％，药用碱0.1～25％，余量为水溶性药用辅料。

本发明根据5，6，7，4′-四羟基黄酮的物理化学特性、药理特性和药代动力学特性，结合心脑血管疾病对临床用药的剂型特点和要求，研究发明了以5，6，7，4′-四羟基黄酮、药用碱和水溶性药用辅料为组分，形成稳定的、水溶性好的冻干粉针剂制剂。

作为优选，所述药用碱为碱性氨基酸或无机碱的一种或两种以上的组合。

更优选地，所述碱性氨基酸包括精氨酸、组氨酸或赖氨酸。

更优选地，所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、乳酸钠、柠檬酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾。

作为优选，所述水溶性药用辅料为氯化钠、葡萄糖、甘露醇、乳糖、甘氨酸、山梨醇、低分子右旋糖中的一种或者两种以上的组合。

本发明还提供所述粉针剂的制备方法，由以下步骤组成：

步骤1：取5，6，7，4′-四羟基黄酮加入30～100倍重量的注射用水使其溶解，加入药用碱调节PH值至6～8；

步骤2：加入水溶性药用辅料，采用微孔滤膜过滤，滤液分装，采用速冻法降温，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-30～-50℃，维持2～3小时，再升温至-20～-35℃，进行真空升华干燥。

作为优选，还包括消毒灭菌步骤。

作为优选，所述制备方法中，药用碱为碱性氨基酸或无机碱的一种或两种以上的组合。更优选地，碱性氨基酸包括精氨酸、组氨酸或赖氨酸；所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、乳酸钠、柠檬酸钠、氢氧化钠或氢氧化钾。

作为优选，所述制备方法中，水溶性药用辅料为氯化钠、葡萄糖、甘露醇、乳糖、甘氨酸、山梨醇、低分子右旋糖中的一种或者两种以上的组合。

根据心脑血管疾病的病理特点和临床用药要求，治疗心脑血管疾病的药物适合于开发为注射剂，通过肌肉或静脉注射的方式给药。众所周知，水是注射剂的最佳溶剂，不仅经济，而且安全性高。然而，由于5，6，7，4′-四羟基黄酮难溶于水，因此，很难将其开发为水溶性的注射剂，这极大地制约了5，6，7，4′-四羟基黄酮的临床应用。

本发明是利用5，6，7，4′-四羟基黄酮分子结构中的酚羟基活性，可与常用的碱性氨基酸如精氨酸、组氨酸、赖氨酸，或与无机碱性物质如碳酸钠、碳酸钾、乳酸钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、氢氧化钾等形成比较稳定的复盐或金属盐，从而大大增加了5，6，7，4′-四羟基黄酮在水中的溶解度，这样既拓宽了该药物的给药途径，又减少或避免其不良副作用，既增加了药物及其制剂的稳定性，又显著提高了其生物利用度，保证了药物在临床使用中取得良好的疗效。

稳定性实验表明，本发明所述粉针剂的稳定性较5，6，7，4’-四羟基黄酮原药本身而言显著提高；溶解度对比实验表明，5，6，7，4’-四羟基黄酮原药在水中的溶解度极差，溶解度＜1g/10000ml，几乎不溶，本发明所述针剂在水中易溶，溶解度＞1g/10ml，具有良好的水溶性；生物利用度对比实验表明，与等剂量灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药相比，静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂的生物利用度提高了近16倍，见图1和图2。

本发明所提供的5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂水溶性优良，便于运输和储存，临床使用方便，产品稳定性好，保质期在二年以上，各项质量指标均符合中国药典要求。所提供的粉针剂制备方法，具有生产操作简单，工艺条件容易控制等特点，适合于大批量规模化生产。

附图说明：

图1示大鼠灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药的血药浓度-时间曲线。

图2示大鼠静注本发明所述粉针剂的血药浓度-时间曲线。

具体实施方式：

本发明公开了一种用于治疗心脑血管疾病的5，6，7，4′-四羟基黄酮粉针剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品、方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

下面结合实施例对本发明做进一步描述，但本发明内容并不局限于实施例。

实施例1：

在无菌条件下，取5，6，7，4′-四羟基黄酮500g置于容器中，加注射用水25000ml，加赖氨酸105g调节PH值至6～8，加入氯化钠300g，按注射剂的要求进行消毒灭菌，采用微孔滤膜过滤，滤液按每支1.5ml分装，采用速冻法，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-37℃，维持3小时，再加温至-30℃，保持真空度在0.1托以上进行升华干燥，将制品取出，进行封口即得到性状为黄色蔬松块状物的成品。

实施例2：

在无菌条件下，取5，6，7，4′-四羟基黄酮345g置于容器中，加注射用水20000ml，加精氨酸85g、氢氧化钠2.5g调节PH值至6～8，加入葡萄糖450g，按注射剂的要求进行消毒灭菌，采用微孔滤膜过滤，滤液按每支1.5ml分装，采用速冻法，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-43℃，维持2小时，再加温至-28℃，保持真空度在0.1托以上进行升华干燥，将制品取出，进行封口即得到性状为黄色蔬松块状物的成品。

实施例3：在无菌条件下，取5，6，7，4′-四羟基黄酮389g置于容器中，加注射用水21000ml，加组氨酸66g、柠檬酸钠5.5g调节PH值至6～8，加入甘露醇600g，按注射剂的要求进行消毒灭菌，采用微孔滤膜过滤，滤液按每支1.5ml分装，采用速冻法，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-45℃，维持3小时，再加温至-26℃，保持真空度在0.1托以上进行升华干燥，将制品取出，进行封口即得到性状为黄色蔬松块状物的成品。

实施例4：

在无菌条件下，取5，6，7，4′-四羟基黄酮445g置于容器中，加注射用水15000ml，加碳酸钠10.5g调节PH值至6～8，加入山梨醇320g，按注射剂的要求进行消毒灭菌，采用微孔滤膜过滤，滤液按每支1.5ml分装，采用速冻法，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-41℃，维持2.5小时，再加温至-25℃，保持真空度在0.1托以上进行升华干燥，将制品取出，进行封口即得到性状为黄色蔬松块状物的成品。

实施例5：5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与本发明所述粉针剂稳定性对比实验

1.供试样品与试剂：

5，6，7，4’-四羟基黄酮原药，批号20080918，昆明制药集团股份有限公司药物研究院生产并提供；5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂，实施例1-4制备的样品。N，N-二甲基甲酰胺，批号20080416，分析纯，天津化学试剂总厂生产；水为注射用水，昆明制药集团股份有限公司生产并提供。

2.实验仪器与设备：

UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)；pHS-3C精密pH计(上海雷磁仪器厂)；HHsyzl-Ni6-C电热恒温水浴锅(北京长源实验设备厂)；DHG一9070A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)。

3.实验方法：

用N，N-二甲基甲酰胺-水(1∶2，体积比)溶液将5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂配制成浓度为1％的供试溶液，调节供试溶液pH至7。将供试溶液置于电热恒温水浴锅中，恒温80℃，连续加热24小时。按照表1要求，于不同时间点取样，用紫外分光光度计测定吸光度值(A)，检测波长为294nm。

4.实验结果与结论：

实验结果见表1。

表1 5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与本发明所述粉针剂稳定性实验

随着供试品溶液加热时间的延长，供试溶液颜色逐步由浅变深，吸光度逐步升高，吸光度的变化越大说明供试品的稳定性越差，反之，则稳定性越高。从表1实验结果不难看出，在同样的加热条件下，连续加热24h后，5，6，7，4’-四羟基黄酮原药供试液的吸光度由0.43升至0.81，升幅高达88％；而5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂供试液的吸光度由0.42升至0.58，升幅仅为38％，说明5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂的稳定性较5，6，7，4’-四羟基黄酮原药本身而言显著提高。

实施例6：5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与本发明所述粉针剂的水溶性实验

1.供试样品与试剂：

5，6，7，4’-四羟基黄酮原药，批号20080918，昆明制药集团股份有限公司药物研究院生产并提供；5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂，实施例1-4制备的样品。实验用水为蒸馏水，昆明制药集团股份有限公司生产并提供。

2.实验仪器与设备：

BP121S电子分析天平(德国Sartorious公司)；SHZ-88恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂)；85-1磁力搅拌器(江苏国华仪器厂)。

3.实验方法：

按照《中国药典》(2005版二部)溶解度的测定方法测定供试品在水中的溶解度。分别精密称取研成细粉的5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与四羟基黄酮粉针剂3～1000mg，置于容量瓶中，分别按药物质量(g)与溶液体积(ml)为1∶1，1∶10，1∶30，1∶100，1∶1000，1∶10000的比例加入蒸馏水。各样品瓶置于25℃恒温水浴中，每隔5min强力震荡并超声30s，观察30min内的溶解情况并测定近似溶解度。

4.实验结果与结论：实验结果见表2。

表2 5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与本发明所述粉针剂的近似溶解度

样品	近似溶解度
		5，6，7，4’-四羟基黄酮原药	几乎不溶，＜1g/10000ml
5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂	易溶，＞1g/10ml

按照《中国药典》规定的溶解度测定方法，进行供试品的溶解度测定，结果显示，5，6，7，4’-四羟基黄酮原药在水中的溶解度极差，几乎不溶(溶解度＜1g/10000ml)；而5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂在水中易溶(溶解度＞1g/10ml)，具有高度良好的水溶性。

实施例7：5，6，7，4’-四羟基黄酮原药与本发明所述粉针剂的生物利用度实验

1.供试样品与试剂：

5，6，7，4’-四羟基黄酮原药，批号20080918，昆明制药集团股份有限公司药物研究院生产并提供；5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂，实施例1-4制备的样品。HPLC用甲醇，色谱纯；冰醋酸，优级纯；其他试剂均为分析纯，水为去离子水。

2.实验仪器与设备：

Agilent 1100series型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；AB204-N型电子天平，瑞士Mettler公司；SHZ-88恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂)；85-1磁力搅拌器(江苏国华仪器厂)；XW-80A型涡旋混合器(上海医科大学仪器厂)；TGL-16B型台式高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

3.实验动物：

健康SD雄性大鼠，雄性，体重225±2.0g，昆明医学院动物室提供。实验前禁食12h，可自由饮水。

4.实验方法：

4.1血样处理方法

精密量取分离得到的血浆200μl，精密加入甲醇400μl，旋涡振荡10min，15000r/min离心15min，取上清液加0.1％磷酸20μl，以0.22μm针式过滤器过滤，置0～5℃冰箱保存待分析。

4.2HPLC色谱条件

色谱条件为：色谱柱为Agilent Zorbax Extend-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶1)，流速1ml.min-1；柱温40℃。检测波长为294nm。

4.3试验设计、给药方法及标本收集

SD雄性大鼠犬18只，随机分为2组，每组9只。一组静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂，另一组灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药，给药剂量均按有效成分5，6，7，4’-四羟基黄酮计为25mg/kg。给药前禁食18h，不禁水。给药后4h内禁食、禁水。于给药前30min内采集空白血样。灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药组于给药0.3、0.6、1.0、1.5、2.0、3.0、5.0、10.0、13.0、17.0、24.0h，静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂组于给药0.1、0.2、0.4、1.0、1.5、3.0、4.0、8.0、12.0、24.0h在尾静脉取血1ml，将采集到的血样置含肝素的离心管中，3000r/min离心15min，分离血浆。按4.1“血样处理方法”操作，采用高效液相法(HPLC)测定测定各血浆样品中的药物浓度。采用梯形法计算AUC_0→t，t是最后一次可测浓度的取样时间。

4.实验结果与结论：

大鼠灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药的药动学参数见表3，血药浓度-时间曲线见图1。

表3、大鼠灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药25mg/kg的药动学参数(n＝9)

结果显示，灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药后，血药浓度约在1.0，10.0h达两次高峰，两次达峰浓度分别为(62.98±23.07)和(45.62±31.95)μg·L^-1。0～24h内的AUC_0→24h值为(567.39±189.33)μg·h·L^-1。

大鼠静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂的药动学参数见表4，血药浓度-时间曲线见图2。

表4、静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂25mg/kg的药动学参数(n＝9)

实验结果表明，静注给药的药-时曲线符合三室模型；在给药后的前60min，血药浓度呈现快速下降，自60min血药浓度下降速度减缓，其AUC_0→24h面积为(8927.44±1729.53)μg·h·L^-1。与等剂量灌胃5，6，7，4’-四羟基黄酮原药的AUC_0→24h值(567.39±189.33)μg·h·L^-1相比，静注5，6，7，4’-四羟基黄酮粉针剂的生物利用度提高了近16倍。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.5,6,7,4'-四羟基黄酮的粉针剂，以质量百分比计包含：5,6,7,4'-四羟基黄酮5～70%，组氨酸或赖氨酸0.1～25%，余量为水溶性药用辅料，所述水溶性药用辅料为氯化钠、山梨醇、低分子右旋糖中的一种或者两种以上的组合。

2.根据权利要求1所述粉针剂的制备方法，含有以下步骤：

步骤1：取5,6,7,4'-四羟基黄酮加入30～100倍重量的注射用水使其溶解，加入组氨酸或赖氨酸调节pH值至6～8；

步骤2：加入水溶性药用辅料，采用微孔滤膜过滤，滤液分装，采用速冻法降温，每分钟降低10～15℃，直至溶液降温到-30～-50℃，维持2～3小时，再升温至-20～-35℃，进行真空升华干燥，所述水溶性药用辅料为氯化钠、山梨醇、低分子右旋糖中的一种或者两种以上的组合。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括消毒灭菌步骤。